CN104569240A - 辛夷鼻炎丸含量的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种辛夷鼻炎丸含量的测定方法，其采用高效液相色谱进行含量测定。采用本发明的方法分析辛夷鼻炎丸成品，所得图谱的目标成分升麻素苷色谱峰及5-O-甲基维斯阿米醇苷色谱峰附近的基线平整，杂质成分峰少，单个样品的分析时间控制在30分钟内，满足在常规分析可接受时间内同时准确检测两个成分的含量，既节省了分析的时间，又达到准确检测的目的。

Description

辛夷鼻炎丸含量的测定方法

技术领域

本发明涉及中医药领域，特别是涉及一种辛夷鼻炎丸含量的测定方法。

背景技术

辛夷鼻炎丸是一种祛风，清热，解毒的中药制剂，收载于《中国药典》2010版第一增补本，主要用于治疗鼻炎，该产品由辛夷、薄荷、紫苏叶、甘草、广藿香、苍耳子、鹅不食草、板蓝根、山白芷、防风、鱼腥草、菊花、三叉苦十三味中药制备而成。辛夷鼻炎丸成品中干扰成分很多，以本领域常见的生产工艺、生产设备，以及市场上采购的原材料，生产的辛夷鼻炎丸成品按2010年版《中国药典》增补版收载的标准检验，存在着以符合规定的防风药材投料，却生产出不符合升麻素苷含量要求的成品的可能，只以升麻素苷含量为指标，不足以评价制剂中防风的质量。

此外，升麻素苷色谱峰与5-O-甲基维斯阿米醇苷色谱峰在高效液相色谱等度洗脱分析条件下，两者出峰时间相隔较长，检测时间长。据文献报道，本领域常规的升麻素苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷的分析大多采用等度洗脱或以甲醇-水系统进行梯度洗脱。车晓彦等(车晓彦，邓晓鸿，余晓琴，范灵靖，等.HPLC测定辛夷鼻炎丸中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总含量［J］.中成药，2010，32（11）：1917-1919.)采用甲醇-水系统进行梯度洗脱分析，单个样品的分析时间需大约50分钟（图谱见图1）；丘文珍（丘文珍.HPLC法测定辛夷鼻炎丸中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量［J］.中草药，2003，34（5）：424-424.）采用甲醇-水（40：60）等度洗脱进行分析，结果升麻素苷色谱峰与5-O-甲基维斯阿米醇苷色谱峰出峰时间太快，两个目标成分的色谱峰均未能达到基线分离，不利于准确地检测分析（图谱见图2）。若仍采用甲醇-水等度洗脱系统，减少甲醇比例，使目标成分出峰时间推迟，经发明人研究发现在60分钟内仍无法让两个目标成分完全达到基线分离。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种辛夷鼻炎丸含量的测定方法，该方法有利于产品的生产，更重要的是能更有效地反映辛夷鼻炎丸产品的质量，以便更好地控制产品的质量。

为实现上述技术目的，具体技术方案如下：

一种辛夷鼻炎丸含量的测定方法，采用高效液相色谱进行含量测定，包括以下步骤：

A、取升麻素苷对照品和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成50μg/ml的对照品溶液；

B、取辛夷鼻炎丸成品适量，研细，取2g，精密称定，置烧瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，加在中性氧化铝柱上，用甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶液使溶解，稀释至10ml，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

C、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；辛夷鼻炎丸成品每1g含防风以升麻素苷（C₂₂H₂₈O₁₁）和5-O-甲基维斯阿米醇苷（C₂₂H₂₈O₁₀）的总量计，不得少于设定值为合格。

修订含量测定方法其中一个关键是优化前处理方法，确保目标成分提取完全，以及尽可能除去干扰性杂质。本发明在制备供试品溶液步骤中，采用加热回流提取后，再过中性氧化铝柱进行除杂、富集目标成分的提取方法，操作简单，并有效除去大量的干扰性杂质，有利于目标成分的分析检测。

在其中一些实施例中，所述步骤B中，加热回流的时间为0.8-1.2小时。

在其中一些实施例中，所述甲醇溶液的体积百分比浓度为75-85%。

在其中一些实施例中，所述甲醇溶液的体积百分比浓度为80%。

在其中一些实施例中，所述步骤B中的中性氧化铝柱由100～200目的中性氧化铝5g，装入内径为1.5cm的分析柱内制备而成。

在其中一些实施例中，所述液相色谱仪的条件为：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，采用梯度洗脱方式：从0-15min，流动相A的体积百分含量为15%，流动相B的体积百分含量为85%；从15-35min，流动相A的体积百分含量由15%提高至30%，流动相B的体积百分含量由85%降低至70%；检测波长为254nm。理论板数按升麻素苷峰计算应不低于6000。

采用高效液相色谱法以乙腈-水系统进行梯度洗脱的分析条件，对辛夷鼻炎丸中的升麻素苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷进行测定，单个样品的分析时间控制在30分钟内，满足在常规分析可接受时间内同时准确检测两个成分的含量，上述测定方法既节省了分析的时间，又达到准确检测的目的。

在其中一些实施例中，辛夷鼻炎丸成品每1g含防风以升麻素苷（C₂₂H₂₈O₁₁）和5-O-甲基维斯阿米醇苷（C₂₂H₂₈O₁₀）的总量计，所述设定值为0.60mg。

本发明现对于现有技术的优点及有益效果为：

1、本发明的供试品溶液的制备采用加热回流提取后，再过中性氧化铝柱进行除杂、富集目标成分的提取方法，操作简单，并有效除去大量的干扰性杂质，有利于目标成分的分析检测；

2、本发明用高效液相色谱法以乙腈-水系统进行梯度洗脱的分析条件，对辛夷鼻炎丸中的升麻素苷及5-o-甲基维斯阿米醇苷进行测定，单个样品的分析时间控制在30分钟内，满足在常规分析可接受时间内同时准确检测两个成分的含量。既节省了分析的时间，又达到准确检测的目的。

附图说明

图1为现有技术中采用甲醇-水系统梯度洗脱分析辛夷鼻炎丸的HPLC色谱图，其中A为混合对照品HPLC图谱，B为辛夷鼻炎丸HPLC图谱，C为阴性样品的HPLC图谱，1为升麻素苷，2为5-O-甲基维斯阿米醇苷；

图2为现有技术中采用甲醇-水（40：60）等度洗脱分析辛夷鼻炎丸的HPLC色谱图，其中A为对照品的HPLC图谱，B为阴性样品的HPLC图谱，C为辛夷鼻炎丸的HPLC图谱，1为升麻素苷，2为5-O-甲基维斯阿米醇苷；

图3为本申请实施例1采用乙腈-水系统梯度分析辛夷鼻炎丸含量的HPLC色谱图，A为对照品的HPLC色谱图（其中升麻素苷：t_R=11.175分钟；5-O-甲基维斯阿米醇苷：t_R=26.792分钟），B为供试品溶液HPLC色谱图（其中升麻素苷：t_R=11.165分钟；5-O-甲基维斯阿米醇苷：t_R=26.782分钟），C为缺防风阴性HPLC色谱图；

图4为对比例1所采用的采用乙腈-水系统梯度分析按《中国药典》2010年版第一增补本方法制备的辛夷鼻炎丸供试品溶液的色谱图。

具体实施方式

以下结合实施例和附图进一步说明本发明。

实施例1

取市售广州中一药业有限公司生产的辛夷鼻炎丸：

测定辛夷鼻炎丸中防风含量，包括以下步骤：

照高效液相色谱法(《中国药典》一部附录ⅥD)测定。

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，采用梯度洗脱方式：从0-15min，流动相A的体积百分含量为15%，流动相B的体积百分含量为85%；从15-35min，流动相A的体积百分含量由15%提高至30%，流动相B的体积百分含量由85%降低至70%；检测波长为254nm。理论板数按升麻素苷峰计算应不低于6000。

对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加浓度为80%（V/V）的甲醇溶液制成50μg/ml的对照品溶液；

供试品溶液的制备：取辛夷鼻炎丸成品适量，研细，取2g，精密称定，置烧瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，加在中性氧化铝柱（该中性氧化铝柱由100～200目的中性氧化铝5g，装入内径为1.5cm的分析柱内制备而成）上，用浓度为80%（V/V）的甲醇溶液80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加浓度为80%（V/V）的甲醇溶液使溶解，并转移至10ml量瓶中，加浓度为80%（V/V）的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，辛夷鼻炎丸成品每1g含防风以升麻素苷（C₂₂H₂₈O₁₁）和5-O-甲基维斯阿米醇苷（C₂₂H₂₈O₁₀）的总量计，不得少于0.60mg为合格。

图3为实施例1所采用的采用乙腈-水系统梯度分析辛夷鼻炎丸的色谱图，由图3可以看出，采用本发明测定方法分析辛夷鼻炎丸成品，所得图谱的目标成分升麻素苷色谱峰及5-O-甲基维斯阿米醇苷色谱峰附近的基线平整，杂质成分峰少，单个样品的分析时间控制在30分钟内，满足在常规分析可接受时间内同时准确检测两个成分的含量。既节省了分析的时间，又达到准确检测的目的。本发明测定方法与图2分析方法相比，平整的基线有利于色谱峰的积分，减少杂质的干扰，能准确地计算目标成分的含量。本发明测定方法与图1分析方法相比，目标成分色谱峰附近杂质成分峰越少，越有利于准确检测目标成分的含量；而且单个样品的分析时间缩短了大约40%。采用本发明的方法分析辛夷鼻炎丸成品，能更有效地反映辛夷鼻炎丸产品的质量，能更好地控制产品的质量。

对比例1

取市售广州中一药业有限公司生产的辛夷鼻炎丸，测定辛夷鼻炎丸中防风含量，具体步骤与实施例1的区别在于：

供试品溶液的制备（《中国药典》2010年版第一增补本方法）：取辛夷鼻炎丸成品适量，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，冷浸1小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

图4为对比例1所采用的采用乙腈-水系统梯度分析按《中国药典》2010年版第一增补本方法制备的辛夷鼻炎丸供试品溶液的色谱图。由图4可以看出，对比例1采用现行的2010年版《中国药典》增补本方法制备的辛夷鼻炎丸供试品溶液，其余测定步骤及参数与实施例1相同，所得图谱的目标成分升麻素苷色谱峰及5-O-甲基维斯阿米醇苷色谱峰很小，附近的基线不平整，杂质成分峰多，而且杂质对升麻素苷色谱峰有干扰。实施例1与对比例1相比，平整的基线有利于色谱峰的积分，减少杂质的干扰，能准确地计算目标成分的含量。采用本发明的方法分析辛夷鼻炎丸成品，能更有效地反映辛夷鼻炎丸产品的质量，能更好地控制产品的质量。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (7)

1.一种辛夷鼻炎丸含量的测定方法，其特征在于，采用高效液相色谱进行含量测定，包括以下步骤：

A、取升麻素苷对照品和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成50μg/ml的对照品溶液；

B、取辛夷鼻炎丸成品适量，研细，取2g，精密称定，置烧瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，加在中性氧化铝柱上，用甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶液使溶解，稀释至10ml，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

C、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；辛夷鼻炎丸成品每1g含防风以升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总量计，不得少于设定值为合格。

2.如权利要求1所述的辛夷鼻炎丸含量的测定方法，其特征在于，所述步骤B中，加热回流的时间为0.8-1.2小时。

3.如权利要求1所述的辛夷鼻炎丸含量的测定方法，其特征在于，所述甲醇溶液的体积百分比浓度为75-85%。

4.如权利要求3所述的辛夷鼻炎丸含量的测定方法，其特征在于，所述甲醇溶液的体积百分比浓度为80%。

5.如权利要求1所述的辛夷鼻炎丸含量的测定方法，其特征在于，所述步骤B中的中性氧化铝柱由100～200目的中性氧化铝5g，装入内径为1.5cm的分析柱内制备而成。

6.如权利要求1所述的辛夷鼻炎丸含量的测定方法，其特征在于，所述液相色谱仪的条件为：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，采用梯度洗脱方式：从0-15min，流动相A的体积百分含量为15%，流动相B的体积百分含量为85%；从15-35min，流动相A的体积百分含量由15%提高至30%，流动相B的体积百分含量由85%降低至70%；检测波长为254nm。

7.如权利要求1所述的辛夷鼻炎丸含量的测定方法，其特征在于，辛夷鼻炎丸成品每1g含防风以升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总量计，所述设定值为0.60mg。