CN104530218A - 一种特立帕肽的固相合成方法 - Google Patents
一种特立帕肽的固相合成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104530218A CN104530218A CN201510005427.5A CN201510005427A CN104530218A CN 104530218 A CN104530218 A CN 104530218A CN 201510005427 A CN201510005427 A CN 201510005427A CN 104530218 A CN104530218 A CN 104530218A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- leu
- trt
- otbu
- boc
- lys
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 title claims abstract description 58
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 title claims abstract description 55
- 229960005460 teriparatide Drugs 0.000 title claims abstract description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 409
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 409
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 152
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 113
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 claims abstract description 111
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 111
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 110
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 51
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 claims abstract description 21
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 14
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 8
- SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 234
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 212
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 148
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 99
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 91
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 76
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 76
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 74
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 43
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 30
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- SIRPVCUJLVXZPW-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CNC=N1 SIRPVCUJLVXZPW-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 18
- REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](COC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 18
- UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 18
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 18
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 16
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 16
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 16
- KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxo-4-(tritylamino)butanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N 0.000 claims description 15
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 15
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 13
- BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 12
- WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)CC(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N 0.000 claims description 12
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 11
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 claims description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 9
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 7
- ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N 0.000 claims description 6
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 6
- DVBUCBXGDWWXNY-SFHVURJKSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 DVBUCBXGDWWXNY-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 6
- QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N (2s,3s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N 0.000 claims description 6
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 6
- KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N 0.000 claims description 5
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 claims description 4
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 4
- YUGBZNJSGOBFOV-INIZCTEOSA-N (2s)-4-amino-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 YUGBZNJSGOBFOV-INIZCTEOSA-N 0.000 claims description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 claims description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 abstract description 12
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 abstract 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 148
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 48
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 48
