CN104582721B - 用于防止结核病的口服灭活分枝杆菌 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于防止结核病的口服用途的灭活分枝杆菌，其采用多剂量方案来给药，并且剂量之间间隔时间减少，从而诱导出针对结核杆菌感染的耐受建立。该灭活的细菌可采用前述方案来控制感染从潜伏状态向活动性结核病进展。

Description

用于防止结核病的口服灭活分枝杆菌
技术领域
本发明涉及口服施用用于防止结核病的医药产品领域，特别地，涉及控制所述疾病的潜伏性感染转化为活动性感染。
背景技术
结核病是一种由结核分枝杆菌复合群(MTB-C)的细菌引起的慢性传染病，该结核分枝杆菌复合群包括结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、牛结核分枝杆菌(M.bovis)、田鼠分枝杆菌(M.microti)和非洲分枝杆菌(M.africanum)，其中，结核分枝杆菌是与人类结核病相关的最重要且最普遍的媒介。虽然所述疾病主要影响肺部，但是在许多病例中，其还会扩散到其他器官。如果没有适当地处理，结核病会是致命的。
根据世界卫生组织2011年的报告，全世界每年有9百万人新病例出现该疾病，并且报告有大约170万人死亡。报告中还提到，每年全球有超过25亿人感染，大约1亿人是新增加的感染者。
结核病通过空气传播，这样，患者肺部的结核空洞是这种疾病的主要传播源，例如，J.Grosset,Studies in short-course chemotherapy for tuberculosis.Basis forshort-course chemotherapy,Chest,1981,80,719-720；以及J.Grosset,Mycobacteriumtuberculosis in the Extracellular Compartment:an Underestimated Adversary,Antimicrob.Agents Chemother.,2003,47,833-836中的描述。
如在所述文献中所描述的，病人通过咳嗽或打喷嚏，喷出大量的可以传播杆菌的微滴，它们会进入到吸入这些微滴的人的肺泡腔。
吸入后，这些芽孢杆菌被肺泡巨噬细胞吞噬，并可在巨噬细胞中繁殖，直至引起细胞破坏的程度。这些芽孢杆菌在细胞外空间被新的巨噬细胞再次吞噬，并且这个过程一直重复，直到巨噬细胞耗尽，感染出现在肺门淋巴结，产生基于细胞免疫的免疫反应。
感染后的大约6周，杆菌的生长停止，宿主的皮肤结核菌素测试呈阳性，特征是延迟型超敏(DTH)反应，而所谓的干酪样坏死是在感染时出现的。
结核性感染的一个主要特征是，结核分枝杆菌能在宿主的组织中以“潜伏的”结核性感染形式保留几年，而不会发展成疾病，但却保持其产生活动性感染的可能性。
这种感染的潜伏状态与所谓的干酪样坏死的发生有关，干酪样坏死是发生在最初的肺泡病变部位和周围的肺组织中，导致包含正在复制的杆菌的巨噬细胞的破坏，导致质实的坏死灶(solid necrotic lesion)。
这种坏死反应的起因不是很确切地知道，但是与DTH型反应相关。本质上，控制杆菌群的免疫反应是一种细胞型的免疫反应，主要由Th1CD4引起，即，其能产生DTH型的反应，并且能识别受感染的巨噬细胞，并激活它们来破坏其中的杆菌。
在大约10％的感染个体中，所述质实的坏死会软化，这是结核病感染最重要的事件之一，因为这随后就是感染进展成活动性结核病，即结核性疾病。
在大多数的病例中，软化与已软化的组织流向支气管树(bronchial tree)形成结核空洞相关，并且与杆菌的爆炸性细胞外生长相关，其中氧气通过支气管开口进入。咳嗽时，充满杆菌的软化的干酪(caseum)扩散到支气管的其他部位、肺部以及体外。
结核病的药物治疗，其特征在于它是一种持续很久的治疗，这使得治疗依从性很复杂，同时偏向出现耐药的细菌。
人们认为，控制结核病最好的策略是基于一防止性(preventive)的方法。
目前胃肠外给药用于防止性治疗结核病的疫苗是基于称为BCG(卡介苗)的菌株的细菌，它是牛结核分枝杆菌的减毒变种。然而，可以看到，其效力随时间推移而下降，并且对成人中该疾病的防止不起作用。事实上，人们认为，其仅能保护致命的结核病(粟粒性结核或结核性脑膜炎)进展的小环境(niches)。
已经开发的其他结核病的预防性(prophylactic)治疗主要是基于其他活的减毒分枝杆菌菌株，或基于细菌性亚单位。
此外，基于灭活分支杆菌的结核病的预防性治疗在现有技术中也有研究，其目的是获得与使用基于减毒分枝杆菌的疫苗获得的免疫反应相似的免疫反应，即，产生干扰素γ的Th1。
因此，例如，文献Opie et al.,Protective inoculation against humantuberculosis with heat-killed tubercle bacilli,Am.J.Hyg.,1939,29,155-164描述了一临床研究，其中，通过加热灭活的5份(doses)结核分枝杆菌经皮内注射，用于产生抵抗疾病的保护。
此外，文献Agger et al.,Specific acquired resistance in mice immunizedwith killed mycobacteria,Scand.J.Immunol.,2002,56,443-447描述了一试验研究，其中，小鼠经皮下给药接种3份1000μg的通过加热灭活的结核分枝杆菌，每份剂量之间相隔2周，显示出基于特异性T-细胞的诱导的免疫。
还测试了用于诱导抵抗结核病的保护的其他灭活分枝杆菌，通常通过胃肠外给药。
例如，Gupta et al.,Immunogenicity and protective efficacy of“Mycobacterium w”against Mycobacterium tuberculosis in mice Immunized withlive versus heat-killed M.w by the aerosol or parenteral route,Infect.Immun.,2009,77(1),223-231中描述了给予活的结核分枝杆菌w(M.w mycobacteria)或通过加热灭活的结核分枝杆菌w。皮下给予单一剂量的通过加热灭活的结核分枝杆菌w，能够观察到基于产生干扰素的Th1细胞的诱导的免疫反应。
