CN104630121B - 解淀粉芽孢杆菌植物亚种zfh-3微生物菌剂及其应用 - Google Patents

解淀粉芽孢杆菌植物亚种zfh-3微生物菌剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH‑3微生物菌剂及其应用，属于植物保护、病害防治领域。每克微生物菌剂含2×1010～1.2×1011cfu解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH‑3活芽孢，ZFH‑3菌株的分类命名为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.Plantarum)，其保藏编号为：CGMCC No.9884。该菌剂对多种农作物病原菌具抑制显著的抑制作用，用于土传病害防治表现出了较好的防治效果，能有效防治蔬菜的土传病害，减少损失，田间防效59％以上。对人无毒、安全；代替化学药剂用于土传病害防治、土壤调理、促植物生长，具有良好的应用前景。

Description

解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3微生物菌剂及其应用
技术领域
本发明属于植物保护、病害防治领域，主要涉及解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3微生物菌剂及其应用，特别是在土传病害防治中的应用。
背景技术
土传病害是以土壤为媒介进行传播的植物病害的统称，指生活在土壤中的病原体，如真菌、细菌、线虫和病毒等在条件适宜时从作物根部或茎基部侵害作物而引起的病害。我国土传病害种类很多，常见的土传病害有猝倒病、立枯病、枯萎病、黄萎病、软腐病以及疫病、根腐病、根肿病、青枯病等。植物被病原侵染的一般症状为立枯型、猝倒型、疫病型、枯萎型和黄萎型，直观症状表现为植物凋萎和萎蔫，根和茎维管阻塞、变褐。
土传病害病原物大多习居或半习居于土壤中，在土壤中存活方式多样，寄主范围广，且具有传染性，一旦大面积发生很难根除，防治较为困难，通常会给农业生产造成重大的经济损失，成为制约农业可持续发展的主要因素。
抗病品种和药剂防治目前对个别特殊病害有效、整体防效不高，而且长期使用化学药剂会破坏生态平衡，造成次要病害猖獗、药剂残留、环境污染等问题。另外，轮作和嫁接法虽然能一定程度控制多种土传病害，但由于大部分病原菌在土壤中能生存很长一段时间，一旦病害发生，会导致轮作的有效性受到限制。嫁接则受成本、劳动强度等限制，不适合大规模推广应用。
生物防治是目前最合理、最环保、生态的防治方法，也是较为有效的防治方法，主要是将拮抗微生物引入到土壤中定殖，通过大量快速繁殖，与病原菌竞争营养及生存空间、分泌抑菌物质及蛋白酶、激发植物体的抗性免疫机制、促进植物生长强化抗逆性等综合作用形成对土传病害的预防与防治效果。国内也有较多的研究报道涉及产业化的生防产品，专利如申请号：200510038979.2、申请号：200810088388.X、申请号：200810153180.1、申请号：200910058487.8、申请号：201110339098.X、申请号：201310336701.8、申请号：201110339274.X、申请号：201210208366.9、申请号：201310066267.6等，相关产品如登记的荧光假单胞杆菌、多粘类芽孢杆菌、海洋芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、哈茨木霉菌等。
解淀粉芽孢杆菌是重要的植物病害拮抗菌，普遍存在于土壤、果蔬与植物的表面及组织内，是动植物的有益菌，生态、环保，对人无毒、安全，较多研究及专利已报道了其在农作物病害、土壤微生物及促植物生长、土壤肥力改良，水产养殖等方面的应用，应用范围广、生长适应性强，在任何介质都易于定殖、繁殖，易大量培养、生产工艺简单，产业化可行性高。目前未有解淀粉芽孢杆菌用于土传病害的生物产品，只有江苏农业科学院的专利“解淀粉芽孢杆菌株B-1619及其在防治茄科蔬菜土传病害中的应用”，但其缺点在于：发酵生产后的菌粉以含菌量计，且含菌量较低，未涉及微生物菌剂产品的加工，离实际应用还一段距离。
因此，开发一种能更有效地防治土传病害，促进植物生长，调控土壤微生物群落结构，提高土壤养分的有效性，改善土壤结构，减少化学药剂使用、减少环境污染、降低抗药性的解淀粉芽孢杆菌植物亚种新菌株及其应用就成为该技术领域急需解决的技术难题。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种可用于土传病害生物防治的解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3。
本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的：
一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株，该解淀粉芽孢杆菌植物亚种菌株的分类命名为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.Plantarum)，其保藏编号为：CGMCC No.9884，保藏日期为2014年10月30日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
本发明的第二个目的是提供一种含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3的微生物菌剂。
本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的：
一种含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3的微生物菌剂，每克微生物菌剂含2×1010～1.2×1011cfu(或2×1010～1×1011cfu)解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3活芽孢。
所述的含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3的微生物菌剂为可湿性粉剂或油悬浮剂。
