CN104507453B - 含有丙酮酸盐的透明质酸制剂 - Google Patents

Abstract

可以使用丙酮酸盐以稳定透明质酸组合物。例如，这些组合物可以具有改善的热稳定性和/或储存稳定性。

Description

含有丙酮酸盐的透明质酸制剂

背景

皮肤衰老为一种渐进的现象，他随着时间的推移发生并且可受到生活方式因素(诸如饮酒、烟草使用和日光照射)的影响。面部皮肤衰老的特征为萎缩、松弛和发胖。萎缩对应于皮肤组织的厚度的大量减少。皮下组织的松弛可能导致皮肤过量和下垂并且导致面颊和眼睑的外观下垂。发胖是指通过面部和颈部的底部肿胀而引起的过量体重的增加。这些变化通常与干燥、弹性丧失和粗糙肌理相关。

透明质烷(hyaluronan)，也称为透明质酸(hyaluronic acid)(HA)，广泛分布在整个人体的结缔组织和上皮组织中并且富于不同的皮肤层中，它在这些皮肤层中具有多重功能，诸如，确保优良的水合作用，有助于细胞外基质的组织，充当填充材料，以及参与组织修复机制。然而，随着年龄的增长，在皮肤中存在的HA、胶原、弹性蛋白和其它基质聚合物的量降低。例如，反复暴露于紫外光(如来自太阳)引起皮肤细胞降低其HA的产量以及增加HA降解的速率。该HA丧失可引起各种皮肤状况诸如，缺陷、瑕疵、疾病和/或病症等。例如，皮肤中的水含量和皮肤组织中的HA水平之间存在强的相关性。随着皮肤衰老，皮肤中HA的量和质量下降。这些变化导致皮肤的干燥和起皱。

皮肤填充物可用于治疗软组织病患和可用于其它皮肤治疗，因为填充物可替换丧失的内源基质聚合物，或增强/促进现有基质聚合物的功能，以便治疗这些皮肤状况。在过去，此类组合物已被用于美容应用以填补皱纹、纹理、皱褶、疤痕和增强皮肤组织，诸如，使薄唇丰满或填补凹眼或浅颊。一种常见的用于皮肤填充物组合物中的基质聚合物为HA。因为HA对人体来说为天然的，其通常具有良好的耐受性并且对多种皮肤状况的治疗具有相当低的风险。不幸的是，一些HA组合物对灭菌，诸如加热灭菌，不如可能期望的稳定。

概述

当掺入到透明质酸组合物中时，丙酮酸盐可以有助于稳定透明质酸和/或组合物中可能存在的其它添加剂。

一些实施方案包括包含以下的组合物：透明质酸和丙酮酸盐，其中所述透明质酸为交联的，所述组合物适合于用作皮肤填充物，并且所述组合物为对加热灭菌稳定的凝胶。

一些实施方案包括通过包含以下工艺制备的组合物：热处理包含交联的透明质酸和丙酮酸盐的凝胶。

一些实施方案包括包含本文描述的组合物的皮肤填充物制品。

一些实施方案包括改善皮肤填充物制品的热稳定性的方法，其包括形成包含丙酮酸盐和交联的透明质酸的组合的凝胶；其中所述丙酮酸盐有效改善凝胶的热稳定性。

附图简述

图1为一些实施例1的组合物当其在45℃储存60天时的挤压力的图。

图2为一些实施例1的组合物当其在45℃储存60天时的弹性模量的图。

图3为一些实施例1的组合物当其在45℃储存60天时的粘性模量的图。

图4为一些实施例1的组合物当其在45℃储存60天时的pH的图。

图5为一些实施例1的组合物当其在45℃储存60天时的挤压力的图。

图6为一些实施例1的组合物当其在45℃储存60天时的弹性模量的图。

图7为实施例1的组合物当其在45℃储存60天时的粘性模量的图

图8为实施例1的组合物当其在45℃储存60天时的tanδ的图。

详述

可以将丙酮酸盐，诸如，丙酮酸钠加入至透明质酸组合物以帮助稳定组合物。例如，加入丙酮酸钠或另一丙酮酸盐，可能对透明质酸凝胶(如灭菌和热稳定性)和制剂中存在的其它成分(诸如抗坏血酸磷酸钠或维生食物)的稳定性具有显著的影响。

透明质酸为增强水分保持和抵抗流体静应力的非硫酸化糖胺聚糖。其为无免疫原性的并且可以以多种方式进行化学改性。透明质酸可以在其羧酸基的pKa附近或高于其羧酸基的pKa的pH范围内为阴离子。除非清楚地指明，否则对本文透明质酸、透明质烷或HA的参考可以包括如下描述的其完全质子化的或非离子的形式、以及透明质酸的任何阴离子形式和盐，诸如钠盐、钾盐、锂盐、镁盐、钙盐等。

可以将任何合适量的HA用于组合物中，诸如约0.1％w/w至约5％w/w；约0.5％w/w至约3％w/w；约1％w/w至约2.5％w/w；约1％w/w至约2％w/w；约2％w/w至约3％w/w；约0.5％w/w；约0.6％；约1.2％w/w；约1.25％w/w；约1.3％w/w；约1.35％w/w；约1.4％w/w；约1.5％w/w；约1.75％w/w；约2％w/w；约2.4％w/w；约2.5％w/w；或任何这些值界定的或任何这些值之间的范围内的任何浓度。

HA可以具有任何合适的分子量，诸如约5,000Da至约20,000,000Da；约300,000Da至约800,000Da；或约2,000,000Da至约5,000,000Da的平均分子量。

在一些实施方案中，HA包含高分子量HA和低分子量HA，其中所述高分子量HA具有大于约2,000,000Da的分子量并且其中所述低分子量HA具有小于约1,000,000Da的分子量。

在一些组合物中，HA可以具有低分子量，如，约100,000Da、约200,000Da、约300,000Da、约400,000Da、约500,000Da、约600,000Da、约700,000Da、约800,000Da、约900,000Da、至多约100,000Da、至多约200,000Da、至多约300,000Da、至多约400,000Da、至多约500,000Da、至多约600,000Da、至多约700,000Da、至多约800,000Da、至多约900,000Da、至多约950,000Da、约100,000Da至约500,000Da、约200,000Da至约500,000Da、约300,000Da至约500,000Da、约400,000Da至约500,000Da、约500,000Da至约950,000Da、约600,000Da至约950,000Da、约700,000Da至约950,000Da、约800,000Da至约950,000Da、约300,000Da至约600,000Da、约300,000Da至约700,000Da、约300,000Da至约800,000Da或约400,000Da至约700,000Da。

在一些实施方案中，HA可以具有高分子量，诸如约1,000,000Da、约1,500,000Da、约2,000,000Da、约2,500,000Da、约3,000,000Da、约3,500,000Da、约4,000,000Da、约4,500,000Da、约5,000,000Da、至少约1,000,000Da、至少约1,500,000Da、至少约2,000,000Da、至少约2,500,000Da、至少约3,000,000Da、至少约3,500,000Da、至少约4,000,000Da、至少约4,500,000Da或至少约5,000,000Da、约1,000,000Da至约5,000,000Da、约1,500,000Da至约5,000,000Da、约2,000,000Da至约5,000,000Da、约2,500,000Da至约5,000,000Da、约2,000,000Da至约3,000,000Da、约2,500,000Da至约3,500,000Da或约2,000,000Da至约4,000,000Da。

HA可以为低分子量HA部分和高分子量HA部分的组合。高分子量HA部分包括平均分子量为约1,000,000Da或更高，诸如约1,500,000Da、约2,000,000Da、约2,500,000Da、约3,000,000Da、约3,500,000Da、约4,000,000Da、约4,500,000Da或约5,000,000Da的HA。低分子量HA部分包括平均分子量小于约1,000,000Da，诸如约200,000Da、约300,000Da、约400,000Da、约500,000Da、约600,000Da、约700,000Da、约800,000Da或约900,000Da的HA。

在包含低分子量HA部分和高分子量HA部分的HA组合物中，可以使用高分子量HA与低分子量HA的任何合适比率。在一些实施方案中，高分子量HA与低分子量HA的重量比率可以为约20、约15、约10、约5、约1、约0.07、约0.05、约0.2或约0.1。重量比率为商(重量高分子量HA)/(低分子量HA)。例如20g高分子量HA和1g低分子量HA的组合物的高分子量HA与低分子量HA的重量比率为20。

未交联的HA部分还可以改善HA组合物的流变性质以便改善皮肤状况的治疗。在该实施方案的方面，组合物包含未交联的HA，其中所述未交联的HA以如，约2mg/g、约3mg/g、约4mg/g、约5mg/g、约6mg/g、约7mg/g、约8mg/g、约9mg/g、约10mg/g、约11mg/g、约12mg/g、约13mg/g、约13.5mg/g、约14mg/g、约15mg/g、约16mg/g、约17mg/g、约18mg/g、约19mg/g、约20mg/g、约40mg/g、至少约1mg/g、至少约2mg/g、至少约3mg/g、至少约4mg/g、至少约5mg/g、至少约10mg/g、至少约15mg/g、至少约20mg/g、至少约25mg/g、至少约35mg/g、至多约1mg/g、至多约2mg/g、至多约3mg/g、至多约4mg/g、至多约5mg/g、至多约10mg/g、至多约15mg/g、至多约20mg/g、至多约25mg/g、约1mg/g至约40mg/g、约7.5mg/g至约19.5mg/g、约8.8mg/g至约19mg/g、约9mg/g至约18mg/g、约10mg/g至约17mg/g、约11mg/g至约16mg/g、或约12mg/g至约15mg/g的浓度存在。在一些实施方案中，交联的HA与未交联的HA的比率为约0.001至约100、约0.005至约20或约0.01至约0.05。

HA可以为交联的、部分交联的或基本上未交联的。在一些实施方案中，低分子量HA部分可以为交联的，低分子量HA部分可以为部分交联的，或低分子量HA部分可以为未交联的；以及高分子量HA部分可以为交联的，高分子量部分可以为部分交联的，或高分子量HA部分可以为未交联的。

