CN105669833A - Ace抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法 - Google Patents

Ace抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105669833A
CN105669833A CN201610239395.XA CN201610239395A CN105669833A CN 105669833 A CN105669833 A CN 105669833A CN 201610239395 A CN201610239395 A CN 201610239395A CN 105669833 A CN105669833 A CN 105669833A
Authority
CN
China
Prior art keywords
decapeptide
aminoacid
tyr
phenylalanine
derivative
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610239395.XA
Other languages
English (en)
Inventor
薛璐
胡志和
王会
王晓丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin University of Commerce
Original Assignee
Tianjin University of Commerce
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin University of Commerce filed Critical Tianjin University of Commerce
Priority to CN201610239395.XA priority Critical patent/CN105669833A/zh
Publication of CN105669833A publication Critical patent/CN105669833A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种ACE抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法。本发明ACE抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物，其命名为YQKF(Me)PQYLQY，其氨基酸序列为Tyr-Gln-Lys-Phe(Me)-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr。本发明制备方法如下：称取1g王树脂放入反应器中，加入二氯甲烷溶胀，加入序列中第一个氨基酸：1mmol当量的L型酪氨酸；添加试剂鼓泡反应后洗净，然后依次Gln、Lys、Phe(Me)、Pro、Gln、Tyr、Leu、Gln、L-Tyr，反应结束后得到粗肽产物，最后用高效液相色谱将粗肽提纯至90％纯以上。本发明在保持ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的降血压活性的同时，提高了其热稳定性、酸碱稳定性和消化稳定性，以便于该ACE抑制十肽在工业化的生产及流通环节中能够保持其活性。

Description

ACE抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体的说是涉及利用甲基化技术对提取自酪蛋白的ACE抑制十肽YQKFPQYLQY进行修饰，从而提高该多肽的稳定性。
背景技术
随着现代社会发展的不断进步，生活节奏的不断加快，生活方式也随之发生了很大变化，高脂高糖高盐食物的摄入越来越多，运动量却逐渐减少，这种不良的生活方式导致高血压患病率逐年增加，且呈现一定的年轻化趋势。
高血压有原发性高血压和继发性高血压两种类型。原发性高血压患者占总高血压患者的95％以上，由原发性高血压所引起的脑卒中、冠心病等，在总患病率和总死亡率中所占的比例日益增高。高血压发病期间，人们往往会服用一些辅助性降压药，目前，常用的降压药主要有受体阻滞剂、利尿降压药、钙通道阻滞剂(CCB)、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)等。这些降压药物在一定程度上确实起到了降压的作用，但同时也会给服药者带来很大的毒副作用。例如利尿降压药可能会造成患者血糖、血胆固醇、血尿酸和甘油三酯升高及血清钾降低等危害。β-受体阻滞剂会引起眩晕、疲惫、嗜睡、胃肠紊乱(恶心、腹泻)等，还可以引起严重的心动过缓、诱发急性心力衰竭或支气管哮喘、四肢冷厥及雷诺现象等。
人们发现通过水解某些食品蛋白质可以得到具有降压效果的多肽，这种来源于天然食品的ACE(angiotensinconvertingenzyme)抑制肽具有更高的安全性，而且对正常血压无降压作用，因此成为了目前预防和治疗高血压最具开发价值的产品之一。
在食源性生物活性肽中，又以乳源生物活性肽作用显著。它是指与乳中某些蛋白质肽链的某些片段相同或相似，在乳中固有的或在乳蛋白降解过程中产生的具有生物活性的肽类。随着不同功能的乳源性活性肽的发现，对乳蛋白质的研究已成为生理学界和营养学界的研究热点。