一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂为油悬浮剂，其组成如下：
所述混合乳化剂为聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯(吐温20)、聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯(吐温40)、聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯(吐温60)、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(吐温80)、山梨醇酐单月桂酸酯(司盘20)、山梨醇酐单棕榈酸酯(司盘40)、山梨醇酐单硬脂酸酯(司盘60)、山梨醇酐叁硬脂酸酯(司盘65)、山梨醇酐单油酸酯(司盘80)、脂肪醇聚氧乙烯醚、油醇聚氧乙烯醚、烷基合成醇烷氧基化合物、十二烷基苯磺酸钙、聚乙二醇脂肪酸酯、木质素磺酸盐、聚羧酸盐或萘磺酸钠甲醛缩合物(NN0)中的一种或多种任意比例的混合。
所述防冻剂为乙二醇、丙二醇或丙三醇中一种或几种任意比例的混合。
所述保护剂为聚乙二醇、丙三醇、氯化钠、蔗糖、乙酸钠或碳酸氢钠中一种或几种任意比例的混合。
所述植物油选自大豆油、菜籽油、棕榈油、玉米油或它们的衍生物的一种或多种任意比例的混合。
一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂为可湿性粉剂，其组成如下：
所述润湿剂为聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯(吐温40)、聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯(吐温60)、山梨醇酐单月桂酸酯(司盘20)、月桂醇硫酸钠、月桂醇聚氧乙烯基醚硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、拉开粉、月桂醇聚氧乙烯醚磺酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或十二烷基苯磺酸钙中的一种或几种任意比例的混合。
所述分散剂为萘磺酸钠甲醛缩合物(NN0)、扩散剂MF、聚羧酸盐、木质素磺酸盐、多聚磷酸钠、聚乙二醇、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮的一种或几种任意比例的混合。
所述稳定剂为氯化钠、蔗糖、油酸钠、碳酸氢钠、苯甲酸钠或双乙酸钠的一种或几种任意比例的混合。
所述载体选自轻质碳酸钙、硅藻土、膨润土、凹凸棒土、高岭土或白炭黑的一种或多种任意比例的混合。
本发明的第三个目的是提供生产微生物菌剂所需的解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3原粉的制备方法。
本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的：
一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3原粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)、活化菌种
活化解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3菌株，待解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3在LB固体培养基上菌落乳白色，圆形，明显突起，表面光滑，不透明，边缘整齐；
(2)、一级种子液的制备
选取LB固体培养基上的单菌落，接种于一级种子摇瓶中，摇瓶体积为250mL，一级种子LB液态培养基(121℃下，灭菌20min)的装液量50ml，将一级种子摇瓶在32℃、180r/min下培养14h，得到一级种子液；
(3)、二级种子液的制备
种子罐中的培养基仍为LB液体培养基，121℃下，灭菌20min，将一级种子液接入种子罐中，接种量为0.5-1％(V/V)；培养条件为：通气比1：1，搅拌转速为250-400r/min，培养温度32℃，罐压0.05MPa，培养时间为12小时，培养结束时得到二级种子液，其活菌含量为1-3×108cfu/mL，OD值在0.85左右，此时菌种活力强；
(4)、解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌液发酵
发酵培养基配方(重量百分比)：玉米淀粉3％，豆粕粉3％，酵母膏0.9％，氯化钠0.25％，碳酸钙0.25％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.3％，pH7.2-7.5，121℃灭菌30min；
将解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3的二级种子液，按照接种量为1％(V/V)接入发酵罐中，培养条件为：通气比为1：0.7，搅拌转速为180r/min、罐压0.05MPa、培养温度32℃、培养时间为48h左右，发酵过程中根据泡沫情况流加消泡剂；下罐时间以取样镜检芽孢90％以上释放为准，成熟发酵液中解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3活芽孢含量为30～40×108cfu/mL，得到发酵成熟菌剂；
(5)、解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌原粉
步骤(4)所得的发酵成熟菌剂(活芽孢含量为30～40×108cfu/mL)经碟片离心机或微滤设备浓缩后，加入轻质碳酸钙，浓缩成熟发酵菌剂与轻质碳酸钙的重量比为100:3，得到液固混合物，将该液固混合物搅拌30min后，利用输料泵将液固混合物送入离心式喷雾塔中干燥，得到解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3原粉。