交联的HA可以由两个或更多个单个HA分子直接地或通过连接部分连接产生。交联HA可以增加水性HA组合物的粘度，这可能导致水凝胶的形成。HA可以使用二醛或二硫化物交联剂交联，包括但不限于多功能的基于PEG的交联剂、二乙烯砜、二缩水甘油醚、双环氧化物和双碳二亚胺。交联剂的非限制性实例包括多功能的基于PEG的交联剂，像季戊四醇四缩水甘油醚(PETGE)、二乙烯砜(DVS)、1，4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)、1，2-双(2，3-环氧丙氧基)乙烯(EGDGE)、1，2，7，8-二环氧辛烷(DEO)、(亚苯基双-(乙基)-碳二亚胺和1，6六亚甲基双(乙基碳二亚胺).)、己二酸二酰肼(ADH)、双(磺基琥珀酰亚胺基)辛二酸酯(BS)、六亚甲基二胺(HMDA)、1-(2，3-环氧丙基)-2，3-环氧基环己烷或它们的组合。其它可用的交联剂公开于Stroumpoulis和Tezel，Tunably Crosslinked Polysaccharide Composition，US2011/0077737，其通过引用整体并入。交联HA的非限制性方法公开于，如，Piron和Tholin，Polysaccharide Crosslinking，Hydrogel Preparation，ResultingPolysaccharides(s)and Hydrogel(s)，uses Thereof，美国专利公布2003/0148995；Lebreton，Cross-Linking of Low and High Molecular Weight PolysaccharidesPreparation of Injectable Monophase Hydrogels；Lebreton，Viscoelastic SolutionsContaining Sodium Hyaluronate and Hydroxypropyl Methyl Cellulose，Preparationand Uses，美国专利公布2008/0089918；Lebreton，Hyaluronic Acid-Based GelsIncluding Lidocaine，美国专利公布2010/0028438；和Polysaccharides and Hydrogelsthus Obtained，美国专利公布2006/0194758；和Di Napoli，Composition and Method forIntradermal Soft Tissue Augmentation，国际专利公布WO 2004/073759，其每一篇据此通过引用整体并入。

术语“丙酮酸盐”通常包括丙酮酸和/或丙酮酸的盐诸如钠盐、钾盐、锂盐、镁盐、钙盐等。丙酮酸盐可以帮助稳定HA组合物。例如丙酮酸盐可以稳定HA和/或HA组合物中的其它组分，诸如利多卡因、抗坏血酸、抗坏血酸磷酸钠、维生食物等。

可以使用任何合适量的丙酮酸盐，诸如约0.05％w/w至约2％w/w；约0.05％w/w至约1％w/w；约0.1％w/w至约1％w/w；约0.01％w/w至约2％w/w；约0.01％w/w、约0.05％w/w、约0.1％w/w、约0.25％w/w、约0.5％w/w、约1％w/w或任何这些值界定的或任何这些值之间的范围内的任何量。

HA组合物可以任选地包含麻醉剂。麻醉剂可以为局部麻醉剂，包括引起可逆的局部麻醉或伤害感受丧失的麻醉剂，诸如，氨基酰胺局部麻醉剂和氨酯局部麻醉剂。麻醉剂的非限制性实例可以包括利多卡因、氨布卡因、阿莫拉酮、阿米卡因、丁氧普鲁卡因、苯佐卡因、贝托卡因、苯柳胺酯(biphenamine)、布比卡因、布他卡因、氨苯丁酯、布坦卡因、丁胺卡因、丁托西卡因(butoxycaine)、卡替卡因、氯普鲁卡因、古柯乙烯(cocaethylene)、环美卡因、地布卡因、二甲异喹(dimethisoquin)、二甲卡因、地哌冬、双环胺(dicyclomine)、去水芽子碱(ecgonidine)、芽子碱(ecgonine)、氯乙烷、依替卡因、β优卡因(beta-eucaine)、尤普罗辛、非那可明、formocaine、海克卡因、羟丁卡因、对氨苯酸异丁酯、甲磺酸亮氨卡因、左沙屈尔、利多卡因、甲哌卡因、美普卡因、美布卡因、氯甲烷、麦替卡因、纳依卡因、奥他卡因、奥索卡因、奥昔卡因(oxethazaine)、对乙氧卡因、非那卡因、苯酚、哌罗卡因、匹多卡因、聚多卡醇(polidocanol)、普莫卡因(pramoxine)、丙胺卡因、普鲁卡因、丙泮卡因、丙美卡因、丙哌卡因、丙氧卡因、假可卡因(pseudococaine)、吡咯卡因、罗哌卡因、水杨醇、丁卡因、托利卡因、三甲卡因、佐拉敏、它们的组合及其盐。氨酯局部麻醉剂的非限制性实例包括普鲁卡因、氯普鲁卡因、可卡因、环美卡因、二甲卡因(拉罗卡因)、丙氧卡因、普鲁卡因(procaine)(奴佛卡因(novocaine))、丙美卡因、丁卡因(tetracaine)(地卡因(amethocaine))。氨基酰胺局部麻醉剂的非限制性实例包括阿替卡因、布比卡因、辛可卡因(cinchocaine)(二丁卡因(dibucaine))、依替卡因、左布比卡因、利多卡因(lidocaine)(利诺卡因(lignocaine))、甲哌卡因、哌罗卡因、丙胺卡因、罗哌卡因、三甲卡因或它们的组合。

包含的麻醉剂的量可以为有效降低组合物施用时个体经历的疼痛的量，诸如约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％约0.9％、约1.0％、约2.0％、约3.0％、约4.0％、约5.0％、约6.0％、约7.0％、约8.0％、约9.0％、约10％、至少约0.1％、至少约0.2％、至少约0.3％、至少约0.4％、至少约0.5％、至少约0.6％、至少约0.7％、至少约0.8％至少约0.9％、至少约1.0％、至少约2.0％、至少约3.0％、至少约4.0％、至少约5.0％、至少约6.0％、至少约7.0％、至少约8.0％、至少约9.0％、至少约10％、至多约0.1％、至多约0.2％、至多约0.3％、至多约0.4％、至多约0.5％、至多约0.6％、至多约0.7％、至多约0.8％至多约0.9％、至多约1.0％、至多约2.0％、至多约3.0％、至多约4.0％、至多约5.0％、至多约6.0％、至多约7.0％、至多约8.0％、至多约9.0％、至多约10％、约0.1％至约0.5％、约0.1％至约1.0％、约0.1％至约2.0％、约0.1％至约3.0％、约0.1％至约4.0％、约0.1％至约5.0％、约0.2％至约0.9％、约0.2％至约1.0％、约0.2％至约2.0％、约0.5％至约1.0％或约0.5％至约2.0％。

一些HA组合物可以包含以约0.05％w/w至约1％w/w；约0.1％w/w至约0.5％w/w或约0.3％w/w的量呈游离碱或盐形式(如利多卡因HCl)的利多卡因。

一些HA组合物不具有麻醉剂。

维生食物(3-氨丙基-L-抗坏血酸磷酸盐)，维生素C(抗坏血酸)的保护形式，可以作为抗氧化剂包含在HA组合物中。可以使用任何合适量的维生食物，诸如约0.01％w/w至约2％w/w、约0.1％w/w至约1％w/w、约0.5％w/w至约0.7％w/w或约0.6％w/w。

一些组合物可以具有生理学上可接受的同渗容摩，如，约100mOsm/L、约150mOsm/L、约200mOsm/L、约250mOsm/L、约300mOsm/L、约350mOsm/L、约400mOsm/L、约450mOsm/L、约500mOsm/L、至少约100mOsm/L、至少约150mOsm/L、至少约200mOsm/L、至少约250mOsm/L、至多约300mOsm/L、至多约350mOsm/L、至多约400mOsm/L、至多约450mOsm/L、至多约500mOsm/L、约100mOsm/L至约500mOsm/L、约200mOsm/L至约500mOsm/L、约200mOsm/L至约400mOsm/L、约300mOsm/L至约400mOsm/L、约270mOsm/L至约390mOsm/L、约225mOsm/L至约350mOsm/L、约250mOsm/L至约325mOsm/L、约275mOsm/L至约300mOsm/L或约285mOsm/L至约290mOsm/L。可以使用同渗重摩剂以调节同渗重摩。实例包括但不限于盐，诸如，氯化钠和氯化钾；以及甘油。

一些HA组合物可以适合于用作皮肤填充物。例如，此类HA组合物可以呈适当形式，如作为具有适当的弹性模量和粘性模量的凝胶，以便合适于用作皮肤填充物。相比之下，太硬或坚硬或太液化的HA组合物可能不适合于用作皮肤填充物。另外，皮肤填充物可以具有与其注射入的身体部分相容的组合物。

HA组合物可以为可注射的，或能够通过细针，诸如约27规(gauge)或较小的针注射而施用至个体的皮肤区域。在一些实施方案中，HA组合物可通过如，约27规；约30规；约32规；约22规或较小；约27规或较小；约30规或较小；约32规或较小；约22规至约35规；约22规至约34规；约22规至约33规；约22规至约32规；约22规至约27规；或约27规至约32规的针注射。

公开的HA组合物可以任选地包括但不限于其它药学上可接受的组分，包括但不限于缓冲剂、防腐剂、张力调节剂、盐、抗氧化剂、同渗重摩调节剂、乳化剂、润湿剂、甜味剂或调味剂等。

缓冲剂的非限制性实例包括乙酸盐缓冲剂、硼酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲剂和磷酸盐缓冲盐水。可使用任何浓度的缓冲剂，诸如约0.1mM至约900mM。在一些实施方案中，HA组合物可以具有约5.0至约8.5、约5.0至约8.0、约6.5至约7.5、约7.0至约7.4或约7.1至约7.3的pH。

防腐剂包括但不限于焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、丁羟茴醚、丁羟甲苯、苯扎氯铵、氯丁醇、硫柳汞、醋酸苯汞、硝酸苯汞、稳定的氧氯组合物，诸如，(Allergan，Inc.Irvine，CA)和螯合剂，诸如，DTPA或DTPA-双酰胺、DTPA钙以及CaNaDTPA-双酰胺。

HA组合物可以在室温基本稳定保持如，约3个月、约6个月、约9个月、约12个月、约15个月、约18个月、约21个月、约24个月、约27个月、约30个月、约33个月、约36个月、至少约3个月、至少约6个月、至少约9个月、至少约12个月、至少约15个月、至少约18个月、至少约21个月、至少约24个月、至少约27个月、至少约30个月、至少约33个月、至少约36个月、约3个月至约12个月、约3个月至约18个月、约3个月至约24个月、约3个月至约30个月、约3个月至约36个月、约6个月至约12个月、约6个月至约18个月、约6个月至约24个月、约6个月至约30个月、约6个月至约36个月、约9个月至约12个月、约9个月至约18个月、约9个月至约24个月、约9个月至约30个月、约9个月至约36个月、约12个月至约18个月、约12个月至约24个月、约12个月至约30个月、约12个月至约36个月、约18个月至约24个月、约18个月至约30个月或约18个月至约36个月。

物体的弹性模量包括在弹性变形区域中其应力-应变曲线的斜率：λ＝应力/应变，其中λ是以帕斯卡(Pa)计的弹性模量；应力为引起变形的力除以施加力的面积；以及应变为应力引起的变化与物体原始状态的比率。虽然取决于施加力的速度，但是较硬的组合物将具有更高的弹性模量且将花费更大的力以使给定距离的物质变形，诸如注射。规定如何测量应力(包括方向)使得许多类型的弹性模量能够被定义。

粘性模量也称为损耗模量，因为它描述以粘性耗散损耗的能量。Tanδ为粘性模量与弹性模量的比率，Tanδ＝G”/G’。对于本说明书中公开的Tanδ值，Tanδ得自频率为1Hz时的动态模量。较低的tanδ对应于较硬的、更坚固的或更具有弹性的组合物。

在一些实施方案中，HA组合物可用约9N至约13N、约10N至约12N或约11N的挤压力以约13mm/min的速度通过27规针注射，所述挤压力是在用恒温器控制在24-25℃之间的凝胶注射器上测量的。

一些包含丙酮酸盐的HA组合物可以对加热，诸如加热灭菌或在储存期间具有改善的稳定性。

在一些实施方案中，HA组合物可以在至少约100℃进行加热灭菌，并且在加热灭菌之后至少约12个月在室温保持基本上稳定。

一些实施方案包括制备水凝胶组合物的方法，其包括热处理透明质酸和丙酮酸盐的混合物。因此处理的水凝胶可以保持本文公开的所需的水凝胶性质。

在一些实施方案中，HA凝胶与不存在丙酮酸盐的基本上相同的凝胶相比具有改善的热稳定性。一种用于评估热稳定性的方法为通过获得ΔTanδ1Hz，其为在25℃测量的如下式中示出的含有添加剂和不含添加剂的Tanδ1Hz之间的差值：

ΔTanδ 1Hz＝(含有添加剂的Tanδ 1Hz凝胶)-(Tanδ 1Hz NaHA对照)

如果ΔTanδ 1Hz≤0.1连同其它物理参数诸如稳定的挤压力，则凝胶被认为是稳定的。负的ΔTanδ 1Hz值可指示由于加入丙酮酸盐所致的稳定性改善。

在一些实施方案中，在加热灭菌之后，凝胶具有约0.004或更低、约0.001或更低、约0或更低、约-0.002或更低、约-0.004或更低或约-0.006或更低的ΔTanδ1Hz。在一些实施方案中，在约45℃储存约60天之后，与不存在丙酮酸盐的类似凝胶相比，所述凝胶具有约-0.01或更低、约-0.03或更低或约0.04或更低的ΔTanδ1Hz

在一些实施方案中，HA组合物可在加热灭菌之后用约9N至约13N、约10N至约12N或约11N的挤压力以约13mm/min的速度通过27规针注射，所述挤压力是在用恒温器控制在24-25℃之间的凝胶注射器上测量的。

HA组合物可以用于治疗个体的软组织状况。如本文所用，术语“治疗”包括将特征为软组织缺陷、瑕疵、疾病和/或病症的软组织状况减少任何可检测量或消除个体中特征为软组织缺陷、瑕疵、疾病和/或病症的软组织状况的美容或临床症状；或延缓或预防个体中特征为软组织缺陷、瑕疵、疾病和/或病症的状况的美容或临床症状的发作。例如，术语治疗包括将特征为软组织缺陷、疾病和/或病症的状况的症状减少任何可检测量。在一些实施方案中，可以将症状减少至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约100％。本文公开的水凝胶组合物在治疗特征为软组织缺陷、疾病和/或病症的状况方面的效力可通过观察美容、临床症状和/或与状况相关的生理指标中的一个或多个而确定。软组织缺陷、疾病和/或病症的改善也可通过对同时疗法的减少的需求指示。本领域技术人员将了解与特定软组织缺陷、疾病和/或病症相关的适当的症状或指标并且将了解怎样确定个体是否为用本文公开的化合物或组合物治疗的候选。

软组织状况可以包括但不限于软组织缺陷、瑕疵、疾病和/或病症，诸如乳房缺陷、瑕疵、疾病和/或病症，诸如，隆乳术、乳房再造术、乳房固定术、乳房过小、胸发育不全、波兰氏综合征(Poland’s syndrome)、由于植入并发症的瑕疵像囊状收缩和/或破裂；面部缺陷、瑕疵、疾病或病症，诸如，面部增大(facial augmentation)、面部重建、中胚层疗法、帕-罗二氏综合征(Parry-Romberg syndrome)、深在性红斑狼疮(lupus erythematosusprofundus)、皮肤磕碰(dermal divots)、疤痕、颊凹陷、薄唇、鼻缺陷或瑕疵、后眼窝缺陷或瑕疵、面部皱褶、纹理和/或皱纹(像眉间纹、鼻唇纹、口周纹和/或木偶纹)、和/或面部的其它轮廓变形或缺陷；颈缺陷、瑕疵、疾病或病症；皮肤缺陷、瑕疵、疾病和/或病症；其它软组织缺陷、瑕疵、疾病和/或病症，诸如，上臂、小臂、手、肩、背、躯干(包括腹部、臀部、大腿、小腿(包括小腿肚)、足(包括足底脂肪垫))、眼、生殖器或其它身体部分、区域或部位的增大或重建或影响这些身体部分、区域或部位的疾病或病症。如本文所用，术语“中胚层疗法(mesotherapy)”包括皮肤的非外科手术的美容治疗技术，其包括以小的多个液滴施用至表皮、皮肤-表皮结合处和/或真皮的试剂的内表皮、内真皮和/或皮下注射。

可以基于所需改变和/或改善、所需软组织状况症状的减少和/或消除、个体和/或医师所需的临床和/或美容效果以及正治疗的身体部分或区域确定使用的HA组合物的量。组合物施用的效力可以通过以下临床和/或美容测量中的一种或多种证明：改变的和/或改善的软组织形状、改变的和/或改善的软组织大小、改变的和/或改善的软组织轮廓、改变的和/或改善的组织功能、组织向内生长支撑和/或新的胶原沉积、组合物的持续植入、改善的患者满意度和/或生活质量以及降低的可植入外源材料的使用。

例如，治疗面部软组织的组合物和方法的效力可以通过以下临床和/或美容测量中的一种或多种证明：面貌的增加的大小、形状和/或轮廓(像唇、面颊或眼部区域增加的大小、形状和/或轮廓)；面貌的改变的大小、形状和/或轮廓(像唇、面颊或眼部区域形状的改变的大小、形状和/或轮廓；皮肤中的皱纹、皱褶或纹理的减少或消除；对皮肤中的皱纹、皱褶或纹理的抗性；皮肤的再水化；增加的皮肤弹性；皮肤粗糙的减少或消除；增加的和/或改善的皮肤紧致度；妊娠纹或怀胎纹的减少或消除；增加的和/或改善的肤色、光泽、亮度和/或光彩；增加的和/或改善的皮肤颜色、皮肤苍白的减少或消除；组合物的持续植入；减少的副作用；改善的患者满意度和/或生活质量。

在一些实施方案中，施用的水凝胶组合物的量为，如，约0.01g、约0.05g、约0.1g、约0.5g、约1g、约5g、约10g、约20g、约30g、约40g、约50g、约60g、约70g、约80g、约90g、约100g、约150g、或约200g、约0.01g至约0.1g、约0.1g至约1g、约1g至约10g、约10g至约100g、或约50g至约200g、约0.01mL、约0.05mL、约0.1mL、约0.5mL、约1mL、约5mL、约10mL、约20mL、约30mL、约40mL、约50mL、约60mL、约70g、约80mL、约90mL、约100mL、约150mL、或约200mL、约0.01mL至约0.1mL、约0.1mL至约1mL、约1mL至约10mL、约10mL至约100mL、或约50mL至约200mL。

治疗的持续时间可以基于由个体和/或医师以及正治疗的身体部分或区域所需的美容和/或临床效果确定。对于一些治疗，施用HA组合物可以有效地治疗软组织状况，持续如，约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月、约12个月、约13个月、约14个月、约15个月、约18个月或约24个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、至少约12个月、至少约13个月、至少约14个月、至少约15个月、至少约18个月或至少约24个月、约6个月至约12个月、约6个月至约15个月、约6个月至约18个月、约6个月至约21个月、约6个月至约24个月、约9个月至约12个月、约9个月至约15个月、约9个月至约18个月、约9个月至约21个月、约6个月至约24个月、约12个月至约15个月、约12个月至约18个月、约12个月至约21个月、约12个月至约24个月、约15个月至约18个月、约15个月至约21个月、约15个月至约24个月、约18个月至约21个月、约18个月至约24个月或约21个月至约24个月。

可以通过注射至皮肤区域或皮下区域，诸如表皮-真皮结合区域、乳头状区域、网状区域或其任何组合将HA组合物施用至个体的皮肤区域。

如本文所用，术语“皮肤区域”是指包含表皮-皮肤结合处和真皮的皮肤区域，包含表面真皮(乳头状区域)和深层真皮(网状区域)。皮肤由三个主要的层组成：表皮，其提供防水并且充当感染的屏障；真皮，其充当皮肤附属物的位置；以及下皮组织(皮下脂肪层)。表皮不含血管，并且通过真皮的扩散滋养。组成表皮的主要细胞类型为角化细胞、黑素细胞、朗格汉斯细胞(Langerhans cell)和默克尔细胞(Merkels cell)。

真皮包括在包括结缔组织的表皮下的皮肤层，并缓和身体来自应力和应变的冲击。真皮通过基膜紧紧地连接于表皮。它还包含提供触感和热感的许多机械感受器/神经末梢。其含有毛囊、汗腺、皮脂腺、顶泌腺、淋巴管和血管。真皮中的血管由其自身细胞以及表皮的基底层提供营养和废物去除。真皮在结构上被分成两个区：邻近表皮的表面区，称为乳头状区域，和深层较厚区域，称为网状区域。

乳头状区域由松散的网状结缔组织组成。它以其朝向表皮延伸的指状突起(称为乳突)命名。乳突为真皮提供与表皮相互交叉的“崎岖不平的”表面，强化了两层皮肤之间的连接。网状区域位于乳头状区域的深层并通常较厚。其由致密的不规则结缔组织组成，并由编织贯穿其的致密浓度的成胶的、弹性的和网状的纤维得名。这些蛋白纤维给予真皮强度、延展性和弹性的性质。发根、皮脂腺、汗腺、受体、指甲和血管也位于网状区域内。纹身墨水保留在真皮中。来自怀孕的妊娠纹也位于真皮内。

下皮组织位于真皮下。其目的为将皮肤的皮肤区域连接于下面的骨骼和肌肉以及为其供应血管和神经。其包括松散的结缔组织和弹性蛋白。主要的细胞类型为成纤维细胞、巨噬细胞和脂肪细胞(下皮组织含有50％体脂肪)。脂肪充当身体的填充物和绝缘物。

一些治疗个体的软组织状况的方法包括将HA组合物施用至个体的软组织状况位点以改善或治疗软组织状况。在一些实施方案中，软组织状况包括乳房组织状况、面部组织状况、颈状况、皮肤状况、上臂状况、小臂状况、手状况、肩部状况、背部状况、躯干(包括腹部)状况、臀部状况、大腿状况、小腿状况(包括小腿肚状况)、足状况(包括足底脂肪垫状况)、眼状况、生殖器状况或引起其它身体部分、区域或部位的状况。

一些治疗皮肤状况的方法包括将HA组合物施用至患有皮肤状况的个体以改善或治疗皮肤状况。皮肤脱水可以通过将HA组合物施用至患有皮肤脱水的个体来治疗以使皮肤再水化，从而治疗皮肤脱水。缺乏皮肤弹性可以通过将HA组合物施用至患有缺乏皮肤弹性的个体来治疗以增加皮肤弹性，从而治疗缺乏皮肤弹性。皮肤粗糙可以通过施用HA组合物来治疗以降低皮肤粗糙，从而治疗皮肤粗糙。缺乏皮肤紧致度可以通过将HA组合物施用至患有缺乏皮肤紧致度的个体来治疗以使得皮肤绷紧，从而治疗缺乏皮肤紧致度。

皮肤妊娠纹或怀胎纹可以通过将HA组合物施用至患有皮肤妊娠纹或怀胎纹的个体来治疗以减少或消除皮肤妊娠纹或怀胎纹，从而治疗皮肤妊娠纹或怀胎纹。皮肤苍白可以通过将HA组合物施用至患有皮肤苍白的个体来治疗以增加肤色或辐射，从而治疗皮肤苍白。皮肤皱纹可以通过将HA组合物施用至患有皮肤皱纹的个体来治疗以减少或消除皮肤皱纹或使得皮肤抵抗皮肤皱纹，从而治疗皮肤皱纹。

一些治疗皮肤状况的方法包括将HA组合物施用至个体的皮肤区域以改善皮肤状况。由公开的组合物治疗的皮肤状况包括但不限于身体部分、区域或部位的增大、重建、疾病、病症、瑕疵或缺陷。在一方面，由公开的组合物治疗的皮肤状况包括但不限于面部增大、面部重建、面部疾病、面部病症、面部瑕疵或面部缺陷。在一方面，由公开的组合物治疗的皮肤病患包括但不限于皮肤脱水、缺乏皮肤弹性、皮肤粗糙、缺乏皮肤紧致度、皮肤妊娠纹或怀胎纹、皮肤苍白、皮肤磕碰、颊凹陷、薄唇、后眼窝缺陷、面部皱褶或皱纹。

实施例

在本文报告的实验中，对HA凝胶稳定性的影响和成分通过以下示出：将丙酮酸钠单独掺入(i)含有利多卡因的凝胶中，或将丙酮酸钠掺入(ii)其它添加剂诸如抗坏血酸(acorbic acid)、抗坏血酸磷酸钠、维生食物。在整个实施例中，所有流变学测量在25℃进行。除非另有说明，否则挤压力的测量在用恒温器控制在24-25℃之间的凝胶注射器上进行。

实施例1：将丙酮酸钠掺入含有利多卡因的凝胶中以及高压灭菌稳定性

将丙酮酸钠掺入到含量为0.01％w/w至1％w/w的含有利多卡因(含有0.3％w/w利多卡因)的基质NaHA凝胶中。将凝胶进行高压灭菌。用27G针和13mm/min的速度测量挤压力(F)。如果-2N≤ΔF≤2N

其中ΔF＝(含有添加剂的F凝胶)-(F NaHA对照)

并且如果ΔTanδ 1Hz≤0.1

其中ΔTanδ 1Hz＝(含有添加剂的Tanδ 1Hz凝胶)-(Tanδ 1Hz NaHA对照)，那么在高压灭菌期间凝胶被认为是稳定的

根据以下方法使用受控应力流变仪，凝胶的流变性质随着频率而变化：以0.8％受控应变从0.05Hz至10Hz进行频率扫描。G′为弹性模量。G″为粘性模量。TanΔ示出粘性模量与弹性模量的比率(其示出凝胶的降解)。表1示出在120℃至130℃之间高压灭菌保持5至15分钟之后测试的组合物和获得的ΔTanδ1Hz。表1中的结果示出至少约对于这些组合物，在凝胶中加入丙酮酸盐保持凝胶的稳定性并且可将其稳定性改善超过0.25％。

表1

丙酮酸盐％	利多卡因％	ΔF	ΔTanδ1Hz
				0.01	0.3	-0.3	0.004
0.05	0.3	-0.6	0.001
				0.10	0.3	-0.1	0.001
0.25	0.3	-0.2	0.001
				0.50	0.3	-0.5	-0.007
1.00	0.3	-0.2	-0.006

实施例2：实施例1制剂的热稳定性

测试实施例1中制备的制剂和含有利多卡因的NaHA基质在45℃下60天期间的保质期。凝胶的pH为适时稳定的。跟踪45℃下60天的流变性质。图1为挤压力的图，图2为弹性模量的图，和图3为对照(0％丙酮酸盐)和包含0.01％丙酮酸盐和1％丙酮酸盐的HA组合物并且在其在45℃储存60天的粘性模量时的图。表2示出，对于这些组合物，将丙酮酸盐加入凝胶有助于稳定凝胶。在45℃储存期间对tan□增加的影响与丙酮酸盐含量相关，其中稳定性改善平台达到约0.25％。

表2

ΔTanδ1Hz＝(60天时含有添加剂的Tanδ1Hz凝胶)-(60天时Tanδ1Hz NaHA对照)

如果60天时ΔTanδ1Hz＜0，那么凝胶稳定性通过丙酮酸盐得到改善。

实施例3：将丙酮酸钠掺入含有维生食物、利多卡因的制剂和高压灭菌稳定性

将丙酮酸钠掺入到含有利多卡因(含有0.3％w/w利多卡因)和含量为0.6％w/w的维生食物的NaHA基质凝胶中。将凝胶在120℃与130℃之间高压灭菌5至15分钟。如表3中所示，高压灭菌之后稳定性的增加(pH、挤压力、tanδ)在含有丙酮酸盐的组合物中观察到而含有维生食物而不含丙酮酸盐的组合物在高压灭菌期间是不稳定的。

表3

丙酮酸盐％	维生食物％	利多卡因％	pH	ΔF	ΔTanδ1Hz
						0	0	0	7.07	0	0
0	0.6	0	6.86	2.6	0.072
						1	0.6	0	7.08	-0.57	-0.100

ΔF＝(含有添加剂的F凝胶)-(F NaHA对照)

ΔTanδ1Hz＝(含有添加剂的Tanδ1Hz凝胶)-(Tanδ1Hz NaHA对照)

如果-2N≤ΔF≤2N并且ΔTanδ1Hz≤0.1，那么凝胶被认为是稳定的。

实施例4：实施例3凝胶性质的热稳定性

测试实施例1中制备的制剂和含有利多卡因的NaHA基质在45℃下经60天的保质期。跟踪pH和流变性质。将丙酮酸盐加入制剂对不含添加剂的凝胶和仅含维生食物的凝胶的稳定性具有显著的影响。

如图4中所示，在制剂中加入维生食物(单独的)导致凝胶的pH随着时间的推移而降低。加入丙酮酸盐使得pH得到较好的保持。由于改善的pH稳定性，流变性质得到较好的保持。(图5-8)

实施例5：实施例3的凝胶中存在的添加剂维生食物的热稳定性

实施例3的高压灭菌样品上保留的维生食物的量通过HPLC定量。表4示出将丙酮酸盐加入至含有维生食物的制剂有助于在热稳定性期间稳定添加剂。

表4

丙酮酸盐％	维生食物％	利多卡因％	在60天丢失的维生食物％
				0	0.6	0	14％
1	0.6	0.3	1.5％

除非另外指出，否则表达说明书和权利要求中使用的成分、性质(诸如分子量、反应条件等)的量的所有数字应理解为在所有实例中被术语“约”修饰。因此，除非显示相反，否则说明书和所附的权利要求中所列的数值参数为近似值，其可根据试图获得的期望性质而改变。在最低限度，并且不试图限制对权利要求的范围应用等同原则，至少约应当根据报道的有效数字个数并通过应用普通舍入技术解释每个数值参数。

术语“一个/种(a)”、“一个/种(an)”、“该/所述(the)”及在描述本发明的上下文中使用的相似的指示物(尤其在以下权利要求的上下文中)将被解释为覆盖单数和复数两者，除非本文另外指出或与上下文明显矛盾。本文描述的所有方法可以以任何合适的顺序进行，除非本文另外指出或与上下文明显矛盾。本文提供的任何和所有的实例或示例性语言(如，“诸如”)的使用仅仅意图更好地阐明本发明，并且不会对任何权利要求的范围构成限制。说明书中的语言不应解释为指出任何未要求保护的实施本发明的必需要素。

本文公开的替代要素或实施方案的群组不应解释为限制。每一群组成员可单独地或以与组的其它成员或本文中存在的其它要素进行任何组合的方式被提及和被要求保护。出于方便性原因或任何其它原因，群组的一个或多个成员可预期包括于群组中或从群组中删除。当发生任何这种包括或删除时，说明书被视为包含改变的群组，因而符合所附权利要求中使用的马什库组的书面描述。

在本文中描述了某些实施方案，包括发明人已知的实施本发明的最佳方式。当然，本领域普通技术人员在阅读上述说明时，这些所述实施方案的变更将变得显而易见。发明人期望熟练的技术人员酌情利用这些改变，并且发明人旨在以不同于本文具体描述的方式实施该发明。因此，权利要求包括如适用法律所许可的权利要求所列举的主题的所有修改和等价物。此外，涵盖了在其所有可能的改变中上述要素的任何组合，除非本文另外说明或上下文中明显矛盾。

最后，应了解本文公开的实施方案阐明了本权利要求的原则。可以利用的其它修改在权利要求的范围内。因此，例如但不限于，可以根据本文的教导采用替代实施方案。因此，权利要求不限于如精确示出和描述的实施方案。

Claims (16)

1.一种组合物，其包含：透明质酸和丙酮酸盐，其中所述透明质酸为交联的，所述组合物适合于用作皮肤填充物，并且所述组合物为对加热灭菌稳定的凝胶；其中丙酮酸盐以0.01％w/w至2％w/w的浓度存在。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述凝胶与不存在丙酮酸盐的凝胶相比具有改善的热稳定性。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述凝胶在加热灭菌之后具有小于0.004的ΔTanδ1Hz。

4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述凝胶在45℃储存60天之后具有小于-0.03的ΔTanδ1Hz。

5.一种通过包括以下的工艺制备的组合物：热处理包含交联的透明质酸和丙酮酸盐的凝胶；其中丙酮酸盐以0.01％w/w至2％w/w的浓度存在。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的组合物，还包含利多卡因。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中利多卡因以0.05％w/w至1％w/w的浓度存在。

8.根据权利要求1-5和7中任一项所述的组合物，其中透明质酸以0.1％w/v的浓度存在。

9.根据权利要求6所述的组合物，其中透明质酸以0.1％w/v的浓度存在。

10.根据权利要求8所述的组合物，其中所述丙酮酸盐以0.05％w/w至1％w/w的浓度存在。

11.根据权利要求1-5、7和9-10中任一项所述的组合物，还包含3-氨丙基-L-抗坏血酸磷酸盐。

12.根据权利要求6的组合物，还包含3-氨丙基-L-抗坏血酸磷酸盐。

13.根据权利要求8的组合物，还包含3-氨丙基-L-抗坏血酸磷酸盐。

14.一种皮肤填充物制品，其包含权利要求1-13中任一项所述的组合物。

15.一种改善皮肤填充物制品的热稳定性的方法，其包括：形成包含丙酮酸盐和交联的透明质酸的组合的凝胶；其中丙酮酸盐有效改善所述凝胶的热稳定性；其中丙酮酸盐以0.01％w/w至2％w/w的浓度存在。

16.根据权利要求15所述的方法，其中丙酮酸盐在所述凝胶中具有0.1％w/w至1％w/w的浓度。