CN104546967B - 复方蟾酥注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于兽药领域，具体涉及一种复方蟾酥注射液及其制备方法，主要用于治疗畜禽因病毒、细菌、支原体感染引起的疾病。本发明复方蟾酥注射液由以下重量百分比的原料制成：蟾酥1.0～1.3％、复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液8～12%、γ‑羟基丁酸钠1.4～1.6%、聚山梨酯‑80 0.3～0.6%、氯化钠0.5～1.0%、丙二醇0.8～1.2%、无水亚硫酸钠0.15～0.25%、苯甲醇0.8～1.2%、乙二胺四乙酸二钠0.4～0.7％，余量为水；可作为核酸类抗病毒和增强免疫力双重功效的特效药物制剂，市场需求量极大，安全无残留，社会效益可观；本发明制备方法简化了工艺，确保了用法用量和疗效。

Description

复方蟾酥注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于兽药领域，具体涉及一种复方蟾酥注射液及其制备方法，主要用于治疗畜禽因病毒、细菌、支原体感染引起的疾病。

背景技术

根据《兽药管理条例》的规定，国家鼓励研制新兽药，保障食品安全，降低和消除药物残留对人类健康的危害，坚持兽药生产企业高起点、高技术、高质量的发展方向。但是，目前兽药生产领域存在产品安全性低、制备工艺简单、科技含量低等现实情况，大量企业在低水平竞争。因此，逐步淘汰生产工艺落后及高耗能、高污染的兽药产品，提高产品科技含量和附加值，积极发展高效、低污染和低残留的兽药产品，提高兽药行业自主创新能力，是我国推动兽药行业的发展方向。

此外，自2006年起，农业部即下发文件全面禁止金刚烷胺、病毒唑等抗病毒类西药应用于兽药，造成了兽药中可以使用的抗病毒药物缺失。因此，目前市场也亟待一种新型安全、高效抗病毒兽药的出现。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种复方蟾酥注射液，可以作为核酸类抗病毒和增强免疫力双重功效的特效药物制剂，市场需求量极大，安全无残留，社会效益可观；本发明还提供了一种该复方蟾酥注射液的制备方法，简化了工艺，确保了用法用量和疗效。

本发明通过以下技术方案实现：

设计一种复方蟾酥注射液，由以下重量百分比的原料制成：蟾酥1.0～1.3％、复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液8～12%、γ-羟基丁酸钠1.4～1.6%、聚山梨酯-80 0.3～0.6%、氯化钠0.5～1.0%、丙二醇0.8～1.2%、无水亚硫酸钠0.15～0.25%、苯甲醇0.8～1.2%、乙二胺四乙酸二钠0.4～0.7％，余量为水。

对于上述的复方蟾酥注射液，由以下重量百分比的原料制成：蟾酥1.1％，复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液10%、γ-羟基丁酸钠1.5%、聚山梨酯-80 0.5%、氯化钠0.8%、丙二醇1%、无水亚硫酸钠0.2%、苯甲醇1%、乙二胺四乙酸二钠0.5％，余量为水。

对于上述的复方蟾酥注射液，所述蟾酥为干品。

对于上述的复方蟾酥注射液，所述水为注射用水。

对于上述的复方蟾酥注射液，所述复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液的制备方法为：取柴胡2500g、细辛250g，切段后混匀，段长1～2cm，加入4000 mL稀盐酸溶液(pH=1.0)，在40～50℃下浸泡5小时后，再加入16000～20000mL水进行蒸馏，收集初馏液5000～6000mL；再对初馏液进行重蒸馏，收集重蒸馏液900~1000mL。

本发明还设计了一种上述复方蟾酥注射液的制备方法，包括以下步骤：

(1)备料：按所述比例配备原料；

(2)将蟾酥研成200目细粉，再加入蟾酥重量80～100倍的乙醇溶液，并再次研匀，在0℃～5℃冷藏并同时振摇40～50小时后，静置分层，提取上清液，并过滤余液，对所得滤渣重复进行本步骤上述醇沉-萃取操作2～3次，合并各次提取液，并加入适量注射用水，搅拌均匀使完全溶解；

(3)将复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液、聚山梨酯-80、丙二醇混合，并加入适量注射用水搅拌均匀，使完全溶解；

(4)合并步骤（1）、（2）所得溶液后，加入氯化钠、无水亚硫酸钠、γ-羟基丁酸钠、苯甲醇、乙二胺四乙酸二钠，再添加适量注射用水搅拌均匀，使其完全溶解；然后，加入溶液0.05wt%的活性炭，充分搅拌，0℃～5℃低温冷藏同时振摇40～50小时后，过滤，得澄明液体，加入剩余注射用水，调节pH值至6～7后，再依次进行精滤、灌封、灭菌，即得。

对于上述的复方蟾酥注射液的制备方法，步骤（2）所述乙醇优选95%体积百分比的乙醇水溶液。

对于上述的复方蟾酥注射液的制备方法，所述灭菌为100℃灭菌30分钟。

对于上述的复方蟾酥注射液的制备方法，步骤（4）采用1wt%NaOH水溶液调节pH值。

用法用量：肌内注射，禽每公斤注射0.05～0.1毫升，一天一次，连用2～3天；也可口服，每1升水兑本品0.5～1毫升，集中饮用，一天两次，连用3～5天。猪慎用。

本发明各原料的作用：

蟾酥含有大量蟾蜍毒素类物质，属于甾族类化合物，又叫蟾蜍二烯内酯，为该品的主要有效成分。蟾酥具有强心、呼吸兴奋、升压、兴奋中枢神经系统、抗炎、抗结核、抗肿瘤与抗辐射、增加冠状动脉灌流量、抗病原微生物、抗内毒素休克、增强网状内皮系统吞噬功能、提高机体的非特异性免疫、镇咳、抑制血小板聚集程度与速度等的作用。（1）蟾酥具有洋地黄样强心作用，能改善微循环，增加心肌供氧，增强心肌收缩力，并能升高血压，兴奋呼吸中枢；（2）蟾酥内脂类物质对多种癌细胞均有抑制作用，尚能不同程度防治化疗和放疗引起的白细胞下降，能提高机体的非特异性免疫功能；（3）蟾酥注射液对甲型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌、四联球菌、白色葡萄球菌、卡他球菌均有较好的抑制作用；（4）蟾酥强心作用主要表现在增大心肌收缩力，增加心博出量，减低心率，消除水肿与呼吸道困难；（5）蟾酥的升压作用主要来自于周围血管的收缩，部分来自它的强心作用；（6）蟾酥制剂具有增高小鼠脾脏溶血空斑形成细胞（PFC）活性率，促进巨噬功能以及增高血清溶菌酶浓度等作用，蟾酥制剂能激活小鼠腹腔游走巨噬细胞，提高其吞噬能力，已知被激活的巨噬细胞和处理抗原，又能直接杀死细菌和抑制细菌生长。

柴胡具有解热、镇静、镇痛、抗炎、抗菌（对结核杆菌有抑制作用）、保肝、抗病毒（流感病毒、肝炎病毒、牛痘病毒、Ⅰ型脊髓灰白质炎病毒、疱疹病毒等）、降低血压和减缓心率等作用，可用于感冒流感、上呼吸道感染、肺炎等多种发热症，也可用于治疗流行性腮腺炎，治疗单疱病毒角膜炎。（1）柴胡含有挥发油(丁香酚、已酸、r-十一酸内酯和对甲氧基苯二酮)，柴胡皂苷(皂苷元A)，可以对伤寒、副伤寒疫苗等所致发热有明显解热作用，具有缓解感冒发热的作用；（2）促进免疫功能：柴胡能使吞噬功能增强、自然杀伤细胞功能增强；（3）提高病毒特异性抗体滴度；（4）提高淋巴细胞转核率。

细辛具有解热、镇痛作用、抑菌作用（细辛对溶血性链球菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌，乃至结核杆菌有某些抑制作用）及其它作用。

本发明的积极有益效果：

（1）从中兽医学角度分析，“虚邪共济”是许多疾病发病诱因，也就是中医所讲的五脏处于“虚”时病毒乘虚而入，导致邪盛正衰、抗病无力；多因外感湿热化火，导致肺气不宣、升降失常、阴阳失调。中草药能够调和阴阳，标本兼治，使机体在体质上、免疫上表里如一、阴阳平衡，从而达到“有病少发、发病少亡”的理想养殖状态。本发明将蟾酥与柴胡、细辛提取物配伍使用，发挥不同作用机制的互补作用，从而起到更强的抗菌、抗病毒、提高免疫力的效果。

（2）本发明复方蟾酥注射液安全性高，经急性经口毒性试验、经禽肌肉注射试验、局部刺激试验和热源试验，受试动物健康状况良好，均未出现不良反应。

（3）本发明复方蟾酥注射液具有疏风清热，凉血解毒、消炎、强心、平喘、提高机体免疫力作用，主治风寒感冒，咽喉肿痛，用于化脓性感染与炎症、白细胞减少症、咳喘症、仔猪白痢等；亦可作为抗肿瘤辅助用药。主要用于防治禽的流行性感冒、禽流感、传染性新城疫、传染性法氏囊病、传染性喉气管炎、传染性支气管炎、鸡痘、慢性呼吸道病、鸭病毒性肝炎等病毒性疾病的预防和治疗。

具体实施方式

以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。

实施例1

一种复方蟾酥注射液，由以下重量百分比的原料制成：蟾酥（干品）1.1％，复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液10%、γ-羟基丁酸钠1.5%、聚山梨酯-80 0.5%、氯化钠0.8%、丙二醇1%、无水亚硫酸钠0.2%、苯甲醇1%、乙二胺四乙酸二钠0.5％，余量为水（注射用水）。

对本实施例复方蟾酥注射液进行相关试验如下：

（一）温度加速试验：

试验方法：本实验研究了复方蟾酥注射液在50℃温度加速实验(6个月)。将复方蟾酥注射液(3个批次) 按市场包装，放在盛饱和氯化钠溶液的密闭干燥器中(相对湿度约为75％)，再将干燥器置于隔水式电热恒温培养箱中维持40℃温度。在温度加速试验6 个月的试验期内每个月取样考察外观、色泽、澄明度、pH 值及不溶性微粒等。

试验结果：50℃温度加速试验的稳定性指标考察结果：从第3个月起pH开始增加，共增加了0.5；但含量下降并不明显，范围在0.1％～2％之间，从第5个月开始，含量下降幅度较大，达2.3％～3％，接近前四个月的和，但总的下降范围在允许的范围之内；其余指标没有明显的变化，未见色泽、澄明度的变化，也没有发现不溶性微粒。

（二）长期稳定性试验：

试验方法：本试验研究了复方蟾酥注射液的长期稳定性试验(10个月)。将复方蟾酥注射液(3个批次) 按市场包装，置于阴凉、干燥、避光处保存，每隔一个月取样考察外观色泽、澄明度、pH 值和不溶性微粒等。

试验结果：饮水剂长期稳定性试验考察指标结果：复方蟾酥注射液比较稳定，在室温(大约16℃～25℃范围)、避光、阴凉干燥的环境下，其含量下降很少，在试验期的10 个月下降范围在2％～3％。含量没有明显的变化，外观色泽没有可见的变化，溶液澄清透明，没有不溶性微粒出现。

本实施例复方蟾酥注射液以20000r/min离心30min，在4℃、25℃、40℃条件下留样观察3个月，每隔10天取样观察，均未发现析出、絮凝和分层现象，溶液澄清透明。

（三）药效试验--临床治疗鸡新城疫的试验报告：

1.试验动物：河南焦作某鸡场自然发病病例1200例，分为复方蟾酥注射液治疗组(600例)、西药（病毒灵、恩诺沙星、速补14等）治疗组(600例)。

2.疾病诊断：临床表现为精神沉郁，食欲减退或不吃，鸡只表现呼吸困难，张口呼吸。口中可见粘液增加，呈灰白色，鸡只甩头时常见粘液流出。嗉囊空虚，内含液体呈波动感。常见下痢，有的呈绿色下痢便。剖检病死鸡，症状如下：在消化道可见食道与腺胃的交界处以及腺胃与肌胃的交界处有出血条带或斑点，腺胃乳头上可见出血，其腺乳头出血的数量多少不一；有的病死鸡在肌胃角质层下可见出血，肠道的变化较特征，在肠道表面可见多处有呈枣核状的紫红色变化，如将此处肠道剪开可见肠粘膜上有与表面见到一致的、呈枣核状的、略突出于肠粘膜表面的、紫红色的出血、坏死。

3.药物与方法：

复方蟾酥注射液治疗组：每1升水兑本品0.5～1毫升，集中饮用，一天两次，连用3～5天。

西药治疗组：病毒灵、恩诺沙星、速补14等，按说明书应用。

4.实验结果：临床治疗试验结果见表1。经统计学分析，复方蟾酥注射液治疗组与对照组(西药治疗组)的死亡率差异极显著(P＜ 0.01)，表明本实施例复方对鸡新城疫自然发病病例有良好的治疗效果。

表1临床治疗鸡新城疫的试验对比结果

组别	数量	死亡数	死亡率％
				复方蟾酥注射液治疗组	600	89	14.83%
西药治疗组	600	137	22.83%

实施例2

一种复方蟾酥注射液，由以下重量百分比的原料制成：蟾酥1.0％、复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液8%、γ-羟基丁酸钠1.4%、聚山梨酯-80 0.3%、氯化钠0.5%、丙二醇0.8%、无水亚硫酸钠0.15%、苯甲醇0.8%、乙二胺四乙酸二钠0.4％，余量为水（注射用水）。

所述蟾酥为干品；所述水为注射用水；所述复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液与实施例1相同。

实施例3

一种复方蟾酥注射液，由以下重量百分比的原料制成：蟾酥1.3％、复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液12%、γ-羟基丁酸钠1.6%、聚山梨酯-80 0.6%、氯化钠1.0%、丙二醇1.2%、无水亚硫酸钠0.25%、苯甲醇1.2%、乙二胺四乙酸二钠0.7％，余量为水。

所述蟾酥为干品；所述水为注射用水；所述复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液与实施例1相同。

实施例4

一种复方蟾酥注射液，由以下重量百分比的原料制成：蟾酥1.0％、复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液12%、γ-羟基丁酸钠1.4%、聚山梨酯-80 0.6%、氯化钠0.5%、丙二醇1.2%、无水亚硫酸钠0.15%、苯甲醇1.2%、乙二胺四乙酸二钠0.4％，余量为水。

所述蟾酥为干品；所述水为注射用水；所述复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液与实施例1相同。

实施例5

实施例1～4所述复方蟾酥注射液的制备方法，包括以下步骤：

(1)备料:按所述比例配备原料；

(2)将蟾酥研成200目细粉，再加入蟾酥重量80～100倍的95%乙醇溶液，并再次研匀，在0℃～5℃冷藏并同时振摇40～50小时后，静置分层，提取上清液，并过滤余液，对所得滤渣重复进行本步骤上述醇沉-萃取操作2～3次，合并各次提取液，并加入适量注射用水，搅拌均匀使完全溶解；

(3)将复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液、聚山梨酯-80、丙二醇混合，并加入适量注射用水搅拌均匀，使完全溶解；

(4)合并步骤（1）、（2）所得溶液后，加入氯化钠、无水亚硫酸钠、γ-羟基丁酸钠、苯甲醇、乙二胺四乙酸二钠，再添加适量注射用水搅拌均匀，使其完全溶解；然后，加入溶液0.05wt%的活性炭，充分搅拌，0℃～5℃低温冷藏同时振摇40～50小时后，过滤，得澄明液体，加入剩余注射用水，采用1wt%NaOH水溶液调节pH值至6～7后，再依次进行精滤、灌封、灭菌（100℃灭菌30分钟），即得。

本发明并不局限于上述具体实施方式，本领域技术人员还可据此做出多种变化，但任何与本发明等同或者类似的变化都应涵盖在本发明权利要求的范围内。

Claims (7)

1.一种复方蟾酥注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）备料：按以下重量百分比配备原料：蟾酥1.0～1.3％、复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液8～12%、γ-羟基丁酸钠1.4～1.6%、聚山梨酯-80 0.3～0.6%、氯化钠0.5～1.0%、丙二醇0.8～1.2%、无水亚硫酸钠0.15～0.25%、苯甲醇0.8～1.2%、乙二胺四乙酸二钠0.4～0.7％，余量为水；

（2）将蟾酥研成200目细粉，再加入蟾酥重量80～100倍的乙醇溶液，并再次研匀，在0℃～5℃冷藏并同时振摇40～50小时后，静置分层，提取上清液，并过滤余液，对所得滤渣重复进行本步骤上述醇沉-萃取操作2～3次，合并各次提取液，并加入适量注射用水，搅拌均匀使完全溶解；

（3）制备复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液：取柴胡2500g、细辛250g，切段后混匀，段长1～2cm，加入4000mL稀盐酸溶液，在40～50℃下浸泡5小时后，再加入16000～20000mL水进行蒸馏，收集初馏液5000～6000mL；再对初馏液进行重蒸馏，收集重蒸馏液900~1000mL，即得；

（4）将复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液、聚山梨酯-80、丙二醇混合，并加入适量注射用水搅拌均匀，使完全溶解；

（5）合并步骤（2）、（4）所得溶液后，加入氯化钠、无水亚硫酸钠、γ-羟基丁酸钠、苯甲醇、乙二胺四乙酸二钠，再添加适量注射用水搅拌均匀，使其完全溶解；然后，加入溶液0.05wt%的活性炭，充分搅拌，0℃～5℃低温冷藏同时振摇40～50小时后，过滤，得澄明液体，加入剩余注射用水，调节pH值至6～7后，再依次进行精滤、灌封、灭菌，即得。

2.根据权利要求1所述的复方蟾酥注射液的制备方法，其特征在于，在所述步骤（1）中，由以下重量百分比的原料制成：蟾酥1.1％，复方北柴胡和细辛的酸化处理蒸馏液10%、γ-羟基丁酸钠1.5%、聚山梨酯-80 0.5%、氯化钠0.8%、丙二醇1%、无水亚硫酸钠0.2%、苯甲醇1%、乙二胺四乙酸二钠0.5％，余量为水。

3.根据权利要求1所述的复方蟾酥注射液的制备方法，其特征在于，在所述步骤（1）中，所述蟾酥为干品。

4.根据权利要求1所述的复方蟾酥注射液的制备方法，其特征在于，在所述步骤（1）中，所述水为注射用水。

5.根据权利要求1所述的复方蟾酥注射液的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述乙醇为95%体积百分比的乙醇水溶液。

6.根据权利要求1所述的复方蟾酥注射液的制备方法，其特征在于：在所述步骤（5）中，所述灭菌为100℃灭菌30分钟。

7.根据权利要求1所述的复方蟾酥注射液的制备方法，其特征在于：步骤（5）采用1wt%的NaOH水溶液调节pH值。