CN104597099A - 一种防腐琼脂糖凝胶板的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，包括溶胶和制板，所述防腐琼脂糖凝胶板的制备方法在溶胶之后加入庆大霉素溶液和青霉素钠溶液的混合液后再进行制板，具体步骤为溶胶、加入庆大霉素溶液和青霉素钠溶液的混合液、制板，再将制备的琼脂糖凝胶板包覆密封包裹物。与现有技术相比，本发明提出了在制备琼脂糖凝胶过程中添加抗生素，从而达到防腐杀菌的目的，有效解决了琼脂糖凝胶板保存过短的问题。通过本发明制备的琼脂糖凝胶板的优点是：体积小、方便存放，防腐性能强，存在极大的市场价值。
Description
技术领域
本发明涉及医药卫生技术领域，具体来说，涉及防腐琼脂糖凝胶板的制备方法。
背景技术
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。临床应用上，对于分子量较大的样品，一般采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
许多琼脂糖分子依靠氢键及其他力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。由于其分子上无带电基团，在缓冲液离子强度大于0.05时，对蛋白质无吸附作用，也无电渗现象，因而分辨率和重现性均较好，是一种用于血清蛋白电泳、各种同工酶电泳、脂蛋白电泳等项目检测的优良的电泳材料。
据了解，蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6～9之间，离子强度0.02～0.05为最适。常用1％的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
此外，琼脂糖凝胶电泳还可用于核酸的电泳的分析，其浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
在发明人先期的研究中，成功制备了一种超薄型琼脂糖电泳凝胶板并用于血清蛋白的分离与检测(实用新型专利：一种超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，专利号：ZL201220365558.6)。然而，尽管在制备凝胶板时已非常注意消毒步骤，但因为琼脂糖易长菌，导致配制好的琼脂糖凝胶板放置的时间很短，往往一周左右就会长菌而报废；仍需要现做现用，较为麻烦。因此，发明人致力于制作一种能长时间保存的琼脂糖凝 胶板，以达到随用随取的目的。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是制备一种防腐琼脂糖凝胶板，以长期处于良好的备用状态，这对试剂盒有效期的保证是极为重要的。为达到上述技术效果，本发明在制备琼脂糖凝胶的过程中加入抗生素，达到防腐杀菌的目的。据了解，各种抗生素一般都在很低浓度下对病原菌有抑制和杀灭作用，各种抗生素对不同微生物的有效浓度各异，有效浓度越低，表明抗菌作用越强。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：
一种防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，包括如下步骤：
步骤a)溶胶；
步骤b)加入庆大霉素溶液和青霉素钠溶液的混合液；
步骤c)制板。
更进一步，所述制备方法还包括步骤d)：将步骤c)制备的琼脂糖凝胶板包覆密封包裹物。
作为一种优选方案，将制备所述琼脂糖凝胶板所用器具消毒，具体操作为：用乙醇溶液对琼脂糖凝胶板模具、聚酯垫片及密封包裹物消毒后，紫外线灯下灭菌2h。
作为进一步优选方案，步骤a)具体操作为：精密称取琼脂糖后，再加入凝胶缓冲液中于微波炉中加热至溶解，最后将该琼脂糖凝胶溶液冷却至温度不低于45℃。
更进一步，将所述该琼脂糖凝胶溶液冷却至50℃。
作为进一步优选方案，步骤b)具体操作为：将庆大霉素溶液和青霉素钠溶液等体积混合，摇匀，再将其加入将步骤a)所得琼脂糖凝胶溶液中。
作为进一步优选方案，步骤c)具体操作为：将步骤b)配置的琼脂糖凝胶溶液倒入琼脂糖凝胶板模具中，使凝胶平整后静置至凝固。
优选地，用75％乙醇溶液对制备所述防腐琼脂糖凝胶板所用器具消毒。
优选地，紫外线灯消毒时，每过30min翻动一次所述器具放置方向，确保灭菌效果。
优选地，所述凝胶缓冲液包括pH8.6，10mmol／L三羟甲基氨基甲烷(Tris)，含1mmol／L乙二胺四乙酸(EDTA)和100mmol／L氯化钠(NaCl)溶液。