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- AAAFQLPJNOITCL-SFHVURJKSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[(2s)-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]carbamate Chemical compound C([C@@H](C=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 AAAFQLPJNOITCL-SFHVURJKSA-N 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 6
- 238000010671 solid-state reaction Methods 0.000 description 6
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 2
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 Benzotriazole-N, N, N ', N '-tetramethyl-urea hexafluorophosphate Chemical compound 0.000 description 1
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N Met-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-pyrrolidine Natural products CN1CC=CC1 AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000001808 coupling effect Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;n,n-dimethylformamide Chemical compound ClCCl.CN(C)C=O MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229940053641 forteo Drugs 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- YYTWEEOFRNSTKS-UHFFFAOYSA-N n,n'-dicyclohexylmethanediimine;1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 YYTWEEOFRNSTKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003053 piperidines Chemical class 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供一种特立帕肽的固相合成方法，包括如下步骤：以Wang树脂为树脂固相载体，和N端Fmoc保护的苯丙氨酸(Fmoc-Phe-OH)偶联得到Fmoc-Phe-树脂；以HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA为缩合剂，通过固相合成法，按照特立帕肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，得到特立帕肽肽树脂；然后对特立帕肽肽树脂进行裂解，脱除保护基和树脂，加入无水乙醚析出，得到特立帕肽粗肽；采用C18柱进行分离纯化，冻干，得到特立帕肽。
Description
技术领域
本发明涉及多肽的合成及裂解方法，尤其涉及一种特立帕肽的固相合成方法。
背景技术：
特立帕肽，英文名称为Teriparatide，其肽序为：
H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH商品名Forteo，由礼来公司研制开发，2002年12月在美国首次上市。现有技术，生产成本高，不利于特立帕肽的大规模生产，有关文献如下：
方法1：CN102731643A报道了特立帕肽的片段连接方法及相应的裂解方法，将各肽树脂片段在0.8mmol/g Wang树脂上逐步偶联特立帕肽树脂，然后裂解得到特立帕肽粗品，纯化得到特立帕肽。
此方法虽然合成周期短，但片段偶联之前需要纯化冻干，使工艺变得复杂，而且片段对接收率较低，大大降低了最终产品的收率。
方法2：王良友等在中国生化药物杂志
ChineseJournalofBiochemcalPharmaceutics2005年第26卷第2期发表的甲状旁腺素(1-34)的合成与聚乙二醇化修饰中提到：
以Wang树脂为固相合成载体，DCC-HOBT为缩合剂，根据PTH(1-34)的氨基酸序列，按标准的Fmoc固相多肽合成方法合成肽树脂，以EDT-间甲酚-TMBS-TFA作裂解液，0℃反应90min，滤除树脂，将滤液旋转蒸发出去TFA，加无水乙醚沉淀出白色固体，溶于水中，冻干得白色干燥粉末。
此方法中所使用的缩合剂DCC为碳二亚胺型缩合剂，反应生成的N,N'-二环己基脲(DCU)在大多数有机溶剂中溶解度很小，有时会混在产物中而很难除尽。
特立帕肽的现有合成方法存在操作繁琐，废液多，不利于环保，需花费大量乙腈及切割试剂，造成成本高昂以及不利于大规模生产的缺点。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种特立帕肽的固相合成方法。
发明内容
以Wang树脂(包括Wang树脂或2Cl-CTC树脂)为树脂固相载体，以HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA为缩合剂，通过固相合成法，按照特立帕肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，依次脱除保护。
本发明需解决的技术问题是公开一种特立帕肽的固相合成方法，以克服现有技术存在的技术缺陷。
以Wang树脂(包括Wang树脂或2Cl-CTC树脂)为树脂固相载体，以HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA为缩合剂，通过固相合成法，按照特立帕肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，依次脱除保护；
裂解，去除保护基和树脂得到特立帕肽粗肽。
采用C18柱进行分离纯化，冻干，得到特立帕肽；
采用上述技术方案，通过固相合成法进行特立帕肽的制备，整个工艺操作简单，生产成本低，产品后处理操作简单，所用试剂有利于环保，产品收率高，纯度高，有利于特立帕肽的工艺放大生产。
作为本发明的进一步改进，所述步骤(1)树脂固相载体采用王树脂，所述Fmoc-Phe-树脂为0.24-0.37mmol/g替代度的Fmoc-Phe-Wang树脂。
所述步骤(2)所述活化剂系统选自DIC/HOBt和DMAP。所述步骤(3)所使用的裂解液优选TFA-EDT-水，反应溶剂优选DMF。
作为本发明的进一步改进，所述步骤(2)所采用脱保护液使所述Fmoc-Phe-树脂脱除Fmoc保护基，脱保护液由体积比为1：4的哌啶和DMF组成，得到H-Phe-树脂，在偶联剂系统的存在下，H-Phe-树脂和Fmoc保护且侧链保护的天冬氨酸偶联得Fmoc-Asn(Trt)-Phe-树脂；重复步骤(2)，按照特立帕肽主链肽序依次进行氨基酸的偶联。
在进行氨基酸的偶联时，色氨酸通过Boc保护基进行侧链的保护；谷氨酸通过OtBu保护基进行侧链的保护；谷氨酰胺通过Trt保护基进行侧链的保护；丝氨酸通过Trt或tBu保护基进行侧链的保护，丝氨酸采用不同的保护基Trt或tBu是为了保证树脂的偶联效果以及最终的产品收率；天冬氨酸通过OtBu保护基进行侧链的保护；苏氨酸通过tBu保护基进行侧链的保护；组氨酸通过Trt保护基进行侧链的保护，通过Boc保护基进行N端的保护。
作为本发明的进一步改进，所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、HBTU/DIEA、TBTU/DIEA、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOAt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的任意组合。
作为本发明的进一步改进，所述步骤(4)纯化为反相高效液相色谱纯化，色谱柱为反相C18柱，柱温为35～45℃。
按照本发明优选的方案：以Wang树脂为树脂固相载体，以Fmoc保护的氨基酸为单体，以HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA为缩合剂，通过固相合成法，按照特立帕肽主链肽序依次进行氨基酸的偶联，并依次脱除保护，包括如下步骤：
(1)Wang树脂的预处理：Wang树脂(0.56mmol/g)用DMF浸泡，通入氮气，使树脂充分溶胀，20-30℃反应10-60分，氮气通去六氢吡啶，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气通干，获得(A)。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为10-50％；
六氢吡啶的DMF溶液中，Wang树脂的重量浓度为5-20％；
(2)Fmoc-Phe-树脂的制备
将步骤(1)的(A)加入Fmoc-Phe-OH(MW:387.4)，HOBT(MW:135.1)、HBTU或TBTU，加入DMAP(MW:122.17)和DMF，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Phe-树脂。
反应液中，(A)的重量体积浓度为5-15ml/g，Fmoc-Phe-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
