CN104557764A - 3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂及制备方法和应用 - Google Patents
3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂及制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂及制备方法和应用，化合物具有如通式I的结构。本发明的化合物对于Bcl-2有较强的抑制活性，可用于制备预防或治疗因抗凋亡蛋白Bcl-2表达异常导致的相关哺乳动物疾病的药物，本发明还涉及具有通式I结构化合物的组合物的制药用途。
Description
技术领域
本发明涉及一种3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂及其制备方法和应用，属于医药技术领域。
背景技术
细胞凋亡(apoptosis)，又称程序性细胞死亡，是由内部或外部刺激引发的程序性自杀死亡过程。细胞凋亡是生物体内精确控制的细胞死亡机制。它能够有序排除体内不需要的或已受损的细胞，对胚胎发育及维持细胞稳态具有重要作用。细胞凋亡与许多人类疾病的发生密切相关，过度凋亡将引发中风、心脏衰竭、神经退行性疾病等，而抑制凋亡则与肿瘤等疾病的产生有关。研究发现，具有逃脱凋亡的能力是癌细胞的标志之一。
B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell leukemia/lymphoma-2，Bcl-2)蛋白家族是细胞凋亡内源性途径中重要的调控因子，包括Bcl-2,Bcl-xL,Bcl-w,A1和Mcl-1等抗凋亡蛋白及Bax,Bak,Bok,Bad和Bim等促凋亡蛋白，在细胞凋亡通路中起着重要的调节作用。在正常细胞中，促凋亡家族蛋白和抗凋亡家族蛋白异二聚体化，使细胞保持正常生长状态，既避免细胞过早凋亡又避免细胞因不发生凋亡而转化为肿瘤细胞。但在一些恶性肿瘤中，Bcl-2蛋白家族的抗凋亡蛋白成员过度表达，导致一般的化疗手段无法使肿瘤细胞发生凋亡，从而影响肿瘤的治疗效果，产生耐药性。因此，针对Bcl-2蛋白家族抗凋亡成员的抑制剂研究已经成为近年来抗肿瘤药物的研究热点，为今后寻找新型的、克服细胞耐药的抗肿瘤药物提供了新的方向。
已发现的Bcl-2调节剂可分为三类，分别是寡义核苷酸类，BH3模拟肽类及小分子抑制剂。其中小分子抑制剂因其较高的透过率及生物稳定性成为近年来研究的热点，特别是针对抗凋亡蛋白的小分子抑制剂不断涌现，有些已进入临床研究阶段，如ABT-263、AT-101、GXl5-070等。然而临床研究发现已有Bcl-2抑制剂存在很多不足，特别是选择性差及耐药性的产生，导致该类药物的临床应用受到很大限制。因此，发展新型有效的Bcl-2抑制剂是抗肿瘤药物研究中具有挑战性和研究价值的课题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂，本发明还提供该化合物的制备方法和应用。
本发明的技术方案如下：
一、3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂
一种3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂，是具有通式I结构的化合物，以及其立体异构体、药学上可接受的盐：
通式I中，R1是没有取代或含1-3个取代基的芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，脂肪烷基，环烷基；杂环芳基含有1-4个杂原子，所述杂原子独立地选自O、S、N或氧化的S或N；碳原子或氮原子是杂芳环结构的连接点，保持稳定的芳环；
基团或者取代基选自羟基，卤素，三氟甲氧基，乙酰基，硝基，氰基，胍基，羧基，卤C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基，C3-C8环烷基，C6-C10芳基，含有1-2个杂原子的环原子数为5-10的杂芳基，1-3个上述基团或取代基在任何可及的位置连接以产生稳定的化合物；
通式I中，X1不含或是―Ar―A―(CH2)1-3—或―Ar―A―(CH2)0-3—X3―(CH2)0-3―；
其中，Ar是芳基、杂芳基；杂环芳基含有1-4个杂原子，所述杂原子独立地选自O、S、N或氧化的S或N；碳原子或氮原子是杂芳环结构的连接点，保持稳定的芳环；
A不含或是NH、O、S；
X3是酯，酰胺，磺酰胺，脲，磺酰脲；
通式I中，R2是羟基，硝基，卤素，三氟甲氧基，乙酰基，氰基，胍基，羧基；R2在苯环A的取代位置可任意改变；
通式I中，X2不含或是X2在苯环A的取代位置可任意改变；
其中，当R1是氢且X1不含时，X2是
根据本发明优选的，通式I中，
R1是没有取代或含1-2个取代基的苯基，苯烷基，吲哚烷基，C4脂肪烷基，C6环烷基；取代基是羟基，卤素，三氟甲氧基，乙酰基，硝基，氰基，胍基，羧基，卤C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基，C3-C8环烷基，C6-C10芳基，含有1-2个杂原子的环原子数为5-10的杂芳基；
X1不含或是―Ph―A―(CH2)1-3—或―Ph―A―(CH2)0-3—X3―(CH2)0-3―；其中，A不含或是O；X3是酰胺；
R2是羟基，硝基；R2在苯环A的取代位置可任意改变；
X2不含或是X2在苯环A的取代位置是间位或对位；其中，当R1是氢且X1不含时，X2是
根据本发明，进一步优选的，上述通式I化合物是下列之一：
(Z)-4-[[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4AA)，
(E)-3-[4-[[4-[(Z)-(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯基]丙烯酸(4AB)，
(Z)-4-硝基-3-[[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4AC)，
(Z)-4-[[3-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4AD)，
(Z)-4-[2-[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4AE)，
(Z)-2-羟基-5-[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯甲酰胺基]苯甲酸(4AF)，
(E)-3-[4-[(Z)-(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯基]丙烯酸(4AG)，
(Z)-4-[[4-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4BA)，
(E)-3-[4-[[4-[(Z)-[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯基]丙烯酸(4BB)，
(Z)-4-[[3-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4BD)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4BE)，
(Z)-4-[[2-[4-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]甲基]苯甲酸(4BH)，
(Z)-4-[[4-[[3-(m-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4CA)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(m-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4CE)，
(Z)-4-[[4-[[3-(p-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4DA)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(p-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4DE)，
(Z)-4-[[4-[[3-(2,6-二甲基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4EA)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(2,6-二甲基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4EE)，
(Z)-4-[[4-[[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4FA)，
(E)-3-[4-[[4-[(Z)-[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯基]丙烯酸(4FB)，
(Z)-4-[[3-[[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4FD)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4FE)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4GA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(3-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4HA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4IA)，
(Z)-4-硝基-3-[[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4IC)，
(Z)-4-[[3-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4ID)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4IE)，
(Z)-2-羟基-5-[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯甲酰胺基]苯甲酸(4IF)，
(E)-3-[4-[(Z)-[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯基]丙烯酸(4IG)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-乙酰基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4JA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(3-三氟甲基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4KA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-氯苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4LA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-氟苄基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4MA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-溴苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4NA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(2,6-二氟苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4OA)，
(Z)-4-[[4-[(3-丁基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4PA)，
(Z)-4-[[4-[(3-环己基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4QA)，
(Z)-4-[[4-[[3-[1-羧基-2-(4-羟苯基)乙基]-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4RA)，
(Z)-4-[[4-[[3-[1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4SA)。
以上优选化合物，后面的括号内的编号是对应于下面反应路线及表1中的化合物结构的编号。
发明详述
本文中所用的术语和定义含义如下：
“芳基”是指含有环系统的芳烃，如苯基或萘基，其可选地与环烷基稠合，所述环烷基优选地具有5-7个环原子，更优选具有5-6个环原子。优选的芳基含有5-15个碳原子。
“杂芳基”是芳族杂环，可以是单环或双环基团。它们含有一个或多个，优选1-4个、更优选1-3个、甚至更优选1-2个杂原子，所述杂原子独立地选自O、S和N。杂芳基包括氧化的S或N，如亚磺酰基、磺酰基和三环氮的N氧化物。碳原子或氮原子是杂芳环结构的连接点，由此保持稳定的芳环。杂芳基的例子包括但不限于吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、氮茚基、苯并[b]噻吩基、喹唑啉基、嘌呤基、吲哚基、喹啉基、嘧啶基、吡咯基、恶唑基、噻唑基、噻吩基、异恶唑基、噻二唑基、异噻唑基、四唑基、咪唑基、三嗪基、呋喃基、苯并呋喃基和吲哚基。
“芳基烷基”是指C1-C6亚烷基连接的芳基。
“杂芳基烷基”是指C1-C6亚烷基连接的杂芳基。
“烷基”，单独地或联合地，是指衍生于烷烃的基团，含有1至20个碳原子，优选地含有1至12个碳原子(如果没有特别指明)。其为直链烷基或支链烷基，并且包括含有环烷基部分或者被环烷基部分中断的直链烷基或支链烷基。直链烷基或支链烷基在任何可及部位连接以产生稳定的化合物。其示例包括但不限于，4-(异丙基)-环己基乙基或2-甲基-环丙基戊基。在许多实施方案中，烷基是含有1至15个碳原子、1至8个碳原子、1至6个碳原子、1至4个碳原子或1至2个碳原子的直链烷基或支链烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基和类似烷基。
“环烷基”是取代或未取代的，饱和或不饱和的环状基团，其含有碳原子和/或一个或多个杂原子。该环可以是单环或稠环，桥环或螺环的环系。每个环中的环原子数是3-8个、更优选3-6个，如环丙基、环戊基、环己基、金刚烷基和类似基团。
“烷氧基”表示基团–O–烷基。
“卤素”单独地或联合地，是指所有卤素，即氯(Cl)、氟(F)、溴(Br)或碘(I)。
“药学上可接受的盐”是指通式I化合物具有疗效且无毒的盐形式。其可由任一酸性基团(如羧基)形成阴离子盐，或由任一碱性基团(如氨基)形成阳离子盐。本领域已知许多这样的盐。在任何酸性基团(如羧基)上形成的阳离子盐，或是在任何碱性基团(如氨基)上形成的阴离子盐。这些盐有许多是本领域已知的，如阳离子盐包括碱金属(如钠和钾)和碱土金属(如镁和钙)的盐以及有机盐(如铵盐)。还可通过使用相应的酸处理碱性形式的I方便地获得阴离子盐，这样的酸包括无机酸如硫酸、硝酸、磷酸等；或有机酸如乙酸、丙酸、羟基乙酸、2-羟基丙酸、2-氧代丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、2-羟基-1,2,3-丙三酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲磺酸、4-甲基苯磺酸、环己基亚磺酸、2-羟基苯甲酸、4-氨基-2-羟基苯甲酸等。这些盐是熟练技术人员熟知的，熟练的技术人员可制备本领域知识所提供的任何盐。此外，熟练技术人员可根据溶解度、稳定性、容易制剂等因素取某种盐而舍另一种盐。这些盐的测定和最优化在熟练技术人员的经验范围内。