酪蛋白(casein)是乳中含量最丰富的蛋白质，在其大分子中含有多种具有生物活性的小分子片段，在不同蛋白酶的作用下，可释放出具有不同功能的分子片段，ACE抑制肽就是其中的一种。近年来国内外研究结果表明，当乳中酪蛋白在生物体内或食品加工过程中用酶消化时，可以产生大量ACE抑制肽，这些ACE抑制肽具有无副作用、安全性高和易吸收等优点。
本课题组前期通过对酪蛋白进行胃蛋白酶及胰蛋白酶水解，从水解产物中分离纯化得到具有ACE抑制活性的片段，并对其进行测序，得到的ACE抑制肽序列为YQKFPQYLQY。(具体过程参看专利CN103275176A)
N-甲基-α-氨基酸是很多具有生物活性生物天然产物的重要组成部分。对α-氨基酸的N-甲基化修饰会影响多肽与受体的相互作用，和没经过甲基化修饰的前体相比生物活性可能会发生改变。同时，包含N-甲基氨基酸的多肽类似物具有更高的抗蛋白酶降解能力。因此，N-甲基氨基酸常作为氨基酸和多肽衍生物构象研究的工具。
发明内容
本发明的目的是克服上述现有传统方案方法上存在的不足，提供一种更为快捷、纯度更高的ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法。
为实现本发明的目的所采用的技术方案如下：
一种ACE抑制十肽(YQKFPQYLQY)的苯丙氨酸甲基化衍生物的制备方法，按照下述步骤进行：
1)称取1g王树脂放入反应器中，加入二氯甲烷溶胀半小时，然后抽掉二氯甲烷，加入序列中第一个氨基酸：1mmol当量的L型酪氨酸，1mmol的N,N-二异丙基碳二亚胺；1mmol的4-二甲氨基吡啶，加入6-10ml的富马酸二甲脂溶液，用氮气鼓泡反应3h；然后加入1ml吡啶，1ml乙酸酐，反应半小时，抽掉反应液，用二甲基甲酰胺、二氯甲烷洗净；
2)加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；
3)向反应器中加入序列中第二个氨基酸Gln3mmol，3mmol1-羟基苯并三氮唑及N,N-二异丙基碳二亚胺，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用二甲基甲酰胺洗净，茚三酮检测；
4)依步骤2、3的方式依次加入序列中氨基酸Lys、Phe(Me)、Pro、Gln、Tyr、Leu、Gln、L-Tyr，直至最后L-Tyr反应结束，其中第四个氨基酸为甲基化苯丙氨酸Phe(Me)；
5)加6-10ml的95％三氟乙酸切割液，震荡反应2h，将氨基酸的侧链保护基团裂解下来，得到粗肽产物；
6)分析提纯和质谱检测：用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪检测该序列分子量的正确性，用高效液相色谱将粗肽提纯至90％纯以上；
7)收集纯化好的目标多肽溶液放入冻干机中进行浓缩冻干，冻干成白色粉末得到ACE抑制肽YQKFPQYLQY的苯丙氨酸甲基化衍生物。
所述ACE抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物：其特征是，其命名为YQKF(Me)PQYLQY，其氨基酸序列为Tyr-Gln-Lys-Phe(Me)-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr。
相对于现有技术,本发明具有如下有益效果：
1.本发明是在前期研究所获得的酪蛋白源ACE抑制十肽α2f(98-107)：YQKFPQYLQY的基础上，对序列上的苯丙氨酸进行甲基化修饰得到的新的ACE抑制十肽YQKF(Me)PQYLQY。经体外实验和体内实验证实，该多肽具有抑制血管紧张素转换酶的活力和降血压功能。
2.在ACE抑制十肽的甲基化修饰衍生物YQKF(Me)PQYLQY的制备上，不采用水解蛋白——纯化多肽——基团修饰这一传统技术路线，而是采用固相合成技术进行化学合成，其中赖氨酸先甲基化修饰，而后再连接到多肽序列上。
3.本发明的活性多肽YQKF(Me)PQYLQY的热稳定性、酸碱稳定性和消化稳定性较原序列均有所提高。稳定性的提高，使得修饰后的ACE抑制十肽在生产加工、贮藏、运输和销售的过程中性质更加稳定，因而更适合开发为保健食品或药物。同时，修饰后的ACE抑制十肽酸碱稳定性和消化稳定性更好，使其在消化道内更不易被人体消化酶所降解，从而能够稳定发挥降血压的作用。
4.本发明的ACE抑制十肽的甲基化修饰衍生物YQK(Me)FPQYLQY制备方法简单，易于提纯，纯度高。
附图说明
图1所示为ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的ACE抑制率；
图2所示为ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的苯丙氨酸甲基化修饰衍生物YQKF(Me)PQYLQY的ACE抑制率；
图3所示为灌胃ACE抑制十肽YQKFPQYLQY对SHR大鼠血压的影响；
图4所示为灌胃ACE抑制十肽YQKFPQYLQY对Wistar大鼠血压的影响；
图5所示为灌胃ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的苯丙氨酸甲基化修饰衍生物YQKF(Me)PQYLQY对SHR大鼠血压的影响；
图6所示为灌胃ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的苯丙氨酸甲基化修饰衍生物YQKF(Me)PQYLQY对Wistar大鼠血压的影响；
图7所示为ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的热稳定性结果；
图8所示为ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的的苯丙氨酸甲基化修饰衍生物YQKF(Me)PQYLQY的热稳定性结果；
图9所示为ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的酸碱稳定性结果；
图10所示为ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的的苯丙氨酸甲基化修饰衍生物YQKF(Me)PQYLQY的酸碱稳定性结果；
图11所示为ACE抑制十肽YQKFPQYLQY模拟胃液消化稳定性结果；
图12所示为ACE抑制十肽YQKFPQYLQY模拟肠液消化稳定性结果；
图13所示为ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的的苯丙氨酸甲基化修饰衍生物YQKF(Me)PQYLQY的模拟胃液消化稳定性结果；
图14所示为ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的的苯丙氨酸甲基化修饰衍生物YQKF(Me)PQYLQY的模拟肠液消化稳定性结果。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1：ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的苯丙氨酸甲基化衍生物的制备
1.称取1g王树脂放入反应器中，加入二氯甲烷溶胀半小时，然后抽掉二氯甲烷，加入序列中第一个氨基酸：1mmol当量的L型酪氨酸，1mmol的N,N-二异丙基碳二亚胺；1mmol的4-二甲氨基吡啶，加入6-10ml的富马酸二甲脂溶液，用氮气鼓泡反应3h；然后加入1ml吡啶，1ml乙酸酐，反应半小时，抽掉反应液，用二甲基甲酰胺、二氯甲烷洗净；
2.加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；
3.向反应器中加入序列中第二个氨基酸Gln3mmol，3mmol1-羟基苯并三氮唑及N,N-二异丙基碳二亚胺，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用二甲基甲酰胺洗净，茚三酮检测；
4.依步骤2、3的方式依次加入序列中第三个氨基酸Lys、第四个氨基酸Phe(Me)、第五个氨基酸Pro、第六个氨基酸Gln、第七个氨基酸Tyr、第八个氨基酸Leu、第九个氨基酸Gln、第十个氨基酸L-Tyr，直至最后L-Tyr反应结束，其中第四个氨基酸为甲基化苯丙氨酸Phe(Me)；
具体步骤为：a.加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；向反应器中加入序列中第三个氨基酸：3mmolLys，3mmol1-羟基苯并三氮唑及DIC，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用DMF洗净，茚三酮检测；
b.加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；向反应器中加入序列中第四个氨基酸：3mmolPhe(Me)，3mmol1-羟基苯并三氮唑及DIC，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用DMF洗净，茚三酮检测；
c.加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；向反应器中加入序列中第五个氨基酸：3mmolPro，3mmol1-羟基苯并三氮唑及DIC，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用DMF洗净，茚三酮检测；
d.加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；向反应器中加入序列中第六个氨基酸：3mmolGln，3mmol1-羟基苯并三氮唑及DIC，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用DMF洗净，茚三酮检测；
e.加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；向反应器中加入序列中第七个氨基酸：3mmolTyr，3mmol1-羟基苯并三氮唑及DIC，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用DMF洗净，茚三酮检测；
f.加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；向反应器中加入序列中第八个氨基酸：3mmolLeu，3mmol1-羟基苯并三氮唑及DIC，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用DMF洗净，茚三酮检测；
g.加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；向反应器中加入序列中第九个氨基酸：3mmolGln，3mmol1-羟基苯并三氮唑及DIC，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用DMF洗净，茚三酮检测；
h.加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；向反应器中加入序列中第十个氨基酸：3mmolL-Tyr，3mmol1-羟基苯并三氮唑及DIC，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用DMF洗净，茚三酮检测；
5.加6-10ml的95％三氟乙酸切割液，震荡反应2h，将氨基酸的侧链保护基团裂解下来，得到粗肽产物；
6.分析提纯和质谱检测：用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪检测该序列分子量的正确性，用高效液相色谱将粗肽提纯至90％纯以上；
7.收集纯化好的目标多肽溶液放入冻干机中进行浓缩冻干，冻干成白色粉末得到ACE抑制肽YQKFPQYLQY的苯丙氨酸甲基化衍生物。
实验例1
紫外分光光度法测定ACE抑制十肽体外活性的具体步骤如下：
取5mmol/LHHL溶液200μL与100μLACE抑制十肽混合，置于37℃水浴中，预热5min，加入0.1U/mLACE溶液20μL，于37℃恒温水浴中反应30min；然后，向反应体系中加入1mol/LHCl溶液250μL以终止反应。再加入1.7mL，经15s振荡混匀后离心(4000r/min，15min，4℃)，吸取1.0mL乙酸乙酯层，在120℃的烘箱中经30min蒸干，再将它重新溶于3mL的去离子水中，在波长228nm处测定吸光度。
由公式计算ACE抑制十肽的抑制率，其中A代表反应中ACE抑制剂与ACE同时存在下的吸光度；B代表反应中不加抑制剂时的吸光度，即对照；C代表ACE和HHL空白反应的吸光度，即空白。
采用上述的紫外分光光度法测定ACE抑制十肽YQKFPQYLQY及其两种甲基化修饰衍生物的体外活性，其结果如图1-2所示
由图1所拟合的一元二次方程y＝-0.0004x2+0.0392x-0.0047(R2＝0.9687)，经过计算可得出ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的IC50值为15.25μg/mL。
由图2所拟合的一元二次回归方程为y＝-0.0003x2+0.0375x-0.0842(R2＝0.9853)，经过计算可得出ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的苯丙氨酸甲基化衍生物YQKF(Me)PQYLQY的IC50值为18.24μg/mL。
实验例2：
用合成的ACE抑制十肽YQKFPQYLQY及苯丙氨酸甲基化衍生物YQKF(Me)PQYLQY灌胃原发性高血压大鼠(SHR)检测其对SHR大鼠血压的影响。选用12周龄的雄性SHR大鼠32只，体重为(260±15)g,自由采食饮水，保持环境温度(23±1)℃，相对湿度60％±5％，预饲养一周。将大鼠随机分为4组，每组8只，分别为空白组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，分别灌胃生理盐水(10mL/Kgmb)、低、中、高剂量的合成产物(相对应的灌胃剂量为1、3、9mg/Kgmb),另取Wistar大鼠10只，随机分为2组，每组5只，分别作为空白组和正常对照组，灌胃生理盐水和高剂量的合成产物。采用BP-2006A型只能无创血压计(北京软隆科技有限责任公司)，测定大鼠的尾动脉收缩压(SBP)。测定前，将大鼠固定于鼠网保温套中于39℃恒温预热，使大鼠的尾动脉扩张，血流畅通。测定灌胃后1-8h的尾动脉血压，连续测定3次，取平均值。其对血压的影响如图3-6所示。
由图3和图5可以看出，ACE抑制十肽YQKFPQYLQY和苯丙氨酸甲基化衍生物YQKF(Me)PQYLQY对原发性高血压大鼠(SHR)均具有很好的降血压作用，与空白组相比具有显著性差异(P<0.05)，由图4和图6可知，ACE抑制十肽YQKFPQYLQY和苯丙氨酸甲基化衍生物YQKF(Me)PQYLQY对正常大鼠(Wistar大鼠)血压无影响(P>0.05)。
因此，无论体外还是体内实验，ACE抑制十肽YQKFPQYLQY和两种甲基化衍生物均有较好的降血压作用，经过甲基化修饰后的肽片段的体外ACE抑制活性略有下降但体内降压效果持平。
实验例3
精确称取一定量样品配置成相同浓度，分别在4、20、37、60、80℃条件下保温60min，然后分别测定ACE抑制十肽YQKFPQYLQY及苯丙氨酸甲基化衍生物YQKF(Me)PQYLQY的ACE抑制率，其结果如图7-8所示。YQKFPQYLQY及苯丙氨酸甲基化衍生物YQKF(Me)PQYLQY具有较好的耐热稳定性，由图10-12可以看出甲基化衍生物的ACE抑制率波动幅度比原序列更小，经甲基化修饰后温度稳定性有所提高。
精确称取一定量样品用pH值分别为1、3、5、7、9、11的磷酸缓冲溶液配制成相同浓度，在4℃条件下分别放置0h、1h、2h、3h，然后分别测定ACE抑制十肽YQKFPQYLQY及苯丙氨酸甲基化衍生物YQKF(Me)PQYLQY的ACE抑制率，其结果如图9-10所示。ACE抑制率均呈现下降趋势，强酸强碱条件下的样品的抑制率下降较为明显；酪蛋白源ACE抑制十肽YQKFPQYLQY在偏中性的条件下活性稳定性最强，强酸强碱条件下的活性损失较为明显，尤其是pH1条件下处理处理3h后与0h相比ACE抑制活性下降最为明显且具有显著性差异，经甲基化修饰后酸碱稳定性均有所提高，苯丙氨酸甲基化修饰衍生物则是在酸性条件下ACE抑制活性比原序列YQKFPQYLQY更稳定。
根据中国药典第五部的要求，配制人工胃肠液。取人工胃液和人工肠液溶解ACE抑制十肽成一定浓度。经过人工胃液处理的样品于37℃条件下放置0h、1h和2h，人工肠液处理的样品于37℃条件下放置0h和4h，然后10000r/min，4℃条件下离心20min，取上清液，测定上清液的ACE抑制活性，其结果如图11-12所示,ACE抑制十肽YQKFPQYLQY及苯丙氨酸甲基化衍生物YQKF(Me)PQYLQY经胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后抑制率略有下降，其结果如图13-14所示，但活性差异不显著(P>0.05)，说明ACE抑制十肽YQKFPQYLQY及苯丙氨酸甲基化衍生物YQKF(Me)PQYLQY具有良好的耐胃蛋白酶及胰蛋白酶消化稳定性。
由实验例1和实验例2可知原ACE抑制十肽YQKFPQYLQY经苯丙氨酸甲基化修饰之后体内外的抑制活性均略有下降，但降压效果与原序列相比几乎是持平的；在这样的情况下再看实验例3可知ACE抑制十肽YQKFPQYLQY经苯丙氨酸甲基化修饰后稳定性均有所提高，尤其是酸碱稳定性提高较为明显。

Claims (2)

1.一种ACE抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物的制备方法，其特征是，按照下述步骤进行：
1)称取1g王树脂放入反应器中，加入二氯甲烷溶胀半小时，然后抽掉二氯甲烷，加入序列中第一个氨基酸：1mmol当量的L型酪氨酸，1mmol的N,N-二异丙基碳二亚胺；1mmol的4-二甲氨基吡啶，加入6-10ml的富马酸二甲脂溶液，用氮气鼓泡反应3h；然后加入1ml吡啶，1ml乙酸酐，反应半小时，抽掉反应液，用二甲基甲酰胺、二氯甲烷洗净；
2)加入6-10ml哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，茚三酮检测；
3)向反应器中加入序列中第二个氨基酸Gln3mmol，3mmol1-羟基苯并三氮唑及N,N-二异丙基碳二亚胺，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用二甲基甲酰胺洗净，茚三酮检测；
4)依步骤2、3的方式依次加入序列中第三个氨基酸Lys、第四个氨基酸Phe(Me)、第五个氨基酸Pro、第六个氨基酸Gln、第七个氨基酸Tyr、第八个氨基酸Leu、第九个氨基酸Gln、第十个氨基酸L-Tyr，直至最后L-Tyr反应结束，其中第四个氨基酸为甲基化苯丙氨酸Phe(Me)；
5)加6-10ml的95％三氟乙酸切割液，震荡反应2h，将氨基酸的侧链保护基团裂解下来，得到粗肽产物；
6)分析提纯和质谱检测：用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪检测该序列分子量的正确性，用高效液相色谱将粗肽提纯至90％纯以上；
7)收集纯化好的目标多肽溶液放入冻干机中进行浓缩冻干，冻干成白色粉末得到ACE抑制肽YQKFPQYLQY的苯丙氨酸甲基化衍生物。
2.一种如权利要求1方法得到的ACE抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物：其特征是，其命名为YQKF(Me)PQYLQY，其氨基酸序列为Tyr-Gln-Lys-Phe(Me)-Pro-Gln-Tyr-Leu-Gln-Tyr。
CN201610239395.XA 2016-04-15 2016-04-15 Ace抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法 Pending CN105669833A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610239395.XA CN105669833A (zh) 2016-04-15 2016-04-15 Ace抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610239395.XA CN105669833A (zh) 2016-04-15 2016-04-15 Ace抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105669833A true CN105669833A (zh) 2016-06-15

Family

ID=56309084

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610239395.XA Pending CN105669833A (zh) 2016-04-15 2016-04-15 Ace抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105669833A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110922334A (zh) * 2019-11-28 2020-03-27 西安戴森电子技术有限公司 一种茚三酮有机激光材料及其制备方法
WO2021136521A1 (zh) * 2020-01-02 2021-07-08 东莞市东阳光生物药研发有限公司 多肽及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103275176A (zh) * 2013-06-18 2013-09-04 天津商业大学 一种ace抑制肽及其制备方法
CN104530218A (zh) * 2015-01-07 2015-04-22 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 一种特立帕肽的固相合成方法
CN105085619A (zh) * 2015-06-18 2015-11-25 浙江海洋学院 一种缢蛏活性十肽及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103275176A (zh) * 2013-06-18 2013-09-04 天津商业大学 一种ace抑制肽及其制备方法
CN104530218A (zh) * 2015-01-07 2015-04-22 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 一种特立帕肽的固相合成方法
CN105085619A (zh) * 2015-06-18 2015-11-25 浙江海洋学院 一种缢蛏活性十肽及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王会: "甲基化修饰对 ACE 抑制肽活性影响的研究", 《天津商业大学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110922334A (zh) * 2019-11-28 2020-03-27 西安戴森电子技术有限公司 一种茚三酮有机激光材料及其制备方法
WO2021136521A1 (zh) * 2020-01-02 2021-07-08 东莞市东阳光生物药研发有限公司 多肽及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Liu et al. Exploration of the molecular interactions between angiotensin-I-converting enzyme (ACE) and the inhibitory peptides derived from hazelnut (Corylus heterophylla Fisch.)
CA2526891C (en) Angiotensin-converting enzyme inhibitory peptides
US10575537B2 (en) Saury Maillard peptide and its preparation method and application
JP5048487B2 (ja) 抗高血圧性機能性食品
WO2013097274A1 (zh) 一种活性小分子阿胶的混合物及其制备方法和应用
CN106831980A (zh) Dpp‑4抑制剂
CN101022737B (zh) 抗高血压的功能性食品
CN108484723A (zh) 浒苔来源的血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法和应用
JPWO2014092150A1 (ja) 筋芽細胞分化促進剤
CN105669833A (zh) Ace抑制十肽的苯丙氨酸甲基化衍生物及其制备方法
CN107698659A (zh) 经蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ‑葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法
CN108840909B (zh) 一种紫菜降压肽和紫菜降压肽提取物及应用
CN100580088C (zh) 一种酶法水解酪蛋白同时制备磷酸肽和非磷酸肽的方法
AU2008230460A1 (en) Preventive or therapeutic composition for liver disease
CN105859836A (zh) Ace抑制十肽的赖氨酸甲基化衍生物及其制备方法
CN101289685A (zh) 酶法水解蛋白制备磷酸肽和非磷酸肽的方法
CN114409731B (zh) 同时具有激活乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶活性的两种多肽
TWI394577B (zh) A method for preparing a hypotensive active hydrolyzate with chicken blood
CN114773432A (zh) 具有降压活性的龙须菜多肽、制备方法及应用
CN114790227A (zh) 以龙须菜为原料的活性多肽、制备方法及应用
JP2003192607A (ja) 降圧ジペプチド
JPH0262828A (ja) 新規ベプチドおよびこれを含有する降圧剤
CN114773431A (zh) 龙须菜ace抑制肽、制备方法及应用
JP3992143B2 (ja) 新規生理活性ペプチド
CN117919377A (zh) 水解酪蛋白寡肽及其在辅助降血压中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160615

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication