CN104605345A - 含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品，其特征在于，采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方，该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01的重量百分比为20％～50％，其余为中药提取物；所述中药材提取物为下列重量配比的中药材：白术6份、木香8份、茉莉花6份、桃仁8份、紫竹根4份、马齿笕20份、蒲公英8份、枸杞子12份，加水煎煮所得的提取物。可应用于预防和治疗高脂血症。

Description

含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品
技术领域
本发明涉及含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品。
背景技术
高脂血症是指血脂水平过高，可直接引起一些严重危害人体健康的疾病，如动脉粥样硬化、冠心病、胰腺炎等。
高脂血症的临床表现主要是脂质在真皮内沉积所引起的黄色瘤和脂质在血管内皮沉积所引起的动脉硬化。尽管高脂血症可引起黄色瘤，但其发生率并不很高；而动脉粥样硬化的发生和发展又是一种缓慢渐进的过程。因此在通常情况下，多数患者并无明显症状和异常体征。不少人是由于其他原因进行血液生化检验时才发现有血浆脂蛋白水平升高。
部分血脂异常的患者通过调整饮食和改善生活方式均可以达到比较理想的血脂调节效果，少数患者血脂水平非常高，可以通过血浆净化治疗和外科治疗。除此之外，尚无公认特别好的治疗方法。
人体血液中正常胆固醇含量为2.9～6.0mmol/L，血清中胆固醇水平过高会引起一系列疾病，例如高血压、冠心病、动脉硬化等心脑血管疾病。现代的人体及动物实验证明活的乳酸菌具有确切的降胆固醇作用。但是由于人体肠道内是含有胆盐的酸性环境，所以常见的乳酸菌在人体消化道内难以存活，以至于应用乳酸菌实现降低胆固醇的发现难以在临床有效实施。
祖国中医药在调理慢性疾病方面颇具优势，其针对根本调理患者体质，用药安全性高，愈后依赖性小。
本发明所涉及的中药材均可见记载于《中华本草》。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含有一种副干酪乳杆菌与中药材提取物复合配方的保健食品。
本发明是通过如下技术方案实现的：
含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品，其特征在于，采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方，该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉的重量百分比为20％～50％，其余为中药提取物；
所述中药材提取物为下列重量配比的中药材：白术6份、木香8份、茉莉花6份、桃仁8份、紫竹根4份、马齿笕20份、蒲公英8份、枸杞子12份，加水煎煮所得的提取物。
所述的副干酪乳杆菌ZPY01按照以下步骤进行发酵培养：（1）制备脱脂乳培养基：1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉，溶解后分装到试管中，121℃条件下灭菌15min，备用；（2）菌种的活化：将菌种接种至脱脂乳培养基中，37℃恒温培养；反复接种培养，直至活化到凝乳时间为4~5h，得发酵液；
所述副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉的制备方法：将上述发酵液离心分离菌体得到菌泥，向菌泥中加入1倍重量的海藻糖，乳化冻干，即得到所述的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉。
所述中药材提取物的提取方法为：称取所述重量配比的药材，加8倍量水，煎煮1.5小时，过滤；滤渣加6倍量水，煎煮1小时，过滤；合并滤液，浓缩，干燥。
本发明的有益效果：
本发明所采用的保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01为发明人新近提纯的新菌种，该菌种具有较强的耐酸性，在pH2.5的酸性条件下可以保持4h活性；对胆盐的抗性也比较明显，能耐受0.40%牛胆酸钠。能够实现在人体消化道长时间存活并发挥降低胆固醇的功效。
发明人认为，高脂血症的病根在于脾胃受损，水谷不化，生化痰湿，水谷无法化生气血精微，聚湿生痰，津液由浊化膏，凝成脂类，囤积于血中，造成了气血运行不畅，痰瘀阻络，经脉失养，最终肝肾亏虚。本发明中药部分运用：白术健脾益气；木香、茉莉花行气化痰；桃仁、紫竹根活血破淤；马齿笕、蒲公英利湿化浊；枸杞子温补肝肾；诸药合用，共奏健脾行气、活血破淤、利湿化浊、补益肝肾之功效。
本发明采用副干酪乳杆菌ZPY01与传统中药结合，从而实现从根本调理病根的同时迅速降低胆固醇的功效，标本兼治。
本发明所选用的原料药食两用，安全性高，适于长期服用。
下面结合实验数据说明副干酪乳杆菌ZPY01的特性：
一、实验材料与方法
（一）、材料
1、菌种
实验菌种来自臧牧民自制牦牛酸奶中，对其进行筛选分离后，参照伯杰氏细菌鉴定手册（第八版）和《乳酸菌——生物学基础及应用》，对其进行生理生化鉴定。形态观察和生理生化鉴定结果表明:分离菌为副干酪乳杆菌，命名为副干酪乳杆菌ZPY01，实验编号为：Lp—ZPY01；对照菌株Lactobacillus paracasei为公知常见菌株，来自鲁东大学生命科学学院发酵室，实验编号为：Lp—CK。
2、培养基
MRS培养基；胆固醇培养基：在MRS培养基中添加0.3mg/ml的胆固醇；脱脂乳培养基：新西兰恒天然脱脂奶粉，121℃灭菌10min。
3、试剂
牛胆酸钠；胆固醇。
4、仪器与设备
722光栅分光光度计，恒温水浴锅、电热蒸汽灭菌锅、生化培养箱、pH计、超净工作台等。
（二）、方法
1、脱脂乳培养基
10%脱脂乳培养基：1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉，溶解后分装到试管中，每支分装10ml，121℃、15min灭菌后备用。
2、菌种的活化
将菌种接种至10ml已灭菌的脱脂牛奶中，37℃恒温培养。反复接种培养，直至活化到凝乳时间为4~5h。
3、菌株抗酸性测定
用1.0mol/L的HCl将MRS培养基调至pH3.5、pH2.5。将活化好的菌液以1.0%的接种量分别接种于MRS 液体培养基中，37℃恒温培养4.0h后，重新接入新鲜培养基中（接种量1.0%），每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度。绘制菌株的生长曲线，检测菌株对酸的耐受性，实验重复3次，取其平均值。
4、菌株抗胆盐测定
在MRS培养基中分别加入牛胆酸钠，使胆盐浓度分别为0.3%和0.4%。将活化好的菌以1.0%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度。绘制菌株的生长曲线，比较菌株生长与胆盐含量的关系，实验重复3次，取其平均值。
5、胆固醇测定方法的建立
将活化好的菌液以1.0%的接种量分别接种于胆固醇培养基中，37℃恒温培养72h，以未接菌的培养基为空白对照。胆固醇含量的测定参照GB/T15206—1994食品中胆固醇的测定方法：直接离心铁矾比色法。用可见分光光度计在波长560nm 处测定其光密度。胆固醇清除率按下式计算：
式中：A为发酵72h，在560nm处测定的培养液的光密度（OD值）；C为空白对照的OD值。
二、实验结果与分析
（一）、菌株抗酸能力实验
食物停留在酸性胃环境中的时间约为2—4h。进食后由于食物的中和会使pH值上升至3或更高一些，但在消化过程中随着胃酸的分泌，胃液pH值又会下降。
本发明模拟人体胃肠环境，将MRS培养基用1.0mol/L的HCl将pH值调至pH3.5和pH2.5形成两种不同酸度的实验环境，将副干酪乳杆菌ZPY01和对照菌株La—CK以1.0%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，37℃恒温培养4.0h后，重新接入新鲜培养基中，每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度。实验重复3次，取其平均值。绘制菌株的生长曲线，其生长曲线见图1。
由图1可知，两株菌经不同的pH处理，其生长情况不同。经pH3.5处理后的生长情况均好于pH2.5处理后的生长情况。两株菌经pH2.5处理后其休眠期均延长，说明酸性环境对菌株的生长影响很大，环境酸性越低对菌株的生长越不利。经pH2.5处理、培养42h以后，副干酪乳杆菌ZPY01的生长情况明显好于副干酪乳杆菌La—CK，说明副干酪乳杆菌ZPY01在pH2.5的环境中可以良好生长，对酸具有较强的耐受性，具有很好的耐胃酸能力。
（二）、菌株抗胆汁盐能力实验
人体小肠中胆汁盐含量在0.30%左右。模拟人体胃肠环境，在MRS培养基中分别加入牛胆酸钠，使胆盐浓度分别为0.3%和0.4%。将副干酪乳杆菌ZPY01和对照菌株La—CK以1.0%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度，实验重复3次，取其平均值。绘制菌株的生长曲线，其生长曲线见图2。
由图2可知，这两种菌株都具有良好的抗胆汁盐能力，如在0.4%的胆汁盐环境中这两株菌都能生长。但副干酪乳杆菌ZPY01在这两个培养基中的生长情况均优于副干酪乳杆菌La—CK。结果说明：副干酪乳杆菌ZPY01抗胆汁盐能力优于副干酪乳杆菌La—CK。
（三）、菌株清除胆固醇能力实验
将副干酪乳杆菌ZPY01和副干酪乳杆菌La—CK以1.0%的接种量分别接种于胆固醇培养基中，37℃恒温培养72h后，以未接菌的培养基为空白对照，胆固醇清除率实验结果见表1。
表1 菌株的胆固醇清除能力
菌株 胆固醇脱除率 （%）
副干酪乳杆菌ZPY01 43.2
副干酪乳杆菌La—CK 23.5
由表1可知，副干酪乳杆菌ZPY01降胆固醇的效率较高，达到43.2%，是一株具有高效降胆固醇功能的乳酸菌。
益生菌体外降低胆固醇的机理目前尚无定论。可能机理主要包括（1）、沉淀理论：游离胆酸盐与胆固醇的共沉淀作用。（2）吸收理论：细菌对胆固醇的吸收。（3）胆盐水解酶理论：把结合态的胆盐催化水解为氨基酸残基和游离胆盐，从而促进胆固醇的分解代谢。（4）结合理论：胆固醇结合到乳酸菌的细胞膜或壁上。（5）共沉淀和吸收共同作用。
下面结合临床试验数据来说明本发明的有益效果：
1、资料与方法
1.1 一般资料
2013年1月至2014年1月发明人共收集40例高脂血症患者。随机分为两组。治疗组20例，其中女性12例，男性8例；平均年龄(62.2±12.3)岁；病程 (10.3±2.6)年。对照组20例，其中女性11例，男性9例；平均年龄(62.9±11.8)岁；病程(10.7±1.2)年。两组患者年龄、性别、病情、病程比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
1.2 诊断标准
参照《中药新药临床研究指导原则》和2007年《中国成人血脂异常防治指南》标准进行评定。在正常饮食情况下，2周内如2次测血脂符合以下情况之一者，即可确诊：(1)胆固醇(TC)≥6.22mmol／L(240 mg／d1)；(2)三酰甘油(TG)≥2.26mmol／L(200 mg／d1)；(3)高密度脂蛋白(HDL-C)≥1.04 mmol／L(40 rag／d1)；(4)低密度脂蛋白(LDL-C)≥4.14 mmol／L(160 mg／d1)。
1.3 治疗方法
1.3.1 治疗组口服本发明按照具体实施例1制得的胶囊，3次／d，每次4g，疗程为3个月。
1.3.2 对照组应用山楂降脂片治疗 6片／次，3次／d，疗程为3个月。
两组在治疗期间均控制饮食、适当体育活动等基础治疗。患者每2周随访1次。
2、结果统计
2.1 疗效标准
参照《心血管药物临床试验评价方法的建议》及《中药新药临床研究指导原则(调整血脂药物)》标准。
显效：治疗后任何项达到下列：TC下降≥20％；TG 下降≥40％；HDL-C升高≥0.26mmol／L。
有效：治疗后任何项达到下列：TC下降10％ ～20％；TG 下降20％～40％；HDL-C升高0.11～0.26mmol／L。
无效：治疗后血脂检测未达到有效标准者。
2.2 治疗结果
两组疗效比较见表2，有统计学意义(P>0.05)。
表2 两组疗效比较 (n，％ )
组别 n 显效 有效 无效 总有效率(%)
治疗组 20 12 4 4 80%
对照组 20 2 6 12 40%
2.3 不良反应
治疗组未见明显不良反应；对照组出现肠痉挛1例，恶心1例。治疗期间，均未发生心源性休克、脑卒中、肝肾中毒等严重不良反应事件。
附图说明
图1是本发明菌株Lp—ZPY01和对照菌株La-CK经低pH处理后的生长曲线。
图2是胆盐对本发明菌株Lp—ZPY01和对照菌株La-CK生长的影响曲线。
具体实施方式
本发明所采用的菌种现保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101；保藏中心登记入册编号：10059；分类命名：副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei；保藏日：2014年11月26日。
本发明副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）ZPY01具有以下特性：
（1）、菌落边缘整齐、表面光滑、扁平，呈乳白色，为圆形，直径大多1.0mm以上；
（2）、镜检为无芽孢的长杆菌,单个或成对出现；
（3）、在pH2.5处理4小时之后的存活率为61％；
（4）、对胆汁盐的抗性比较明显，能耐受0.40%牛胆酸钠；
（5）、其体外胆固醇清除率达43.2%。
下面结合实施例进一步说明本发明：
实施例1
含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品，采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方，该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01的重量百分比为30％，其余为中药提取物；
所述中药材提取物为下列重量配比的中药材：白术6份、木香8份、茉莉花6份、桃仁8份、紫竹根4份、马齿笕20份、蒲公英8份、枸杞子12份，加水煎煮所得的提取物；提取方法为：称取所述重量配比的药材，加8倍量水，煎煮1.5小时，过滤；滤渣加6倍量水，煎煮1小时，过滤；合并滤液，浓缩，干燥。
所述的副干酪乳杆菌ZPY01的发酵培养按照以下步骤进行：（1）制备脱脂乳培养基：1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉，溶解后分装到试管中，121℃条件下灭菌15min，备用；（2）菌种的活化：将菌种接种至脱脂乳培养基中，37℃恒温培养；反复接种培养，直至活化到凝乳时间为4~5h。
将发酵培养后得到的发酵液，离心分离菌体得到菌泥，向菌泥中加入1倍重量的冻干保护剂海藻糖，乳化冻干，即得到所述的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉。
取30％重量的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉，与70%重量的上述中药材提取物混合均匀，装入胶囊壳，封装，制得本发明保健食品的胶囊剂。
可用于预防和治疗高脂血症。每日建议用量12克，分2～３次服用。
实施例2