其中，LB培养基配方(g/L)：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl 10g，溶剂为水，pH7.0-7.2，固体培养基在液体培养基中加2％琼脂。
其中，离心式喷雾塔的干燥条件为：进风口温度为180-200℃，出风口温度为80-85℃，菌原粉中含水量小于5％(W/W)，活芽孢含量2000×108cfu/g。
本发明的第四个目的是提供上述微生物菌剂的制备方法。
本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的：
方案之一：解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3微生物菌剂之油悬浮剂的制备：
一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3微生物油悬浮剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)：称取(2×1011活芽孢/克的)解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3原粉10-40重量％，植物油30重量％，混合乳化剂：15-20重量％，在混合釜中混合搅拌1.5小时；
(2)：往步骤(1)搅拌1.5小时后的混合釜中加入防冻剂：4-6重量％保护剂1-10重量％，并补足植物油至100％，继续搅拌0.5小时，即可形成稳定的含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3活芽孢的油悬浮剂。
方案二：解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3微生物菌剂之可湿性粉剂的制备：
一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3微生物可湿性粉剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)：称取2×1011活芽孢/克的解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3原粉10-60重量％，润湿剂：1-5重量％，高速万能粉碎机中混合粉碎20分种，并观察粉碎情况；
(2)：在步骤(1)基础上，加入分散剂2-8重量％，稳定剂：0.5-2重量％，并补足载体至100％，继续粉碎，依均匀性、颗粒大小、入水的悬浮及分散情况断定产品是否还需继续粉碎，需0.5小时左右，最终即可形成稳定的含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3活芽孢可湿性粉剂。
本发明的第五个目的是提供上述微生物菌剂的应用。
本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的：
解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物菌剂用于土传病害的防治。
解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3防治土传病害效果：
解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3及含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物菌剂的试验结果表明，解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3对枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、青枯病菌(Ralstonia solanacearum)、根腐病(Fusarium vasinfectum Atk)、疫病(Phytophthora capsici Leonianv)、欧文氏杆菌(Erwinia)软腐病菌、立枯病菌(Rhizoctonia solani/Kühn)具很强的抑制作用，对各土传病害的抑菌率在76％以上。田间试验的结果也进一步证明解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3对土传病害的有效性，防效能维持在59％以上，作为对土传病害生态、环保的生物产品具很好的市场应用前景。
本发明具有下列优点和效果：
解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3是食用真菌根部分离筛选到的对多种植物病原菌具抑菌作用的菌株，通过获得的16S rDNA和gyrB基因片段，在NCBI上BLAST搜索和比对，并结合菌的形态、生理生化性质，判定为一新的解淀粉芽孢杆菌植物亚种菌株，并于2014年10月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.9884。
本发明的解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3是从食用真菌类根中部分离筛选到的对多种植物病原菌具抑菌作用的生物防治菌，取自自然。又是动植物的有益菌，生态、环保，对人无毒、安全，应用范围广、生长适应性强，在任何介质都易于定殖、繁殖，易大量培养、生产工艺简单，发酵周期短，成本低，产业化可行性高。利用解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3生产的微生物菌剂能有效防治蔬菜的土传病害，减少损失，对人无毒、利于环境，安全、生态、环保，能代替化学药剂用于土传病害防治、土壤调理、促植物生长，减少化学药剂带来的食品安全、药物残留、环境污染等问题，确保食品安全、环境友好、生态安全。且本发明易于工业化生产及推广应用，具有良好的应用前景。
下面通过附图和实施例对本发明进行详细说明。应该理解的是，所述的实施例仅仅涉及本发明的优选实施方案，在不脱离本发明的精神和范围情况下，各种成分及含量的变化和改进都是可能的。
保藏信息：
解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株，该菌株的分类命名为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)，其保藏编号为：CGMCC No.9884，保藏日为2014年10月30日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
附图说明
图1是本发明实施例解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的菌体形态(×1000倍)。
图2是本发明实施例解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的菌落形态。
具体实施方式
一、解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3的制备及鉴定
1、样品采集
从福建省三明市大田县老树林采集土壤样品、收集担子菌纲伞菌红菇科食用真菌，自然晒干；剪下食用真菌根部，研磨成粉，混合均匀，得食用真菌根部样品；土壤样品研磨成粉，混合均匀，得土壤样品；
2、菌株的分离和抗性菌筛选的与纯化
(1)样品稀释：分别从混合均匀的2个样品(真菌根部样品和土壤样品)中，各称取5g溶解到装有45ml无菌水的三角瓶中，150rp振荡器振荡成均匀的10-1稀释液，然后用1ml移液枪吸取该稀释液1ml至装有9ml无菌水的试管中，充分摇匀，即制成10-2的样品稀释液，并依次稀释至10-5；
(2)培养基准备：
①NA培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCL5g，琼脂粉20g，蒸馏水1000ml，PH7.0；
②PDA培养基：葡萄糖20g，去皮马铃薯200g，琼脂粉20g，蒸馏水1000ml，PH7.0；
③将配制好的NA培养基、PDA培养基灭菌，于45℃-55℃倾倒至无菌的培养基；
(3)菌种分离、筛选及纯化：分别吸取上述2种样品的不同稀释倍数的稀释液0.1ml，均匀涂布于冷却好的PDA培养基、NA培养基，放置28℃培养箱中倒置培养5天，每天观察并挑选长势良好、对周边菌具明显拮抗作用的菌落于PDA培养基培养；
(4)拮抗菌株验证及纯化：将所挑选出的培养于PDA培养基、能快速生长繁殖且可能具拮抗作用的菌落，利用实验已有菌株，验证对柑桔酸腐病菌、蒂腐病菌、青绿霉菌、炭疽病菌，香蕉轴腐病、炭疽病，草莓灰霉病、软腐病等预拮抗试验；并就拮抗作用最好、最产业化前景的1个菌株于PDA培养基上培养纯化，并命名菌株ZFH-3；
3、菌株的鉴定
(1)、菌落形态：解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3，革兰氏阳性，芽饱椭圆形，中生或端生，孢囊不膨大；菌体呈杆状，0.7-0.9μm×1.8-3.0μm，单个、成对或栅栏状排列。菌落乳白色，圆形，表面光滑稍突，不透明，边缘整齐，直径约1mm。见图1、图2。
图1为解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的菌体形态(普通生物显微镜1000倍拍摄)。
图2为解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的菌落形态(用普通照相机拍摄)。
(2)、ZFH-3的生理活性特征见下表1：
表1
(3)、ZFH-3的16S rDNA系列分析，如序列表中序列1所示：
(4)、ZFH-3的gyrB基因系列分析，如序列表中序列2所示：
(5)、ZFH-3鉴定结论
根据菌株ZFH-3的形态学、生理生化鉴定及16rDNA、gyrB基因系列分析，最终鉴定ZFH-3为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)，并命名为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3，于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)保藏，保藏编号：CGMCCNo.9884，保藏日期为2014年10月30日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码为100101。
二、解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3原粉的制备
1、解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3的活化
取一支解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3的冷冻干燥管，先用75％酒精沿冷冻干燥管尖头端擦下灭菌，酒精干后，再用酒精灯烧冷冻干燥管的尖头，最后用摄子打破冷冻干燥管尖头，无菌操作方式挑取解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3菌粉至250mL三角瓶中稀释，32℃、150r/min均匀振荡0.5h。用无菌吸管吸取0.1mL菌液，在LB固体培养基中划线培养24h-36h，解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3在LB固体培养基上菌落乳白色，圆形，明显突起，表面光滑，不透明，边缘整齐。
LB培养基配方(g/L)：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl10g，溶剂为水，pH7.0-7.2。固体培养基在液体培养基中加2％琼脂。
2、一级种子液的制备
挑取LB固体培养基上的单菌落接种于一级种子摇瓶中，摇瓶体积为250mL，一级种子LB液态培养基(121℃，灭菌20min)的装液量50ml。将一级种子摇瓶在32℃、180r/min下培养14h，得到一级种子液。
3、二级种子液的制备
种子罐中的培养基仍为LB液体培养基，121℃，灭菌20min。将一级种子液接入种子罐中，接种量为0.5-1％(V/V)，培养条件为：通气比1：1，搅拌转速为250-400r/min，培养温度32℃，罐压0.05MPa，培养时间为12h。培养结束时得到二级种子液，其活菌含量为1-3×108cfu/mL，OD值在0.85左右，此时菌种活力强。
4、解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌液发酵
发酵培养基配方(重量百分比)：玉米淀粉3％，豆粕粉3％，酵母膏0.9％，氯化钠0.25％，碳酸钙0.25％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.3％，pH7.2-7.5，121℃，灭菌30min。
将解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3的二级种子液，按照接种量为1％(V/V)接入发酵罐中，培养条件为：通气比为1：0.7，搅拌转速为180r/min、罐压0.05MPa、培养温度32℃、培养时间为48h左右，发酵过程中根据泡沫情况流加消泡剂。下罐时间以取样镜检芽孢90％以上释放为准。成熟发酵液中解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3活芽孢含量为30～40×108cfu/mL，得发酵成熟菌剂。
5、解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌原粉
发酵成熟菌剂(活芽孢含量为30～40×108cfu/mL)经碟片离心机或微滤设备浓缩后，加入轻质碳酸钙，浓缩成熟发酵菌剂与轻质碳酸钙的重量比为100:3，得液固混合物。将该液固混合物搅拌30min后，利用输料泵将液固混合物送入离心式喷雾塔中干燥，得到该菌原粉。
离心式喷雾塔中的干燥条件为：进风口温度为180-200℃，出风口温度为80-85℃。菌原粉中含水量小于5％(W/W)，活芽孢含量2000×108cfu/g。
三、解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3微生物菌剂之油悬剂制备方法
1、本发明所述解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3微生物菌剂之油悬浮剂的制备方法
(1)：称取2×1011活芽孢/克的解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3原粉10-40重量％，植物油10-20重量％，混合乳化剂：15-20重量％，在混合釜中混合搅拌1.5小时。
(2)：往步骤(1)搅拌1.5小时后的混合釜中加入防冻剂：4-6重量％，保护剂：1-10重量％，并补足植物油至100％继续搅拌0.5小时，即可形成稳定的油悬浮剂，得到含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3活芽孢的产品。
所述油悬浮剂制备方法中的植物油可选用大豆油、菜籽油、棕榈油、玉米油或它们的衍生物等的一种或多种。
所述油悬浮剂中的混合乳化剂为聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯(吐温20)、聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯(吐温40)、聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯(吐温60)、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(吐温80)、山梨醇酐单月桂酸酯(司盘20)、山梨醇酐单棕榈酸酯(司盘40)、山梨醇酐单硬脂酸酯(司盘60)、山梨醇酐叁硬脂酸酯(司盘65)、山梨醇酐单油酸酯(司盘80)、脂肪醇聚氧乙烯醚、油醇聚氧乙烯醚、烷基合成醇烷氧基化合物、十二烷基苯磺酸钙、聚乙二醇脂肪酸酯、木质素磺酸盐、聚羧酸盐或萘磺酸钠甲醛缩合物(NN0)二种或多种任意比例的组成混合乳化剂。
所述油悬浮剂中的防冻剂为乙二醇、丙二醇或丙三醇中的一种或几种任意比例的混合。
所述油悬浮剂中的保护剂为聚乙二醇、丙三醇、氯化钠、蔗糖、乙酸钠或碳酸氢钠中的一种或几种任意比例的混合。
2、以总重量100克为例的油悬浮剂产品配方
油悬浮剂配方1
每克含2×1010个解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3活芽孢。
油悬浮剂配方2
每克含6×1010个解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3活芽孢。
油悬浮剂配方3
每克含8×1010个解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3活芽孢。
四、解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3微生物菌剂之可湿性粉的制备方法
1、本发明解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3微生物菌剂之可湿性粉的制备方法
(1)：称取2×1011活芽孢/克的解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3原粉10-60重量％，润湿剂：1-5重量％，高速万能粉碎机中混合粉碎20分种，并观察粉碎情况。
(2)：在步骤(1)的基础上，加入分散剂：2-8重量％，稳定剂：0.5-2重量％，并补足载体至100％，继续粉碎，依均匀性、颗粒大小、入水的悬浮及分散情况断定产品是否还需继续粉碎，需0.5小时左右。最终即可形成稳定的含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3活芽孢的可湿性粉剂。
所述可湿性粉剂制备方法中的载体可为轻质碳酸钙、硅藻土、膨润土、凹凸棒土、高岭土、白炭黑的一种或多种。
