CN104569202B

CN104569202B - 一种分离测定醋酸巴多昔芬及其有关物质的方法

Info

Publication number: CN104569202B
Application number: CN201510001001.2A
Authority: CN
Inventors: 王晓莹; 王宇杰; 马苏峰
Original assignee: Aventis Pharma Hainan Co ltd
Current assignee: Aventis Pharma Hainan Co ltd
Priority date: 2015-01-05
Filing date: 2015-01-05
Publication date: 2020-07-07
Anticipated expiration: 2035-01-05
Also published as: CN104569202A

Abstract

本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱法分离测定醋酸巴多昔芬有关物质的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液‑有机相为流动相，可以定量测定醋酸巴多昔芬及其有关物质的含量，从而有效控制醋酸巴多昔芬的质量。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。

Description

一种分离测定醋酸巴多昔芬及其有关物质的方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定醋酸巴多昔芬及其有关物质含量的方法。

背景技术

醋酸巴多昔芬(bazedoxifene)是新一代选择性雌激素受体调节剂，对骨骼有雌激素激动剂活性，能改善脊椎和髋部的骨密度，故能显著降低骨质疏松症绝经妇女的椎骨骨折风险。单独使用对人乳癌细胞无激动剂活性，其首要适应症为治疗和预防绝经期后的骨质疏松。醋酸巴多昔芬，化学名为1-[4-[2-(hexahydro-1H-azepin-1-yl)ethoxyl]methyl]-2-(4-hydroxyphenyl)-3-methyl-1H-Indol-5-ol monoacetate，英文通用名为Bazedoxifene acetate。分子式为C₃₂H₃₈N₂O_5。醋酸巴多昔芬结构式为：

。

在该化合物的生产过程中，有几个物质可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，这几个物质即药物质量控制中的有关物质，对于醋酸巴多昔芬的生产质量主要控制的有关物质有6个，分别是1-[2-(4-Chloromethyl-phenoxy-ethyl]-azepanehydrochloride（有关物质1），3-methyl-5-benzyloxy-2-(4-benzyloxy-phenyl)-1H-indole（有关物质2），1-[5-(2-Azepan -1-yl-ethoxy)-2-methylene-pent-3-enyl]-5-benzyloxy-2-(4-benzyloxy-phenyl)-3-methyl-1H-indole（有关物质3），1-(4-Hydroxy-benzyl)-2-(4-hydroxy-phenyl)-3-methyl-1H-Indol-5-ol（有关物质4），2-(4-hydroxy-phenyl) -3-methyl-1H-Indol-5-ol（有关物质5），5-Benzyloxy-2-(4-benzyloxy -phenyl)-3-methyl-1-{4-[2-（1-oxyazepan-1-yl）-ethoxy]-benzyl}-1H-indole（有关物质6）结构式分别为：

。

对于醋酸巴多昔芬工艺生产过程中引入的有关物质，在原料药中是需要进行质量控制的，因此，实现醋酸巴多昔芬及其有关物质的分离，在醋酸巴多昔芬质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分析醋酸巴多昔芬纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现醋酸巴多昔芬与其有关物质的分离和测定，从而保证醋酸巴多昔芬的纯度，实现其终产品的质量控制。

本发明所述的用液相色谱法分析醋酸巴多昔芬纯度以及分离其有关物质的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相。

上述所说的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，选自Kromasil、Apollo或Merk等品牌。

上述所说的有机相选自以下化合物：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇，优选乙腈。

上述所说的方法，其流动相缓冲盐溶液-有机相采用梯度洗脱。

上述所说的方法中，缓冲盐选自磷酸盐、高氯酸盐、甲酸盐、乙酸盐，优选高氯酸钠。

上述所说的方法中，缓冲盐溶液的浓度为0.01～0.1M，优选浓度为0.02M。

上述所说的方法中，缓冲盐溶液pH优选3.0。

本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：

（1）取醋酸巴多昔芬样品适量，用流动相溶解样品，配制成每1mL含醋酸巴多昔芬0.1～1.5mg的样品溶液。

（2）设置流动相流速为0.5～1.5mL/min ，流动相流速优选1.0mL/min，检测波长为205～250nm，最佳检测波长优选225nm。

（3）取（1）的样品溶液5～50μL，注入液相色谱仪，完成醋酸巴多昔芬与其有关物质的分离测定。

其中：高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp

色谱柱：C18（Merk，250×4.6mm，5μm）

流动相：A相：0.02M高氯酸钠缓冲液（pH3.0），B相：0.02M高氯酸钠缓冲液（pH3.0）-乙腈（25:75），采用梯度洗脱：

T（min）	0	10	35	60	95	95.10	115
								B%	44	46	46	97	97	44	44

流速：1.0mL/min

检测波长：225nm

进样体积：10μL

柱温：30℃。

本发明采用C18(Merk，250×4.6mm，5μm)，能够有效的分离醋酸巴多昔芬及其有关物质。本发明解决了醋酸巴多昔芬及其有关物质的分离测定问题，从而确保了醋酸巴多昔芬终产品的质量可控。

附图说明

图1为实施例1时的醋酸巴多昔芬HPLC图；

图2为实施例1时的醋酸巴多昔芬及其有关物质HPLC图；

图3为实施例2时的醋酸巴多昔芬HPLC图；

图4为实施例2时的醋酸巴多昔芬及其有关物质HPLC图；

图5为实施例3时的溶剂图；

图6为实施例3时的醋酸巴多昔芬及其有关物质HPLC图；

图7为实施例3时的醋酸巴多昔芬的HPLC图。

具体实施方式

以下实施案例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。

实施例1

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；

色谱柱：苯基柱（Kromasil，250×4.6mm，5μm）

流动相：A相：0.02M磷酸二氢钾（pH3.0），B相：乙腈，采用梯度洗脱：

T（min）	0	10	20	40	45	75	76	90
									B%	18	18	38	38	65	65	18	18

流速：1.0mL/min

检测波长：225nm

进样体积：10μL

实验步骤

取醋酸巴多昔芬及其各有关物质适量，分别用80%乙腈溶解样品，配制成含醋酸巴多昔芬约1.0mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1~2；图1中保留时间为33.031min的色谱峰为醋酸巴多昔芬；图2中醋酸巴多昔芬出峰时间为31.414min，其余色谱峰为醋酸巴多昔芬各有关物质的色谱峰。

实施例 2

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp色谱柱：苯基柱（Kromasil，250×4.6mm，5μm）

流动相：A相：0.02M高氯酸钠（pH3.0），B相：乙腈；采用梯度洗脱：

T(min)	0	50	51	100	101	115
							B%	35	35	63	63	35	35

流速：1.0mL/min

检测波长：225nm

柱温：30℃

进样体积：10μL

实验步骤

取醋酸巴多昔芬及其各有关物质适量，分别用80%乙腈水溶解样品，配制成含醋酸巴多昔芬约0.5mg/mL的样品溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3~4，图3中保留时间为43.169min的色谱峰为醋酸巴多昔芬。图4中保留时间为42.974min的色谱峰为醋酸巴多昔芬，其余色谱峰为醋酸巴多昔芬各有关物质的色谱峰；

实施例3

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp

色谱柱：C18（Merk，250×4.6mm，5μm）

T（min）	0	10	35	60	95	95.10	115
								B%	44	46	46	97	97	44	44

流速：1.0mL/min

检测波长：225nm

柱温：30℃

进样体积：10μL

实验步骤

取醋酸巴多昔芬及其各有关物质适量，分别用0.02M高氯酸钠（pH3.0）-乙腈（65:35）溶解样品，配制成含醋酸巴多昔芬约1.0mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图5~6，图5为溶剂峰，图6中保留时间为29.161min的色谱峰为醋酸巴多昔芬，其余色谱峰为醋酸巴多昔芬各有关物质的色谱峰，由图可以看出，醋酸巴多昔芬与其各有关物质能够达到基线分离，符合中国药典的要求；图7中保留时间为29.358min的色谱峰为醋酸巴多昔芬，可以看出在该条件下醋酸巴多昔芬与其各有关物质可以完全分离。

从以上实施案例可以理解本发明建立的过程。以下试验可以表明本发明上述的检测方法的优点以及该方法的优越的可行性、准确性和可靠性。

1、系统适用性试验

在上述确定的色谱条件下，再分别用醋酸巴多昔芬原料和各有关物质的混合物来分析此色谱条件是否符合要求。由图6可见此条件下各个有关物质与主峰之间分离度符合要求，峰纯度和单点阀值均符合要求。

2、专属性

取本品适量，分别于各苛性条件下进行破坏，考察破坏产物与主成分峰的分离情况。

酸破坏：取醋酸巴多昔芬约10mg，精密称定，置10ml具塞试管中，加1.0mol/L盐酸溶液1ml，室温放置1h，用1.0mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，加入溶剂使溶解，并定容至刻度，混匀。

碱破坏样品：取醋酸巴多昔芬约10mg，精密称定，置10ml具塞试管中，加0.5mol/L氢氧化钠溶液1ml，室温放置2h，用0.5mol/L盐酸溶液中和至中性，加入溶剂使溶解，并定容至刻度，混匀。

氧化破坏样品：取醋酸巴多昔芬约10mg，精密称定，置10ml具塞试管中，加30%双氧水1ml，室温放置1h。加入溶剂使溶解，并定容至刻度，混匀。

高温破坏样品：取醋酸巴多昔芬约10mg，精密称定，置10ml具塞试管中，在60℃放置10天。加入溶剂使溶解，并定容至刻度，混匀。

光照破坏样品：取醋酸巴多昔芬约10mg，精密称定，置10ml具塞试管中，在4500lx放置10天。加入溶剂使溶解，并定容至刻度，混匀。

取各破坏条件下的样品，照有关物质的液相条件进样，记录色谱图，结果表明，本品于各破坏条件下生成的杂质峰均能与主成分峰分离良好，本品在各破坏条件下生成的杂质均不大，且杂质峰均在检测波长225nm附近有较大吸收。

3、溶液稳定性

将醋酸巴多昔芬与其各有关物质的混合物，分别于0、2、4、8、12小时进样，考察样品含量测定时溶液的稳定性，由结果可见，本溶液在12小时内稳定。

4、耐用性

由于本品的色谱条件为梯度洗脱，并规定了相应的色谱柱型号、柱温、流速、pH值等，故我们将这些条件作相应的微调，考察方法的耐用性。结果表明，该方法对不同品牌的色谱柱、柱温、流速、pH值等耐用性良好。在不同品牌色谱柱、不同柱温、流速、pH值等条件下，醋酸巴多昔芬及其有关物质保留时间无显著变化，且均能达到有效分离。

Claims

1.一种液相色谱法分离测定醋酸巴多昔芬有关物质的方法，其特征在于：方法分离测定的醋酸巴多昔芬的有关物质主要有：

，

采用如下色谱条件完成醋酸巴多昔芬及其有关物质的测定：色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：A：pH为3.0的0.02M高氯酸钠溶液；B：pH为3.0的0.02M高氯酸钠溶液-乙腈=25/75；洗脱梯度为

。

2.根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱选自品牌为Kromasil、Apollo、Merck品牌。

3.根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于，包括以下几个步骤：

（1）取醋酸巴多昔芬样品适量，分别用流动相溶解样品，配制成每1 mL含醋酸巴多昔芬及其有关物质0.1～1.5 mg的样品溶液；

（2）设置流动相流速为0.5～1.5 mL/min，检测波长为200～250 nm；柱温箱温度为10～40℃；

（3）取步骤（1）的样品溶液5～50µL，注入液相色谱仪，完成醋酸巴多昔芬及其有关物质的分离测定。

4.根据权利要求3所述的分离测定方法，步骤（2）所说的流动相流速优选1.0mL/min；检测波长优选225nm；柱温箱温度优选30℃。