尤其希望提供一种口服给药的有效的预防性治疗，因为这种给药途径非常便于药物的给药和治疗依从性。
在这个意义上说，根据与一般化疗药物结合的方案，现有技术中有文献涉及到口服给予通过加热灭活的结核分枝杆菌，母牛分枝杆菌(Mycobacterium vaccae)，以获得活动性结核病的治疗效果。
在实验水平，Hernández-Pando et al.,Orally administered Mycobacteriumvaccae modulates expression of immunoregulatory molecules in BALB/c mice withpulmonary tuberculosis,Clin.Vaccine Immunol.,2008,15(11),1730-1736中描述了在小鼠上进行的试验，小鼠经口给予5份0.1μg的通过加热灭活的母牛分枝杆菌，每次给药间隔28天，在给药第一份后23小时，通过气管内诱导结核分枝杆菌感染。该研究确认了产生细胞免疫反应，Th1细胞分泌增加，同时体液免疫下降，如Th2型细胞和TGF-β生长因子的减少所表明。
通常，现有技术显示有利的是Th1诱导，随后干扰素-γ产生，而Th2反应(随后IL-4产生)或Th3反应(其使调节性T细胞(Treg)产生)，可具有活动性结核病诱导作用。
这描述在例如，Kursar et al.,Cutting Edge:Regulatory T Cells PreventEfficient Clearance of Mycobacterium tuberculosis,J.Immunol.,2007,178,2661-2665中，其中，调节性T细胞(Treg)的产生归因于CD4T-细胞没有能力杀死干酪病灶中的菌，防止实验性结核病的小鼠模型中的潜伏性感染。该文献揭示了Th1反应和Treg反应之间失去平衡而倾向于Treg反应的放松管制是活动性结核病诱发的原因。
按照现有技术中所描述的，仍然需要提供对结核病的有效治疗，所述治疗可以通过口服给药来防止个体的活动性结核病的进展，以及后续该疾病的病理状态发作，所述个体包括未感染个体(预防性作用)，以及感染结核分枝杆菌且该感染处于潜伏状态的个体(治疗性作用)。
发明内容
本发明的客体是灭活分枝杆菌用于制备防止结核病的口服药物的用途。
附图说明
图1显示x-轴代表以天表示的存活时间和y-轴代表存活动物的百分数。对照组以实线代表，组1的动物以虚线代表。组1的动物在感染前用灭活结核分枝杆菌进行口服处理，在感染前的第10天开始每48小时给药1份所述杆菌，共给药5份。曲线图1、2、3和4分别对应于组1a、1b、1c和1d的动物，这些组按照1:1、1:10、1:100和1:1000的稀释度给予不同量的产品。(实施例1)
图2显示，x-轴代表以天表示的存活时间，y-轴代表存活动物的百分数；在这个图中，对照组(实线)与组2(虚线)进行比较。组2的动物在感染后用灭活结核分枝杆菌进行口服处理，在感染后的第11天开始每48小时给药1份所述杆菌，共给药5份。曲线图5、6、7和8分别对应于组2a、2b、2c和2d的动物，这些组按照1:1、1:10、1:100和1:1000的稀释度给予不同量的产品。(实施例1)
图3显示，x-轴代表以天表示的存活时间，y-轴上代表存活动物的百分数。在这个图中，对照组(实线)与组1(虚线)的动物相比较，其中，组1的动物在感染后用灭活的牛结核分枝杆菌BCG进行口服处理。(实施例2)
图4显示，x-轴代表以天表示的存活时间，y-轴代表存活动物的百分数。在这个图中，对照组(实线)与组1(虚线)的动物相比较，其中，组1的动物在感染前用灭活的牛结核分枝杆菌BCG进行口服处理。(实施例3)
图5显示，x-轴代表以天表示的存活时间，y-轴代表存活动物的百分数。曲线图1中，对照组(实线)与组1(虚线)相比较，其中，组1在感染前开始利用灭活的结核分枝杆菌进行口服给药处理。曲线图2中，对照组(实线)与组2(虚线)相比较，其中，组2在感染后开始用灭活的结核分枝杆菌进行经口给药处理。(实施例4)
图6显示了感染后，每种采用灭活的结核分枝杆菌的处理以及对照组中，在3周(曲线图1)和4周(曲线图2)时，具有CD4+CD25+Foxp3+表现型的调节性T细胞相对于总CD4+T细胞的百分数。所述调节性T细胞的百分数显示在y-轴上。不同组的动物显示在x-轴上。方形代表未经处理的动物(对照组)，三角形代表在感染前经处理的组1动物(预防性作用)，而圆形代表在感染后经处理的组2动物(治疗性作用)。实心横线代表每个组的算术平均数。(实施例4)
图7显示，x-轴代表以天表示的存活时间，y-轴上代表存活动物的百分数。曲线图1中，对照组(实线)与组1(虚线)相比较，其中，组1在感染前利用灭活的堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)进行经口给药处理(预防性作用)。曲线图2中，对照组(实线)与组2(虚线)相比较，其中，组2在感染后开始利用灭活的堪萨斯分枝杆菌进行经口给药处理(治疗性作用)。(实施例5)
图8显示，x-轴代表以天表示的存活时间，y-轴代表存活动物的百分数。曲线图1中，对照组(实线)与组1(虚线)相比较，其中，组1在感染前开始利用灭活的偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum)进行经口给药处理(预防性作用)。曲线图2中，对照组(实线)与组2(虚线)相比较，其中，组2在感染后开始利用灭活的偶发分枝杆菌进行经口给药处理(治疗性作用)。(实施例6)
图9显示，x-轴代表以天表示的存活时间，y-轴表示存活动物的百分数。感染动物，然后用抗结核病药物RIMSTAR处理。RIMSTAR处理后，组1接受用灭活的偶发分枝杆菌进行的后续口服给药耐受建立(tolerance-building)处理(抗复发作用)。对照组(实线，没有经过耐受建立处理)与组1(虚线，经过耐受建立处理)进行对比。采用RIMSTAR处理的处理时间(黑色矩形)和后续耐受建立处理的处理时间(白色矩形)显示在x-轴上。(实施例7)。
具体实施方式
本发明的客体是灭活分枝杆菌用于制备防止结核病的药物的用途，其中：
-将该分枝杆菌周期性地进行口服，
-每剂之间的间隔不超过5天，以及
-给药的剂量数量是至少5次。
或者，本发明的客体可以配制成灭活分枝杆菌，用于防止结核病，其中：
-将该分枝杆菌周期性地进行口服，
-每剂之间的间隔不超过5天，以及
-给药的剂量数量是至少5次。
本发明的作者开发出一种新的防止性治疗方法对抗结核病，该方法基于采用多剂量的疗法给予灭活分枝杆菌，每次给药之间的间隔时间减少。
作者观察到，所述防止性治疗在结核分枝杆菌感染前(预防性作用)或感染后(治疗性作用)进行，可以通过控制感染从结核病潜伏状态进展成活动状态来防止活动性结核病的发展。
根据所述的治疗，周期性口服死亡的杆菌(优选低剂量)，并且每剂之间间隔时间减少，诱导耐受建立或耐受建立反应，出人意料地对控制结核分枝杆菌的感染具有积极的效果，即，对控制潜伏性感染转变为活动性感染具有积极效果。
事实上，作者观察到，在结核分枝杆菌感染前和感染后给予这种治疗触发了耐受建立反应，其特征在于调节性T细胞(Treg)的百分数升高。
本发明的用途专注于未感染个体，以及感染结核分枝杆菌且该感染处于潜伏状态的个体。倘若是未感染个体，防止性治疗被认为具有预防性作用，而倘若是感染结核分枝杆菌的个体，其被认为是具有治疗性作用。
在这第二种情形的具体方面，即具有治疗性作用的预防性治疗(指的是感染结核分枝杆菌且该感染处于潜伏状态的对象)，包括那些个体，所述个体先前已发展成活动性结核病，以及其中所述疾病后来通过例如传统抗结核疗法治疗而减轻，因此，结核病重新回到潜伏感染的状态。这一预防性治疗的具体例子被认为是具有治疗性抗复发效果的。
因此，在具有抗复发效果的防止性治疗的情况中，个体通常是先前已采用抗结核试剂进行药物治疗的。本领域技术人员熟知这些抗结核试剂，主要的抗结核试剂尤其包括，例如，异烟肼、乙胺丁醇、吡嗪酰胺、利福平、链霉素；以及应用于耐药性发生的那些二线抗结核试剂，例如，硫代酰胺(尤其包括丙硫异烟胺、乙硫异烟胺)、氨基糖甙类(尤其包括阿米卡星、卡那霉素)、环丝氨酸、利福布汀、利福喷汀、氟喹诺酮(fluorquinolones)(莫西沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星)、PAS、克拉霉素、氯法齐明(clofazimide)、利奈唑胺或甲硫哒嗪，或它们的混合物。
“防止性治疗”通常被理解为保护个体免于疾病的治疗。
在这个意义上说，在本发明的背景下，防止性治疗是能通过控制潜伏性感染转换为活动性感染来防止活动性结核病进展的治疗。
“耐受建立”通常被理解为通过生物或化学试剂有意诱导的耐受，其中，术语“耐受”指的是对生物或化学试剂产生很低的特异性反应的状态。
因此，在本发明的背景下，短语“耐受建立反应的诱导”被理解为一种方法，借此在宿主免疫系统中诱发出缺乏对特定抗原反应的状态，导致病症的减弱。
耐受建立疗法在其他疾病的现有技术背景下已经有描述，例如，动脉粥样硬化。George et al.,Suppression of early atherosclerosis in LDL-receptor deficientmice by oral tolerance with h2-glycoprotein I,Cardiovasc.Res.,2004,62,603-609描述了使用β2-糖蛋白I来诱导口服耐受，并抑制早期动脉粥样硬化，以及Harats et al.,Oral Tolerance With Heat Shock Protein 65 Attenuates MycobacteriumTuberculosis-Induced and High-Fat-Diet-Driven Atherosclerotic Lesions,J.Am.Coll.Cardiol.,2002,40,1333-1338描述了使用热休克蛋白65来诱导粥样硬化病变的口服耐受。
灭活分枝杆菌
分枝杆菌属属于分枝杆菌科，由好氧杆菌组成。
属于分枝杆菌属的所有杆菌是本发明的客体的一部分，例如，尤其包括脓肿分枝杆菌(M.abscessus)、非洲分枝杆菌(M.africanum)、亚洲分枝杆菌(M.asiaticum)、金色分枝杆菌(M.aurum)、鸟分枝杆菌(M.avium)、鸟分枝杆菌副结核亚种(M.aviumparatuberculosis)、鸟分枝杆菌森林土壤亚种(M.avium silvaticum)和分枝杆菌人和猪亚种(M.avium hominissuis)、牛分枝杆菌(M.bovis)、牛分枝杆菌卡介苗(M.bovis BCG)、龟分枝杆菌(M.chelonae)、偶发分枝杆菌(M.fortuitum)、胃分枝杆菌(M.gastri)、古德分枝杆菌(M.goodi)、戈登分枝杆菌(M.gordonae)、免疫原分枝杆菌(M.immunogenum)、嗜血分枝杆菌(M.haemophilum)、哈瓦那分枝杆菌(M.habana)、堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)、慢生黄分枝杆菌(M.lentiflavum)、麻风分枝杆菌(M.leprae)、弥漫型痳疯分枝杆菌(M.lepromatosis)、lufu分枝杆菌(M.lufu)、马德里分枝杆菌(M.mageritense)、玛尔摩分枝杆菌(M.malmoense)、海分枝杆菌(M.marinum)、马赛分枝杆菌(M.massiliense)、田鼠分枝杆菌(M.microti)、摩纳哥分枝杆菌(M.monacense)、产黏液分枝杆菌(M.mucogenicum)、新金色分枝杆菌(M.neoaurum)、外来分枝杆菌(M.peregrinum)、草分枝杆菌(M.phlei)、瘰疬分枝杆菌(M.scrofulaceum)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)、地分枝杆菌(M.terrae)、次要分枝杆菌(M.triviale)、结核分枝杆菌、田鼠分枝杆菌(M.microti)、溃疡分枝杆菌(M.ulcerans)、母牛分枝杆菌(M.vaccae)和蟾蜍分枝杆菌(M.xenopi)。
分枝杆菌具有许多与结核分枝杆菌一样的抗原，因此适合本发明的用途。文献Stanford et al.,Mycobacteria and their world,Int.J.Mycobacteriol.,2012,3-12描述了分枝杆菌中不同抗原组的分类，以及它们在分枝杆菌科的不同种之间是如何分布和共享的。
灭活分枝杆菌是本发明的一部分，优选地，其为称为结核分枝杆菌复合群(MTB-C)的组的分枝杆菌，偶发分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌。换句话说，灭活分枝杆菌优选地选自以下的组，该组由结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌、牛分枝杆菌卡介苗、偶发分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌组成。灭活的分枝杆菌更优选地选自以下的组，该组由结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌、牛分枝杆菌卡介苗、偶发分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌组成。
灭活分枝杆菌也被称为死亡分枝杆菌，被理解为是那些已经经历过物理或化学处理的分枝杆菌，使活的分枝杆菌转化成不能复制的形式。
在本发明的范围中，灭活分枝杆菌的合适方法是，例如，采用甲醛处理、辐照处理或热处理。
本发明的灭活分枝杆菌客体优选地通过加热过程的方法来灭活。
通过加热来灭活分枝杆菌的合适方法包括，例如，在合适的培养基中培养分枝杆菌菌株，该培养基如本领域技术人员熟知的，如Middlebrook 7H10或7H11琼脂、索东(Sauton)培养基或普-贝二氏(Proskauer-Beck)培养基。优选地，一直培养到浓度达到大约1×105到1×109菌落形成单位(CFU)每ml之间。
然后，通过加热灭活培养物。优选地，在70℃到90℃之间的温度下加热培养物。优选地，加热时间在30分钟到3小时之间。此外，可采用高压锅，优选地，在121℃加热培养物20分钟。
结核病的防止
短语“结核病的防止”指的是通过控制感染从结核病潜伏状态进展成活动状态来防止活动性结核病的表现。
所述防止可以用在未感染个体，以及感染结核分枝杆菌且该感染处于潜伏状态的个体，感染处于潜伏状态是由于还没有进展成疾病，或由于已经进展成活动的疾病，而后来例如，由于采用抗结核药物治疗而减弱了。
本发明的作者已经开发出一种对抗结核病的防止性治疗，其防止了潜伏性感染的进展，从而防止了质实的干酪病灶进展成液体的病灶，并因此防止了活动性结核病的表现。
本发明的作者采用了基于C3HeB/FeJ小鼠的实验模型，其中该小鼠在感染结核分枝杆菌后能模拟相当于人类中发展的肺部病理。
响应于结核分枝杆菌的感染，干酪样坏死能够液化，与其他动物模型中不发展成所述的坏死不同，如文献Harper et al.,Mouse model of necrotic tuberculosisgranulomas develops hypoxic lesions,J.Infect.Dis.,2012,205,595-601中所述。
在用高剂量静脉内感染的情况中，所述动物中坏死和病灶的生长是这样的，它能在感染后大约四周内引起100％的死亡，如文献Sissons et al.,Multigenic control oftuberculosis resistance:analysis of a QTL on mouse chromosome 7 and itssynergism with sst1,Genes Immun.,2009,10,37-46中所述。
不希望受到任何理论的限制，本发明的作者认为，本发明治疗客体的防止性作用是由于频繁地周期性多次口服死亡杆菌的剂量(优选地，低剂量)是能诱发对象中产生耐受的方案，其中，优选产生诱发调节性T细胞(Tregs)的反应。所述细胞与转化生长因子-β(TGF-β)相关，即主要产生耐受建立或Th3免疫反应，不像传统的免疫系统，其基本上是触发Th1免疫反应的。
本发明的作者意外地发现，耐受的诱发对阻止结核分枝杆菌感染的进展是有效的，即对阻止潜伏性感染转变成活动性感染是有效的。
必须重复地给予灭活分枝杆菌，并且每次给药之间间隔的时间减少，即，不超过5天，从而触发这种耐受建立的反应；优选地，每剂之间间隔不超过3天；并且更优选地，每剂之间间隔不超过2天。
耐受建立治疗还需要灭活分枝杆菌的重复给药，给药的剂量数量为至少5次；优选地，给药的剂量数量为至少7次；更优选地，给药的剂量数量为至少9次，并且甚至更优选地，给药的剂量数量为至少14次。
在本发明的应用中，给予免疫有效量的灭活分枝杆菌。
使用的剂量已知取决于被给予分枝杆菌的个体的年龄和重量。
合适的剂量范围通常在103到1010灭活的分枝杆菌之间，优选地，在103到108之间，更优选地，在104到108之间。
为了证明属于本发明一部分的耐受建立给药方案在干酪样病灶液化上的防止性治疗治疗作用，以上描述的模型中使用的C3HeB/FeJ小鼠经历这样的方案，其中口服灭活分枝杆菌5到14份剂量，每份剂量之间间隔1-3天。
在以下的情形中，采用的鼠科模型模拟了防止性结核病治疗：当处理是在感染前施用，如实施例1和3-6中描述，或当处理是在结核分枝杆菌感染后施用，如实施例1、2和4-6中描述，但所述处理是在前期(感染后不超过15天，在动物已经发展出病灶，但病灶还没有进展成液化，以及没有进展成后续的疾病表现时)施用；或者，如实施例7所述，在动物已经发展出病灶，并且该病灶已经液化，但所述病灶已经恢复到潜伏性感染的小病灶特征的形式时，在感染后施用处理。
基于实施例中得到的结果，结论是，由于疾病的诱发，即潜伏性感染到活动性感染的转变被延迟了，因此在结核分枝杆菌感染前和感染后，口服灭活分枝杆菌的耐受建立方案增加了动物的存活率。
因此认为根据本发明的灭活分枝杆菌的用途是适用于防止结核病的。
组合物
根据本发明的客体，灭活的分枝杆菌是口服的。
所述分枝杆菌可以以任何本领域技术人员熟知的适于口服的药物组合物形式给药。例如，适于口服的片剂、胶囊、溶液、悬浮液、分散剂、粉末、颗粒或喷雾。
所述分枝杆菌优选以胶囊或片剂的形式给药。
所述药物组合物通常包含灭活分枝杆菌和至少一种药学上可接受的赋形剂。
根据本领域技术人员熟知的传统方法制备所述组合物，例如，那些在制药技术手册中找到的那些方法，如教科书Remington The Science and Practice of Pharmacy,20thedition,Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia,2000[ISBN:0-683-306472]。
药学上可接受的赋形剂中，可包含在药物组合物中的是，例如，防结块剂，如硅胶、三碱价磷酸钙、硅酸钙、硅酸镁、三硅酸镁或滑石粉；稀释剂，如无水乳糖、一水乳糖、磷酸钙、无水磷酸氢钙、二水磷酸氢钙、硫酸钙、碳酸钙、羧甲基纤维素钙、微晶纤维素或纤维素粉、醋酸纤维素、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖、果糖、硬脂酸棕榈酸甘油酯、高岭土、乳糖醇、碳酸镁、氧化镁、麦芽糖醇、麦芽糖糊精、麦芽糖、聚甲基丙烯酸酯、预胶凝淀粉、氯化钠、淀粉、蔗糖；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸棕榈酸甘油酯、泊洛沙姆、氧化镁、苯甲酸钠、硅胶、十二醇硫酸钠、硬脂酰醇富马酸钠、硬脂酸、滑石粉或山嵛酸甘油酯；悬浮剂，如黄原胶、瓜尔豆胶、藻酸、皂土、卡波姆、羧甲基纤维素钠或钙、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、藻朊酸羟丙酯、微晶纤维素或纤维素粉、无水硅胶、糊精、明胶、高岭土、硅酸铝镁盐、麦芽糖醇、聚维酮、失水山梨醇酯(sorbitan esters)或黄芪胶；粘合剂如三硅酸镁、纤维素、淀粉、糊精、右旋糖、聚葡萄糖、麦芽糖、麦芽糖糊精、乙基纤维素、甲基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、滑石粉、聚维酮、硬脂酸或蔗糖；崩解剂，如低取代羟丙基纤维素、三碱价磷酸钙、羧甲基纤维素钠或钙、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮或甲基纤维素；包覆剂，如壳聚糖、邻苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二甲酯、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、麦芽糖糊精、聚甲基丙烯酸酯、聚醋酸乙烯酞酸酯或柠檬酸三乙酯；分散剂，如泊洛沙姆或失水山梨醇酯；甜味剂，如阿斯巴甜、甘露醇、山梨醇、糖精钠、环己基氨基磺酸钠、蔗糖、右旋糖、果糖、葡萄糖、菊粉、异麦芽糖、乳糖醇、麦芽糖、麦芽酚、甘露醇、三氯蔗糖、海藻糖、木糖醇或奇异果甜蛋白(thaumatin)；调味剂和调味品，和/或它们的混合物。
赋形剂的一个更全面的列表，以及它们的物理化学特性和商品销售的名称可以在教科书R.C.Rowe et al.,Handbook of Pharmaceutical Excipients,4th edition,Pharmaceutical Press,London,2003[ISBN:0-85369-472-9]中找到。
以下的实施例旨在阐明本发明，但它们不得用于解释为对本发明的限制。
实施例1.在感染前或感染后，用灭活的结核分枝杆菌进行的口服耐受建立处理 (预防性或治疗性作用)
来自于Unitat de Tuberculosi Experimental of Institut Germans Trias iPujol菌种中心的一株结核分枝杆菌临床菌株(TOL-3)，在普-贝二氏液态培养基中培养，直至达到指数生长期，且浓度为1.7×107菌落形成单位(CFU)每ml，用于制备灭活分枝杆菌。
培养基在75℃加热2小时后灭活，然后在-80℃下冷冻。随后，用10％的蔗糖溶液以50:50稀释，用小瓶以0.5ml体积包装并冻干。这些小瓶随后用3ml的双蒸水来重构，构成1:1的稀释液，其相当于4.25×106CFU。
在试验中，0.3ml的产品以1:1及1:10、1:100和1:1000的稀释液给药。这些给药分别相当于4.25×105、4.25×104、4.25×103和4.25×102CFU的数次剂量。
在没有特定致病菌的6-8周大的C3HeB/FeJ雌性小鼠中测试灭活分枝杆菌的效力。
小鼠被分成三组，每组6只动物，并且每组都经历以下的耐受建立方案。
1)对照组：不处理。
2)组1(感染前处理)：在感染前第10天开始进行口服处理，用包含灭活分枝杆菌的5份产品剂量每48小时灌胃1份。每剂量给药体积为0.3ml，并且总共测定4个稀释度，即1:1、1:10、1:100和1:1000(分别是组1a、1b、1c和1d)。
3)组2(感染后处理)：在感染后第11天开始进行口服处理，包含灭活分枝杆菌的5份产品剂量每48小时通过灌胃1份。每剂量给药体积为0.3ml，并且总共测定4个稀释度，即1:1、1:10、1:100和1:1000(分别是组2a、2b、2c和2d)。
使用在普-贝二氏培养基中培养至对数中期并以l ml的等分存储在-70℃下备用的结核分枝杆菌的毒性菌株(H37Rv Pasteur)进行感染。
通过引入大约2×104活杆菌的接种物来在静脉内感染小鼠。
根据表1中详细描述的方法，每天对动物进行观察和称重，直至动物的状况需要处死为止。
表1
所得结果通过图1和2的曲线图描画，其显示不同实验组的动物在感染后的存活率进展。x-轴上代表以天表示的存活时间，y-轴代表存活动物的百分数。
图1中，对照组(实线)与组1(虚线)的动物进行对比，它们都在感染前进行处理。曲线图1、2、3和4分别对应于组1a、1b、1c和1d的动物，按照1:1、1:10、1:100和1:1000的稀释度给予不同量的产品。
图2中，对照组(实线)与组2(虚线)的动物进行对比，它们都在感染后进行处理。曲线图5、6、7和8分别对应于组2a、2b、2c和2d的动物，按照1:1、1:10、1:100和1:1000的稀释度给予不同量的产品。
为了评估处理对动物存活率的影响，存活率曲线用两种方法来对比：Mantel-Cox检验(或对数等级检验，LR t)以及Gehan-Breslow-Wilcoxon检验(GBW t)。在第一种方法中，假设在整个实验过程中，风险(死亡/单位时间)是恒定的，而第二种方法中，考虑头几天的死亡(早期死亡)更多。如果风险是恒定的，Mantel-Cox检验具有较高的统计效力，但如果不是这样并且其中一组比其他组具有更高的风险时，Gehan-Breslow-Wilcoxon检验更加合适。
相对于对照组，所有情况中都能观察到统计学上的显著差异(p＜0.05，GBW t)。对应于曲线图4、5、6和7的处理的LR t也具有统计显著性(p＜0.05)。
当使用最低稀释度(1:1000，图1，曲线图4)的感染前方案时，这些结果反映出了保护性的反应，而在稀释度为1:1、1:10和1:100(分别是图2中的曲线图5、6和7)的感染后方案中观察到保护作用，特别重要的是在1:10的稀释度方案中。
对对照组进行的尸体解剖反映了在第26天和第30天之间的一个非常迅速的进展，期间，病灶的大小大大增加，并最终聚集，产生大的内部具有奶油状稠度的坏死病灶。
因此，可以得出的结论是，在结核分枝杆菌感染前(预防性作用)和感染后(治疗性作用)，口服给药的耐受建立方案通过延迟潜伏性感染转变成活动性感染，增加了动物的存活率。因此，认为根据本发明的灭活分枝杆菌的用途是适用于作为抵抗结核病的防止性治疗。
实施例2.在感染后，给予灭活牛分枝杆菌卡介苗的口服耐受建立处理(治疗性作 用)
本实施例中使用的治疗试剂由商业菌株牛分枝杆菌卡介苗(SSI)制备，其在普-贝二氏液体培养基中培养，直至达到指数生长期，且浓度为1.03×108菌落形成单位(CFU)每ml。按照实施例1中描述的相同方法对培养物进行灭活。
在没有特定致病菌的6-8周大的C3HeB/FeJ雌性小鼠中测试灭活的分枝杆菌的效力。给药的每剂量中，体积为0.3ml，相当于1:10稀释度，相当于2.575×105CFU。
小鼠被分成两组，每组12只动物，并且每组都经历以下的耐受建立方案：
1)对照组：不处理。
2)组1(感染后处理)：在感染后第12天开始进行口服处理，包含灭活分枝杆菌的5份产品剂量每48小时灌胃1份，随后每周3次(周一、周三和周五)，根据每只小鼠的存活时间进行，直至实验结束。
使用在普-贝二氏培养基中培养至对数中期并以lml的等分存储在-70℃下备用的结核分枝杆菌的毒性菌株(H37Rv Pasteur)进行感染。
通过引入大约2×104活杆菌的接种物来在静脉内感染小鼠。
根据实施例1的表1中描述的相同方法，每天对动物进行观察和称重，直至动物的状况需要处死为止。
所得结果通过图3的曲线图描画。x-轴代表存活时间(以天表示)，y-轴代表存活动物的百分数。
可以观察到，对照组(实线)具有比组1(虚线)更低的存活率，观察到显著的差异(对数等级检验，p＝0.0147；Gehan-Breslow-Wilcoxon检验，p＝0.0052)。
这些结果反映了连续处理受感染的动物后的保护性反应。因此，可以得出结论，在结核分枝杆菌感染后，口服灭活的牛分枝杆菌卡介苗的耐受建立方案通过延迟疾病的诱发，增加了动物的存活率。因此，认为根据本发明的灭活分枝杆菌的用途通过延迟潜伏性感染转变成活动性感染，适用于作为抵抗结核病的防止性治疗。
实施例3.在感染前，给予灭活的牛分枝杆菌卡介苗的口服耐受建立处理(预防性 作用)
根据实施例2中描述的相同方法来制备灭活的牛分枝杆菌卡介苗。
在没有特定致病菌的6-8周大的C3HeB/FeJ雌性小鼠中测试灭活的分枝杆菌的效力。
小鼠被分成两组，每组12只动物，并且它们都经历以下的处理：
1)对照组：不处理。
2)组1(感染前处理)：在感染前第29天开始进行口服处理，包含灭活分枝杆菌的13份产品剂量每周灌胃3次(周一、周三和周五)。给药的每剂量中，体积为0.3ml，相当于1:1000稀释度，相当于2.575×103CFU。
如前面的实施例，使用在普-贝二氏培养基中培养至对数中期并以lml的等分存储在-70℃下备用的结核分枝杆菌的毒性菌株(H37Rv Pasteur)进行感染。
通过引入大约2×104活杆菌的接种物来在静脉内感染小鼠。
根据实施例1的表1中描述的相同方法，每天对动物进行观察和称重，直至动物的状况需要处死为止。
所得结果通过图4的曲线图描画。x-轴代表存活时间(以天表示)，y-轴代表存活动物的百分数。
可以观察到，对照组(实线)具有比处理组1(虚线)低的存活率，根据对数等级检验(p＝0.0020)以及Gehan-Breslow-Wilcoxon检验(p＝0.0019)，观察到显著性差异。
结果显示，在结核分枝杆菌感染前由口服灭活的牛分枝杆菌卡介苗诱发耐受后，反映出保护性的反应，观察到所述处理防止了疾病的高百分率诱发。
实施例4.在感染前或感染后用灭活的结核分枝杆菌进行的口服耐受建立处理的 效力(预防性或治疗性作用)，并通过分析脾脏的调节性T细胞来监控诱发的耐受
根据实施例1中描述的相同方法来制备灭活的结核分枝杆菌(TOL-3)。
在没有特定致病菌的6-8周大的C3HeB/FeJ雌性小鼠中测试灭活的分枝杆菌的效力。
小鼠被分成三组，每组24只动物，并且它们都经历以下的处理：
1)对照组：不处理。
2)组1(感染前处理)：在感染前第10天开始进行口服处理，包含灭活分枝杆菌的5份产品剂量每48小时灌胃1份，随后每周3次(周一、周三和周五)，直至实验结束。每一给药的剂量体积是0.3ml，1:1000的稀释度。
3)组2(感染后处理)：在感染后第11天开始进行口服处理，包含灭活分枝杆菌的5份产品剂量每48小时灌胃1份，随后每周3次(周一、周三和周五)，直至实验结束。每一给药的剂量体积是0.3ml，1:10的稀释度。
如前面的实施例，使用在普-贝二氏培养基中培养至对数中期并以lml的等分存储在-70℃下备用的结核分枝杆菌的毒性菌株(H37Rv Pasteur)进行感染。
通过引入大约1×105活杆菌的接种物来在静脉内感染小鼠。
每组中留出一半的动物(12只)用作存活研究。根据实施例1的表1中描述的相同方法，每天对动物进行观察和称重，直至动物的状况需要处死为止。
图5中，曲线图1和2显示了不同实验组的存活结果。x-轴代表存活时间(以天表示)，y-轴代表存活动物的百分数。
曲线图1中，对照组(实线)与组1(虚线)相比较，其中，组1在感染前开始接受处理。观察到，对照组具有比处理组低的存活率，根据对数等级检验(p＝0.0011)以及Gehan-Breslow-Wilcoxon检验(p＝0.0014)，得到统计学上显著的结果。
曲线图2中，对照组(实线)与组2(虚线)相比较，其中，组2在感染后开始接受处理。观察到，对照组具有比处理组低的存活率，根据对数等级检验(p＝0.04541)，得到统计学上显著的结果，而根据Gehan-Breslow-Wilcoxon检验，差异在统计学上不显著。
在两种情况中，可得出结论，在结核分枝杆菌感染后，采用灭活的分枝杆菌进行耐受建立方案处理的动物，比没有处理的动物存活更长的时间。
至于每组中剩余的动物(12只)，一半的动物在第3周时处死(每组6只动物)，另一半在第4周处死(每组6只动物)，以研究脾细胞中间存在的调节性T细胞。
如文献Faria et al.,Oral tolerance,Immunol.Rev.,2005,206(1),232-259中所描述的，调节性T细胞是一组T细胞，其是诱发口服耐受的关键，被定义为参与调节免疫反应的群体，并且它们表达CD4和CD25膜标记。
2003年的文献Hori et al.,Control of regulatory T cell development bythe transcription factor Foxp3,Science,2003,299(5609),1057-61中，描述了转录因子Foxp3是调节性T细胞发育的关键。因为这个原因，可以认为，具有CD4+CD25+Foxp3+表型的T细胞具有调节功能。
在吸入含有异氟醚的麻醉剂后，通过颈椎脱臼法处死动物。移除脾脏，通过机械分解，用细胞筛网(BD Falcon细胞滤网，尼龙，40μm)过滤，并溶解红细胞来获得脾细胞。采用调节性T细胞标记试剂盒(eBioscience)标记脾细胞膜的CD4和CD25和细胞内Foxp3，并采用流式细胞术(BD LSR-Fortessa细胞分析仪)来分析。采用BD FACSdiva分析软件对结果进行处理。
图6显示了感染后第3周(曲线图1)和第4周(曲线图2)，不同处理以及对照中，调节性T细胞、具有CD4+CD25+Foxp3+表现型的T细胞相对于总CD4+T细胞的百分数。调节性T细胞的百分数显示在y-轴上。不同类型的处理和对照显示在x-轴上。
方形代表未经处理的动物(对照组)，三角形代表在感染前处理的组1动物，而圆形代表在感染后处理的组2动物。实心横线代表每个组的算术平均数。
观察到的事实是，在第3周和第4周之间，调节性T细胞的百分数仅在根据耐受建立方案处理的组中增加，而不论其在结核分枝杆菌感染前还是感染后进行。
实施例5.-在感染前或感染后，用灭活的堪萨斯分枝杆菌进行的口服耐受建立处 理(预防性或治疗性作用)
堪萨斯分枝杆菌是一种生长缓慢的非结核性的分枝杆菌。来自于Unitat deTuberculosi Experimental of Institut Germans Trias i Pujol菌种中心的一株堪萨斯分枝杆菌临床菌株(TOL)，在普-贝二氏液体培养基中培养，直至达到指数生长期，且浓度达到8.07×104菌落形成单位(CFU)每ml，用于制备灭活的分枝杆菌。
将培养物在121℃下高压灭菌20分钟来灭活，然后在-80℃下冷冻。随后，用10％的蔗糖溶液以50:50稀释，用小瓶以2ml体积包装并保存在-80℃中。
在没有特定致病菌的6-8周大的C3HeB/FeJ雌性小鼠中测试灭活分枝杆菌的效力。
给药的每剂量中，体积为0.3ml，相当于1:10稀释度，相当于2.42×104CFU。
小鼠被分成三组，每组12只动物，并且每组都经历以下的耐受建立方案：
1)对照组：不处理。
2)组1(感染前处理)：进行口服处理，包含灭活的分枝杆菌的13份产品剂量每周灌胃3次(周一、周三和周五)。在给予最后一份剂量后24小时，对该组进行感染。
3)组2(感染后处理)：感染后15天，该组进行口服处理，包含灭活分枝杆菌的13份产品剂量每周灌胃3次(周一、周三和周五)。
使用在普-贝二氏培养基中培养至对数中期的结核分枝杆菌并以l ml的等分存储在-70℃下备用的毒性菌株(H37Rv Pasteur)进行感染。
通过引入大约2×104活杆菌的接种物来在静脉内感染小鼠。
根据实施例1的表1中描述的相同方法，每天对动物进行观察和称重，直至动物的状况需要处死为止。
图7中，曲线图1和2显示了不同组的存活结果。x-轴上代表存活时间(以天表示)，y-轴上代表存活动物的百分数。
曲线图1涉及预防性处理，将对照组与组1进行对比，其中，组1在感染前开始经历处理。可以观察到，对照组(实线)具有比组1(虚线)低的存活率，观察到显著的差异(对数等级检验，p＜0.0001；Gehan-Breslow-Wilcoxon检验，p＜0.0001)。
曲线图2涉及治疗性处理，将对照组与组2进行对比，其中，组2在感染后开始经历处理。可以观察到，对照组(实线)具有比组2(虚线)低的存活率，观察到显著的差异(对数等级检验，p＜0.0001；Gehan-Breslow-Wilcoxon检验，p＜0.0001)。
在两种情形中，结果都反映出保护性的反应。因此，可以得出结论，在结核分枝杆菌感染前或感染后，给予生长缓慢的、非结核性的灭活分枝杆菌(堪萨斯分枝杆菌)的耐受建立方案的口服处理通过延迟疾病的诱发，增加了动物的存活率。因此，认为根据本发明的灭活的分枝杆菌的用途通过延迟潜伏性感染转变成活动性感染，适用于作为抵抗结核病的预防性治疗。
实施例6.在感染前或感染后，用灭活的偶发分枝杆菌给药的口服耐受建立处理 (预防性或治疗性作用)
偶发分枝杆菌是一种生长迅速的非结核性的分枝杆菌。来自于Unitat deTuberculosi Experimental of Institut Germans Trias i Pujol菌种中心的一株偶发分枝杆菌环境菌株(Manresa菌株)，在Middlebrook 7H9固体培养基中培养，直至达到浓度为2×109菌落形成单位(CFU)每ml，用于制备灭活的分枝杆菌。
将培养物在121℃下高压灭菌20分钟来灭活，然后在-80℃下冷冻。随后，用10％的无菌蔗糖溶液以50:50稀释，用小瓶以2ml体积包装并保存在-80℃中。
在没有特定致病菌的6-8周大的C3HeB/FeJ雌性小鼠中测试灭活分枝杆菌的效力。
给药的每剂量中，体积为0.3ml，相当于1:1000稀释度，相当于6×105CFU。
小鼠被分成三组，每组12只动物，并且每组都经历以下的耐受建立方案：
1)对照组：不处理。
2)组1(感染前处理)：进行口服处理，包含灭活分枝杆菌的10份产品剂量每周灌胃5次(周一到周五)。在给予最后一份剂量后24小时，对该组进行感染。
3)组2(感染后处理)：在感染后第5天开始进行口服处理，包含灭活分枝杆菌的10份产品剂量每周灌胃5次(周一到周五)。
使用在普-贝二氏培养基中培养至对数中期并以lml的等分存储在-70℃下备用的结核分枝杆菌的毒性菌株(H37Rv Pasteur)进行感染。
通过引入大约2×105活杆菌的接种物来在静脉内感染小鼠。
根据实施例1的表1中描述的相同方法，每天对动物进行观察和称重，直至动物的状况需要处死为止。
图8中，曲线图1和2显示了不同组的存活结果。x-轴代表存活时间(以天表示)，y-轴上代表存活动物的百分数。
获得的关于预防性处理的结果显示在曲线图1中。可以观察到，对照组(实线)具有比组1(虚线)低的存活率，观察到显著的差异(对数等级检验，p＜0.0001；Gehan-Breslow-Wilcoxon检验，p＜0.0001)。
获得的关于治疗性处理的结果显示在曲线图2中。可以观察到，对照组(实线)具有比处理组2(虚线)低的存活率，观察到显著的差异(对数等级检验，p＜0.0001；Gehan-Breslow-Wilcoxon检验，p＜0.0001)。
在两种情况中，结果都反映出保护性的反应。因此，可以得出结论，在结核分枝杆菌感染前或感染后，口服给予生长迅速的非结核性分枝杆菌(偶发分枝杆菌)的耐受建立方案通过延迟疾病的诱发，增加了动物的存活率。因此，认为根据本发明的灭活的分枝杆菌的用途通过延迟潜伏性感染转变成活动性感染，适用于作为抵抗结核病的预防性治疗。
实施例7.在试验的活动性结核病治疗后，用灭活的偶发分枝杆菌给药的口服耐受 建立处理(抵抗复发的作用)
根据实施例6中描述的相同方法来制备灭活的偶发分枝杆菌(Manresa菌株)。
在没有特定致病菌的6-8周大的C3HeB/FeJ雌性小鼠中测试灭活的分枝杆菌的效力。
给药的每剂量中，体积为0.3ml，相当于1:100稀释度，相当于6×106CFU。
在这种情况中，针对抗复发作用(即在动物发展出活动性结核病后，并采用抗结核病药物治疗后)研究了根据本发明的防止性耐受建立处理的效力。
因此，在实验开始时，通过引入大约2×105活杆菌的接种物来在静脉内感染小鼠。
如前面的实施例，使用在普-贝二氏培养基中培养至对数中期并以l ml的等分存储在-70℃下备用的结核分枝杆菌的毒性菌株(H37Rv Pasteur)进行感染。
根据实施例1的表1中描述的相同方法，每天对动物进行观察和称重，直至动物的状况显示需要处死为止。
此时(第21天)，开始采用包含抗生素组合物的称为RIMSTAR(异烟肼，乙胺丁醇，吡嗪酰胺和利福平)的商业制品，经调整以适应动物的体重，进行处理，每周5天。最后一份剂量在第60天给予。
然后，小鼠被分成两组，每组12只动物，并且每组都经历以下的耐受建立方案：
1)对照组：没有耐受建立处理。
2)组1：进行口服处理，在采用RIMSTAR最终治疗活动性结核病后72小时(第63天)开始所述耐受建立处理，通过灌胃包含灭活分枝杆菌的14份产品剂量，每周7次(周一至周日)，并在第76天给予最后一次剂量。
获得的关于抵抗复发的处理的结果描画在图9的曲线图中。x-轴代表存活时间(以天表示)，y-轴代表存活动物的百分数。此外，在x-时间轴上，使用RIMSRAR的处理时间用黑色矩形表示，组1的耐受建立处理时间用白色矩形表示。
可以观察到，对照组(实线)具有比处理组1(虚线)低的存活率。
结果反映了一保护性的反应，因此，可以得出结论，分枝杆菌的耐受建立方案的口服给药防止了接受活动性结核病治疗后的复发。

Claims (12)

1.灭活分枝杆菌用于制备通过诱导耐受建立反应以防止人类主体中结核病的药品的用途，所述灭活分支杆菌选自偶发分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌，其中：
-将所述药品周期性地进行口服，
-每剂量包含104到108的灭活分枝杆菌，
-每剂之间间隔不超过5天，以及
-给药的剂量数量是至少5次。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述分枝杆菌通过热处理的方式灭活。
3.根据权利要求1-2任一项所述的用途，其特征在于，每剂之间间隔不超过3天。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，每剂之间间隔不超过2天。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，给药的剂量数量是至少7次。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，给药的剂量数量是至少9次。
7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述分枝杆菌以药物组合物的形式给药，所述药物组合物包含灭活分枝杆菌和至少一种药学上可接受的赋形剂。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述药物组合物是胶囊的形式。
9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述药物组合物是片剂的形式。
10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，其对感染结核分枝杆菌的个体给药，其中，所述感染在个体中是处于潜伏状态的。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述个体以前曾经发展出活动性结核病。
12.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，其对没有感染结核分枝杆菌的个体给药。
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