(3)Fmoc-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(2)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Asn(Trt)-OH(MW:596.7)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Asn(Trt)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(2)的Fmoc-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；(4)Fmoc-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(3)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-His-OH(MW:619.7)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-His-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(3)的Fmoc-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(5)Fmoc-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(4)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Val-OH(MW:339.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Val-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(4)的Fmoc-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(6)Fmoc-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(5)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Asp(OtBu)-OH(MW:411.46)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Asp(OtBu)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(5)的Fmoc-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(7)Fmoc-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(6)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Gln(Trt)-OH(MW:610.7)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Gln(Trt)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(6)的Fmoc-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(8)Fmoc-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(7)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Leu-OH(MW:353.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Leu-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(7)的Fmoc-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(9)Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(8)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Lys(Boc)-OH(MW:468.55)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Lys(Boc)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(8)的Fmoc-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(10)Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(9)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Lys(Boc)-OH(MW:468.55)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Lys(Boc)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(9)的Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(11)Fmoc-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(10)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Arg-OH(MW:648.77)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Arg-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(10)的Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(12)Fmoc-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(11)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Leu-OH(MW:353.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Leu-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(11)的Fmoc-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(13)Fmoc-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(12)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Trp(Boc)-OH(MW:526.5)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Trp(Boc)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(12)的Fmoc-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(14)Fmoc-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(13)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Glu(otbu)-OH(MW:425.48)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Glu(otbu)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(13)的Fmoc-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(15)Fmoc-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(14)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Val-OH(MW:339.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Val-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(14)的Fmoc-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(16)Fmoc-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(15)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Arg-OH(MW:648.77)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Arg-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(15)的Fmoc-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(17)Fmoc-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(16)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Glu(otbu)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Glu(otbu)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(16)的Fmoc-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(18)Fmoc-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(17)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Met-OH(MW:371.5)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Met-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(17)的Fmoc-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(19)Fmoc-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(18)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Ser(tBu)-OH(MW:383.