本文所用的“立体异构体”定义了本发明化合物或其生理上的衍生物所有可能的立体异构体的形式。除非另有指示，本发明化合物的化学命名包括所有可能的立体化学形式的混合物，所属混合物包含基本结构分子的所有非对映体和对映体，以及基本纯净的本发明化合物的单个异构体形式，即其中含有低于10％，优选低于5％，特别是低于2％，最优选低于1％的其它异构体。本发明类肽化合物各种立体异构体形式均明显包含于本发明的范围内。
通式I化合物还可以其它被保护的形式或衍生物的形式存在，这些形式对本领域技术人员而言是显而易见的，均应该包含于本发明的范围内。
如上所述的取代基自身还可被一个或多个取代基取代。这样的取代基包括在C.Hansch和A.Leo,Substituent Constants for Correlation Analysis in Chemistry and Biology(1979)中列出的那些取代基。优选的取代基包括烷基，烯基，烷氧基，羟基，氧基，硝基，氨基，氨基烷基(如氨甲基等)，氰基，卤素，羧基，羰基烷氧基(如羰基乙氧基等)，硫基，芳基，环烷基，杂芳基，杂环烷基(如哌啶基，吗啉基，吡咯基等)，亚氨基，羟烷基，芳基氧基，芳基烷基及其结合。
“药物组合物”是指含有治疗上显著量的活性药剂的制备物，其以适于给予患者的形式被制备。因此，所述制备物不含有这样量的任何一种组分或多种组分，即，适当谨慎的医疗实施者发现所述制备物不适于给予普通对象。在许多情况下，这种药物组合物是无菌制备物。
室温是指实验操作所处的环境温度，控制在10～30℃范围内。
二、3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂的制备方法
一种3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂的制备方法，包括由取代的胺合成关键中间体3-取代的饶丹宁2A-2S，再该中间体与化合物3A-3H经羟醛缩合反应得到化合物4A-4S(通式I)。
合成路线如下：
其中，R1、R2、X1、X2的定义同上通式Ⅰ所述；
试剂和条件：(a)①二硫化碳，三乙胺，乙醇；②氯乙酸钠，水；③6摩尔/升盐酸，85℃；(b)双(羧甲基)三硫代碳酸盐，碳酸钾，水，回流；(c)醋酸铵，冰醋酸，回流。
合成路线中目标化合物的结构式如下表1所示：
表1 目标化合物的结构式
注：i代表ii代表iii代表iv代表v代表
所述化合物的具体操作步骤将在实施例中将加以详细说明。
本领域技术人员可以对上述步骤进行变动以提高收率，他们可据本领域的基本知识确定合成的路线，如选择反应物，溶剂和温度，可以通过使用各种常规保护基以避免副反应的发生从而提高收率。这些常规的保护方法可参见例如T.Greene,Protecting Groups inOrganic Synthesis.
三、3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂的应用
本发明还提供了3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂在制备预防或治疗因抗凋亡蛋白Bcl-2表达异常导致的相关哺乳动物疾病药物中的应用。所述的与抗凋亡蛋白Bcl-2异常表达相关的哺乳动物疾病包括癌症、心肌梗塞、胎膜早破、神经退行性疾病、自身免疫性疾病和白血病等。
此外，本发明还包括一种适于口服给予哺乳动物的药物组合物，包含上述通式I的任一化合物，和药学上可接受载体，任选包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
此外，本发明还包括一种适于胃肠外给予哺乳动物的药物组合物，包含上述通式I的任一化合物，和药学上可接受载体，任选包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
进行抑制酶活性和细胞活性两方面测试评价化合物在体外的生物活性。
荧光标记分子5-FAM标记的Bid-BH3多肽，能够与Bcl-2家族蛋白(Bcl-xL，Bcl-2和Mcl-1)发生特异性结合，其解离常数(Kd)在30-60nM左右，二者结合的结果会产生较高的极化值。如果待测化合物也能够与这些蛋白特异性结合，则会与荧光标记多肽发生竞争，抑制其与蛋白的结合，从而导致极化值降低。将加入待测化合物产生的极化值与阴性对照和阳性对照比较，可计算待测化合物的IC50值，进而导出其竞争性抑制常数Ki。
化合物的细胞活性的测试使用MTT检测方法，肿瘤细胞悬液(人乳腺癌细胞株MDA-MB231，白血病细胞株K562，前列腺癌细胞株PC-3)分别接种于96孔板，每孔中加入含不同浓度化合物的培养基，经孵育后，用MTT染色，继续孵育后，于酶标仪上在570nm处测定每孔的吸光度OD值，计算出细胞生长抑制率，从而确定化合物的活性。
体外抑酶实验表明，本发明中的部分化合物对于Bcl-2有较强的抑制活性，其中，4EA，4FB，4NA及4SA与Bcl-2的亲和力常数Ki小于1μM；同时，体外抗肿瘤细胞增殖的试验中，结果表明4EA，4FB和4NA对于实验的肿瘤细胞均有抑制作用，表明3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂有很大的开发前景，并可用于指导发现新型高效抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。实施例中试剂浓度均为质量百分比，混合溶剂的比例均为体积比。
实施例1.(Z)-4-[[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4AA)的合成
3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮(2A)的合成
冰浴条件下，苯胺(1A，0.93g，10mmol)和三乙胺(5.05g,50mmol)中加入2mL乙醇，搅拌10分钟，滴加二硫化碳(1.52g,20mmol)，体系有淡黄色固体析出，过滤，乙醚洗涤。所的固体加入氯乙酸钠(1.28g,11mmol)的5mL水溶液中，搅拌至固体溶解，加入盐酸(6摩尔/升，14mL)，85℃搅拌0.5小时，冷却，过滤，得淡黄色固体，经氯仿重结晶得到淡黄色固体(1.60g，80％)。M.p.:195-197℃。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.54(td,J＝7.2Hz,1.8Hz,2H),7.50(tt,J＝7.2Hz,1.8Hz,1H),7.20(dt,J＝7.2Hz,1.8Hz,2H),4.20(s,2H).
化合物2B-2H，2J-2S参照2A的方法进行合成。
(Z)-4-[[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4AA)的合成
2A(0.21g,1mmol)和4-[(4-醛基苯氧基)甲基]苯甲酸(3A,0.26g,1mmol)的混合物中加入4mL冰醋酸，加热溶解，加入醋酸铵(0.31g,4mmol)，回流0.5小时，析出黄色沉淀，过滤，经冰醋酸及无水乙醇洗涤得黄色固体(0.30g，67％)。M.p.:>250℃。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,1H),7.98(d,J＝7.8Hz,2H),7.82(s,1H),7.68(d,J＝7.8Hz,2H),7.59(d,J＝7.8Hz,2H),7.56(t,J＝7.8Hz,2H),7.52(t,J＝7.8Hz,2H),7.41(d,J＝7.8Hz,2H),7.24(d,J＝7.8Hz,2H),5.32(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H17NO4S2[M+H]+448.0672,found 448.0630.
实施例2.(E)-3-[4-[[4-[(Z)-(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯基]丙烯酸(4AB)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率62％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.42(s,1H),7.82(s,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,2H),7.68(d,J＝9.0Hz,2H),7.55(m,6H),7.41(m,2H),7.23(d,J＝9.0Hz,2H),6.55(d,J＝16.2Hz,1H),5.27(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C26H19NO4S2[M-H]-472.0683,found 472.0663.
实施例3.(Z)-4-硝基-3-[[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4AC)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率84％；m.p.229-230℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.68(s,1H),8.31(d,J＝1.6Hz,1H),8.25(d,J＝8.4Hz,1H),8.14(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),7.83(s,1H),7.70(d,J＝8.8Hz,2H),7.58-7.52(m,3H),7.43-7.41(m,2H),7.26(d,J＝8.8Hz,2H),5.62(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H16N2O6S2[M+H]+493.0523,found 493.0531.
实施例4.(Z)-4-[[3-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4AD)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率74％；m.p.240-242℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.81(s,1H),7.54(m,6H),7.42(m,2H),7.31(m,1H),7.27(s,1H),7.22(dd,J＝8.1Hz,2.1Hz,1H),5.31(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcdfor C24H17NO4S2[M+H]+448.0672,found 448.0678.
实施例5.(Z)-4-[2-[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4AE)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率87％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.74(s,1H),10.51(s,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,2H),7.82(s,1H),7.76(d,J＝8.7Hz,2H),7.70(d,J＝9.0Hz,2H),7.60-7.51(m,3H),7.43-7.40(m,2H),7.21(d,J＝9.0Hz,2H),4.90(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C25H18N2O5S2[M+H]+491.0730,found 491.0733.
实施例6.(Z)-2-羟基-5-[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯甲酰胺基]苯甲酸(4AF)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率65％；m.p.>250℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.01(s,1H),11.13(s,1H),10.40(s,1H),8.30(d,J＝2.8Hz,1H),8.12(d,J＝8.4Hz,2H),7.91(s,1H),7.89(dd,J＝8.8Hz,2.8Hz,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,2H),7.58-7.51(m,3H),7.45-7.43(m,2H),6.99(d,J＝8.8Hz,1H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H16N2O5S2[M+H]+477.0573,found 477.0577.
实施例7.(E)-3-[4-[(Z)-(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯基]丙烯酸(4AG)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率73％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.54(s,1H),8.44(d,J＝9.0Hz,2H),7.90(m,3H),7.80(d,J＝9.0Hz,2H),7.74(d,J＝7.5Hz,2H),7.65(d,J＝15.9Hz,1H),6.68(d,J＝15.9Hz,1H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd forC19H13NO3S2[M-H]-366.0264,found 366.0263.
实施例8.(Z)-4-[[4-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4BA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率59％；m.p.>250℃；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.55(s,1H),7.98(d,J＝7.8Hz,2H),7.85(s,1H),7.70(d,J＝7.8Hz,2H),7.59(d,J＝7.8Hz,2H),7.43(m,2H),7.38(m,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,1H),7.24(d,J＝7.8Hz,2H),5.33(s,2H),2.06(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C25H19NO4S2[M+H]+462.0828,found462.0829.
实施例9.(E)-3-[4-[[4-[(Z)-[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯基]丙烯酸(4BB)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率82％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.39(s,1H),7.85(s,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,2H),7.69(d,J＝9.0Hz,2H),7.60(d,J＝16.2Hz,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,2H),7.39(m,4H),7.23(d,J＝9.0Hz,2H),6.55(d,J＝16.2Hz,1H),5.27(s,2H),2.06(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C27H21NO4S2[M-H]-486.0839,found486.0801.
实施例10.(Z)-4-[[3-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4BD)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率67％；m.p.201-203℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.97(s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.85(s,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.53(t,J＝8.1Hz,1H),7.39(m,6H),7.23(m,1H),5.31(s,2H),2.07(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcdfor C25H19NO4S2[M+H]+462.0828,found 462.0824.
实施例11.(Z)-4-[2-[4-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4BE)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率53％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.34(s,1H),10.51(s,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,2H),7.86(s,1H),7.78-7.70(m,4H),7.44-7.33(m,4H),7.21(d,J＝8.7Hz,2H),4.90(s,2H),2.06(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd forC26H20N2O5S2[M+H]+505.0886,found 505.0887.
实施例12.(Z)-4-[[2-[4-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]甲基]苯甲酸(4BH)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率76％；m.p.245-247℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.87(s,1H),8.82(t,J＝6.0Hz,1H),7.89(d,J＝8.4Hz,2H),7.86(s,1H),7.71(d,J＝9.0Hz,2H),7.45-7.35(m,6H),7.19(d,J＝9.0Hz,2H),4.72(s,2H),4.43(d,J＝4.0Hz,2H),2.07(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C27H22N2O5S2[M+H]+519.1043,found 519.1044.
实施例13.(Z)-4-[[4-[[3-(m-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4CA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率69％；m.p.>250℃；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.01(s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.81(s,1H),7.68(d,J＝9.0Hz,2H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,1H),7.33(d,J＝7.8Hz,2H),7.22(m,4H),5.33(s,2H),2.37(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C25H19NO4S2[M+H]+462.0828,found 462.0827.
实施例14.(Z)-4-[2-[4-[[3-(m-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4CE)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率66％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,1H),7.91(d,J＝8.7Hz,2H),7.81(s,1H),7.75(d,J＝8.7Hz,2H),7.70(d,J＝8.7Hz,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,1H),7.33(d,J＝7.8Hz,1H),7.22-7.19(m,4H),4.90(s,2H),2.37(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C26H20N2O5S2[M+H]+505.0886,found 505.0886.
实施例15.(Z)-4-[[4-[[3-(p-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4DA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率57％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.89(s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.81(s,1H),7.68(d,J＝8.7Hz,2H),7.59(d,J＝8.1Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.26(m,4H),5.33(s,2H),2.39(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/zcalcd for C25H19NO4S2[M+H]+462.0828,found 462.0827.
实施例16.(Z)-4-[2-[4-[[3-(p-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4DE)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率60％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,2H),7.81(s,1H),7.75(d,J＝8.7Hz,2H),7.69(d,J＝9.0Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.27(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(d,J＝9.0Hz,2H),4.89(s,2H),2.39(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C26H20N2O5S2[M+H]+505.0886,found 505.0876.
实施例17.(Z)-4-[[4-[[3-(2,6-二甲基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4EA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率64％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.98(s,1H),7.98(d,J＝8.1Hz,2H),7.91(s,1H),7.71(d,J＝9.0Hz,2H),7.60(d,J＝8.1Hz,2H),7.37-7.32(m,1H),7.27-7.24(m,4H),5.33(s,2H),2.03(s,6H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C26H21NO4S2[M+H]+476.0985,found 476.0985.
实施例18.(Z)-4-[2-[4-[[3-(2,6-二甲基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4EE)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率71％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.74(s,1H),10.51(s,1H),7.94-7.91(m,3H),7.75(m,4H),7.37-7.32(m,1H),7.28-7.20(m,4H),4.90(s,2H),2.03(s,6H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C27H22N2O5S2[M+H]+519.1043,found 519.1010.
实施例19.(Z)-4-[[4-[[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4FA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率78％；m.p.>250℃；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.83(s,1H),7.68(d,J＝9.0Hz,2H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.52(m,1H),7.36(dd,J＝7.8Hz,1.8Hz,1H),7.24(d,J＝9.0Hz,3H),7.11(m,1H),5.33(s,2H),3.74(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C25H19NO5S2[M+H]+478.0777,found478.0784.
实施例20.(E)-3-[4-[[4-[(Z)-[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯基]丙烯酸(4FB)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率68％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.37(s,1H),7.82(s,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,2H),7.68(d,J＝9.0Hz,2H),7.60(d,J＝16.2Hz,1H),7.51(m,3H),7.36(dd,J＝7.8Hz,1.8Hz,1H),7.24(m,3H),7.11(m,1H),6.55(d,J＝16.2Hz,1H),5.27(s,2H),3.75(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C27H21NO5S2[M-H]-502.0788,found 502.0748.
实施例21.(Z)-4-[[3-[[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4FD)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率50％；m.p.213-215℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.97(s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.83(s,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.52(td,J＝8.1Hz,1.8Hz,2H),7.37(dd,J＝7.8Hz,1.8Hz,1H),7.26(m,4H),7.11(td,J＝7.8Hz,0.9Hz,1H),5.31(s,2H),3.76(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C25H19NO5S2[M+H]+478.0777,found 478.0774.
实施例22.(Z)-4-[2-[4-[[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4FE)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率53％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.39(s,1H),10.50(s,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,2H),7.83(s,1H),7.76(d,J＝9.0Hz,2H),7.70(d,J＝9.0Hz,2H),7.52(m,1H),7.36(dd,J＝7.5Hz,1,8Hz,1H),7.22(m,3H),7.11(td,J＝7.5Hz,0.9Hz,1H),4.90(s,2H),3.75(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C26H20N2O6S2[M+H]+521.0836,found 521.0813.
实施例23.(Z)-4-[[4-[[3-(4-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4GA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率76％；m.p.>250℃；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.80(s,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.32(d,J＝9.0Hz,2H),7.24(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(d,J＝9.0Hz,2H),5.32(s,2H),3.82(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C25H19NO5S2[M+H]+478.0777,found 478.0705.
实施例24.(Z)-4-[[4-[[3-(3-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4HA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率69％；m.p.>250℃；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.85(s,1H),8.48(s,1H),8.39(dt,J＝7.8Hz,1.2Hz,1H),7.99(d,J＝7.8Hz,2H),7.96(d,J＝7.8Hz,1H),7.88(m,1H),7.85(s,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝7.8Hz,2H),7.25(d,J＝8.4Hz,2H),5.33(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H16N2O6S2[M-H]-491.0377,found 491.0370.
实施例25.(Z)-4-[[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4IA)的合成
3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮(2I)的合成
对硝基苯胺(1I，1.38g,10mmol)，双(羧甲基)三硫代碳酸盐(2.26g,10mmol)和碳酸钾(6.91g,5mmol)的混合物中加入50mL水，回流12小时，冷却至室温，过滤，所得滤饼经氯仿重结晶得淡黄色固体(1.20g，47％)。M.p.:220℃(分解点)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.40(m,2H),7.64(m,2H),4.40(s,2H).MS(ESI)m/z:253.1[M-H]-.
(Z)-4-[[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4IA)的合成
制备方法如实施例1。产率45％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.51(s,1H),8.43(d,J＝9.0Hz,2H),7.99(d,J＝8.4Hz,2H),7.85(s,1H),7.79(d,J＝9.0Hz,2H),7.70(d,J＝9.0Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(d,J＝9.0Hz,2H),5.33(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/zcalcd for C24H16N2O6S2[M+H]+491.0377,found 491.0368.
实施例26.(Z)-4-硝基-3-[[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4IC)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例26。产率61％；m.p.>250℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.78(s,1H),8.43(d,J＝8.8Hz,2H),8.30(d,J＝1.6Hz,1H),8.23(d,J＝8.4Hz,1H),8.12(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),7.86(s,1H),7.80(d,J＝8.8Hz,2H),7.71(d,J＝8.8Hz,2H),7.26(d,J＝8.8Hz,2H),5.62(s,2H).1HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H15N3O8S2[M-H]-536.0228,found 536.0209.
实施例27.(Z)-4-[[3-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4ID)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例26。产率67％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.98(s,1H),8.43(d,J＝9.0Hz,2H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.84(s,1H),7.79(d,J＝9.0Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.53(t,J＝8.1Hz,1H),7.30(m,2H),7.23(dd,J＝8.1Hz,1,8Hz,1H),5.31(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H16N2O6S2[M-H]-491.0377,found491.0374.
实施例28.(Z)-4-[2-[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4IE)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例26。产率80％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.72(s,1H),10.48(s,1H),8.42(d,J＝9.0Hz,2H),7.92(d,J＝8.7Hz,2H),7.85(s,1H),7.82-7.75(m,4H),7.71(d,J＝9.0Hz,2H),7.11(d,J＝9.0Hz,2H),4.90(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/zcalcd for C25H17N3O7S2[M-H]-534.0435,found 534.0431.
实施例29.(Z)-2-羟基-5-[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯甲酰胺基]苯甲酸(4IF)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例26。产率72％；m.p.>250℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),8.46(d,J＝9.2Hz,2H),8.30(d,J＝2.8Hz,1H),8.12(d,J＝8.4Hz,2H),7.95(s,1H),7.89(dd,J＝8.8Hz,2.8Hz,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,2H),7.81(d,J＝9.2Hz,2H),6.98(d,J＝8.8Hz,1H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H15N3O7S2[M-H]-520.0279,found 520.0269.
实施例30.(E)-3-[4-[(Z)-[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯基]丙烯酸(4IG)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例26。产率77％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.54(s,1H),8.44(d,J＝9.0Hz,2H),7.90(m,3H),7.80(d,J＝9.0Hz,2H),7.74(d,J＝7.5Hz,2H),7.65(d,J＝15.9Hz,1H),6.68(d,J＝15.9Hz,1H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd forC19H12N2O5S2[M-H]-411.0115,found 411.0163.
实施例31.(Z)-4-[[4-[[3-(4-乙酰基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4JA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率59％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.00(s,1H),8.13(d,J＝8.4Hz,2H),7.98(d,J＝8.1Hz,2H),7.84(s,1H),7.69(d,J＝9.0Hz,2H),7.62-7.58(m,4H),7.25(d,J＝9.0Hz,2H),5.33(s,2H),2.65(s,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C26H19NO5S2[M+H]+490.0777,found 490.0726.
实施例32.(Z)-4-[[4-[[3-(3-三氟甲基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4KA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率65％；m.p.>250℃；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),7.99(d,J＝8.4Hz,2H),7.97-7.90(m,2H),7.85-7.77(m,3H),7.70(d,J＝8.7Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(d,J＝8.7Hz,2H),5.33(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/zcalcd for C25H16F3NO4S2[M+H]+516.0546,found 516.0527.
实施例33.(Z)-4-[[4-[[3-(4-氯苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4LA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率78％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.83(s,1H),7.69(d,J＝9.0Hz,2H),7.64(d,J＝8.7Hz,2H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.7Hz,2H),7.24(d,J＝9.0Hz,2H),5.33(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H16ClNO4S2[M+H]+482.0282,found 482.0282.
实施例34.(Z)-4-[[4-[[3-(4-氟苄基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4MA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率52％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.97(s,1H),7.97(d,J＝8.1Hz,2H),7.83(s,1H),7.65(d,J＝9.0Hz,2H),7.58(d,J＝8.1Hz,2H),7.39(m,2H),7.13-7.24(m,4H),5.31(s,2H),5.22(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/zcalcd for C25H18FNO4S2[M-H]-478.0589,found 478.0568.
实施例35.(Z)-4-[[4-[[3-(4-溴苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4NA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率68％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.82(s,1H),7.78(d,J＝8.7Hz,2H),7.68(d,J＝8.7Hz,2H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝8.7Hz,2H),7.24(d,J＝8.7Hz,2H),5.32(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H16BrNO4S2[M+H]+525.9777,found 525.9836.
实施例36.(Z)-4-[[4-[[3-(2,6-二氟苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4OA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率76％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.00(s,1H),7.98(s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(m,3H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.46(m,2H),7.26(d,J＝9.0Hz,2H),5.34(s,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H15F2NO4S2[M+H]+484.0483,found 484.0217.
实施例37.(Z)-4-[[4-[(3-丁基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4PA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率40％；m.p.238-240℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.00(s,1H),7.97(d,J＝8.4Hz,2H),7.79(s,1H),7.63(d,J＝9.2Hz,2H),7.58(d,J＝8.4Hz,2H),7.22(d,J＝9.2Hz,2H),5.31(s,2H),4.03(t,J＝7.6Hz,2H),1.66-1.58(m,2H),1.36-1.27(m,2H),0.90(t,J＝7.6Hz,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C22H21NO4S2[M-H]-426.0839,found 426.0804.
实施例38.(Z)-4-[[4-[(3-环己基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4QA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率56％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.97(s,1H),7.97(d,J＝8.4Hz,2H),7.69(s,1H),7.62-7.56(m,4H),7.21(d,J＝9.0Hz,2H),5.30(s,2H),4.90(t,J＝12.0Hz,1H),2.38-2.26(m,2H),1.86-1.82(m,2H),1.69-1.65(m,3H),1.37-1.15(m,3H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C24H23NO4S2[M-H]-452.0996,found452.1100.
实施例39.(Z)-4-[[4-[[3-[1-羧基-2-(4-羟苯基)乙基]-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4RA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率72％；m.p.>250℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.94(d,J＝8.4Hz,2H),7.65(s,1H),7.58(d,J＝9.0Hz,2H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.19(d,J＝9.0Hz,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,2H),6.54(d,J＝8.4Hz,2H),5.49(s,1H),5.27(s,2H),3.43(m,2H).HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C27H21NO7S2[M+H]+536.0832,found 536.0829.
实施例40.(Z)-4-[[4-[[3-[1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4SA)的合成
中间体和目标化合物制备方法如实施例1。产率57％；m.p.207-209℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.07(s,2H),10.77(s,1H),7.97(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(s,1H),7.60-7.56(m,4H),7.48(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(d,J＝8.1Hz,1H),7.19(d,J＝8.4Hz,2H),7.04(m,1H),7.00(m,1H),6.90(m,1H),5.85(s,1H),5.30(s,2H),3.76(m,1H),3.61(m,1H).HRMS(AP-ESI)m/z calcdfor C29H22N2O6S2[M+H]+559.0992,found 559.0993.
目标化合物活性评价
实验例1.目标化合物对抗凋亡蛋白Bcl-2抑制试验(体外)
1.[材料]
目标化合物和阳性对照ABT-263的储备液；N端用荧光标记物5-FAM进行了荧光标记的Bid-BH3多肽；磷酸盐缓冲液(pH＝7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以及氯化钾)；校正溶液(1nM fluorescein，10mM NaOH)；黑色384孔板；TECAN Genios Pro型多功能酶标仪。
2.[方法]
(1)在测试缓冲液中加入靶蛋白和待测小分子化合物，混匀后室温避光孵育30min。再加入荧光标记的Bid-BH3多肽，使各溶液的总体积均为200μL，混匀后室温避光孵育20min。
(2)将上述溶液及校正溶液各取60μL转移至黑色384孔板中(平行三组)，立即在酶标仪上进行荧光偏振的检测，以485nm为激发波长，535nm为发射波长，将校正溶液的荧光偏振值定为20mP。
(3)在7个不同浓度下(1nM,10nM,100nM,1μM,10μM,50μM,100μM)进行完整结合曲线的测定。每个化合物均在同一块板上做3个复孔的平行测定，极化值测定结果取平均值。根据阴性对照、阳性对照以及受测化合物极化值的测定结果推算抑制率。测定中通常采用的靶蛋白浓度为300～500nM，荧光标记多肽采用5-FAM-Bid-BH3多肽，阳性化合物ABT-263。用GraphPad Prism软件处理数据和做图，得出该化合物的IC50值。
根据测量中所使用的蛋白总浓度、荧光多肽的总浓度、蛋白-多肽复合物的解离常数以及检测化合物的IC50值，计算得出检测化合物的竞争性抑制常数Ki
实验结果见表2。
表2.目标化合物对Bcl-2体外抑制实验结果
a表中数值为三次试验结果的平均值
从表中可以看出，当R1是邻位取代或对位溴代的苯基及烷基时，对Bcl-2有显著抑制作用，如果R1是间位或对位取代的苯基则大多没有明显的抑酶活性，例4B,4E,4F,4N及4P-4S系列活性显著优于其他系列。并且，X1是间位或对位取代的亚甲氧基苯基时，化合物的活性得到明显提高。尤其是化合物4EA，4FB，4NA及4SA与Bcl-2的亲和力常数Ki小于1μM，对于进一步开发活性更高的Bcl-2抑制剂有很重要的指导意义。
实验例2.目标化合物抑制细胞增殖的活性试验(体外)
选取酶活性较好的化合物进行体外抑制癌细胞增殖的活性试验，实施例中试剂浓度均为质量百分比，混合溶剂或气体的比例均为体积比。结果见表3。
术语说明：
MDA-MB-231：人乳腺癌细胞株，K562：白血病细胞株，PC-3：前列腺癌细胞株。
IC50：半数抑制浓度。
1.[材料]PC-3，MDA-MB-231和K562细胞株，四甲基偶氮唑蓝MTT，10％胎牛血清，96孔板
2.[方法]
细胞培养肿瘤细胞株采用常规培养。实验时均用对数生长期细胞。
细胞生长检测(MTT法)将肿瘤细胞悬液调整至4×104/mL(悬浮细胞调整至6×104/mL)，分别接种于96孔板(100μL/孔)，4000个细胞/孔(悬浮细胞6000个细胞/孔)。铺板8h后，每孔中加入100μL含不同浓度化合物的培养基，每个浓度设三个复孔，不加细胞的孔读数时作空白，加细胞不加化合物的孔作化合物空白孔，醋酸棉酚作化合物阳性对照。于37℃，5％CO2中孵育48h，每孔加入10μL 0.5％的MTT染色液，继续孵育。4h后，2000rpm，离心20min，然后抛弃板孔中培养基，每孔加入150μL DMSO，37℃恒温震摇5-10min。酶标仪上于570nm处测定每孔的吸光度OD值，细胞生长抑制率按下式计算：
表3 部分化合物抗肿瘤细胞增殖实验结果
a表中数值为三次试验的平均值，“±”后的数值表示标准偏差
对酶活性较好的化合物进行MDA-MB-231、K562和PC-3三株肿瘤细胞的体外抗增殖活性实验，结果表明4EA，4FB和4NA对于实验的肿瘤细胞均有抑制作用，且对MDA-MB-231和PC-3细胞株的抑制活性优于K562细胞株，表明3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂具有良好的开发前景，可进行深入的活性研究，开发出更有活性的化合物用于制备预防和治疗因抗凋亡蛋白Bcl-2表达异常导致的相关哺乳动物疾病的药物。
Claims (7)
1.一种3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂，其特征在于是具有通式Ⅰ结构的化合物，以及其立体异构体、药学上可接受的盐，
通式I中，R1是没有取代或含1-3个取代基的芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，脂肪烷基，环烷基；杂环芳基含有1-4个杂原子，所述杂原子独立地选自O、S、N或氧化的S或N；碳原子或氮原子是杂芳环结构的连接点，保持稳定的芳环；
基团或者取代基选自羟基，卤素，三氟甲氧基，乙酰基，硝基，氰基，胍基，羧基，卤C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基，C3-C8环烷基，C6-C10芳基，含有1-2个杂原子的环原子数为5-10的杂芳基，1-3个上述基团或取代基在任何可及的位置连接以产生稳定的化合物；
通式I中，X1不含或是―Ar―A―(CH2)1-3—或―Ar―A―(CH2)0-3—X3―(CH2)0-3―；
其中，Ar是芳基、杂芳基；杂环芳基含有1-4个杂原子，所述杂原子独立地选自O、S、N或氧化的S或N；碳原子或氮原子是杂芳环结构的连接点，保持稳定的芳环；
A不含或是NH、O、S；
X3是酯，酰胺，磺酰胺，脲，磺酰脲；
通式I中，R2是羟基，硝基，卤素，三氟甲氧基，乙酰基，氰基，胍基，羧基；R2在苯环A的取代位置可任意改变；
通式I中，X2不含或是X2在苯环A的取代位置可任意改变；
其中，当R1是氢且X1不含时，X2是
2.如权利要求1所述的取3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂，其特征在于，通式Ⅰ中，
R1是没有取代或含1-2个取代基的苯基，苯烷基，吲哚烷基，C4脂肪烷基，C6环烷基；取代基是羟基，卤素，三氟甲氧基，乙酰基，硝基，氰基，胍基，羧基，卤C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基，C3-C8环烷基，C6-C10芳基，含有1-2个杂原子的环原子数为5-10的杂芳基；
X1不含或是―Ph―A―(CH2)1-3—或―Ph―A―(CH2)0-3—X3―(CH2)0-3―；其中，A不含或是O；X3是酰胺；
R2是羟基，硝基；R2在苯环A的取代位置可任意改变；
X2不含或是X2在苯环A的取代位置是间位或对位；其中，当R1是氢且X1不含时，X2是
3.如权利要求1或2所述的3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂，其特征在于，是下述化合物之一：
(Z)-4-[[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4AA)，
(E)-3-[4-[[4-[(Z)-(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯基]丙烯酸(4AB)，
(Z)-4-硝基-3-[[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4AC)，
(Z)-4-[[3-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4AD)，
(Z)-4-[2-[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4AE)，
(Z)-2-羟基-5-[4-[(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯甲酰胺基]苯甲酸(4AF)，
(E)-3-[4-[(Z)-(3-苯基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯基]丙烯酸(4AG)，
(Z)-4-[[4-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4BA)，
(E)-3-[4-[[4-[(Z)-[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯基]丙烯酸(4BB)，
(Z)-4-[[3-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4BD)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4BE)，
(Z)-4-[[2-[4-[[3-(o-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]甲基]苯甲酸(4BH)，
(Z)-4-[[4-[[3-(m-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4CA)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(m-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4CE)，
(Z)-4-[[4-[[3-(p-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4DA)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(p-甲苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4DE)，
(Z)-4-[[4-[[3-(2,6-二甲基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4EA)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(2,6-二甲基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4EE)，
(Z)-4-[[4-[[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4FA)，
(E)-3-[4-[[4-[(Z)-[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯基]丙烯酸(4FB)，
(Z)-4-[[3-[[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4FD)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(2-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4FE)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-甲氧基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4GA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(3-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4HA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4IA)，
(Z)-4-硝基-3-[[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4IC)，
(Z)-4-[[3-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4ID)，
(Z)-4-[2-[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]乙酰胺基]苯甲酸(4IE)，
(Z)-2-羟基-5-[4-[[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯甲酰胺基]苯甲酸(4IF)，
(E)-3-[4-[(Z)-[3-(4-硝基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯基]丙烯酸(4IG)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-乙酰基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4JA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(3-三氟甲基苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4KA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-氯苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4LA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-氟苄基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4MA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(4-溴苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4NA)，
(Z)-4-[[4-[[3-(2,6-二氟苯基)-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4OA)，3 -->
(Z)-4-[[4-[(3-丁基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4PA)，
(Z)-4-[[4-[(3-环己基-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基)甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4QA)，
(Z)-4-[[4-[[3-[1-羧基-2-(4-羟苯基)乙基]-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4RA)，
(Z)-4-[[4-[[3-[1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-硫代-4-噻唑烷二酮-5-亚基]甲基]苯氧基]甲基]苯甲酸(4SA)。
4.如权利要求1或2所述的3,5-二取代绕丹宁类抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：
由取代的胺合成关键中间体3-取代的饶丹宁2A-2S，再该中间体与化合物3A-3H经羟醛缩合反应得到通式I化合物；
合成路线如下：
其中，R1、R2、X1、X2的定义同上通式Ⅰ所述；
试剂和条件：(a)①二硫化碳，三乙胺，乙醇；②氯乙酸钠，水；③6摩尔/升盐酸，85℃；(b)双(羧甲基)三硫代碳酸盐，碳酸钾，水，回流；(c)醋酸铵，冰醋酸，回流。
5.权利要求1-3任一所述的化合物在制备预防或治疗因抗凋亡蛋白Bcl-2表达异常导致的相关哺乳动物疾病药物中的应用；所述的与抗凋亡蛋白Bcl-2活性异常表达相关的哺乳动物疾病包括癌症、心肌梗塞、胎膜早破、神经退行性疾病、自身免疫性疾病和白血病。
6.一种适于口服给予哺乳动物的药物组合物，包含权利要求1-3任一所述的化合物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
7.一种适于胃肠外给予哺乳动物的药物组合物，包含权利要求1-3任一所述的化合物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
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