CN104531875A - 一种MyD88基因突变荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

一种MyD88基因突变荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104531875A
CN104531875A CN201410849417.5A CN201410849417A CN104531875A CN 104531875 A CN104531875 A CN 104531875A CN 201410849417 A CN201410849417 A CN 201410849417A CN 104531875 A CN104531875 A CN 104531875A
Authority
CN
China
Prior art keywords
myd88
seconds
transgenation
detection kit
probe
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410849417.5A
Other languages
English (en)
Inventor
邱英华
周细武
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
NINGBO UNIGENEDX BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Original Assignee
NINGBO UNIGENEDX BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by NINGBO UNIGENEDX BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical NINGBO UNIGENEDX BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority to CN201410849417.5A priority Critical patent/CN104531875A/zh
Publication of CN104531875A publication Critical patent/CN104531875A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种采用荧光定量PCR检测基因突变的方法，特别涉及一种MyD88基因突变荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法，可在突变含量只有0.1％的临床样本中检测出低至5个拷贝的突变DNA。本发明的方法包括：设计特异性引物和探针；配制荧光定量PCR反应体系和设计反应条件；利用特异性引物扩增样品中的突变基因靶序列；利用探针和扩增产物的杂交，检测反应体系中FAM和HEX荧光信号强度作为结果的判断标准。本试剂盒检测速度快，只需90分钟即可完成检测。

Description

一种MyD88基因突变荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法
技术领域
本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种采用荧光定量PCR检测基因突变的方法，特别涉及一种MyD88基因突变荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法，可在突变含量只有0.1％的临床样本中检测出低至5个拷贝的突变DNA。
背景技术
MyD88(髓样分化因子88，myeloid differentiation factor 88)的相对分子量为35 kDa，包含2个特殊的结构域。其C端带有与TLR分子胞内段相同的TIR结构域，通过同型相互作用与TLR/IL-1R相接，启动信号转导；N端是死亡结构域(death domain，DD)，带有死亡结构域的信号分子，参与凋亡相关的信号通路，通过DD招募、结合并活化其他带有DD的分子，如蛋白激酶IRAK，进而启动相关信号传导。MyD88作为一种衔接蛋白，可向细胞内传递信号，激活核因子-κB(NF-κB)等转录因子，引起多种炎性细胞因子以及抗凋亡分子的释放，从而参与人体固有免疫。目前一般认为该通路的过度激活与自身免疫疾病相关，近年来随着研究的深入，发现部分肿瘤细胞也表达有该信号分子，参与多种肿瘤的发病。
多项研究已在数种B细胞肿瘤中发现了MyD88第265位氨基酸由亮氨酸变成苯丙氨酸的突变(L265P)。此突变位点正好处于TLR结构域，可导致NF-κB信号通路的异常激活。Ngo等[1]通过RNA干扰、高通量mRNA测序发现29％的ABC分子亚型弥漫性大B细胞淋巴瘤存在MyD88 L265P突变，而在其他类型的弥漫大B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤中极少或者没有。有研究认为NF-κB信号途径的持续激活可促进细胞恶性增殖，途径的持续过度激活是ABC型弥漫性大B细胞淋巴瘤的特征[2]。Treon等[3]发现超过90％的华氏巨球蛋白血症具有MyD88 L265P，这种突变体可以引发白介素-1受体相关激酶(interleukin-1receptor-associated kinase，IRAK)介导的NF-κB信号的激活，促进细胞增殖。近年来的研究证实MyD88 L265P是IgM MGUS、华氏巨球蛋白血症常见的较为特异的基因突变，在疾病的诊断、病理机制及疗效评估方面均具有重要意义。
弥漫性大B细胞淋巴瘤是成年人中最为常见的非霍奇金淋巴瘤，通过分子表型，可分为激活型(ABC)、生发中心型(GCB)、原发纵膈型(PMBL)等。其中ABC型预后最差，临床治疗有效率不到40％。上述研究提示MyD88信号通路异常激活参与了B细胞肿瘤的发生，以MyD88信号通路为靶点的抑制剂可能成为治疗B胞肿瘤的新手段。应用分子诊断技术准确地检测病人肿瘤细胞中MyD88基因突变状态，从而选择合适的靶向治疗药物，不仅可对患者实行个性化治疗，同时亦可为临床评判病人的预后提供帮助。
目前在临床上检测MyD88基因突变的通用方法为传统的DNA直接测序法。DNA直接测序法检测灵敏度只有20～30％，即肿瘤组织样本中必须要含有20～30％的突变阳性细胞才能被检测出来；对于小样本病理组织的检测，直接测序法的检测精度有限，难以满足实际应用的需求。同时，该方法容易造成污染，出现假阳性；操作复杂，耗时长(通常需要2～3天才能出检测结果)。针对此类问题，本发明提供了一种快速、高效、高灵敏度、操作简便的MyD88基因突变检测方法和试剂盒，仅需90分钟即可完成MyD88基因L265P突变的检测，为临床个体化用药提供准确实验依据。
参考文献：
[1]Ngo VN，Young RM，Schmitz R，et al.Oncogenically active MYD88 mutations in humanlymphoma.Nature 2011；470(7332):115-119.
[2]Davis RE，Brown KD，Siebenlist U，et al.Constitutive nuclear factor kB activity is required forsurvival of activated B cell-like diffuse large B cell lymphoma cells.J Exp Med 2001；194(12):1861-1874.
[3]Treon SP，Xu L，Guang Y，et al.MYD88 L265P Somatic Mutation in Waldenstr m'sMacroglobulinemia.N Engl Med 2012；367(9):826-833.
发明内容
为了提高临床检验能力，现提供一种快速有效检测MyD88基因突变的荧光定量PCR方法，该方法可以在90分钟内检测出MyD88基因的L265P突变。
本发明的技术方案包含以下步骤：
1.根据人类MyD88基因的野生型基因序列和L258P突变型基因序列，设计出多对特异性高效引物和探针，以FAM信号进行荧光标记；L265P突变点位于正向引物的3’端时，TaqMan探针中不包含突变点；当引物对不包含L265P突变点时，L265P突变点位于TaqMan探针的5’端。
2.选择MyD88基因中的保守序列为内控，设计相应的引物和探针，其TaqMan探针以HEX信号进行荧光标记。
3.建立荧光定量PCR扩增突变基因序列的反应体系，利用特异性引物通过PCR反应大量扩增目的基因序列。
4.可通过两种方式检测荧光信号：
A：利用荧光标记的特异性探针和扩增产物进行杂交，检测反应体系中荧光信号的强度。
B:特异性探针与模板上的L265P突变点结合，当上游引物与模板结合并扩增延伸到探针结合的位置时，Taq酶利用5’-3’端外切酶的活性，将探针5’端连接的荧光分子从探针上切割下来，从而发出荧光。
以HEX的信号达到设定阈值(Ct<32)时表明样品DNA中包含MyD88基因，且上样量在允许范围内，说明FAM的信号可信、有效；以FAM信号达到设定阈值时所需的循环次数Ct值作为阴阳性判断的标准，当Ct值等于0或≥35时，检测结果判定为阴性，Ct值＜32时，检测结果为阳性。Ct值介于32至35之间为临界值，需重新检测。
本发明提供一种用于检测MyD88基因L265P突变的试剂盒，所建立的荧光定量PCR反应体系为：
反应体系总体积为25μL，用去离子水补足体积后，漩涡震荡、短暂离心混匀。
本发明所述荧光定量PCR反应条件是95℃预变性5分钟后进入以下循环：72℃ 20秒，95℃ 15秒，65℃ 20秒，进行10个循环；72℃ 20秒，95℃ 15秒，60℃ 20秒，共35个循环，荧光信号收集温度设定在退火温度。
本发明所述特异性引物和特异性探针见表1。P-SEQ-1～P-SEQ-11为正向引物；P-SEQ-12～P-SEQ-17为反向引物；P-SEQ-18～P-SEQ-22为探针。
表1：特异性引物和探针
所述的一种检测MyD88基因L265P突变的荧光定量PCR方法不包括样品DNA提取步骤，但对于从甲醛固定石蜡包埋的样品获得的DNA片段依然具有与从新鲜组织样品中提取的DNA同样的扩增和检测能力。
与现有的检测方法相比，本发明具有以下优势：
(1)建立了荧光定量PCR的方法，可有效检测MyD88基因L265P突变；
(2)灵敏度高，能检出5～10拷贝的突变；
(3)特异性强，10～100ng的野生型DNA不会产生非特异性干扰信号；
(4)选择性强，可在99～99.9％的野生型DNA背景下检测出0.1％～1.0％的突变型；
(5)检测操作简便，在封闭的体系中进行DNA扩增和实时荧光检测，检测速度快，仅需90分钟即可完成检测。
附图说明
图1：本发明试剂盒检测MyD88基因L265P突变型的扩增曲线图
图2：本发明试剂盒检测MyD88基因野生型样本的扩增曲线图
具体实施方式
下面以具体实施例对本发明做进一步的详细说明。应当理解的是，具体实施例仅是对本发明做出更清楚的说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
收集临床诊断为弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC分子亚型)的15例患者的肿瘤组织(包括新鲜组织和石蜡包埋组织切片)，使用Qiagen公司的试剂盒提取出基因组DNA，溶解于超纯水中，经紫外分光光度计测定浓度，配成50ng/μL的溶液，作为PCR扩增的模板。
设计能特异性检测MyD88基因L265P突变的引物和荧光探针，序列如下：
荧光PCR扩增反应体系总体积为25μL，各成分为：
采用Roche 480II实时PCR扩增仪进行检测。上述荧光定量PCR反应条件是95℃预变性5分钟后进入以下循环：72℃ 20秒，95℃ 15秒，65℃ 20秒，进行10个循环；72℃ 20秒，95℃ 15秒，60℃ 20秒，共35个循环，荧光信号收集温度设定在退火温度。
检测反应体系中FAM和HEX荧光信号的强度，以HEX的信号达到设定阈值(Ct<32)表明样品DNA中包含MyD88基因，且上样量在允许范围内，说明FAM的信号可信、有效；以FAM信号达到设定阈值时所需的循环次数Ct值作为阴阳性判断的标准，当Ct值等于0或≥35时，检测结果判定为阴性；Ct值＜32时，检测结果为阳性；Ct值介于32至35之间为临界值，需重新检测。
含有MyD88基因L265P突变样本的扩增曲线如图1所示，在15例样品中共检测出5例样本存在MyD88基因L265P突变。另外将实施例1中的样品进行测序验证，测序结果与采用本试剂盒进行检测的结果完全一致，可确认本试剂盒能够正确测定MyD88基因L265P突变。
实施例2：
构建含有MyD88基因L265P突变的质粒，作为突变型的模板，野生型的模板采用HT29细胞DNA。模板DNA均溶解于超纯水中，经紫外分光光度计测定浓度，配成50ng/μL的溶液，作为PCR扩增的模板。
设计能特异性检测MyD88基因L265P突变的引物和荧光探针，序列如下：
荧光PCR扩增反应体系总体积为25μL，各成分为：
采用Roche 480II实时PCR扩增仪进行检测，上述荧光定量PCR反应条件是98℃预变性5分钟后进入以下循环：72℃ 20秒，95℃ 15秒，65℃ 20秒，进行10个循环；72℃ 20秒，95℃ 15秒，60℃ 20秒，共35个循环，荧光信号收集温度设定在退火温度。
检测反应体系中FAM和HEX荧光信号的强度，以HEX的信号达到设定阈值(Ct<32)时表明样品DNA中包含MyD88基因，且上样量在允许范围内，说明FAM的信号可信、有效；以FAM信号达到设定阈值时所需的循环次数Ct值作为阴阳性判断的标准，当Ct值等于0或≥35时，检测结果判定为阴性；Ct值＜32时，检测结果为阳性；Ct值介于32至35之间为临界值，需重新检测。
MyD88基因野生型样本的扩增曲线图如图2所示。
灵敏度分析：将突变型模板从50ng/μL进行连续梯度稀释，在荧光PCR扩增反应体系(25μL)中分别加入1000、500、50、5个拷贝数的模板，每种模板量测定三管。检测结果表明本发明提供的荧光定量PCR灵敏度高，5拷贝的突变型模板即可检出。
拷贝数 1000 500 50 5
平均Ct值 25.33 26.47 30.15 33.22
选择性能力分析：将突变型模板和野生型细胞系HT29的DNA浓度配制为50ng/μL，两者等体积混匀即为含50％突变型的DNA，用野生型DNA逐步稀释，配制成含20％、10％、5％、1％、0.5％、0.1％突变型DNA的供试模板，取供试模板进行荧光定量PCR检测，每种模板量测定三管。检测结果表明，10ng样品DNA中含0.1％的突变DNA即可检出。
突变型模板含量(％) 20 10 5 1 0.5 0.1
平均Ct值 26.98 28.01 29.06 31.06 32.67 34.22
重复性分析：每次反应加入突变型模板DNA 10ng、1ng和100pg，重复10次荧光定量PCR检测，10次的Ct值相差不超过0.2个循环。
Ct值 10ng模板DNA 1ng模板DNA 100pg模板DNA
1 26.78 30.11 33.20
2 26.81 30.07 33.28
3 26.80 30.09 33.28
4 26.78 30.13 33.19
5 26.79 30.13 33.16
6 26.82 30.18 33.21
7 26.81 30.20 33.22
8 26.77 30.07 33.27
9 26.77 30.22 33.20
10 26.83 30.23 33.15

Claims (7)

1.用于检测MyD88基因突变的特异性引物和探针，见本发明说明书表1，P-SEQ-1～P-SEQ-22。
2.一种检测MyD88基因突变的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物和探针。
3.如权利要求2所述的检测MyD88基因突变的检测试剂盒，包括以下荧光定量PCR反应体系：
。
4.如权利要求2所述的检测MyD88基因突变的检测试剂盒，荧光定量PCR反应条件为：95℃预变性5分钟后进入以下循环：72℃20秒，95℃15秒，65℃20秒，进行10个循环；72℃20秒，95℃15秒，60℃20秒，共35个循环，荧光信号收集温度设定在退火温度。
5.如权利要求2所述的检测MyD88基因突变的检测试剂盒，检测结果判定方法为：以HEX的信号达到设定阈值(Ct<32)时表明样品DNA中包含MyD88基因，且上样量在允许范围内，说明FAM的信号可信、有效；以FAM信号达到设定阈值时所需的循环次数Ct值作为阴阳性判断的标准，当Ct值等于0或≥35时，检测结果判定为阴性，Ct值＜32时，检测结果为阳性，Ct值介于32至35之间为临界值，需重新检测。
6.如权利要求2所述的检测MyD88基因突变的检测试剂盒，待检测样品包括新鲜病理组织、石蜡包埋病理组织、石蜡切片和血液。
7.一种用于检测MyD88基因突变的引物和探针，其特征在于，由P-SEQ-1～P-SEQ-22的寡核苷酸引物和探针或序列与其有至少70％同一性的寡核苷酸组成。
CN201410849417.5A 2014-12-30 2014-12-30 一种MyD88基因突变荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法 Pending CN104531875A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410849417.5A CN104531875A (zh) 2014-12-30 2014-12-30 一种MyD88基因突变荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410849417.5A CN104531875A (zh) 2014-12-30 2014-12-30 一种MyD88基因突变荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104531875A true CN104531875A (zh) 2015-04-22

Family

ID=52847494

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410849417.5A Pending CN104531875A (zh) 2014-12-30 2014-12-30 一种MyD88基因突变荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104531875A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105838811A (zh) * 2016-05-20 2016-08-10 武汉艾迪康医学检验所有限公司 实时荧光pcr技术定量检测myd88基因l265p突变的方法、引物和探针
CN110229910A (zh) * 2019-07-08 2019-09-13 福建省肿瘤医院（福建省肿瘤研究所、福建省癌症防治中心） Myd88基因l265p突变检测试剂盒及检测方法
CN110982898A (zh) * 2019-10-14 2020-04-10 苏州艾可瑞斯生物科技有限公司 基于ARMS-PCR的MyD88基因L265P突变检测试剂盒及检测方法
CN111593126A (zh) * 2020-06-22 2020-08-28 杭州千麦医学检验所有限公司 一种检测myd88基因l265p突变的引物和探针及高灵敏度检测方法
CN111690749A (zh) * 2020-07-09 2020-09-22 广州金域医学检验中心有限公司 一种ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法及检测试剂盒

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009040557A2 (en) * 2007-09-28 2009-04-02 Dxs Limited Polynucleotide primers for detecting pik3ca mutations

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009040557A2 (en) * 2007-09-28 2009-04-02 Dxs Limited Polynucleotide primers for detecting pik3ca mutations

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIAN XU ET AL: "MYD88 L265P in Waldenström macroglobulinemia, immunoglobulin M monoclonal gammopathy, and other B-cell lymphoproliferative disorders using conventional and quantitative allele-specific polymerase chain reaction", 《BLOOD》, vol. 121, no. 11, 14 March 2013 (2013-03-14) *
戴善军: "实时荧光定量PCR技术及在植入前遗传学诊断中应用", 《国外医学计划生育/生殖健康分册》, vol. 26, no. 3, 31 December 2007 (2007-12-31) *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105838811A (zh) * 2016-05-20 2016-08-10 武汉艾迪康医学检验所有限公司 实时荧光pcr技术定量检测myd88基因l265p突变的方法、引物和探针
CN110229910A (zh) * 2019-07-08 2019-09-13 福建省肿瘤医院（福建省肿瘤研究所、福建省癌症防治中心） Myd88基因l265p突变检测试剂盒及检测方法
CN110982898A (zh) * 2019-10-14 2020-04-10 苏州艾可瑞斯生物科技有限公司 基于ARMS-PCR的MyD88基因L265P突变检测试剂盒及检测方法
CN111593126A (zh) * 2020-06-22 2020-08-28 杭州千麦医学检验所有限公司 一种检测myd88基因l265p突变的引物和探针及高灵敏度检测方法
CN111690749A (zh) * 2020-07-09 2020-09-22 广州金域医学检验中心有限公司 一种ddPCR检测MYD88基因L265P突变的样本处理方法及检测试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12077803B2 (en) MicroRNAs as biomarkers for endometriosis
Tourang et al. Association between Human Endogenous Retrovirus K gene expression and breast cancer
CN104946739B (zh) Egfr基因突变检测试剂盒及其应用
CN102719525B (zh) 用于检测eml4-alk融合基因突变的引物、探针及检测试剂盒
CN103710460B (zh) 定量检测egfr基因突变的试剂盒及其用途
CN104531875A (zh) 一种MyD88基因突变荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法
CN102776286B (zh) 用于检测ros1基因融合突变的引物、探针及检测试剂盒
CN104031992A (zh) 人类B-raf基因V600突变检测试剂盒
CN105002283A (zh) 一种用于检测人c-kit基因突变的QPCR组合物及试剂盒
Günel et al. Potential biomarker of circulating hsa-miR-1273g-3p level for detection of recurrent epithelial ovarian cancer
CN103114133A (zh) 一种用于检测c-kit基因突变的探针、引物及检测试剂盒
Sebastiani et al. MicroRNA profiling in sera of patients with type 2 diabetes mellitus reveals an upregulation of miR-31 expression in subjects with microvascular complications
CN106148497A (zh) Braf基因突变检测试剂盒及其应用
CN103820545A (zh) 用于检测人abcg2基因突变的探针、引物及试剂盒
CN104404128A (zh) 一种tert基因组合突变位点的检测试剂盒
US20160208346A1 (en) Method and composition for detection of oncogenic hpv
CN103589786B (zh) 检测RRM1 mRNA相对表达量的方法、试剂盒及引物和探针
CN104651492A (zh) miRNA410-在制备前列腺癌诊断试剂盒中的应用
US20150344961A1 (en) Sera Based miRNAs as Non-Invasive Biomarkers in Melanoma
CN113774123B (zh) 预测HIV感染者免疫应答水平的microRNA分子标志物组合及其用途
CN102758011A (zh) 用于检测ERCC1mRNA的核酸检测试剂盒
US20240150849A1 (en) MicroRNAs AS BIOMAKERS FOR THE IN VITRO DIAGNOSIS OF GLIOMA
JP2024035040A (ja) 分析方法、キット及び検出用デバイス
CN102965437B (zh) Bcl10基因突变的快速检测方法
RU2014135723A (ru) Способ диагностики папиллярной почечноклеточной карциномы и набор для его осуществления

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20150422

RJ01 Rejection of invention patent application after publication