ES2335177B1 - Agente inmunoterapeutico apropiado para la profilaxis primaria de la tuberculosis. - Google Patents
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Abstract
Agente inmunoterapéutico apropiado para la
profilaxis primaria de la tuberculosis.
La presente invención se refiere al uso de un
agente inmunoterapéutico que comprende fragmentos de pared celular
de una cepa virulenta de Mycobacterium tuberculosis para la
preparación de un medicamento apropiado para la profilaxis primaria
de la tuberculosis. El agente inmunoterapéutico es capaz de inducir
una respuesta protectora más eficaz que la vacuna convencional BCG y
reduce el número de bacilos viables en los pulmones y en el bazo de
los individuos recientemente infectados por M.
tuberculosis.
Description
Agente inmunoterapéutico apropiado para la
profilaxis primaria de la tuberculosis.
La presente invención se refiere al uso de un
agente inmunoterapéutico basado en fragmentos de pared celular de
una cepa virulenta de Mycobacterium tuberculosis-complex para
la preparación de un medicamento apropiado para la profilaxis
primaria de la tuberculosis.
La tuberculosis es una enfermedad infecciosa
crónica ocasionada por los bacilos Mycobacterium
tuberculosis-complex (MTB-C), que incluyen
actualmente a las especies M. tuberculosis, M. bovis, M.
microti y M. africanum.
Según el informe del 2008 de la Organización
Mundial de la Salud, en el mundo se registran anualmente 9.000.000
de nuevos casos de personas que manifiestan la enfermedad y mueren
unos 2.000.000 de personas. Se considera que en el mundo existen
más de 2.500.000.000 de personas infectadas y que cada año se
generan otros 90-100 millones de infectados
nuevos.
La vacuna actual que se emplea en el tratamiento
preventivo contra la tuberculosis está basada en bacterias de la
cepa denominada BCG (Bacilo de Calmette-Guerin),
una variante atenuada de M. bovis.
En la solicitud de patente
WO-A-2008/053055 se describe el uso
de un agente inmunoterapéutico que comprende fragmentos de pared
celular de una cepa virulenta de Mycobacterium
tuberculosis-complex (MTB-C) para la preparación
de un medicamento para el tratamiento profiláctico de la
tuberculosis y para prevenir las infecciones causadas por M.
tuberculosis. Dicho agente se administra habitualmente con
suficiente antelación a la infección. También se describe en dicha
solicitud de patente que el mencionado agente inmunoterapéutico es
más efectivo que la vacuna actual basada en la cepa atenuada
BCG.
Una vez la infección ya se ha iniciado, en el
estado de la técnica se han descrito diferentes tratamientos para
combatir el desarrollo de la tuberculosis activa en personas
infectadas, es decir, con infección tuberculosa latente.
Por ejemplo, en la solicitud de patente
WO-A-03/004520, se describe que,
para combatir la tuberculosis en personas infectadas, tanto las que
no han desarrollado todavía la enfermedad, como las que ya la han
desarrollado, se administran varios fármacos, entre ellos la
isoniacida, durante un período de tiempo que se prolonga durante
varios meses.
En la solicitud de patente
ES-A-2231037 se describe el uso de
un agente inmunoterapéutico que comprende fragmentos de pared
celular de una cepa virulenta de Mycobacterium
tuberculosis-complex (MTB-C) para la preparación
de un medicamento para el tratamiento de la tuberculosis en
personas infectadas en asociación con otros fármacos como la
isoniacida y la rifampicina. Dicha combinación aumenta la eficacia
de los fármacos, ya que genera una respuesta inmunológica contra
los bacilos que no están en fase de metabolismo activo, lo que
además reduce el riesgo de desarrollo de resistencia.
En el artículo "Documento de consenso sobre el
estudio de los contactos en los pacientes tuberculosos" del
Grupo de Estudio de Contactos de la Unidad de Investigación en
Tuberculosis de Barcelona (UITB) publicado en Med. Clin. (Barc),
1999, 112, 151-156, se describe que
prioritariamente, un programa de control de tuberculosis debe velar
por el diagnóstico y tratamiento temprano de los enfermos
garantizando el correcto cumplimiento de la terapia y, cuando se
alcanzan tasas de cumplimiento adecuadas, ha de profundizar en el
estudio de contactos. Se considera "contacto" al individuo que
ha mantenido relación con un enfermo de tuberculosis.
Por tanto, el hecho que el mecanismo de
transmisión de la infección tuberculosa latente sea mediante la
inspiración de aerosoles infectados por M. tuberculosis, hace
que los "contactos" convivientes o frecuentes de un enfermo de
tuberculosis, especialmente si es pulmonar y bacilífera, sean un
grupo de riesgo que se tenga que examinar.
Así pues, el control de los "contactos" de
un caso de tuberculosis es una de las actividades más efectivas
para conseguir el control de la endemia en una comunidad. Esta
actividad permite clasificar a los "contactos" en tres
grupos:
- I.
- Individuos expuestos pero todavía no contagiados. El test cutáneo de la tuberculina (TCT) es negativo. Corresponde al grupo I de la clasificación de la American Toraccic Society (ATS). La profilaxis primaria pretende prevenir la infección de los individuos expuestos al contagio, y en muchos casos evita la infección.
- II.
- Individuos con infección tuberculosa latente, pero no enfermos. Es decir, el grupo II de la clasificación de la ATS. Posiblemente sean convertores de la reacción tuberculínica (TCT), con alto riesgo de generar la enfermedad. La profilaxis secundaria, en particular, la quimioprofilaxis secundaria reduce considerablemente este riesgo.
- III.
- Individuos ya enfermos, el grupo III de la clasificación de la ATS, habitualmente con formas primarias de la enfermedad, y por tanto poco o nada contagiantes. La quimioterapia evitará que lleguen a ser fuentes de contagio.
En la actualidad la profilaxis primaria de la
infección que se administra habitualmente al grupo I de la ATS, es
en realidad una quimioprofilaxis primaria que se basa en la
administración de isoniacida, en dosis de 5 mg/kg, sin exceder los
300 mg/día y en régimen diario. Dicho tratamiento está indicado en
todos los individuos, de cualquier edad, TCT negativo, convivientes
y/o en contacto íntimo con enfermos de tuberculosis pulmonar. En
este caso, la quimioprofilaxis primaria se ha de mantener durante 3
meses después de haber suspendido el contacto con el foco infectivo
o que el foco haya dejado de ser contagioso.
En el documento "La Tuberculosi a
Catalunya: informe", publicado el 1983 por la Generalitat de
Catalunya, se indica que la quimioprofilaxis primaria está dirigida,
pues, a la protección de los individuos no infectados expuestos al
contagio, y su finalidad es la de prevenir la infección de los
"contactos". Dicho tratamiento representa, por tanto, una
auténtica profilaxis de la infección y se puede llegar a afirmar que
ha sido aceptada sin reticencias.
Sin embargo, en el estado de la técnica se han
descrito los efectos secundarios que provoca la quimioprofilaxis
primaria basada en la administración prolongada de isoniacida. Así
en el artículo de Martínez et al., Primary prevention and
treatment of latent tuberculosis infection with isoniazid: efficacy
of a control program, 1997-2002, Arch.
Bronconeumol., 2005, 41(1), 27-33 se
describen los problemas de hepatotoxicidad asociados con la
duración de la quimioprofilaxis primaria.
Otro inconveniente que presenta la
quimioprofilaxis primaria es la duración del tratamiento que puede
llegar a extenderse hasta los 12 meses. Ello implica que, por parte
de los individuos que se encuentran sometidos a dicho tratamiento,
frecuentemente el grado de cumplimiento sea insatisfactorio.
Subsiste pues la necesidad de disponer de una
profilaxis primaria de la tuberculosis que presente unos efectos
secundarios reducidos y que sea de más fácil cumplimiento.
\vskip1.000000\baselineskip
El objeto de la presente invención es el uso de
un agente inmunoterapéutico que comprende fragmentos de pared
celular de una cepa virulenta de MTB-C para la
preparación de un medicamento apropiado para la profilaxis primaria
de la tuberculosis.
También forma parte del objeto de la invención
un agente inmunoterapéutico que comprende fragmentos de pared
celular de una cepa virulenta de MTB-C para ser
usado en la profilaxis primaria de la tuberculosis.
\vskip1.000000\baselineskip
En la solicitud de patente
ES-A-2231037 se describe un
procedimiento para la preparación de un agente inmunoterapéutico
que comprende fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de
Mycobacterium tuberculosis-complex (MTB-C).
También se describen composiciones que lo contienen, y su aplicación
terapéutica para el tratamiento combinado de la tuberculosis en
asociación con otros fármacos.
Los autores de la presente invención han
descubierto que dicho agente inmunoterapéutico resulta apropiado
para la preparación de un medicamento para la profilaxis primaria
de la tuberculosis.
El objeto de la presente invención es pues el
uso de un agente inmunoterapéutico que comprende fragmentos de
pared celular de una cepa virulenta de Mycobacterium
tuberculosis-complex (MTB-C) para la preparación
de un medicamento para la profilaxis primaria de la tuberculosis,
en donde dicho agente es obtenible por un procedimiento que
comprende las siguientes etapas:
- -
- cultivar la cepa virulenta MTB-C durante un período de tiempo igual o superior a tres semanas y, posteriormente,
- -
- homogeneizar el cultivo de células en presencia de un tensioactivo no iónico.
También forma parte del objeto de la invención
un agente inmunoterapéutico que comprende fragmentos de pared
celular de una cepa virulenta de MTB-C para ser
usado en la profilaxis primaria de la tuberculosis, en donde dicho
agente es obtenible por un procedimiento que comprende las
siguientes etapas:
- -
- cultivar la cepa virulenta MTB-C durante un período de tiempo igual o superior a tres semanas y, posteriormente,
- -
- homogeneizar el cultivo de células en presencia de un tensioactivo no iónico.
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En una realización preferida, el procedimiento
incluye las siguientes etapas adicionales:
- -
- separar mediante centrifugación las células no fragmentadas y los componentes solubilizados,
- -
- someter a tratamiento químico o físico la fracción de fragmentos de pared celular para inactivar las eventuales células de cepa virulenta que eventualmente contenga, y
- -
- desecar el agente inmunoterapéutico obtenido mediante liofilización.
En el contexto de la invención se entiende por
profilaxis primaria de la tuberculosis el tratamiento para prevenir
la infección de la tuberculosis en individuos que se encuentran
expuestos al contagio y que no han dado positivo el test cutáneo de
la tuberculina.
Las vacunas profilácticas contra la
tuberculosis, bien sea la que está basada en el bacilo de Calmette
Guerin, o la vacuna profiláctica descrita en la solicitud de patente
WO-A-2008/053055, se administran
con suficiente antelación a individuos no infectados para prevenir
las infecciones causadas por M. tuberculosis.
El objeto de esta invención se dirige al uso de
un agente inmunoterapéutico que comprende fragmentos de pared
celular de una cepa virulenta de Mycobacterium
tuberculosis-complex (MTB-C) para preparar un
medicamento apropiado para la profilaxis primaria de la
tuberculosis, que se administra a individuos que están en riesgo de
contraer la infección por el contacto con individuos infectados y
que presentan un resultado negativo frente al test cutáneo de la
tuberculina.
Dichos individuos pueden haber sido vacunados o
no con cualquiera de las vacunas mencionadas anteriormente.
En el caso de que los individuos hayan sido
vacunados, la profilaxis primaria puede actuar como un potenciador
para evitar la infección.
En el procedimiento para la obtención del agente
inmunoterapéutico se emplea una cepa virulenta de
MTB-C.
La cepa virulenta puede ser cualquier cepa
virulenta de MTB-C. Una de las cepas mas utilizadas
por los investigadores en este campo es la denominada H_{37}Rv
que, por ejemplo, puede ser libremente adquirida en la National
Collection of Type Cultures (NCTC), Londres, Gran Bretaña (número
de depósito N0007416).
La cepa virulenta se puede cultivar por
inoculación en medios de cultivo bien conocidos por el experto en
la materia, por ejemplo el agar Middlebrook tipo 7H10 o tipo 7H11,
el medio de cultivo Sauton o el medio de cultivo
Proskauer-Beck.
El cultivo de la cepa virulenta se efectúa
durante un período de tiempo igual o superior a tres semanas,
preferiblemente comprendido entre 3 y 4 semanas. La temperatura del
cultivo se mantiene preferiblemente entre 34ºC y 38ºC.
Una vez finalizado el cultivo se procede al
aislamiento de las células empleando técnicas como las descritas,
por ejemplo, en la solicitud de patente
ES-A-2231037.
La homogeneización de las células vivas se lleva
a cabo en presencia de un tensioactivo no fónico. Preferiblemente
el tipo de tensioactivo no iónico utilizado en el proceso de
homogeneización se selecciona entre el grupo formado por los
alquilfenoles etoxilados, los ésteres de sorbitán etoxilados, y
mezclas de los mismos.
De manera más preferible el tensioactivo no
iónico se selecciona entre el grupo de los octilfenoles etoxilados.
Más preferiblemente se emplean octilfenoles etoxilados con un
contenido de óxido de etileno comprendido entre 7 y 8 moles, que se
pueden encontrar en el mercado bajo el nombre de TRITON®
X-114.
El contenido en tensioactivo no iónico en la
etapa de homogeneización está comprendido preferiblemente entre el
1% y el 10% en peso con respecto del peso total del homogeneizado.
Más preferiblemente entre el 3% y el 6% en peso.
Dicha homogeneización preferiblemente se lleva a
cabo en un medio tamponado a un pH neutro, por ejemplo a un pH
comprendido entre 6 y 8, como el proporcionado por el tampón PBS
(solución salina de tampón fosfato).
La homogeneización puede llevarse a cabo
mediante sonicación por ultrasonidos, o mediante la utilización de
pequeñas bolas de aproximadamente 1 mm de diámetro, por ejemplo, de
sílice o de sílice-zirconio, conjuntamente con un
homogeneizador mecánico. Un homogeneizador mecánico que se puede
utilizar, por ejemplo, es el modelo Beadbeater® de la compañía
Biospec.
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Mediante este proceso de homogeneización se
rompen las células de MTB-C y se obtienen
fragmentos pequeños de pared celular.
En una realización preferida el procedimiento
incluye una etapa para separar los fragmentos de pared celular.
La masa homogeneizada, que contiene los
fragmentos de pared celular, se somete a un tratamiento
convencional para separar y rechazar las células no fragmentadas y
los componentes solubilizados. Por ejemplo se puede emplear la
centrifugación a diferentes velocidades y los lavados con solución
tampón como se describe en la solicitud de patente
ES-A-2231027.
Después de efectuar los procedimientos de
purificación mencionados se obtiene un sedimento, que contiene los
fragmentos de pared celular que se emplean para preparar el
medicamento apropiado para la profilaxis primaria.
En una realización preferida el sedimento
obtenido en la etapa anterior se dispersa en tampón PBS y se somete
a un tratamiento convencional para asegurar la inactivación total
de las células de MTB-C que hubieran podido
permanecer viables tras el proceso de fragmentación y de
purificación.
El tratamiento de inactivación puede ser un
proceso químico, por ejemplo mediante tratamiento con formol, o
físico, por ejemplo mediante tratamiento en autoclave o
pasteurización.
Preferiblemente se emplea un tratamiento de
pasteurización a una temperatura comprendida entre 60ºC y 90ºC, más
preferiblemente entre 60ºC y 70ºC, y aún más preferiblemente a una
temperatura alrededor de 65ºC.
En una realización preferida, la dispersión de
fragmentos de pared celular en tampón PBS obtenida tras el
tratamiento de inactivación se liofiliza para facilitar su
conservación. Para ello se puede distribuir la dispersión en viales
y liofilizar mediante un procedimiento convencional a una
temperatura comprendida entre -15ºC y -25ºC y bajo un vacío
comprendido entre 0,1 y 0,5 mbar.
Los viales obtenidos tras el proceso de
liofilización contienen el agente inmunoterapéutico que comprende
los fragmentos de pared celular de MTB-C, y se
conservan generalmente a temperaturas muy bajas, por ejemplo a
-70ºC.
Como ya se ha indicado, el objeto de la
invención es el uso del agente inmunoterapéutico que comprende
fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de
MTB-C para la preparación de un medicamento
apropiado para la profilaxis primaria de la tuberculosis.
El medicamento para el tratamiento profiláctico
primario de la tuberculosis comprende el agente inmunoterapéutico
basado en fragmentos de pared celular y, opcionalmente, diluyentes,
adyuvantes y/o excipientes farmacéuticamente aceptables.
El medicamento puede estar en forma de solución
salina de tampón fosfato, solución acuosa, emulsión, o también en
forma de liposomas.
Preferiblemente el medicamento está en forma de
liposomas.
La formación de liposomas puede efectuarse
empleando técnicas y lípidos auxiliares convencionales bien
conocidos por el experto, como los descritas en la solicitud de
patente ES-A-2231037.
En general, los liposomas incluyen fosfolípidos,
con carga neta neutra y/o negativa, y esteroles.
Los fosfolípidos empleados pueden ser, por
ejemplo: la fosfatidilcolina, la fosfatidilserina y el
fosfatidilinositol.
Habitualmente, el componente mayoritario de los
liposomas es la fosfatidilcolina, que puede ser sintetizada o
aislada de fuentes naturales. Un producto comercial frecuentemente
usado es la lecitina de soja, que es una mezcla compleja de
fosfolípidos entre los cuales se encuentra la fosfatidilcolina.
Los esteroles que se emplean en la preparación
de liposomas pueden ser, entre otros, el colesterol y las sales
biliares.
Preferiblemente, los liposomas se forman
empleando una mezcla de lecitina de soja y colato sódico.
Opcionalmente los liposomas pueden contener
excipientes que mejoren su estabilidad como por ejemplo la
glicina.
Los liposomas obtenidos presentan habitualmente
una distribución de tamaño en la que el 99,9% son más pequeños que
1 micra.
Los liposomas se pueden someter a un proceso de
liofilización convencional para obtener de este modo el agente
inmunoterapéutico en forma de liposomas liofilizados.
\vskip1.000000\baselineskip
La administración del medicamento puede
realizarse en forma de una dosis única o de varias dosis, mediante
la repetición a intervalos de tiempo determinados. Preferiblemente
dicho medicamento se administra en forma de una dosis única.
En el caso de aplicar varias dosis, es
preferible aplicar dos dosis con un intervalo de tiempo entre ellas
comprendido entre 1 y 5 semanas, preferiblemente entre 1 y 3
semanas, y aún más preferiblemente entre 1 y 2 semanas.
El medicamento se puede administrar a una
mucosa, por ejemplo, ocular, intranasal, oral, gástrica,
intestinal, vaginal, o el tracto urinario, o, por vía parenteral,
por ejemplo, subcutánea, intradermal, intramuscular, intravenosa, o
intraperitoneal. Resulta preferida la administración por vía
parenteral.
La dosis apropiada depende de varios parámetros,
entre ellos la vía de administración y el sujeto a ser tratado,
pero de forma preferible la dosis se encuentra comprendida entre 1
\mug y 1000 \mug de fragmentos de pared celular, más
preferiblemente entre 5 y 700, y aún más preferiblemente entre 5
\mug y 300 \mug.
El agente inmunoterapéutico de la invención se
puede administrar en combinación con otros medicamentos apropiados
para la profilaxis primaria de la tuberculosis, de manera
simultánea o alternada. Entre dichos medicamentos se encuentran la
isoniacida, la rifampicina u otros agentes tuberculostáticos. En el
caso de administración combinada, el agente inmunoterapéutico de la
invención se administra con isoniacida.
Sorprendentemente, se ha encontrado que la
administración del medicamento que comprende el agente
inmunoterapéutico que contiene fragmentos de pared celular de una
cepa virulenta de MTB-C es apropiado como profilaxis
primaria de la tuberculosis en ratones infectados recientemente, ya
que induce una respuesta protectora más eficaz que la vacuna
convencional BCG en dicho ratones.
Este resultado resulta sorprendente en cuanto
que la vacuna convencional BCG y el agente inmunoterapéutico que
contiene fragmentos de pared celular tienen un comportamiento
inmunoprotector sustancialmente idéntico cuando se administran como
vacuna profiláctica con suficiente antelación a la infección, tal
como se describe en la solicitud de patente
WO-A-2008/053055.
Sin embargo los resultados experimentales que se
incluyen en esta descripción ponen de manifiesto la diferencia
entre ambos medicamentos al ser empleados en la profilaxis primaria
de la tuberculosis con la finalidad de prevenir la infección debido
a los contactos en individuos no infectados, pero expuestos al
contagio.
Como se describe ampliamente en el apartado de
Ejemplos, se infectaron cuatro grupos de ratones con la cepa
virulenta H_{37}Rv. A los pocos días de la infección a un grupo
se les administró una dosis de dicho agente inmunoterapéutico, a un
segundo grupo se les administraron dos dosis del mismo agente en un
intervalo de una semana, y a un tercer grupo se les administró una
dosis de la vacuna convencional BCG. El cuarto grupo era el grupo
de control y no se les administró medicamento alguno.
A las tres semanas de la infección se
sacrificaron los animales y se determinó el número de bacilos
viables presentes en los pulmones y en el bazo de los ratones. Se
observó que el número de bacilos viables presentes en los pulmones
de los ratones a los que se había administrado dicho agente
inmunoterapéutico, era inferior al número de bacilos viables
presentes en el grupo de ratones control, y al de los ratones
vacunados con la vacuna convencional BCG. En particular, los ratones
a los que se administraron dos dosis de agente inmunoterapéutico en
forma de liposomas presentaron el menor número de bacilos viables
de todos los grupos.
En el bazo, si bien las diferencias entre los
grupos de ratones no eran estadísticamente significativas, cabe
señalar que la administración del agente inmunoterapéutico en forma
de liposomas redujo la concentración bacilar hasta el punto que en
el grupo tratado con dos dosis del agente, se consiguió la
erradicación de la población bacilar (UFC= 0) en 4 casos de 14, de
aquí la alta desviación estándar detectada.
Por tanto, la profilaxis primaria con el agente
inmunoterapéutico basado en fragmentos de pared celular de una cepa
virulenta de MTB-C consigue proteger a los
individuos frente a las infecciones recientes causadas por M.
tuberculosis, puesto que genera una respuesta protectora, en
contraposición a la vacuna convencional BCG que se muestra
sustancialmente menos eficaz.
El ejemplo que sigue a continuación se expone a
efectos de proporcionar al experto en la materia una explicación
detallada de realizaciones concretas dentro de la invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
El agente inmunoterapéutico empleado en este
Ejemplo fue preparado de acuerdo con el procedimiento descrito en
el Ejemplo 2 de la solicitud de patente
ES-A-2231037.
La efectividad del agente inmunoterapéutico
basado en fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de
MTB-C se ensayó en ratones hembra de 6 a 8 semanas
de edad del tipo C57BL/6, libres de patógenos específicos.
Los ratones se dividieron en cuatro grupos de 14
animales cada uno de ellos, y se sometieron al siguiente protocolo
de vacunación:
- 1)
- Sin vacunación (grupo Control),
- 2)
- Inoculados por vía subcutánea con una dosis de 260 \mug de fragmentos de pared celular en forma de liposomas obtenido en el Ejemplo 2 de la solicitud de patente ES-A-2231037, a los 4 días después de la infección de los ratones mediante aerosol.
- 3)
- Inoculados por vía subcutánea con dos dosis de 260 \mug de fragmentos de pared celular en forma de liposomas obtenido en el Ejemplo 2 de la solicitud de patente ES-A-2231037, a los 4 y 11 días después de la infección de los ratones mediante aerosol.
- 4)
- Inoculados por vía subcutánea con una dosis de 2 x 10^{6} Unidades Formadoras de Colonias de la cepa BCG Danish (Statens Serum Institute, Dinamarca), a los 4 días después de la infección de los ratones mediante aerosol.
Para la infección se empleó la cepa virulenta de
Mycobacterium tuberculosis (H_{37}Rv Pasteur), que se
cultivó en medio Proskauer-Beck hasta una fase media
logarítmica, y se conservó en alícuotas de 1 ml a una temperatura
de -70ºC hasta su utilización.
Los ratones se infectaron por aerosol con dicha
cepa virulenta al inicio del experimento mediante su ubicación en
un aparato Middelbrook de infección por aerosol que proporcionó un
inóculo aproximado de 10-50 bacilos viables en los
pulmones de los ratones.
El número de bacilos viables en los pulmones y
en el bazo se determinó a los 21 días después de la infección por
aerosol de los animales (semana 3 del experimento) incubando
diluciones seriadas de homogeneizados de pulmón y de bazo en agar
Middelbrook 7H11 durante 4 semanas a 37ºC. La homogeneización del
pulmón y del bazo se llevó a cabo en presencia de 1 ml de agua
bidestilada.
Los resultados de la Tabla I expresan el
logaritmo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por ml que
se han identificado en el pulmón:
En el pulmón, las diferencias entre el resultado
del grupo de ratones que han sido tratados con el agente
inmunoterapéutico liposomado y los que no lo han sido son
estadísticamente significativas.
Se puede observar que en el pulmón del grupo de
ratones vacunado con el agente inmunoterapéutico liposomado se
detecta un menor número de bacilos viables que en el pulmón de los
ratones de los otros grupos.
Los resultados de la Tabla II expresan el
logaritmo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por ml que
se han identificado en el bazo:
En el bazo, si bien no hay diferencias
estadísticamente significativas, cabe señalar que la administración
del agente inmunoterapéutico en forma de liposomas redujo la
concentración bacilar, hasta el punto que en el grupo tratado con
dos dosis del agente, se consiguió la erradicación de la población
bacilar (CFU= 0) en 4 casos de 14, de aquí la alta desviación
estándar detectada.
Por tanto, la profilaxis primaria con el agente
inmunoterapéutico basado en fragmentos de pared celular de una cepa
virulenta de MTB-C consigue proteger frente a las
infecciones recientes causadas por M. tuberculosis, puesto
que genera una respuesta protectora, en contraposición a la menor
eficacia demostrada por la vacuna convencional BCG.
A pesar de que la vacuna convencional BCG y el
agente inmunoterapéutico que contiene fragmentos de pared celular
tienen un comportamiento inmunoprotector sustancialmente idéntico
cuando se administran como vacuna profiláctica con suficiente
antelación a la infección, tal como se describe en la solicitud de
patente WO-A-2008/053055, los
resultados del Ejemplo 1 ponen de manifiesto la diferencia existente
entre ambos medicamentos cuando son empleados en la profilaxis
primaria de la tuberculosis para prevenir la infección debido a los
contactos en individuos no infectados, pero expuestos al
contagio.
Claims (13)
1. El uso de un agente inmunoterapéutico que
comprende fragmentos de pared celular de una cepa virulenta de
Mycobacterium tuberculosis-complex (MTB-C)
para la preparación de un medicamento para la profilaxis primaria
de la tuberculosis, en donde dicho agente es obtenible por un
procedimiento que comprende las siguientes etapas:
- -
- cultivar la cepa virulenta MTB-C durante un período de tiempo igual o superior a tres semanas y, posteriormente,
- -
- homogeneizar el cultivo de células en presencia de un tensioactivo no iónico.
\vskip1.000000\baselineskip
2. El uso según la reivindicación 1
caracterizado porque el período de tiempo de cultivo está
comprendido entre 3 y 4 semanas.
3. El uso según las reivindicaciones 1 ó 2
caracterizado porque el tensioactivo no iónico se selecciona
entre el grupo formado por los alquilfenoles etoxilados, los
esteres de sorbitán etoxilados, y mezclas de los mismos.
4. El uso según la reivindicación 3
caracterizado porque el tensioactivo no iónico se selecciona
entre el grupo de los octilfenoles etoxilados.
5. El uso según la reivindicación 4
caracterizado porque el tensioactivo no iónico se selecciona
entre los octilfenoles etoxilados con un contenido de óxido de
etileno comprendido entre 7 y 8 moles.
6. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5 caracterizado porque la
homogeneización se efectúa en un medio tamponado a pH neutro.
7. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6 caracterizado porque el procedimiento
comprende además las siguientes etapas:
- -
- separar mediante centrifugación las células no fragmentadas y los componentes solubilizados,
- -
- someter a tratamiento químico o físico la fracción de fragmentos de pared celular para inactivar las eventuales células de cepa virulenta que eventualmente contenga, y
- -
- desecar el agente inmunoterapéutico obtenido mediante liofilización.
\vskip1.000000\baselineskip
8. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 caracterizado porque el medicamento
está en forma de liposomas.
9. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8 caracterizado porque el medicamento
se administra en forma de dosis única o de varias dosis.
10. El uso según la reivindicación 9
caracterizado porque el medicamento se administra en dos
dosis.
11. El uso según la reivindicación 10
caracterizado porque las dosis se administran separadas por
un período de tiempo comprendido entre 1 y 5 semanas.
12. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11 caracterizado porque el medicamento
se administra en combinación con otros medicamentos apropiados para
la profilaxis primaria de la tuberculosis.
13. El uso según la reivindicación 12,
caracterizado porque el medicamento se administra en
combinación con la isoniacida.
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