更优选地，所述凝胶缓冲液已巴氏消毒。
优选地，所述室温优选为30～70℃。
更优选地，所述室温为50℃。
优选地，所述庆大霉素溶液浓度为12.8μl／ml。
优选地，所述青霉素钠溶液质量百分数为0.003％。
更优选地，所述庆大霉素溶液将和青霉素钠溶液等体积混合，其在琼脂糖凝胶中浓度为2μl／ml。
优选地，所述琼脂糖凝胶板模具内部垫所述聚酯垫片。
更优选地，所述聚酯垫片为亲水性聚酯垫片。
优选地，所述密封包裹物为塑料薄膜。
优选地，所述塑料薄膜包被整个所述琼脂糖凝胶。
更优选地，所述塑料薄膜与琼脂糖凝胶之间无气泡，即所述塑料薄膜将所述琼脂糖凝胶密封包被于所述塑料薄膜和所述聚酯垫片之间。
优选地，所述该琼脂糖凝胶厚度小于1mm。
更优选地，所述该琼脂糖凝胶厚度为0.8mm。
另外需要说明的是，与现有技术相比，本发明提出了在制备琼脂糖凝胶过程中添加庆大霉素-青霉素钠溶液，从而达到防腐灭菌的目的，上述步骤在非无菌自然环境或去除密封包裹物的前提下，所述防腐琼脂糖凝胶板也可长时间保存；为达到更好的抗菌效果，可采用无菌环境并在所述防腐琼脂糖凝胶板外包覆密封包裹物，此操作并不决定本发明制备的防腐琼脂糖凝胶板的防腐效果。所述该防腐琼脂糖凝胶板体积小、方便存放；制作材料用量少，成本较低；厚薄均匀，外观湿润，琼脂板水分充足，饱满，无细菌生长，防腐性能强，经实验，其在4℃冰箱内保存时间长达6个月，有效解决了琼脂糖凝胶板保存过短的困扰，存在极大的市场价值。
附图说明
图1是本发明的一较佳实施例示意图；
图2是本发明的一较佳实施例俯视图；
图3是防腐琼脂糖凝胶板制成后当天实验泳道图；
图4是4℃冰箱保存防腐琼脂糖凝胶板3个月后实验泳道图；
图5是4℃冰箱保存防腐琼脂糖凝胶板4个月后实验泳道图；
图6是4℃冰箱保存防腐琼脂糖凝胶板5个月后实验泳道图；
图7是4℃冰箱保存防腐琼脂糖凝胶板6个月后实验泳道图；
图中：1、聚酯垫片；2、琼脂糖凝胶；3、塑料薄膜。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细、完整地说明。
实验前准备工作
取琼脂糖凝胶板模具、聚酯垫片及塑料薄膜，用75％乙醇溶液进行仔细擦拭，以除去污物及部分细菌；将模具组装完成，聚酯垫片、塑料薄膜向上放置，紫外线灯下灭菌2h，每30min时翻动一次所述器具放置方向，保证紫外灭菌效果。
参照上述操作，将制备所述琼脂糖凝胶板的器具消毒。
步骤a)溶胶
将凝胶缓冲液[pH8.6，10mmol／L三羟甲基氨基甲烷(Tris)，含1mmol／L乙二胺四乙酸(EDTA)和100mmol／L氯化钠(NaCl)溶液]置于锥形瓶中加热，温度维持在60～65℃之间，加热30分钟后，停止加热，留待备用。
步骤b)加入庆大霉素溶液和青霉素钠溶液的混合液
无菌水分别配制12.8μl／ml庆大霉素溶液和0.003％青霉素钠溶液，将以上两种溶液等体积混合，摇匀；无菌称取琼脂糖，用凝胶缓冲液将所述琼脂糖于微波炉中加热至溶解，迅速取出，在无菌条件下使其自然冷却至50℃，加入上述混合液并摇匀，使其在琼脂糖凝胶中浓度达到2μl／ml。
步骤c)制板
将所述防腐琼脂糖凝胶溶液迅速倒入下垫所述聚酯垫片的琼脂糖凝胶板模具中，用一直尺或三角尺的一边将凝胶拉平，以保证凝胶内无气泡且板表面平整，静置。
步骤d)将步骤c)制备的琼脂糖凝胶板包覆密封包裹物
待所述防腐琼脂糖凝胶凝固后，将塑料薄膜贴于凝胶上，确保所述塑料薄膜与所述琼脂糖凝胶间不能有气泡；待完全凝固后去除模具，所述塑料薄膜四周多出部分向下衬聚酯垫片底部内侧翻折，留待使用。
参照上述操作，即可制得厚度为0.8mm的防腐琼脂糖凝胶板。
下面就本发明制备完成的防腐琼脂糖凝胶板作稳定性实验。
实施例1制成后当天实验图(图3)
取一新鲜血清样本，用制成当天的防腐琼脂糖凝胶板做蛋白电泳实验，并对其结果进行数据分析：
| 泳道 | ALB | α1球蛋白 | α2球蛋白 | β球蛋白 | γ球蛋白 |
| 1 | 64.5 | 3.6 | 8.7 | 12.3 | 10.8 |
| 2 | 64.8 | 3.8 | 9.2 | 11.7 | 10.4 |
| 3 | 65.2 | 4.0 | 8.7 | 12.1 | 10.0 |
| 4 | 65.9 | 3.9 | 8.9 | 11.5 | 9.8 |
| 均值(x) | 65.1 | 3.83 | 8.9 | 11.9 | 10.3 |
| 标准差(s) | 0.52 | 0.15 | 0.20 | 0.32 | 0.38 |
| 变异系数(CV％) | 0.81 | 3.87 | 2.31 | 2.66 | 3.75 |
实施例24℃冰箱保存3个月样品实验图(图4)
取一样品，密封盒内潮湿、外观湿润、琼脂板水分充足、饱满、无细菌生长的防腐琼脂糖凝胶板。取一新鲜血清样本，用取出的样品做蛋白电泳实验，并对其结果进行数据分析(由于4号泳道存在拖尾，结果剔除)：
| 泳道 | ALB | α1球蛋白 | α2球蛋白 | β球蛋白 | γ球蛋白 |
| 1 | 54.7 | 4.9 | 10.2 | 14.3 | 16.0 |
| 2 | 54.2 | 4.3 | 9.6 | 14.6 | 17.3 |
| 3 | 53.4 | 4.8 | 10.3 | 13.2 | 18.2 |
| 5 | 52.2 | 4.3 | 10.2 | 15.1 | 18.2 |
| 6 | 54.7 | 4.0 | 10.5 | 12.6 | 18.2 |
| 7 | 55.6 | 4.7 | 9.9 | 13.6 | 16.2 |
| 均值(x) | 54.1 | 4.5 | 10.1 | 13.9 | 17.4 |
| 标准差(s) | 1.19 | 0.35 | 0.32 | 0.93 | 1.03 |
| 变异系数(CV％) | 2.20 | 7.83 | 3.15 | 6.72 | 5.94 |
实施例34℃冰箱保存4个月样品实验图(图5)
取一样品，密封盒内潮湿、外观湿润、琼脂板水分充足、饱满、无细菌生长的防腐琼脂糖凝胶板。取一新鲜血清样本，用取出的样品做蛋白电泳实验，并对其结果进行数据分析：
| 泳道 | ALB | α1球蛋白 | α2球蛋白 | β球蛋白 | γ球蛋白 |
[0067]
| 1 | 61.2 | 2.8 | 7.9 | 12.4 | 15.7 |
| 2 | 63.0 | 2.5 | 8.1 | 10.1 | 16.2 |
| 3 | 60.2 | 2.8 | 7.1 | 13.0 | 16.8 |
| 4 | 60.7 | 2.6 | 7.1 | 11.7 | 17.9 |
| 5 | 60.0 | 2.6 | 7.2 | 11.8 | 18.5 |
| 6 | 62.4 | 2.8 | 6.3 | 11.6 | 16.9 |
| 7 | 62.1 | 2.7 | 7.2 | 11.4 | 16.6 |
| 8 | 62.3 | 3.0 | 6.5 | 11.5 | 16.8 |
| 9 | 61.7 | 2.7 | 8.2 | 11.9 | 15.6 |
| 10 | 61.0 | 2.7 | 8.4 | 11.1 | 16.7 |
| 均值(x) | 16.46 | 2.72 | 7.4 | 11.65 | 16.77 |
| 标准差(s) | 1.00 | 0.14 | 0.72 | 0.76 | 0.89 |
| 变异系数(CV％) | 1.63 | 5.14 | 9.72 | 6.57 | 5.32 |
实施例44℃冰箱保存5个月样品实验图(图6)
取一样品，密封盒内潮湿、外观湿润、琼脂板水分充足、饱满、无细菌生长的防腐琼脂糖凝胶板。取一新鲜血清样本，用取出的样品做蛋白电泳实验，并对其结果进行数据分析：
| 泳道 | ALB | α1球蛋白 | α2球蛋白 | β球蛋白 | γ球蛋白 |
| 1 | 48.6 | 2.6 | 9.7 | 13.8 | 25.4 |
| 2 | 46.8 | 3.0 | 9.0 | 14.7 | 26.6 |
| 3 | 43.4 | 3.2 | 10.6 | 15.7 | 27.1 |
| 4 | 43.3 | 3.2 | 10.6 | 15.0 | 28.0 |
| 5 | 44.7 | 3.2 | 10.8 | 15.0 | 26.3 |
| 6 | 49.3 | 3.0 | 9.0 | 13.4 | 25.4 |
| 7 | 48.9 | 3.2 | 8.9 | 14.1 | 24.9 |
| 8 | 48.0 | 2.9 | 9.4 | 14.4 | 25.4 |
| 9 | 48.0 | 3.0 | 9.3 | 14.3 | 25.4 |
| 10 | 50.0 | 2.8 | 8.5 | 15.1 | 23.0 |
[0071]
| 均值(x) | 47.1 | 3.0 | 9.6 | 14.6 | 25.8 |
| 标准差(s) | 2.46 | 0.20 | 0.82 | 0.69 | 1.36 |
| 变异系数(CV％) | 5.22 | 6.73 | 8.52 | 4.71 | 5.29 |
实施例54℃冰箱保存6个月样品实验图(图7)
取一样品，密封盒内潮湿、外观湿润、琼脂板水分充足、饱满、无细菌生长的防腐琼脂糖凝胶板。取一新鲜血清样本，用取出的样品做蛋白电泳实验，并对其结果进行数据分析：