含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品，采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方，该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01的重量百分比为20％，其余为中药提取物；
所述中药材提取物为下列重量配比的中药材：白术6份、木香8份、茉莉花6份、桃仁8份、紫竹根4份、马齿笕20份、蒲公英8份、枸杞子12份，加水煎煮所得的提取物；提取方法为：称取所述重量配比的药材，加8倍量水，煎煮1.5小时，过滤；滤渣加6倍量水，煎煮1小时，过滤；合并滤液，浓缩，干燥。
所述的副干酪乳杆菌ZPY01的发酵培养按照以下步骤进行：（1）制备脱脂乳培养基：1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉，溶解后分装到试管中，121℃条件下灭菌15min，备用；（2）菌种的活化：将菌种接种至脱脂乳培养基中，37℃恒温培养；反复接种培养，直至活化到凝乳时间为4~5h。
将发酵培养后得到的发酵液，离心分离菌体得到菌泥，向菌泥中加入1倍重量的冻干保护剂海藻糖，乳化冻干，即得到所述的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉。
取20％重量的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉，与80%重量的上述中药材提取物混合均匀，装入胶囊壳，封装，制得本发明保健食品的胶囊剂。
可用于预防和治疗高脂血症。每日建议用量10克，分2～３次服用。
实施例3
含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品，采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方，该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01的重量百分比为50％，其余为中药提取物；
所述中药材提取物为下列重量配比的中药材：白术6份、木香8份、茉莉花6份、桃仁8份、紫竹根4份、马齿笕20份、蒲公英8份、枸杞子12份，加水煎煮所得的提取物；提取方法为：称取所述重量配比的药材，加8倍量水，煎煮1.5小时，过滤；滤渣加6倍量水，煎煮1小时，过滤；合并滤液，浓缩，干燥。
所述的副干酪乳杆菌ZPY01的发酵培养按照以下步骤进行：（1）制备脱脂乳培养基：1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉，溶解后分装到试管中，121℃条件下灭菌15min，备用；（2）菌种的活化：将菌种接种至脱脂乳培养基中，37℃恒温培养；反复接种培养，直至活化到凝乳时间为4~5h。
将发酵培养后得到的发酵液，离心分离菌体得到菌泥，向菌泥中加入1倍重量的冻干保护剂海藻糖，乳化冻干，即得到所述的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉。
取50％重量的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉，与50%重量的上述中药材提取物混合均匀，装入胶囊壳，封装，制得本发明保健食品的胶囊剂。
可用于预防和治疗高脂血症。每日建议用量15克，分2～３次服用。

Claims (3)

1.含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品，其特征在于，采用保藏编号为CGMCC No.10059的副干酪乳杆菌ZPY01与中药材提取物组成的复合配方，该配方中含副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉的重量百分比为20％～50％，其余为中药提取物；
所述中药材提取物为下列重量配比的中药材：白术6份、木香8份、茉莉花6份、桃仁8份、紫竹根4份、马齿笕20份、蒲公英8份、枸杞子12份，加水煎煮所得的提取物。
2.根据权利要求1 所述的含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品，其特征在于，所述的副干酪乳杆菌ZPY01按照以下步骤进行发酵培养：（1）制备脱脂乳培养基：1000ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉，溶解后分装到试管中，121℃条件下灭菌15min，备用；（2）菌种的活化：将菌种接种至脱脂乳培养基中，37℃恒温培养；反复接种培养，直至活化到凝乳时间为4~5h，得发酵液；
所述副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉的制备方法：将上述发酵液离心分离菌体得到菌泥，向菌泥中加入1倍重量的海藻糖，乳化冻干，即得到所述的副干酪乳杆菌ZPY01冻干粉。
3.根据权利要求1 所述的含有一种副干酪乳杆菌的用于治疗高脂血症的保健食品，其特征在于，所述中药材提取物的提取方法为：称取所述重量配比的药材，加8倍量水，煎煮1.5小时，过滤；滤渣加6倍量水，煎煮1小时，过滤；合并滤液，浓缩，干燥。
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