CN104650251A - 灵芝多糖醇的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种灵芝多糖醇的提取方法,包括以下步骤:(1)将干燥的灵芝、赤芝或紫芝品种子实体切块或切片;(2)将切片加入50%~75%乙醇溶液中,回流提取;然后再依次用75%乙醇溶液、60%乙醇溶液夹层蒸汽回流加热提取;(3)将三次回流液合并,静置18~24小时,吸取上清液,浓缩;(4)向浓缩液中加入95%乙醇溶液至含醇量70%,静置18~24小时;吸收上清液,浓缩,得浸膏液;(5)干燥:将浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉。本发明的灵芝多糖醇的提取方法,用醇提取方法提取灵芝多糖醇,灵芝多糖的提取率高,还可将灵芝子实体中的三萜类、生物碱类、核苷类等有效成分提取完全,避免了资源的浪费,提高了提取效率。
Description
技术领域
本发明涉及一种灵芝多糖醇的提取方法,属于药物有效成分提取领域。
背景技术
灵芝是中华民族传统医药瑰宝,我国是灵芝应用及灵芝文化的发源地。《神农本草经》记载,灵芝被列为安全有效、无不良反应的上品,被誉为仙草、瑞草和吉祥草,明朝李时珍的《本草纲目》认为灵芝“主耳聋、利关节、保神、益精气、坚筋骨、好颜色、久服不老延年”,对灵芝做出了很高的评价。灵芝被全世界公认的一种可以滋补强壮、扶正固本的传统中药。
现代药理研究表明:从不同灵芝种类中分离的多糖均有抗癌作用,免疫调节作用,降血糖作用,降血脂作用,抗氧化作用及抗衰老作用等,我国有灵芝种类百余种,种类繁多,地理分布广泛。从20世纪70年代起,我国对灵芝种类进行了化学、药理和临床的研究,取得了进展。我国主要对《中国药典》(2000版)收载的灵芝(G.Lucidum)和国家卫生部公布可用于保健食品的真菌菌种名单目录中的灵芝(G.Lucidum)的子实体、菌丝体和孢子粉进行了研究,灵芝属种类化学成分研究较多的有灵芝、紫芝、松衫、树舌等,其化学成分为:多糖类(polysaccharides)、三萜类、甾醇类、核苷类、生物碱类等,其中多糖类(含还原糖)是灵芝的重要生物活性物质之一。
现有技术中,提取灵芝多糖醇多采用水提取法、渗滤提取法,存在提取率不高(3%以下)的缺陷,提取后的残渣中还含有大量未提取出的灵芝多糖、灵芝多糖醇,造成资源的浪费。
发明内容
针对上述现有技术,本发明提供了一种灵芝多糖醇的提取方法,可解决目前现有技术中存在的灵芝多糖醇提取率低的问题。
本发明是通过以下技术方案实现的:
一种灵芝多糖醇的提取方法,包括以下步骤:
(1)原料处理:将干燥的灵芝、赤芝或紫芝品种子实体切块或切片,切片的厚度为0.05~0.1cm,备用。
优选的,在切片时,用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后,在中药切片机上切片,灵芝切片后有利于灵芝药材萃取。如果采用人工切片,切片的厚度有厚有薄,厚薄不能有效控制,不利于灵芝药材的萃取。如果在中药切片机上切片,厚度大于0.1cm时,对下一步工艺流程带来了增加萃取时间,也不利于灵芝药材的有效萃取。
(2)乙醇回流提取:将上述切好片的灵芝子实体加入50%~75%(体积百分数)乙醇溶液中,回流提取2小时,每200~250g灵芝切片用乙醇溶液2000g;然后再依次用75%(体积百分数)乙醇溶液、60%(体积百分数)乙醇溶液(用量均为每200~250g灵芝切片用乙醇溶液2000g)夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时。
进一步地,第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取,以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎,并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
所述微波辅助提取的条件是:微波功率为300~500W,提取时间为3~5min。
所述的超声波辅助提取的条件是:超声温度40~60℃,功率为500~600W,超声时间为30~50min,超声5 秒停5 秒(即占空比5S/5S),超声总时间为60~100min。
本发明采用乙醇提取,与水提取法(需加热至80~90℃维持温度搅拌约6小时,还要滤出水溶液,药渣再重复相同条件再提取3个小时)相比,不但提取时间更短,且提取率更高。
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置18~24小时(如果采用渗滤提取法,渗滤时间需10~15天,本发明静置时间1天即可,节约了时间),吸取上清液,减压回收乙醇,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
(4)醇沉:向上述浓缩液中缓缓加入95%(体积百分数)乙醇溶液至含醇量70%(体积百分数),静置18~24小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩至每毫升相当于2g生药量(即1ml相当于2克原药材),得浸膏液。
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉。若浸膏液浓度过大,可加入少许医用蒸馏水来稀释。本发明采用喷雾干燥方法,较为理想,经比较,比冷冻干燥法、真空干燥法更为合适,具有成本低、收率高,操作方便,对有效成分破坏少等优点。
经过实践,本发明的灵芝多糖醇的提取方法,用醇提取方法提取灵芝多糖醇,灵芝多糖的提取率高(10~15%,灵芝浸膏粉收率根据灵芝子实体品种而定,生态环境条件不同、季节不同和工艺条件变化都会有所波动),比用水提取法和渗滤提取法萃取灵芝多糖高,还可将灵芝子实体中的三萜类、生物碱类、核苷类等有效成分提取完全。本发明的方法既提高了灵芝多糖有效成分的萃取能力,又保证了灵芝浸膏粉内在成分的完整性,避免了易氧化有效成分的损失,避免了资源的浪费,提高了提取效率,有利于灵芝多糖有效成分充分释放,营养物质的消化吸收。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1 提取方法的优化
方案1采用下述方法提取:
(1)原料处理:将干燥的灵芝子实体切片,切片的厚度为0.08cm,备用。
(2)乙醇回流提取:将上述切好片的灵芝子实体加入65%(体积百分数)乙醇溶液中,回流提取2小时,每250g灵芝切片用乙醇溶液2000g;然后再依次用75%(体积百分数)乙醇溶液、60%(体积百分数)乙醇溶液(用量同上)夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时。
第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取,以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎,并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是:微波功率为300W,提取时间为5min。
超声波辅助提取的条件是:超声温度50℃,功率为550W,超声时间为40min,超声5 秒停5 秒(即占空比5S/5S),超声总时间为80min。
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置20小时,吸取上清液,减压回收乙醇,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
(4)醇沉:向上述浓缩液中缓缓加入95%(体积百分数)乙醇溶液至含醇量70%(体积百分数),静置20小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩至每毫升相当于2g生药量(即1ml相当于2克原药材),得浸膏液。
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉。
方案2在第一次回流提取时,只采用超声波辅助提取,超声波辅助提取条件同上。其他同上。
方案3在第一次回流提取时,只采用微波辅助提取,微波辅助提取条件同上。其他同上。
方案4在第一次回流提取时,不采用微波辅助提取,也不采用超声波辅助提取。其他同上。
方案5的步骤(2)为热水回流提取,提取温度80~90℃,提取时间9小时,提取后,直接浓缩,喷雾干燥。
每个方案均用灵芝500g,灵芝来源批次相同。比较不同方案的灵芝多糖醇得率(浸膏粉与灵芝的质量比),如表1所示。
表1
方案1 | 方案2 | 方案3 | 方案4 | 方案5 | |
超声波功率 | 550W | 550 W | / | / | / |
微波功率 | 300 W | / | 300 W | / | / |
得率(%) | 12.85 | 7.06 | 3.73 | 3.62 | 2.06 |
通过表1可以看出,方案1的灵芝多糖醇得率最高。
实施例2 提取灵芝多糖醇
步骤如下:
(1)原料处理:将250g干燥的灵芝子实体切片,切片的厚度为0.08cm,备用。在切片时,用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后,在中药切片机上切片。
(2)乙醇回流提取:将上述切好片的灵芝子实体加入65%(体积百分数)乙醇溶液中,回流提取2小时,250g灵芝切片用乙醇溶液2000g;然后再依次用75%(体积百分数)乙醇溶液、60%(体积百分数)乙醇溶液(用量同上)夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时。
第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取,以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎,并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是:微波功率为300W,提取时间为5min。
超声波辅助提取的条件是:超声温度50℃,功率为550W,超声时间为40min,超声5 秒停5 秒(即占空比5S/5S),超声总时间为80min。
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置20小时,吸取上清液,减压回收乙醇,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
(4)醇沉:向上述浓缩液中缓缓加入95%(体积百分数)乙醇溶液至含醇量70%(体积百分数),静置20小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩至每毫升相当于2g生药量(即1ml相当于2克原药材),得浸膏液。
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉,经计算,得率11.52%。
实施例3 提取灵芝多糖醇
步骤如下:
(1)原料处理:将250g干燥的灵芝子实体切片,切片的厚度为0.05cm,备用。在切片时,用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后,在中药切片机上切片。
(2)乙醇回流提取:将上述切好片的灵芝子实体加入60%(体积百分数)乙醇溶液中,回流提取2小时,250g灵芝切片用乙醇溶液2000g;然后再依次用75%(体积百分数)乙醇溶液、60%(体积百分数)乙醇溶液(用量同上)夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时。
第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取,以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎,并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是:微波功率为300W,提取时间为5min。
超声波辅助提取的条件是:超声温度60℃,功率为600W,超声时间为30min,超声5 秒停5 秒(即占空比5S/5S),超声总时间为60min。
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置20小时,吸取上清液,减压回收乙醇,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
(4)醇沉:向上述浓缩液中缓缓加入95%(体积百分数)乙醇溶液至含醇量70%(体积百分数),静置20小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩至每毫升相当于2g生药量(即1ml相当于2克原药材),得浸膏液。
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉,经计算,得率12.20%。
实施例4 提取灵芝多糖醇
步骤如下:
(1)原料处理:将250g干燥的赤芝子实体切片,切片的厚度为0.1cm,备用。在切片时,用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后,在中药切片机上切片。
(2)乙醇回流提取:将上述切好片的子实体加入50%(体积百分数)乙醇溶液中,回流提取2小时,250g切片用乙醇溶液2000g;然后再依次用75%(体积百分数)乙醇溶液、60%(体积百分数)乙醇溶液(用量同上)夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时。
第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取,以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎,并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是:微波功率为400W,提取时间为4min。
超声波辅助提取的条件是:超声温度50℃,功率为550W,超声时间为50min,超声5 秒停5 秒(即占空比5S/5S),超声总时间为100min。
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置20小时,吸取上清液,减压回收乙醇,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
(4)醇沉:向上述浓缩液中缓缓加入95%(体积百分数)乙醇溶液至含醇量70%(体积百分数),静置20小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩至每毫升相当于2g生药量(即1ml相当于2克原药材),得浸膏液。
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉,经计算,得率12.47%。
实施例5 提取灵芝多糖醇
步骤如下:
(1)原料处理:将250g干燥的赤芝子实体切片,切片的厚度为0.07cm,备用。在切片时,用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后,在中药切片机上切片。
(2)乙醇回流提取:将上述切好片的子实体加入55%(体积百分数)乙醇溶液中,回流提取2小时,250g切片用乙醇溶液2000g;然后再依次用75%(体积百分数)乙醇溶液、60%(体积百分数)乙醇溶液(用量同上)夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时。
第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取,以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎,并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是:微波功率为500W,提取时间为3min。
超声波辅助提取的条件是:超声温度50℃,功率为550W,超声时间为40min,超声5 秒停5 秒(即占空比5S/5S),超声总时间为80min。
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置20小时,吸取上清液,减压回收乙醇,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
(4)醇沉:向上述浓缩液中缓缓加入95%(体积百分数)乙醇溶液至含醇量70%(体积百分数),静置20小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩至每毫升相当于2g生药量(即1ml相当于2克原药材),得浸膏液。
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉,经计算,得率10.95%。
实施例6 提取灵芝多糖醇
步骤如下:
(1)原料处理:将250g干燥的紫芝子实体切片,切片的厚度为0.06cm,备用。在切片时,用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后,在中药切片机上切片。
(2)乙醇回流提取:将上述切好片的子实体加入75%(体积百分数)乙醇溶液中,回流提取2小时,250g切片用乙醇溶液2000g;然后再依次用75%(体积百分数)乙醇溶液、60%(体积百分数)乙醇溶液(用量同上)夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时。
第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取,以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎,并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是:微波功率为300W,提取时间为5min。
超声波辅助提取的条件是:超声温度40℃,功率为500W,超声时间为50min,超声5 秒停5 秒(即占空比5S/5S),超声总时间为100min。
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置20小时,吸取上清液,减压回收乙醇,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
(4)醇沉:向上述浓缩液中缓缓加入95%(体积百分数)乙醇溶液至含醇量70%(体积百分数),静置20小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩至每毫升相当于2g生药量(即1ml相当于2克原药材),得浸膏液。
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉,经计算,得率12.68%。
实施例7 提取灵芝多糖醇
步骤如下:
(1)原料处理:将250g干燥的紫芝子实体切片,切片的厚度为0.09cm,备用。在切片时,用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后,在中药切片机上切片。
(2)乙醇回流提取:将上述切好片的子实体加入70%(体积百分数)乙醇溶液中,回流提取2小时,250g切片用乙醇溶液2000g;然后再依次用75%(体积百分数)乙醇溶液、60%(体积百分数)乙醇溶液(用量同上)夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时。
第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取。
微波辅助提取的条件是:微波功率为300W,提取时间为3min。
超声波辅助提取的条件是:超声温度50℃,功率为650W,超声时间为50min,超声5 秒停5 秒(即占空比5S/5S),超声总时间为100min。
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置20小时,吸取上清液,减压回收乙醇,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
(4)醇沉:向上述浓缩液中缓缓加入95%(体积百分数)乙醇溶液至含醇量70%(体积百分数),静置20小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩至每毫升相当于2g生药量(即1ml相当于2克原药材),得浸膏液。
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉,经计算,得率10.44%。
实施例8 提取灵芝多糖醇
步骤如下:
(1)原料处理:将250g干燥的紫芝子实体切片,切片的厚度为0.08cm,备用。在切片时,用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后,在中药切片机上切片。
(2)乙醇回流提取:将上述切好片的子实体加入70%(体积百分数)乙醇溶液中,回流提取2小时,250g切片用乙醇溶液2000g;然后再依次用75%(体积百分数)乙醇溶液、60%(体积百分数)乙醇溶液(用量同上)夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时。
第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取。
微波辅助提取的条件是:微波功率为500W,提取时间为5min。
超声波辅助提取的条件是:超声温度60℃,功率为600W,超声时间为40min,超声5 秒停5 秒(即占空比5S/5S),超声总时间为80min。
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置20小时,吸取上清液,减压回收乙醇,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
(4)醇沉:向上述浓缩液中 吗缓缓加入95%(体积百分数)乙醇溶液至含醇量70%(体积百分数),静置20小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩至每毫升相当于2g生药量(即1ml相当于2克原药材),得浸膏液。
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉,经计算,得率12.91%。
本技术领域中的普通技术人员应当认识到,以上的实施例仅是用来说明本发明,而并非用作为对本发明的限定,只要在本发明的实质精神范围内,对以上实施例的变化、变型都将落在本发明的权利要求书范围内。
Claims (8)
1. 一种灵芝多糖醇的提取方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)原料处理:将干燥的灵芝、赤芝或紫芝品种子实体切块或切片,切片的厚度为0.05~0.1cm,备用;
(2)将上述切好片的灵芝子实体加入50%~75%乙醇溶液中,回流提取2小时;然后再依次用75%乙醇溶液、60%乙醇溶液夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时;
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置18~24小时,吸取上清液,减压回收乙醇,浓缩;
(4)醇沉:向上述浓缩液中加入95%乙醇溶液至含醇量70%,静置18~24小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩,得浸膏液;
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉。
2. 根据权利要求1所述的灵芝多糖醇的提取方法,其特征在于:所述步骤(1)中,在切片时,用医用蒸馏水喷洒灵芝使之软化后,在中药切片机上切片。
3. 根据权利要求1所述的灵芝多糖醇的提取方法,其特征在于:所述步骤(2)中,第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取,以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎,并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
4. 根据权利要求3所述的灵芝多糖醇的提取方法,其特征在于:所述微波辅助提取的条件是:微波功率为300~500W,提取时间为3~5min。
5. 根据权利要求3所述的灵芝多糖醇的提取方法,其特征在于:所述的超声波辅助提取的条件是:超声温度40~60℃,功率为500~600W,超声时间为30~50min,超声5 秒停5 秒,超声总时间为60~100min。
6. 根据权利要求1所述的灵芝多糖醇的提取方法,其特征在于:所述步骤(3)中,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
7. 根据权利要求1所述的灵芝多糖醇的提取方法,其特征在于:所述步骤(4)中,浓缩至每毫升相当于2g生药量。
8. 根据权利要求1~7中任一项所述的灵芝多糖醇的提取方法,其特征在于:步骤如下:
(1)原料处理:将干燥的灵芝、赤芝或紫芝品种子实体切块或切片,切片的厚度为0.05~0.1cm,备用;
(2)乙醇回流提取:将上述切好片的灵芝子实体加入65%乙醇溶液中,回流提取2小时,每250g灵芝切片用乙醇溶液2000g;然后再依次用75%乙醇溶液、60%乙醇溶液夹层蒸汽回流加热提取,每次提取时间2小时;
第一次回流提取时,先用微波辅助提取,再用超声波辅助提取;
微波辅助提取的条件是:微波功率为300W,提取时间为5min;
超声波辅助提取的条件是:超声温度50℃,功率为550W,超声时间为40min,超声5 秒停5 秒,超声总时间为80min;
(3)浓缩:将三次回流液合并,静置20小时,吸取上清液,减压回收乙醇,将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量;
(4)醇沉:向上述浓缩液中加入95%乙醇溶液至含醇量70%,静置20小时;待沉淀完全后,吸收上清液减压回收乙醇,浓缩至每毫升相当于2g生药量,得浸膏液;
(5)干燥:将上述浸膏液喷雾干燥,得浸膏粉。
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