| 泳道 | ALB | α1球蛋白 | α2球蛋白 | β球蛋白 | γ球蛋白 |
| 1 | 63.1 | 2.6 | 7.9 | 11.7 | 14.8 |
| 2 | 65.8 | 2.8 | 7.1 | 11.2 | 13.1 |
| 3 | 61.8 | 2.6 | 7.9 | 12.5 | 15.1 |
| 4 | 61.9 | 2.8 | 8.0 | 12.4 | 14.9 |
| 5 | 64.4 | 2.6 | 7.2 | 11.3 | 14.4 |
| 6 | 62.2 | 2.8 | 7.1 | 13.2 | 14.7 |
| 7 | 64.4 | 2.9 | 8.0 | 10.9 | 13.8 |
| 8 | 62.1 | 3.0 | 7.4 | 12.6 | 14.8 |
| 9 | 64.0 | 2.7 | 6.6 | 12.4 | 14.3 |
| 10 | 61.5 | 2.7 | 7.5 | 13.9 | 14.4 |
| 均值(x) | 63.1 | 2.8 | 7.5 | 12.2 | 14.4 |
| 标准差(s) | 1.38 | 0.13 | 0.45 | 0.89 | 0.57 |
| 变异系数(CV％) | 2.19 | 4.67 | 6.05 | 7.31 | 3.92 |
综上述实验数据可知，所得数据变异系数(CV％)低于10％，均在可接受范围之内；由此可知，本发明制得的防腐琼脂糖凝胶板能存放至少6个月。相较现有技术制得的琼脂糖凝胶板，本发明的优点是：体积小、方便存放，防腐性能强，有效解决了琼脂糖凝胶板保存过短的困扰，并存在极大的市场价值。
最后有必要在此说明的是：上面结合附图对本发明实施方式进行了详细说明，但是本 发明并不限于上述实施方式，在本领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。
Claims (9)
1.一种防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，包括溶胶和制板，其特征在于：在溶胶之后加入庆大霉素溶液和青霉素钠溶液的混合液再进行制板，具体包括以下步骤：
步骤a)溶胶；
步骤b)加入庆大霉素溶液和青霉素钠溶液的混合物；
步骤c)制板。
2.根据权利要求1所述的防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，其特征在于：还包括步骤d)，将步骤c)制备的琼脂糖凝胶板包覆密封包裹物。
3.根据权利要求1所述的防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，其特征在于，步骤a)具体操作为：精密称取琼脂糖后，再用凝胶缓冲液将所述琼脂糖于微波炉中加热至溶解，最后将该琼脂糖凝胶溶液冷却至温度不低于45℃。
4.根据权利要求3所述的防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，其特征在于：所述该琼脂糖凝胶溶液冷却至50℃。
5.根据权利要求1所述的防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，其特征在于，步骤b)具体操作为：将庆大霉素溶液和青霉素钠溶液等体积混合，摇匀，再将其加入步骤a)配置的琼脂糖凝胶溶液中。
6.根据权利要求1所述的防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，其特征在于，步骤c)具体操作为：将步骤b)配置的琼脂糖凝胶溶液倒入琼脂糖凝胶板模具中，使凝胶平整后静置至凝固。
7.根据权利要求2所述的防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，其特征在于：所述密封包裹物为塑料薄膜。
8.根据权利要求3所述的防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，其特征在于：所述凝胶缓冲液巴氏消毒。
9.根据权利要求1～8任一所述的防腐琼脂糖凝胶板的制备方法，其特征在于：所述塑料薄膜与琼脂糖凝胶之间无气泡，即所述塑料薄膜将所述琼脂糖凝胶密封包被于所述塑料薄膜和所述聚酯垫片之间。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150506 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |