CN104650251A - 灵芝多糖醇的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种灵芝多糖醇的提取方法，包括以下步骤：（1）将干燥的灵芝、赤芝或紫芝品种子实体切块或切片；（2）将切片加入50%～75%乙醇溶液中，回流提取；然后再依次用75%乙醇溶液、60%乙醇溶液夹层蒸汽回流加热提取；（3）将三次回流液合并，静置18～24小时，吸取上清液，浓缩；（4）向浓缩液中加入95%乙醇溶液至含醇量70%，静置18～24小时；吸收上清液，浓缩，得浸膏液；（5）干燥：将浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉。本发明的灵芝多糖醇的提取方法，用醇提取方法提取灵芝多糖醇，灵芝多糖的提取率高，还可将灵芝子实体中的三萜类、生物碱类、核苷类等有效成分提取完全，避免了资源的浪费，提高了提取效率。
Description
技术领域
本发明涉及一种灵芝多糖醇的提取方法，属于药物有效成分提取领域。
背景技术
灵芝是中华民族传统医药瑰宝，我国是灵芝应用及灵芝文化的发源地。《神农本草经》记载，灵芝被列为安全有效、无不良反应的上品，被誉为仙草、瑞草和吉祥草，明朝李时珍的《本草纲目》认为灵芝“主耳聋、利关节、保神、益精气、坚筋骨、好颜色、久服不老延年”，对灵芝做出了很高的评价。灵芝被全世界公认的一种可以滋补强壮、扶正固本的传统中药。
现代药理研究表明：从不同灵芝种类中分离的多糖均有抗癌作用，免疫调节作用，降血糖作用，降血脂作用，抗氧化作用及抗衰老作用等，我国有灵芝种类百余种，种类繁多，地理分布广泛。从20世纪70年代起，我国对灵芝种类进行了化学、药理和临床的研究，取得了进展。我国主要对《中国药典》（2000版）收载的灵芝（G.Lucidum）和国家卫生部公布可用于保健食品的真菌菌种名单目录中的灵芝（G.Lucidum）的子实体、菌丝体和孢子粉进行了研究，灵芝属种类化学成分研究较多的有灵芝、紫芝、松衫、树舌等，其化学成分为：多糖类（polysaccharides）、三萜类、甾醇类、核苷类、生物碱类等，其中多糖类（含还原糖）是灵芝的重要生物活性物质之一。
现有技术中，提取灵芝多糖醇多采用水提取法、渗滤提取法，存在提取率不高（3%以下）的缺陷，提取后的残渣中还含有大量未提取出的灵芝多糖、灵芝多糖醇，造成资源的浪费。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种灵芝多糖醇的提取方法，可解决目前现有技术中存在的灵芝多糖醇提取率低的问题。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种灵芝多糖醇的提取方法，包括以下步骤：
（1）原料处理：将干燥的灵芝、赤芝或紫芝品种子实体切块或切片，切片的厚度为0.05～0.1cm，备用。
优选的，在切片时，用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后，在中药切片机上切片，灵芝切片后有利于灵芝药材萃取。如果采用人工切片，切片的厚度有厚有薄，厚薄不能有效控制，不利于灵芝药材的萃取。如果在中药切片机上切片，厚度大于0.1cm时，对下一步工艺流程带来了增加萃取时间，也不利于灵芝药材的有效萃取。
（2）乙醇回流提取：将上述切好片的灵芝子实体加入50%～75%（体积百分数）乙醇溶液中，回流提取2小时，每200～250g灵芝切片用乙醇溶液2000g；然后再依次用75%（体积百分数）乙醇溶液、60%（体积百分数）乙醇溶液（用量均为每200～250g灵芝切片用乙醇溶液2000g）夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时。
进一步地，第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取，以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎，并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
所述微波辅助提取的条件是：微波功率为300～500W，提取时间为3～5min。
所述的超声波辅助提取的条件是：超声温度40～60℃，功率为500～600W，超声时间为30～50min，超声5 秒停5 秒（即占空比5S/5S），超声总时间为60～100min。
本发明采用乙醇提取，与水提取法（需加热至80～90℃维持温度搅拌约6小时，还要滤出水溶液，药渣再重复相同条件再提取3个小时）相比，不但提取时间更短，且提取率更高。
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置18～24小时（如果采用渗滤提取法，渗滤时间需10～15天，本发明静置时间1天即可，节约了时间），吸取上清液，减压回收乙醇，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
（4）醇沉：向上述浓缩液中缓缓加入95%（体积百分数）乙醇溶液至含醇量70%（体积百分数），静置18～24小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于2g生药量（即1ml相当于2克原药材），得浸膏液。
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉。若浸膏液浓度过大，可加入少许医用蒸馏水来稀释。本发明采用喷雾干燥方法，较为理想，经比较，比冷冻干燥法、真空干燥法更为合适，具有成本低、收率高，操作方便，对有效成分破坏少等优点。
经过实践，本发明的灵芝多糖醇的提取方法，用醇提取方法提取灵芝多糖醇，灵芝多糖的提取率高（10～15%，灵芝浸膏粉收率根据灵芝子实体品种而定，生态环境条件不同、季节不同和工艺条件变化都会有所波动），比用水提取法和渗滤提取法萃取灵芝多糖高，还可将灵芝子实体中的三萜类、生物碱类、核苷类等有效成分提取完全。本发明的方法既提高了灵芝多糖有效成分的萃取能力，又保证了灵芝浸膏粉内在成分的完整性，避免了易氧化有效成分的损失，避免了资源的浪费，提高了提取效率，有利于灵芝多糖有效成分充分释放，营养物质的消化吸收。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1 提取方法的优化
方案1采用下述方法提取：
（1）原料处理：将干燥的灵芝子实体切片，切片的厚度为0.08cm，备用。
（2）乙醇回流提取：将上述切好片的灵芝子实体加入65%（体积百分数）乙醇溶液中，回流提取2小时，每250g灵芝切片用乙醇溶液2000g；然后再依次用75%（体积百分数）乙醇溶液、60%（体积百分数）乙醇溶液（用量同上）夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时。
第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取，以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎，并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是：微波功率为300W，提取时间为5min。
超声波辅助提取的条件是：超声温度50℃，功率为550W，超声时间为40min，超声5 秒停5 秒（即占空比5S/5S），超声总时间为80min。
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置20小时，吸取上清液，减压回收乙醇，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
（4）醇沉：向上述浓缩液中缓缓加入95%（体积百分数）乙醇溶液至含醇量70%（体积百分数），静置20小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于2g生药量（即1ml相当于2克原药材），得浸膏液。
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉。
方案2在第一次回流提取时，只采用超声波辅助提取，超声波辅助提取条件同上。其他同上。
方案3在第一次回流提取时，只采用微波辅助提取，微波辅助提取条件同上。其他同上。
方案4在第一次回流提取时，不采用微波辅助提取，也不采用超声波辅助提取。其他同上。
方案5的步骤（2）为热水回流提取，提取温度80～90℃，提取时间9小时，提取后，直接浓缩，喷雾干燥。
每个方案均用灵芝500g，灵芝来源批次相同。比较不同方案的灵芝多糖醇得率（浸膏粉与灵芝的质量比），如表1所示。
表1
| 方案1 | 方案2 | 方案3 | 方案4 | 方案5 | |
| 超声波功率 | 550W | 550 W | / | / | / |
| 微波功率 | 300 W | / | 300 W | / | / |
| 得率（%） | 12.85 | 7.06 | 3.73 | 3.62 | 2.06 |
通过表1可以看出，方案1的灵芝多糖醇得率最高。
实施例2 提取灵芝多糖醇
步骤如下：
（1）原料处理：将250g干燥的灵芝子实体切片，切片的厚度为0.08cm，备用。在切片时，用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后，在中药切片机上切片。
（2）乙醇回流提取：将上述切好片的灵芝子实体加入65%（体积百分数）乙醇溶液中，回流提取2小时，250g灵芝切片用乙醇溶液2000g；然后再依次用75%（体积百分数）乙醇溶液、60%（体积百分数）乙醇溶液（用量同上）夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时。
第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取，以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎，并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是：微波功率为300W，提取时间为5min。
超声波辅助提取的条件是：超声温度50℃，功率为550W，超声时间为40min，超声5 秒停5 秒（即占空比5S/5S），超声总时间为80min。
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置20小时，吸取上清液，减压回收乙醇，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
（4）醇沉：向上述浓缩液中缓缓加入95%（体积百分数）乙醇溶液至含醇量70%（体积百分数），静置20小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于2g生药量（即1ml相当于2克原药材），得浸膏液。
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉，经计算，得率11.52%。
实施例3 提取灵芝多糖醇
步骤如下：
（1）原料处理：将250g干燥的灵芝子实体切片，切片的厚度为0.05cm，备用。在切片时，用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后，在中药切片机上切片。
（2）乙醇回流提取：将上述切好片的灵芝子实体加入60%（体积百分数）乙醇溶液中，回流提取2小时，250g灵芝切片用乙醇溶液2000g；然后再依次用75%（体积百分数）乙醇溶液、60%（体积百分数）乙醇溶液（用量同上）夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时。
第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取，以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎，并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是：微波功率为300W，提取时间为5min。
超声波辅助提取的条件是：超声温度60℃，功率为600W，超声时间为30min，超声5 秒停5 秒（即占空比5S/5S），超声总时间为60min。
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置20小时，吸取上清液，减压回收乙醇，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
（4）醇沉：向上述浓缩液中缓缓加入95%（体积百分数）乙醇溶液至含醇量70%（体积百分数），静置20小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于2g生药量（即1ml相当于2克原药材），得浸膏液。
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉，经计算，得率12.20%。
实施例4 提取灵芝多糖醇
步骤如下：
（1）原料处理：将250g干燥的赤芝子实体切片，切片的厚度为0.1cm，备用。在切片时，用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后，在中药切片机上切片。
（2）乙醇回流提取：将上述切好片的子实体加入50%（体积百分数）乙醇溶液中，回流提取2小时，250g切片用乙醇溶液2000g；然后再依次用75%（体积百分数）乙醇溶液、60%（体积百分数）乙醇溶液（用量同上）夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时。
第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取，以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎，并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是：微波功率为400W，提取时间为4min。
超声波辅助提取的条件是：超声温度50℃，功率为550W，超声时间为50min，超声5 秒停5 秒（即占空比5S/5S），超声总时间为100min。
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置20小时，吸取上清液，减压回收乙醇，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
（4）醇沉：向上述浓缩液中缓缓加入95%（体积百分数）乙醇溶液至含醇量70%（体积百分数），静置20小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于2g生药量（即1ml相当于2克原药材），得浸膏液。
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉，经计算，得率12.47%。
实施例5 提取灵芝多糖醇
步骤如下：
（1）原料处理：将250g干燥的赤芝子实体切片，切片的厚度为0.07cm，备用。在切片时，用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后，在中药切片机上切片。
（2）乙醇回流提取：将上述切好片的子实体加入55%（体积百分数）乙醇溶液中，回流提取2小时，250g切片用乙醇溶液2000g；然后再依次用75%（体积百分数）乙醇溶液、60%（体积百分数）乙醇溶液（用量同上）夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时。
第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取，以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎，并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是：微波功率为500W，提取时间为3min。
超声波辅助提取的条件是：超声温度50℃，功率为550W，超声时间为40min，超声5 秒停5 秒（即占空比5S/5S），超声总时间为80min。
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置20小时，吸取上清液，减压回收乙醇，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
（4）醇沉：向上述浓缩液中缓缓加入95%（体积百分数）乙醇溶液至含醇量70%（体积百分数），静置20小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于2g生药量（即1ml相当于2克原药材），得浸膏液。
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉，经计算，得率10.95%。
实施例6 提取灵芝多糖醇
步骤如下：
（1）原料处理：将250g干燥的紫芝子实体切片，切片的厚度为0.06cm，备用。在切片时，用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后，在中药切片机上切片。
（2）乙醇回流提取：将上述切好片的子实体加入75%（体积百分数）乙醇溶液中，回流提取2小时，250g切片用乙醇溶液2000g；然后再依次用75%（体积百分数）乙醇溶液、60%（体积百分数）乙醇溶液（用量同上）夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时。
第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取，以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎，并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
微波辅助提取的条件是：微波功率为300W，提取时间为5min。
超声波辅助提取的条件是：超声温度40℃，功率为500W，超声时间为50min，超声5 秒停5 秒（即占空比5S/5S），超声总时间为100min。
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置20小时，吸取上清液，减压回收乙醇，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
（4）醇沉：向上述浓缩液中缓缓加入95%（体积百分数）乙醇溶液至含醇量70%（体积百分数），静置20小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于2g生药量（即1ml相当于2克原药材），得浸膏液。
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉，经计算，得率12.68%。
实施例7 提取灵芝多糖醇
步骤如下：
（1）原料处理：将250g干燥的紫芝子实体切片，切片的厚度为0.09cm，备用。在切片时，用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后，在中药切片机上切片。
（2）乙醇回流提取：将上述切好片的子实体加入70%（体积百分数）乙醇溶液中，回流提取2小时，250g切片用乙醇溶液2000g；然后再依次用75%（体积百分数）乙醇溶液、60%（体积百分数）乙醇溶液（用量同上）夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时。
第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取。
微波辅助提取的条件是：微波功率为300W，提取时间为3min。
超声波辅助提取的条件是：超声温度50℃，功率为650W，超声时间为50min，超声5 秒停5 秒（即占空比5S/5S），超声总时间为100min。
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置20小时，吸取上清液，减压回收乙醇，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
（4）醇沉：向上述浓缩液中缓缓加入95%（体积百分数）乙醇溶液至含醇量70%（体积百分数），静置20小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于2g生药量（即1ml相当于2克原药材），得浸膏液。
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉，经计算，得率10.44%。
实施例8 提取灵芝多糖醇
步骤如下：
（1）原料处理：将250g干燥的紫芝子实体切片，切片的厚度为0.08cm，备用。在切片时，用少许医用蒸馏水喷洒使之软化后，在中药切片机上切片。
（2）乙醇回流提取：将上述切好片的子实体加入70%（体积百分数）乙醇溶液中，回流提取2小时，250g切片用乙醇溶液2000g；然后再依次用75%（体积百分数）乙醇溶液、60%（体积百分数）乙醇溶液（用量同上）夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时。
第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取。
微波辅助提取的条件是：微波功率为500W，提取时间为5min。
超声波辅助提取的条件是：超声温度60℃，功率为600W，超声时间为40min，超声5 秒停5 秒（即占空比5S/5S），超声总时间为80min。
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置20小时，吸取上清液，减压回收乙醇，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
（4）醇沉：向上述浓缩液中 吗缓缓加入95%（体积百分数）乙醇溶液至含醇量70%（体积百分数），静置20小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于2g生药量（即1ml相当于2克原药材），得浸膏液。
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉，经计算，得率12.91%。
本技术领域中的普通技术人员应当认识到，以上的实施例仅是用来说明本发明，而并非用作为对本发明的限定，只要在本发明的实质精神范围内，对以上实施例的变化、变型都将落在本发明的权利要求书范围内。
Claims (8)
1. 一种灵芝多糖醇的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）原料处理：将干燥的灵芝、赤芝或紫芝品种子实体切块或切片，切片的厚度为0.05～0.1cm，备用；
（2）将上述切好片的灵芝子实体加入50%～75%乙醇溶液中，回流提取2小时；然后再依次用75%乙醇溶液、60%乙醇溶液夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时；
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置18～24小时，吸取上清液，减压回收乙醇，浓缩；
（4）醇沉：向上述浓缩液中加入95%乙醇溶液至含醇量70%，静置18～24小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩，得浸膏液；
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉。
2. 根据权利要求1所述的灵芝多糖醇的提取方法，其特征在于：所述步骤（1）中，在切片时，用医用蒸馏水喷洒灵芝使之软化后，在中药切片机上切片。
3. 根据权利要求1所述的灵芝多糖醇的提取方法，其特征在于：所述步骤（2）中，第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取，以使所述灵芝子实体的灵芝细胞破碎，并将所述灵芝子实体内的杂质带出。
4. 根据权利要求3所述的灵芝多糖醇的提取方法，其特征在于：所述微波辅助提取的条件是：微波功率为300～500W，提取时间为3～5min。
5. 根据权利要求3所述的灵芝多糖醇的提取方法，其特征在于：所述的超声波辅助提取的条件是：超声温度40～60℃，功率为500～600W，超声时间为30～50min，超声5 秒停5 秒，超声总时间为60～100min。
6. 根据权利要求1所述的灵芝多糖醇的提取方法，其特征在于：所述步骤（3）中，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量。
7. 根据权利要求1所述的灵芝多糖醇的提取方法，其特征在于：所述步骤（4）中，浓缩至每毫升相当于2g生药量。
8. 根据权利要求1～7中任一项所述的灵芝多糖醇的提取方法，其特征在于：步骤如下：
（1）原料处理：将干燥的灵芝、赤芝或紫芝品种子实体切块或切片，切片的厚度为0.05～0.1cm，备用；
（2）乙醇回流提取：将上述切好片的灵芝子实体加入65%乙醇溶液中，回流提取2小时，每250g灵芝切片用乙醇溶液2000g；然后再依次用75%乙醇溶液、60%乙醇溶液夹层蒸汽回流加热提取，每次提取时间2小时；
第一次回流提取时，先用微波辅助提取，再用超声波辅助提取；
微波辅助提取的条件是：微波功率为300W，提取时间为5min；
超声波辅助提取的条件是：超声温度50℃，功率为550W，超声时间为40min，超声5 秒停5 秒，超声总时间为80min；
（3）浓缩：将三次回流液合并，静置20小时，吸取上清液，减压回收乙醇，将所余溶液浓缩至每毫升相当于1g生药量；
（4）醇沉：向上述浓缩液中加入95%乙醇溶液至含醇量70%，静置20小时；待沉淀完全后，吸收上清液减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于2g生药量，得浸膏液；
（5）干燥：将上述浸膏液喷雾干燥，得浸膏粉。
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