所述润湿剂为聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯(吐温40)、聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯(吐温60)、山梨醇酐单月桂酸酯(司盘20)、月桂醇硫酸钠、月桂醇聚氧乙烯基醚硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、拉开粉、月桂醇聚氧乙烯醚磺酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或十二烷基苯磺酸钙中的一种或几种任意比例的混合。
所述分散剂为萘磺酸钠甲醛缩合物(NN0)、扩散剂MF、聚羧酸盐、木质素磺酸盐、多聚磷酸钠、聚乙二醇、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮的一种或几种任意比例的混合。
所述稳定剂为氯化钠、蔗糖、油酸钠、碳酸氢钠、苯甲酸钠或双乙酸钠的一种或几种任意比例的混合。
2、以总重量100克为例的可湿性粉产品配方
可湿性粉配方1
每克含4×1010个解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3活芽孢。
可湿性粉配方2
每克含8×1010个解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3活芽孢。
可湿性粉配方3
每克含6×1010个解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3活芽孢。
可湿性粉配方4
每克含2×1010个解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3活芽孢。
可湿性粉配方5
每克含1.2×1011个解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3活芽孢。
五、解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3菌对主要土传病菌的平板抑菌作用
解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的活化：从解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的斜面种子管中，用无菌接种针挑取单落至PDA、LB固体培养基划线培养24h-36h，培养温度32℃，解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3在LB、PDA长势好，菌落乳白色，圆形，明显突起，表面光滑，不透明，边缘整齐。
选取番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、番茄青枯病菌(Ralstoniasolanacearum)、辣椒根腐病(Fusarium vasinfectum Atk)、辣椒疫病(Phytophthoracapsici Leonianv)、大白菜欧文氏杆菌(Erwinia)软腐病菌、黄瓜立枯病菌(Rhizoctoniasolani/Kühn)的斜面种子管，用无菌接种针挑取菌落至PDA固态培养基、LB固体培养基中培养5d，培养温度28℃。选取长势良好培养基，待用。
平板对峙法：将PDA平板上培养3-5天的番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、番茄青枯病菌(Ralstonia solanacearum)、辣椒根腐病(Fusarium vasinfectum Atk)、辣椒疫病(Phytophthora capsici Leonianv)、大白菜欧文氏杆菌(Erwinia)软腐病菌、黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani/Kühn)病原菌打成直径5mm的菌饼，接种于制作好的PDA培养基中央，然后将在PDA培养基上活化24h的解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3接种于距菌饼2.5cm处，每个PDA平板接种4个点，重复3次，以接无菌水为空白对照。置于培养箱28℃下培养，待对照中病原菌长满培养皿后，测量处理组菌落直径和对照菌落直径，并计算抑菌率。
抑制率(％)＝(对照组菌落直径-处理组菌落直径)/(对照组菌落直径-原菌饼直径)*100％。
表2平板抑菌作用
从表2结果可知，解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefacienssubsp.plantarum)ZFH-3菌对主要的土传病害致病菌：番茄枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、番茄青枯病菌(Ralstonia solanacearum)、辣椒根腐病(Fusariumvasinfectum Atk)、辣椒疫病(Phytophthora capsici Leonianv)、大白菜欧文氏杆菌(Erwinia)软腐病菌、黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani/Kühn)都具明显的抑制作用，除枯萎病菌、疫病菌外，对其他几种病菌的抑菌率都在80％以上，特别是对软腐病菌的抑菌率达85.79％。
六、解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3对蔬菜土传病害田间防治效果
从珠海、中山寻找番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)和番茄青枯病菌(Ralstonia solanacearum)发病菜地、辣椒根腐病(Fusarium vasinfectum Atk)和辣椒疫病(Phytophthora capsici Leonianv)发病菜地、大白菜软腐病菌(Erwinia)发病菜地、黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani/Kühn)发病菜地，最终确定的发病菜地按发病情况，均匀分成三个区块，番茄与辣椒每个区统计850株、黄瓜、大白菜每个区统计200株，并调查施药前的发病情况，具体如下表3所示。
表3田间试验用药前枯萎病、青枯病、疫病、根腐病、软腐病的的发病情况
选用解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3制备好的油悬浮剂、可湿性粉剂，实验时分别选择了油悬浮剂配方1(20％原粉制备的产品)、可湿性粉剂配方1(40％原粉制备的产品)
㈠4×1010ZFH-3油悬浮剂微生物菌剂 稀释400倍
㈡8×1010ZFH-3可湿性粉剂微生物菌剂 稀释800倍
施药方式采用浇淋，每株淋100～150ml药液，共浇淋两次，5天一次。第二次浇淋药5天后调查病株数及统计结果。结果如下表4-6所示。
表4含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3微生物菌剂对番茄枯萎病、青枯病的田间防效
表5含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3微生物菌剂对辣椒疫病、根腐病的田间防效
表6含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3微生物菌剂对黄瓜枯萎病、大白菜软腐病的田间防效
从对田间自然发病蔬菜的防效试验结果可知，本发明含解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)ZFH-3含的油悬浮剂、可湿性粉剂的微生物菌对多种农作物病原菌具抑制显著的抑制作用，对蔬菜主要的土传病害，如番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)和番茄青枯病菌(Ralstonia solanacearum)、辣椒根腐病(Fusarium vasinfectum Atk)和辣椒疫病(Phytophthora capsici Leonianv)、大白菜软腐病菌(Erwinia)、黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani/Kühn)具较好的病害防治作用，对各病害的防效保持59％以上，作为对土传病害生态、环保的生物产品具很好的市场应用前景。

Claims (8)

1.一种含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物菌剂，其特征在于：每克微生物菌剂含2×1010～1.2×1011cfu解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3活芽孢，ZFH-3菌株的分类命名为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.Plantarum)，其保藏编号为：CGMCC No.9884。
2.如权利要求1所述的含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物菌剂，其特征在于：所述的微生物菌剂为含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3活芽孢的微生物可湿性粉剂或含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3活芽孢的微生物油悬浮剂。
3.如权利要求2所述的含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物菌剂，其中含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物油悬浮剂组成如下：
所述混合乳化剂为聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯、山梨醇酐单月桂酸酯、山梨醇酐单棕榈酸酯、山梨醇酐单硬脂酸酯、山梨醇酐叁硬脂酸酯、山梨醇酐单油酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚、油醇聚氧乙烯醚、烷基合成醇烷氧基化合物、十二烷基苯磺酸钙、聚乙二醇脂肪酸酯、木质素磺酸盐、聚羧酸盐或萘磺酸钠甲醛缩合物中的两种或多种任意比例组成的混合乳化剂；
所述油悬浮剂中的防冻剂为乙二醇、丙二醇或丙三醇中的一种或几种任意比例的混合；
所述油悬浮剂中的保护剂为聚乙二醇、丙三醇、氯化钠、蔗糖、乙酸钠或碳酸氢钠中的一种或几种任意比例的混合；
所述植物油选自大豆油、菜籽油、棕榈油、玉米油的一种或多种任意比例的混合。
4.如权利要求3所述的含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)：称取2×1011活芽孢/克的解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3原粉10-40重量％，植物油10-20重量％，混合乳化剂15-20重量％，在混合釜中混合搅拌1.5小时；
(2)：往步骤(1)搅拌1.5小时后的混合釜中加入防冻剂4-6重量％，保护剂1-10重量％，并补足植物油至100％，继续搅拌0.5小时，得含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3活芽孢的微生物油悬浮剂。
5.如权利要求2所述的含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物菌剂，其中含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物可湿性粉剂组成如下：
所述润湿剂为聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯、山梨醇酐单月桂酸酯、月桂醇硫酸钠、月桂醇聚氧乙烯基醚硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、拉开粉、脂肪醇聚氧乙烯醚或十二烷基苯磺酸钙中的一种或几种任意比例的混合；
所述分散剂为萘磺酸钠甲醛缩合物、扩散剂MF、聚羧酸盐、木质素磺酸盐、多聚磷酸钠、聚乙二醇、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮的一种或几种任意比例的混合；
所述稳定剂为氯化钠、蔗糖、油酸钠、碳酸氢钠、苯甲酸钠或双乙酸钠的一种或几种任意比例的混合；
所述载体选自轻质碳酸钙、硅藻土、膨润土、凹凸棒土、高岭土或白炭黑的一种或多种任意比例的混合。
6.如权利要求5所述含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)：称取2×1011活芽孢/克的解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3原粉10-60重量％，润湿剂1-5重量％，高速万能粉碎机中混合粉碎；
(2)：在步骤(1)基础上，加入分散剂2-8重量％，稳定剂0.5-2重量％，并补足载体至100％，继续粉碎0.5小时，得含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3活芽孢的微生物可湿性粉剂。
7.权利要求1所述的含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物菌剂在防治土传病害中的应用。
8.如权利要求7所述的含解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的微生物菌剂在防治土传病害中的应用，其特征在于：所述的土传病害包括：枯萎病菌、青枯病菌、根腐病、疫病、欧文氏杆菌软腐病菌或立枯病菌。
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Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105394085B (zh) * 2015-10-29 2018-03-23 海南大学 一种金黄垂直链霉菌hn6可湿性粉剂
CN105219681B (zh) * 2015-11-04 2018-02-13 湖北工程学院 一种解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens D2WM及制备方法和应用
CN105399572A (zh) * 2015-11-22 2016-03-16 广东植物龙生物技术有限公司 一种蚕沙解淀粉芽胞杆菌zfh-3多功能生物肥及其应用
CN105494431B (zh) * 2015-12-25 2018-08-31 南京普帅生物纳米科技发展有限公司 一种脂肽-纳米二氧化钛复合制剂及其制备方法和应用
CN105754858A (zh) * 2016-03-04 2016-07-13 广西壮族自治区水产科学研究院 一种刺激隐核虫包囊的保存剂
CN109042737A (zh) * 2018-07-27 2018-12-21 四川省农业科学院植物保护研究所 一种采用生防菌Bam22防治黄连根腐病和提高产量的方法
CA3131955A1 (en) * 2019-04-01 2020-10-08 Bala N. Devisetty Mycorrhizae and/or bacillus amyloliquefaciens liquid fertilizer compatible formulations
CN110447659B (zh) * 2019-08-15 2020-08-21 江苏苏滨生物农化有限公司 一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂及其制备方法
CN110683912A (zh) * 2019-12-02 2020-01-14 傅玉珍 一种抗病毒多元素生物有机菌剂肥料
CN111073833B (zh) * 2019-12-27 2021-08-10 北京工商大学 解淀粉芽孢杆菌、菌剂及其应用和降解甲醛的方法
CN111139199B (zh) * 2020-01-13 2021-08-31 中化农业（临沂）研发中心有限公司 解淀粉芽孢杆菌CGMCC No.17843及其应用
WO2022023109A1 (en) * 2020-07-31 2022-02-03 Basf Se New agrochemical formulations for fusaricidin producing bacteria
CN114772718B (zh) * 2022-03-14 2023-06-23 南京信息工程大学 一种低cn比污水生物脱氮外加新型复合碳源生产工艺
CN115725457A (zh) * 2022-10-24 2023-03-03 中国海洋大学 一种用于土传病害防治和土壤修复的解淀粉芽孢杆菌及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103642727A (zh) * 2013-12-02 2014-03-19 北京市农林科学院 一株抑制真菌的解淀粉芽孢杆菌及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103642727A (zh) * 2013-12-02 2014-03-19 北京市农林科学院 一株抑制真菌的解淀粉芽孢杆菌及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Extracellular phytase activity of Bacillus amyloliquefaciens FZB45 contributes to its plant-growth-promoting effect.;Idriss EE et al.;《Microbiology》;20020731;第148卷(第Pt7期);第2097-2109页 *
杨树内生细菌的分离、多样性分析及解淀粉芽孢杆菌PEBA20的抑菌活性研究;胥丽娜;《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》;20100315(第3期);第24页第1段，第38页表6，第40页表7 *
解淀粉芽孢杆菌YN-1抑制植物病原真菌活性物质鉴定;邓建良等;《植物病理学报》;20100430;第40卷(第2期);第202-209页 *

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