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Ser(tBu)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(18)的Fmoc-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(20)Fmoc-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(19)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Asn-OH(MW:596.7)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Asn-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(19)的Fmoc-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(22)Fmoc-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(20)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Leu-OH(MW:353.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Leu-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(20)的Fmoc-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(22)
Fmoc-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(21)得到的树脂中
加入Fmoc-His-OH(MW:619.7)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到(22)Fmoc-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-His-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(21)的Fmoc-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(23)Fmoc-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂将步骤(22)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Lys(Boc)-OH(MW:468.55)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Lys(Boc)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(22)的Fmoc-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-
Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-
Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(24)Fmoc-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(23)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Gly-OH(MW:297.3)、HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Gly-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(23)的Fmoc-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(25)Fmoc-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(24)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Leu-OH(MW:353.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Phe-树脂。
Fmoc-Leu-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(24)的Fmoc-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(26)Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(25)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Asn(Trt)-OH(MW:596.7)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Asn-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Asn(Trt)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(25)的Fmoc-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(27)Fmoc-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(26)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-His-OH(MW:619.7)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-His-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(26)的Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(28)Fmoc-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(27)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Met-OH(MW:371.5)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Met-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(27)的Fmoc-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(29)Fmoc-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(28)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Leu-OH(MW:353.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Leu-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(28)的Fmoc-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(30)Fmoc-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(29)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Gln(Trt)-OH(MW:610.7)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护。
Fmoc-Gln(Trt)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(29)的Fmoc-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(31)Fmoc-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(30)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Ile-OH(MW:353.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Ile-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(30)的Fmoc-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(32)Fmoc-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(31)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Glu(otbu)-OH(MW:425.48)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Glu(otbu)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(31)的Fmoc-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(33)Fmoc-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(32)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Ser(tBu)-OH(383.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。
Fmoc-Ser(tBu)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(32)的Fmoc-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(34)Fmoc-Val-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(33)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Val-OH(MW:339.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Val-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。Fmoc-Val-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(33)的Fmoc-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
(35)Fmoc-Ser(tBu)-Val-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(34)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
加入Fmoc-Ser(tBu)-OH(383.4)，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应1.5-2.5h，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Ser(tBu)-Val-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂。Fmoc-Ser(tBu)-OH氨基酸的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(34)的Fmoc-Val-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
将步骤(34)得到的树脂中加入六氢吡啶的DMF溶液，20-30℃脱Fmoc反应10-60min，分别用DMF、DCM洗涤。
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15-25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(35)的Fmoc-
Ser(tBu)-Val-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的重量体积浓度为5-15ml/g；
用DMF、DCM洗涤，再用甲醇洗涤收缩，氮气吹干，得到34肽树脂。
将上述得到的34肽树脂加入切肽试剂：TFA:EDT:水＝95:2.5:2.5，20-30℃反应1.5-2.5h，抽滤，滤液中加入3-7倍量的无水乙醚，过滤得到粗肽，干燥。
34肽树脂在切肽试剂中的重量体积比为5-20ml/g。
按照本发明优选的纯化方法，如下步骤：
将所得到的粗肽溶于水中，过滤，滤液经C18柱纯化，流动相：TFA:水＝1:1000，流速为100-650ml/min，检测波长为214nm，用HPLC跟踪收集所需要的流出液，然后采用常规的方法冻干，获得目标产物，纯度99.92％，总收率约为38％。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：提供了一种固相合成法进行特立帕肽的制备，操作简单，合成周期短，成本不高，减少了废液的产生，后处理容易，副产物少，产品收率高，利于特立帕肽的大规模生产。
发明内容有以下优点
1、本发明提供的固相合成方法为直链合成法，与以往文献报导的方法比较，其步骤简易，省去了中间体的处理步骤，节省了资源，降低了生产成本，且产品收率高，纯度高，有利于特立帕肽的工艺放大生产。
2、与现有技术相比，本发明所使用的缩合剂DIC为碳二亚胺型缩合剂，副产物少，后处理容易，减少了废液的产生，有利于环保；使用HBTU/TBTU+DIEA缩合剂可减少反应时间，提高生产效率。
3、与现有技术相比，本发明步骤简易，省去了中间体的处理步骤，节省了资源，如中间体纯化时使用大量的流动相，冻干时所耗费的电能等。
4、与现有方法1相比，本发明降低了生产成本，不仅省去了中间体处理所用物料、能源，而且节省了大量的树脂的使用以及切割试剂的使用，同时保护了环境，有利于环保。
5、为进一步说明本发明的优点，用以下数据加以证明：
其中物料用量的计算依据为：在均得到12.29g产品的情况下所用物料。
其中收率的计算方法如下：目的肽含量＝(样品主峰峰面积/对照品主峰峰面积)*对照品浓度*溶解样品的体积
理论肽含量＝理论物质的量*分子质量
合成收率＝(目的肽含量/理论肽含量)*100％
纯度的检测方法如下：以乙腈：三氟乙酸(1000:1)为流动相A,以水：三氟乙酸(1000:1)为流动相B，色谱柱为C18柱，检测波长214nm，柱温40℃，流速为1.0ml/min,进行梯度洗脱。初始状态为10％流动相A，30分钟将流动相A升至40％，再于5分钟内将A相升至100％，保持5分钟，然后在2分钟内回到初始状态，保持10分钟。
附图说明
图1为所得到的冻干后的特立帕肽精肽的HPLC图。
具体实施方式
说明书和权利要求书中所使用英文缩写的含义列于下表中。
| 英文缩写 | 含义 |
| DMF | N,N-二甲基甲酰胺 |
| DCM | 二氯甲烷 |
| DIC | N,N′-二异丙基碳二亚胺 |
| DIEA | 二异丙基乙胺 |
| HOBT | 1-羟基苯并三氮唑 |
| HBTU | 苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐 |
| TBTU | O-苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸 |
| TFA | 三氟乙酸 |
| EDT | 1,2-乙二硫醇 |
| DMAP | 对二甲氨基吡啶 |
实施例1
替代度为0.167mmol/g的Fmoc-Phe-Wang树脂的制备
称取替代度为1.08mmol/g的Wang树脂50g，加入到固相反应柱中，DMF溶胀树脂30分钟后，在烧杯中称取8.36gFmoc-Phe-OH、2.9gHOBT和0.23gDMAP，用DMF溶解，加入4.0mLDIC活化5min，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2h，用DMF洗涤2次，用甲醇收缩吹干，得到Fmoc-Phe-Wang树脂，检测Wang-F氨基酸树脂替代度为0.167mmol/g。
实施例2
替代度为0.323mmol/g的Fmoc-Phe-Wang树脂的合成。
称取替代度为0.56mmol/g的Wang树脂10g，加入到固相反应柱中，DMF溶胀树脂30分钟后，13.56gFmoc-Phe-OH和4.72gHOBT用DMF溶解，加入5.42mLDIC活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应4小时，用DMF洗涤2次，用甲醇收缩吹干，得到Fmoc-Phe-Wang树脂，检测替代度为0.323mmol/g。
实施例3
替代度为0.372mmol/g的Fmoc-Phe-Wang树脂的合成。
称取替代度为1.08mmol/g的Wang树脂10g，加入到固相反应柱中，DMF溶胀树脂30分钟后烧杯中称取2.926gFmoc-Phe-OH、1.015gHOBT和0.080gDMAP，DMF溶解，加入1.4mLDIC活化5min，加入上述装有树脂的反应柱中，反应3小时，用DMF洗涤2次，用甲醇收缩吹干，得到Fmoc-Phe-Wang树脂，检测替代度为0.372mmol/g。实施例4
Fmoc-Phe-Wang树脂的处理
称取Fmoc-Phe-Wang树脂10g，加入40ml DMF溶胀30-40min，充分溶胀后，加入25％六氢吡啶的DMF溶液，25℃脱Fmoc反应20min，分别用DMF、DCM洗涤。用茚三酮法检测树脂颜色，树脂有颜色，表示Fmoc已脱除。
实施例5
特立帕肽肽树脂的制备。
称取已处理的0.167mmol/g的Fmoc-Phe-Wang树脂10g，加入40ml DMF溶胀30-40min，充分溶胀后，加入2.23gFmoc-Asn(Trt)-OH(3.74mmol)和0.50gHOBt(3.70mmol)，加入40mlDMF溶解氨基酸和HOBT，冰浴加入0.58mlDIC(3.74mmol)活化5min，加入固相反应柱中，室温反应2h。以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需再偶联反应1h，此判断标准适用于后续内容中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱Fmoc反应步骤和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照特立帕肽主链肽序，依次完成Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH和Fmoc-Ser(tBu)-OH、的偶联，脱除Fmoc保护，用DMF洗涤4次，DCM洗2次，用40ml甲醇收缩吹干，称重得到特立帕肽树脂25.54g(树脂增重率155％)，经裂解得特立帕肽粗肽11.72g，经HPLC检测，流动相为：水：TFA＝1000:1，粗肽纯度68.40％。
实施例6
特立帕肽肽树脂的制备。
称取已处理的0.372mmol/g的Fmoc-Phe-Wang树脂10g，加入40ml DMF溶胀30-40min，充分溶胀后，加入6.66gFmoc-Asn(Trt)-OH(11.16mmol)和4.43gHBTU(11.16mmol)，加入40mlDMF溶解氨基酸和HBTU，加入3.69mlDIEA(22.3mmol)活化3min，加入固相反应柱中，室温反应2h。以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需再偶联反应1h，此判断标准适用于后续内容中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱Fmoc反应步骤和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照特立帕肽主链肽序，依次完成Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH和Fmoc-Ser(tBu)-OH、的偶联，脱除Fmoc保护，用DMF洗涤4次，DCM洗2次，用40ml甲醇收缩吹干，称重得到特立帕肽树脂29.55g(树脂增重率195％)，经裂解得特立帕肽粗肽14.70g，经HPLC检测，流动相为：水：TFA＝1000:1，粗肽纯度70.21％；
实施例7
特立帕肽肽树脂的规模化制备。
称取已处理的0.323mmol/g的Fmoc-Phe-Wang树脂100g，加入400ml DMF溶胀30-40min，充分溶胀后，加入46.26gFmoc-Asn(Pbf)-OH(96.9mmol)和13.09gHOBT(96.9mmol)，加入400mlDMF溶解氨基酸和HOBT，冰浴加入15.0mlDIC(96.9mmol)活化5min，加入固相反应柱中，室温反应2h。以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需再偶联反应1h，此判断标准适用于后续内容中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱Fmoc反应步骤和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照特立帕肽主链肽序，依次完成Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH和Fmoc-Ser(tBu)-OH、的偶联，脱除Fmoc保护，用DMF洗涤4次，DCM洗2次，用40ml甲醇收缩吹干。称重得到特立帕肽树脂345.8g(树脂增重率245.8％)，经裂解得特立帕肽粗肽172.28g，经HPLC检测，流动相为：水：TFA＝1000:1，粗肽纯度70.25％；
实施例8
特立帕肽粗肽的制备。
称取80g全保护的特立帕肽树脂(Wang-F氨基酸树脂替代度：0.344mmol/g，起始Wang树脂用量：25g)，加入到2L反应釜中，按TFA：EDT：水＝95：2.5：2.5的体积比配制裂解试剂800ml，将裂解试剂倒入特立帕肽肽树脂中，22-30℃反应2h。反应结束，过滤树脂，收集滤液。用少量TFA洗涤树脂，合并滤液，将滤液中加入5.6L无水乙醚，沉淀析出，抽滤，无水乙醚洗涤，真空干燥，得到特立帕肽粗肽40.14g，经HPLC检测，流动相为：水：TFA＝1000:1，，粗肽纯度70.12％；
实施例9
经C18或C8柱纯化，流动相：TFA:水＝1:1000，流速为100-650ml/min，检测波长为214nm，用HPLC跟踪收集所需要的流出液，然后采用常规的方法冻干，获得特立帕肽精肽质量为12.29g，纯度为99.87％，总收率为34.72％；MALDI-TOF：(M+H)+＝4117。
Claims (10)
1.一种特立帕肽的固相合成方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1，
以Wang树脂为树脂固相载体，其和Fmoc-Phe-OH偶联得到Fmoc-Phe-树脂，所述Fmoc-Phe-树脂为0.12～0.40mmol/g替代度的Fmoc-Phe-树脂；
步骤2，
以HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA为缩合剂，用固相合成法，按照特立帕肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，
步骤3，
依次裂解，脱除保护基和树脂得到特立帕肽粗肽，
步骤4，
特立帕肽粗肽采用C18柱进行分离纯化，冻干，得到特立帕肽。
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于：其中所述Wang树脂选自：Wang树脂或2Cl-CTC树脂。
3.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于：步骤如下：
(1)Wang树脂，包括Wang树脂或2Cl-CTC树脂的预处理
将Wang树脂用DMF溶胀30-40min，同时通入氮气，使树脂充分溶胀，
(2)Fmoc-Phe-树脂的制备
将步骤(1)预处理的树脂中加入Fmoc-Phe-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，加入DMAP，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Phe-树脂，并测其替代度，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(3)Fmoc-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(2)得到的树脂中加入Fmoc-Asn(Trt)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(4)Fmoc-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(3)得到的树脂中加入Fmoc-His-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(5)Fmoc-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(4)得到的树脂中加入Fmoc-Val-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(6)Fmoc-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(5)得到的树脂中加入Fmoc-Asp(OtBu)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(7)Fmoc-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(6)得到的树脂中加入Fmoc-Gln(Trt)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(8)Fmoc-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(7)得到的树脂中加入Fmoc-Leu-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(9)Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(8)得到的树脂中加入Fmoc-Lys(Boc)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(10)Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(9)得到的树脂中加入Fmoc-Lys(Boc)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(11)Fmoc-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(10)得到的树脂中加入Fmoc-Arg-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(12)Fmoc-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(11)得到的树脂中加入Fmoc-Leu-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(13)Fmoc-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(12)得到的树脂中加入Fmoc-Trp(Boc)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(14)Fmoc-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(13)得到的树脂中加入Fmoc-Glu(otbu)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(15)Fmoc-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(14)得到的树脂中加入Fmoc-Val-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(16)Fmoc-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(15)得到的树脂中加入Fmoc-Arg-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(17)Fmoc-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(16)得到的树脂中加入Fmoc-Glu(otbu)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(18)Fmoc-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(17)得到的树脂中加入Fmoc-Met-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(19)Fmoc-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(18)得到的树脂中加入Fmoc-Ser(tBu)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(20)Fmoc-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(19)得到的树脂中加入Fmoc-Asn-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(21)Fmoc-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(20)得到的树脂中加入Fmoc-Leu-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(22)
Fmoc-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(21)得到的树脂中加入Fmoc-His-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到(22)Fmoc-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(23)Fmoc-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂
将步骤(22)得到的树脂中加入Fmoc-Lys(Boc)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(24)Fmoc-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(23)得到的树脂中加入Fmoc-Gly-OH、HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(25)Fmoc-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(24)得到的树脂中加入Fmoc-Leu-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(26)Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(25)得到的树脂中加入Fmoc-Asn(Trt)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到
Fmoc-Asn-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(27)Fmoc-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(26)得到的树脂中加入Fmoc-His-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-His-Asn(Trt)
-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(28)Fmoc-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(27)得到的树脂中加入Fmoc-Met-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(29)Fmoc-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(28)得到的树脂中加入Fmoc-Leu-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(30)Fmoc-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(29)得到的树脂中加入Fmoc-Gln(Trt)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(31)Fmoc-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(30)得到的树脂中加入Fmoc-Ile-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Ile-Gln(Trt)
-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(32)Fmoc-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(31)得到的树脂中加入Fmoc-Glu(otbu)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到Fmoc-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(33)Fmoc-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)
-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(32)得到的树脂中加入Fmoc-Ser(tBu)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到
Fmoc-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(34)Fmoc-Val-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备
将步骤(33)得到的树脂中加入Fmoc-Val-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到
Fmoc-Val-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)
-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，
(35)Fmoc-Ser(tBu)-Val-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂的制备将步骤(34)得到的树脂中加入Fmoc-Ser(tBu)-OH，HOBT/DIC、HBTU/DIEA或
TBTU/DIEA，通入氮气反应，反应完毕，分别用DMF、DCM洗涤，得到
Fmoc-Ser(tBu)-Val-Ser(tBu)-Glu(otbu)-Ile-Gln(Trt)-Leu-Met-His-Asn(Trt)-Leu-Gly-Lys(Boc)
-His-Leu-Asn-Ser(tBu)-Met-Glu(otbu)-Arg-Val-Glu(otbu)-Trp-Leu-Arg-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Val-His-Asn(Trt)-Phe-树脂，用体积比为1:4的脱保护液进行脱保护，用DMF、DCM洗涤，再用甲醇洗涤收缩，氮气吹干，得到特立帕肽树脂。
4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：步骤如下：
接肽反应的温度为15-40℃，反应时间为1-4h。
5.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：步骤如下：
脱Fmoc反应的温度为15-35℃，反应时间为5-20min。
6.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：步骤如下：
反应液中，HBTU或TBTU的摩尔数为树脂的2-6倍，HOBT的摩尔数为树脂的2-6倍，六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为10-50％。
7.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：步骤如下：
所述加入切肽试剂包括如下步骤：将上述34肽加入切肽试剂配比为：TFA:EDT:水＝95:2.5:2.5，温度18-30℃，时间1-4h，过滤，滤液加2-7倍无水乙醚沉淀，获得粗肽。
8.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：步骤如下：
34肽在切肽试剂中的重量体积比为5-20ml/g。
9.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：进一步包括如下步骤：脱除树脂得到特立帕肽粗肽。
10.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于：进一步包括如下步骤：将获得的特立帕肽粗肽干燥称重后用水溶解，经C18或C8柱纯化，流动相：TFA:水＝1:1000，流速为100-650ml/min，检测波长为214nm，用HPLC跟踪收集所需要的流出液，然后采用常规的方法冻干，获得特立帕肽。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510005427.5A CN104530218A (zh) | 2015-01-07 | 2015-01-07 | 一种特立帕肽的固相合成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510005427.5A CN104530218A (zh) | 2015-01-07 | 2015-01-07 | 一种特立帕肽的固相合成方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104530218A true CN104530218A (zh) | 2015-04-22 |
Family
ID=52845880
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510005427.5A Pending CN104530218A (zh) | 2015-01-07 | 2015-01-07 | 一种特立帕肽的固相合成方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104530218A (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104910269A (zh) * | 2015-06-02 | 2015-09-16 | 成都圣诺生物科技股份有限公司 | 一种合成特立帕肽的方法 |
| CN105384809A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-09 | 济南康和医药科技有限公司 | 一种片段法固液结合制备特立帕肽的方法 |
| CN105669833A (zh) * | 2016-04-15 | 2016-06-15 | 天津商业大学 | Ace抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法 |
| CN105859836A (zh) * | 2016-04-15 | 2016-08-17 | 天津商业大学 | Ace抑制十肽的赖氨酸甲基化衍生物及其制备方法 |
| CN107501408A (zh) * | 2017-09-22 | 2017-12-22 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| CN109096388A (zh) * | 2017-07-24 | 2018-12-28 | 江苏金斯瑞生物科技有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| CN109879954A (zh) * | 2019-03-27 | 2019-06-14 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种特立帕肽的合成方法 |
| CN111057139A (zh) * | 2018-10-17 | 2020-04-24 | 南京华威医药科技集团有限公司 | 一种制备特立帕肽的新工艺 |
| WO2021114787A1 (zh) * | 2019-12-10 | 2021-06-17 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特立帕肽杂质f的合成方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103467595A (zh) * | 2013-09-06 | 2013-12-25 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| CN104017064A (zh) * | 2014-06-13 | 2014-09-03 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备特立帕肽的方法 |
| CN104211777A (zh) * | 2013-05-30 | 2014-12-17 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种皮卡那肽的制备方法 |
-
2015
- 2015-01-07 CN CN201510005427.5A patent/CN104530218A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104211777A (zh) * | 2013-05-30 | 2014-12-17 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种皮卡那肽的制备方法 |
| CN103467595A (zh) * | 2013-09-06 | 2013-12-25 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| CN104017064A (zh) * | 2014-06-13 | 2014-09-03 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备特立帕肽的方法 |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104910269A (zh) * | 2015-06-02 | 2015-09-16 | 成都圣诺生物科技股份有限公司 | 一种合成特立帕肽的方法 |
| CN104910269B (zh) * | 2015-06-02 | 2018-08-17 | 成都圣诺生物科技股份有限公司 | 一种合成特立帕肽的方法 |
| CN105384809A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-09 | 济南康和医药科技有限公司 | 一种片段法固液结合制备特立帕肽的方法 |
| CN105384809B (zh) * | 2015-12-30 | 2019-05-14 | 济南康和医药科技有限公司 | 一种片段法固液结合制备特立帕肽的方法 |
| CN105669833A (zh) * | 2016-04-15 | 2016-06-15 | 天津商业大学 | Ace抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法 |
| CN105859836A (zh) * | 2016-04-15 | 2016-08-17 | 天津商业大学 | Ace抑制十肽的赖氨酸甲基化衍生物及其制备方法 |
| CN109096388A (zh) * | 2017-07-24 | 2018-12-28 | 江苏金斯瑞生物科技有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| CN107501408A (zh) * | 2017-09-22 | 2017-12-22 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| CN107501408B (zh) * | 2017-09-22 | 2021-11-02 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| CN111057139A (zh) * | 2018-10-17 | 2020-04-24 | 南京华威医药科技集团有限公司 | 一种制备特立帕肽的新工艺 |
| CN111057139B (zh) * | 2018-10-17 | 2023-12-22 | 南京华威医药科技集团有限公司 | 一种制备特立帕肽的新工艺 |
| CN109879954A (zh) * | 2019-03-27 | 2019-06-14 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种特立帕肽的合成方法 |
| CN109879954B (zh) * | 2019-03-27 | 2023-03-31 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种特立帕肽的合成方法 |
| WO2021114787A1 (zh) * | 2019-12-10 | 2021-06-17 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特立帕肽杂质f的合成方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104530218A (zh) | 一种特立帕肽的固相合成方法 | |
| CN102286092B (zh) | 利拉鲁肽的固相合成方法 | |
| CN104650219B (zh) | 片段缩合制备利拉鲁肽的方法 | |
| CN101033249B (zh) | 固相多肽合成比筏芦定的制备方法 | |
| CN109627317A (zh) | 片段缩合制备索马鲁肽的方法 | |
| CN102875655B (zh) | 一种合成利那洛肽的方法 | |
| CN106928343A (zh) | 索玛鲁肽的制备方法 | |
| CN103864918A (zh) | 一种利拉鲁肽的固相合成方法 | |
| CN102875665A (zh) | 一种合成利拉鲁肽的方法 | |
| CN101104638B (zh) | 胸腺素α1的固相合成工艺 | |
| CN102731643A (zh) | 一种治疗骨质疏松多肽的制备方法 | |
| CN103497245A (zh) | 一种合成胸腺法新的方法 | |
| CN103145828A (zh) | 一种利拉鲁肽的全固相合成方法 | |
| CN113880936B (zh) | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 | |
| CN103588863A (zh) | Rgd环肽合成制备工艺 | |
| CN101357938A (zh) | 固相多肽合成Exenatide的制备方法 | |
| CN106554391B (zh) | 一种海洋生物肽Xen2174的合成方法 | |
| CN101519444B (zh) | 一种制备奈西利肽的方法 | |
| CN105001307B (zh) | 一种溶解难溶多肽的偶联肽链及其在液相色谱中分离纯化的应用 | |
| CN102532302A (zh) | 自然偶联法制备艾塞那肽的方法 | |
| CN106478805A (zh) | 一种glp-1衍生物的制备方法 | |
| CN101857629A (zh) | 布雷默浪丹的固相合成方法 | |
| CN109306366B (zh) | 一种合成pt141的方法 | |
| CN105037496A (zh) | 一种依替巴肽的制备方法 | |
| CN104761619A (zh) | 醋酸去氨加压素的固相制备工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150422 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |