CN104513282A

CN104513282A - 一种不可萃取多酚的制备方法

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Publication number: CN104513282A
Application number: CN201310458972.0A
Authority: CN
Inventors: 贾传龙
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2013-10-07
Filing date: 2013-10-07
Publication date: 2015-04-15

Abstract

本发明涉及一种不可萃取多酚的制备方法，属于食品深加工技术领域。包括下述步骤：将果蔬打浆后与质量浓度为50%-60%乙醇按照1g:2-6ml比例混匀，然后超声萃取，离心分离后收集果蔬残渣；向果蔬残渣中加2.3-2.9mol/L的NaOH溶液，加热至40-45℃浸泡30-40min后进行超声萃取，然后离心分离、收集上清液，得不可萃取多酚粗提液；不可萃取多酚粗提液用丁醇萃取，得不可萃取多酚萃取液；将不可萃取多酚萃取液用大孔树脂纯化、干燥，得不可萃取多酚冻干粉。本发明具备具有操作步骤简单、工艺条件要求低、安全性较高、生产成本低、收率高的优点；所获得的不可萃取多酚纯度高。

Description

一种不可萃取多酚的制备方法

技术领域

本发明涉及一种不可萃取多酚的制备方法，属于食品深加工技术领域。

技术背景

多酚的萃取分离方法很多，由于其组成复杂，聚合度不同，以及原料结构性质的差异等诸多因素影响，到目前没有一种方法完全适于所有多酚的萃取。常用的萃取溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸、丁醇、丁醇、水等。目前对果蔬中多酚的研究主要集中在可萃取多酚(extractable/soluble polyphenols)，而很少关注不可萃取多酚(non-extractable/insoluble polyphenols)，在大多文献包括外文文献中有关总多酚含量的概念也仅仅是指可萃取部分，而忽略了不可萃取部分，实际上总多酚含量是指可萃取多酚与不可萃取多酚的总和，这正是目前从事活性成分提取的科研工作者所忽视的。Arranz等指出不可萃取多酚主要指一些水合丹宁酸（hydrolyzable tannins）以及与纤维或蛋白结合的原花青素（proanthocyanindins），这需要通过化学或酶处理方法将多酚从细胞壁上分离出来。

实际上有关不可萃取多酚早在1973年就有研究，但由于缺乏合适的分析研究方法，一直没有引起人们的注意。从2007年，西班牙Saura-Calixto领导的研究小组开始关注并研究不可萃取多酚，以谷类、蔬菜、豆类、水果、坚果为实验材料，研究表明这些材料中含有大量的不可萃取多酚，其含量远远超过可萃取多酚，其中苹果、桃子及油桃中不可萃取的多酚含量是可萃取多酚的5倍以上。Madhujith等采用碱水解的方式研究了大麦中可萃取和不可萃取多酚的含量及其抗氧化性，结果表明不可萃取多酚的含量远远高于可萃取多酚，相应的不可萃取多酚的抗氧化性也明显高于可萃取多酚。Kristl等研究指出，李子中的不可萃取多酚含量也远远高于可萃取多酚，在抗氧化作用中的贡献也远远大于可萃取部分。

目前从果蔬中提取不可萃取多酚是采用硫酸进行加热水解的方法。虽然有文献提出可以用NaOH进行碱水解的方法来提取不可萃取多酚；但是不可萃取多酚的收率和纯度仍有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种不可萃取多酚的制备方法；采用该方法提取的不可萃取多酚纯度和收率都明显提高。

本发明的技术方案：

一种不可萃取多酚的制备方法，包括下述步骤：

（1）将果蔬打浆后与质量浓度为50%-60%乙醇按照1g:2-6ml比例混匀，然后超声萃取，离心分离后收集果蔬残渣；

（2）向果蔬残渣中加2.3-2.9mol/L的NaOH溶液，加热至40-45℃浸泡30-40min后进行超声萃取，然后离心分离、收集上清液，得不可萃取多酚粗提液；果蔬残渣与NaOH水溶液的比例为1g：5-30ml；

（3）不可萃取多酚粗提液用丁醇萃取，得不可萃取多酚萃取液；

（4）将不可萃取多酚萃取液用大孔树脂纯化、干燥，得不可萃取多酚冻干粉。

步骤（1）和（2）中，超声萃取条件功率为200-500W，时间0.5-2h；离心条件：转速3000-5000r/min，时间10-20min。

所用果蔬为含有多酚的水果和蔬菜。

上述不可萃取多酚的制备方法，优选的，步骤（3）采用下述方式完成：将不可萃取多酚粗提液与等体积的丁醇混合，加热至40℃-50℃，静置，待分层后收集下层液，浓缩至原体积的1/3-1/5，过滤，收集滤液，得不可萃取多酚萃取液。

上述不可萃取多酚的制备方法，优选的，步骤（4）采用下述方法完成：

首先，将不可萃取多酚萃取液用大孔树脂吸附；上样浓度为2-5.0mg/ml，上样流速为1.5-3m/min，上样体积为4-6倍柱体积；

然后，用蒸馏水洗去树脂表面的杂物；再用质量浓度60%-90%的乙醇水溶液进行洗脱并收集洗脱液；洗脱速率为1.5-3ml/min，洗脱体积为3-5倍柱体积；

最后，将洗脱液浓缩到原体积的1/3-1/5、过滤、将滤液冷冻干燥，得不可萃取多酚冻干粉。

上述不可萃取多酚的制备方法，优选的，在进行步骤（2）之前，将果蔬残渣在50-60℃条件下烘干，粉碎。

上述不可萃取多酚的制备方法，优选的，所述大孔树脂为HPD-100C。

有益效果：

1.与硫酸加热水解提取不可萃取多酚的方法相比较，本发明具备具有操作步骤简单、工艺条件要求低、安全性较高、生产成本低、收率高的优点；

2.所获得的不可萃取多酚纯度高。

具体实施方案

实施例1

选择新鲜、成熟的蓝莓为原料，剔除霉烂果、病虫果及杂质并在清水中除去泥沙及漂浮物。将沥干水后的蓝莓粉碎打浆，然后按照1：2.5（g/ml）的比例加入质量浓度50%乙醇水溶液，200W超声萃取2h，3000r/min离心20min。重复提取两次。

过滤后将获得的果渣45℃烘干，然后粉碎至60目。向果渣中按照1:10（g/mL）的料液比例加入2.5mol/L的NaOH溶液，将混合浆液在45℃条件下、200W超声萃取2h。然后3000r/min离心20min，过滤取上清液，即为不可萃取多酚粗提液。

按照1:1的体积比向上述不可萃取多酚粗提液中加入丁醇，40℃加热混匀，静置分层，收集下层分离液；重复萃取3次，合并下层分离液；然后浓缩至原体积的1/5，过滤，收集滤液。

选用HPD-100C大孔树脂在常温常压下对滤液进行吸附提纯，调整上样液的浓度为2.5mg/ml，上样速度和流出速度均为3ml/min，体积为4倍柱体积。吸附完成后，先用蒸馏水对吸附柱进行冲，洗直到流出液无色；然后使用60%的乙醇溶液进行解吸洗脱，洗脱流速为3ml/min，洗脱体积为3倍柱体积。解吸完成后收集洗脱液进行浓缩，浓缩至原体积的30%，再过滤，将滤液冷冻干燥成粉，即为粉状不可萃取多酚。用Folin-Ciocalteu法在765nm处测定多酚含量，测得其收率为41mg/g，纯度为47%。

实施例2

选择新鲜、成熟的蓝莓为原料，剔除霉烂果、病虫果及杂质并在清水中除去泥沙及漂浮物。将沥干水后的蓝莓粉碎打浆，然后按照1：6（g/ml）的比例加入质量浓度60%乙醇水溶液；500W超声萃取1h，5000r/min离心10min。重复提取两次。

过滤后将获得的果渣放烘箱中40℃烘干，然后粉碎至80目。向果渣中按照1:30（g/mL）的料液比例加入2.9mol/L的NaOH水溶液，将混合浆液在40℃条件下、500W超声萃取0.5h。然后5000r/min离心10min，过滤、取上清液，即为不可萃取多酚粗提液。

按照1:1的体积比向上述不可萃取多酚粗提液中加入丁醇，40℃加热混匀，静置分层，收集下层分离液；重复萃取3次，合并下层分离液；然后浓缩至原体积的1/3，过滤，收集滤液。

选用HPD-100C大孔树脂在常温常压下对滤液进行吸附提纯，调整上样液的浓度为5.0mg/ml，上样速度和流出速度均为5ml/3min，体积为6倍柱体积。吸附完成后，先用蒸馏水对吸附柱进行冲，洗直到流出液无色；然后使用质量浓度80%的乙醇溶液进行解吸洗脱，洗脱流速为5ml/3min，洗脱体积为5倍柱体积。解吸完成后收集洗脱液进行浓缩，浓缩至原体积的20%，再过滤，将滤液冷冻干燥成粉，即为粉状不可萃取多酚。使用Folin-Ciocalteu法在765nm条件下测定多酚含量，测得其收率为48mg/g，纯度为46%。

实施例3

选择新鲜、成熟的蓝莓为原料，剔除霉烂果、病虫果及杂质并在清水中除去泥沙及漂浮物。将沥干水后的蓝莓粉碎打浆，然后按照1：4（g/ml）的比例加入质量浓度50%乙醇水溶液，400W超声萃取1h，4000r/min离心15min。重复提取两次。

过滤后将获得的果渣40℃烘干，然后粉碎至100目。向果渣中按照1:20（g/mL）的料液比例加入2.3mol/L的NaOH溶液，将混合浆液在45℃条件下、500W超声萃取2h。然后4000r/min离心15min，过滤取上清液，即为不可萃取多酚粗提液。

选用HPD-100C大孔树脂在常温常压下对滤液进行吸附提纯，调整上样液的浓度为4.0mg/ml，上样速度和流出速度均为5ml/3min，体积为5倍柱体积。吸附完成后，先用蒸馏水对吸附柱进行冲，洗直到流出液无色；然后使用70%的乙醇溶液进行解吸洗脱，洗脱流速为5ml/3min，洗脱体积为5倍柱体积。解吸完成后收集洗脱液进行浓缩，浓缩至原体积的30%，再过滤，将滤液冷冻干燥成粉，即为粉状不可萃取多酚。使用Folin-Ciocalteu法在765nm条件下测定多酚含量，测得其收率为53mg/g，纯度为49%。

实施例4

过滤后将获得的果渣放烘箱中45℃烘干，然后粉碎至80目。向果渣中按照1:5（g/mL）的料液比例加入2.8mol/L的NaOH水溶液，将混合浆液在45℃条件下、500W超声萃取0.5h。然后5000r/min离心10min，过滤、取上清液，即为不可萃

选用HPD-100C大孔树脂在常温常压下对滤液进行吸附提纯，调整上样液的浓度为5.0mg/ml，上样速度和流出速度均为5ml/3min，体积为6倍柱体积。吸附完成后，先用蒸馏水对吸附柱进行冲，洗直到流出液无色；然后使用80%的乙醇溶液进行解吸洗脱，洗脱流速为5ml/3min，洗脱体积为5倍柱体积。解吸完成后收集洗脱液进行浓缩，浓缩至原体积的20%，再过滤，将滤液冷冻干燥成粉，即为粉状不可萃取多酚。使用Folin-Ciocalteu法在765nm条件下测定多酚含量，测得其收率为47mg/g，纯度为49%。

Claims

1.一种不可萃取多酚的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）和（2）中，超声萃取条件功率为200-500W，时间0.5-2h；离心条件：转速3000-5000r/min，时间10-20min。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）采用下述方式完成：将不可萃取多酚粗提液与等体积的丁醇混合，加热至40℃-50℃，静置，待分层后收集下层液，浓缩至原体积的1/3-1/5，过滤，收集滤液，得不可萃取多酚萃取液。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）采用下述方法完成：

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在进行步骤（2）之前，将果蔬残渣在50-60℃条件下烘干，粉碎。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂为HPD-100C。