CN104498403B - 一种降解有机磷和无机磷的泛菌及其应用 - Google Patents

一种降解有机磷和无机磷的泛菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104498403B
CN104498403B CN201410806691.4A CN201410806691A CN104498403B CN 104498403 B CN104498403 B CN 104498403B CN 201410806691 A CN201410806691 A CN 201410806691A CN 104498403 B CN104498403 B CN 104498403B
Authority
CN
China
Prior art keywords
phos
pantoea
general bacterium
bacterium
phosphate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410806691.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104498403A (zh
Inventor
陈倩
刘善江
白杨
李亚星
郜春花
李建华
靳东升
卢朝东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Original Assignee
Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences filed Critical Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Priority to CN201410806691.4A priority Critical patent/CN104498403B/zh
Publication of CN104498403A publication Critical patent/CN104498403A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104498403B publication Critical patent/CN104498403B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种降解有机磷和无机磷的泛菌及其应用。本发明所提供的泛菌(Pantoea sp.)S‑32在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.10017。该菌降解磷酸钙的解磷率达到24.19％，为巨大芽孢杆菌As1.223的3.64倍；该菌降解卵磷脂的解磷率达到2.47％，为巨大芽孢杆菌As1.223的1.46倍；该菌具有较强的环境适应性，能够适应较广的温度、pH值和盐浓度范围。实验证明，本发明的泛菌(Pantoea sp.)S‑32 CGMCC No.10017可作为微生物肥料的菌种资源，用来提高作物产量、加快矿区土壤生态恢复。

Description

一种降解有机磷和无机磷的泛菌及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域中一种降解有机磷和无机磷的泛菌及其应用。
背景技术
磷是植物生长必需的营养元素之一，其重要性仅次于氮，约占植物干重的0.2％，是参与能量代谢、核酸与细胞合成、部分酶调控的主要成分，对促进植物的生长发育和新陈代谢起着重要的作用，是生态系统中不可替代的组分。
土壤平均含磷量约为0.05％(w/w)，土壤中的磷以无机和有机化合物这两种状态存在，但其中只有0.1％的磷能被植物所利用，成为影响植物生长的限制性因素。其中难溶性有机磷一般占土壤全磷的20％-50％，占难溶性土壤磷总量的10％-85％。而施入土壤中的化学磷肥本季节利用效率为5％-25％，大部分磷与土壤中的Ca2+、Fe3+、Al3+结合形成难溶性磷酸盐，植物很难直接吸收利用，导致土壤出现磷素富集的现象。且化学磷肥的生产也会造成空气及水体污染，所以提高土壤磷素资源的利用率对植物的生长及环境均具有积极的作用。
一些微生物通过溶解、摄磷、络合等作用，使无效态磷如矿物态磷和有机磷转变为有效磷，满足植物对磷素的需求，这种微生物被称作解磷微生物(PSMs)。根据解磷细菌分解化合物的不同可分为两类：一类是能够分泌有机酸来分解无机磷化合物的解无机磷菌，另一类是可分泌磷酸酶物质分解有机磷化合物的解有机磷菌。解磷菌的解磷机制因不同的菌株而有所不同。无机磷微生物的解磷机制一般认为与微生物产生有机酸有关，这些有机酸能够降低pH值，与铁、铝、钙、镁等离子结合，从而使难溶性的磷酸盐溶解；有机磷微生物在土壤缺磷的情况下，向外分泌磷酸酶、核酸酶和植酸酶等，水解有机磷，转化为无机磷酸盐。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何降解有机磷和无机磷。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了泛菌(Pantoea sp.)S-32。
本发明所提供的泛菌(Pantoea sp.)S-32，该菌株已于2014年11月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.10017。
为解决上述技术问题，本发明还提供了一种菌剂。
本发明所提供的菌剂的活性成分为所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCCNo.10017。
上述菌剂中，所述菌剂为下述1)或2)或3)所述菌剂：
1)用于降解无机磷的菌剂；
2)用于降解有机磷的菌剂；
3)用于降解无机磷和有机磷的菌剂。
上述菌剂中，所述无机磷可为磷酸氢钙、磷矿粉、磷酸铁、磷酸铝和磷酸钙中至少一种；所述有机磷可为卵磷脂。
上述菌剂中，所述菌剂还可以包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物；所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种；所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。所述菌剂中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述组合物的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。
为解决上述技术问题，本发明还提供了下述任一种应用：
Ⅰ、所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017在降解无机磷和/或有机磷中的应用；
Ⅱ、所述菌剂在降解无机磷和/或有机磷中的应用；
Ⅲ、所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017在制备降解无机磷和/或有机磷产品中的应用；
Ⅳ、所述菌剂在制备降解无机磷和/或有机磷产品中的应用。
Ⅴ、所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017在制备酸性磷酸酶和/或碱性磷酸酶酶中的应用；
Ⅵ、所述菌剂在制备酸性磷酸酶和/或碱性磷酸酶酶中的应用。
上述应用中，所述无机磷可为磷酸氢钙、磷矿粉、磷酸铁、磷酸铝和磷酸钙中至少一种；所述有机磷可为卵磷脂。
上述应用中，所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017或所述菌剂降解有机磷和/或无机磷的温度可为4℃-37℃。所述4℃-37℃可为20-35℃或20-30℃或25-30℃。所述4℃-37℃具体可为4℃、20℃、25℃、30℃、35℃、28℃或37℃。
上述应用中，所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017或所述菌剂降解有机磷和/或无机磷的pH可为3-11。所述3-11可为6-8。所述3-11具体可为3、4、5、6、7、8、9、10或11。
上述应用中，所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017或所述菌剂降解有机磷和/或无机磷的NaCl质量百分浓度可为1％-10％。所述1％-10％可为2-10％,3-10％,4-10％,5-10％,6-10％,7-10％,8-10％,9-10％,1-9％,1-8％,1-7％,1-6％,1-5％,1-4％,1-3％,1-2％。所述1％-10％具体可为1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％。
上述应用中，所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017或所述菌剂降解有机磷和/或无机磷的时间可为24小时-168小时，具体可为24小时、48小时、72小时、96小时、120小时、144小时或168小时。
上述应用中，所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017或所述菌剂降解有机磷和/或无机磷的碳源可为葡萄糖、果糖、乳糖、甘露醇或甘油。
为解决上述技术问题，本发明还提供了下述任一产品：
P1)、利用所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017制备的降解无机磷和/或有机磷的产品；
P2)、利用所述菌剂制备的降解无机磷和/或有机磷的产品；
P3)、利用所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017制备的酸性磷酸酶和/或碱性磷酸酶酶；
P4)、利用所述菌剂制备的酸性磷酸酶和/或碱性磷酸酶酶。
上述产品中，P1)所述降解无机磷和/或有机磷的产品的活性成分可为所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017；
P2)所述降解无机磷和/或有机磷的产品的活性成分可为所述菌剂。
上述产品中，所述无机磷为磷酸氢钙、磷矿粉、磷酸铁、磷酸铝和磷酸钙中至少一种；所述有机磷为卵磷脂。
上述产品中，所述降解无机磷和/或有机磷的产品的适用温度可为4℃-37℃。所述4℃-37℃可为20-35℃或20-30℃或25-30℃。所述4℃-37℃具体可为4℃、20℃、25℃、30℃、35℃、28℃或37℃。
上述产品中，所述降解无机磷和/或有机磷的产品的适用pH可为3-11。所述3-11可为6-8。所述3-11具体可为3、4、5、6、7、8、9、10或11。
上述产品中，所述降解无机磷和/或有机磷的产品的适用NaCl质量百分浓度可为1％-10％。所述1％-10％可为2-10％,3-10％,4-10％,5-10％,6-10％,7-10％,8-10％,9-10％,1-9％,1-8％,1-7％,1-6％,1-5％,1-4％,1-3％,1-2％。所述1％-10％具体可为1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％。
上述产品中，所述降解无机磷和/或有机磷的产品降解无机磷和/或有机磷的时间可为24小时-168小时，具体可为24小时、48小时、72小时、96小时、120小时、144小时或168小时。
上述产品中，所述降解无机磷和/或有机磷的产品可以葡萄糖、果糖、乳糖、甘露醇或甘油为碳源。
为解决上述技术问题，本发明还提供了培养所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCCNo.10017的方法。
本发明所提供的培养所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的方法，包括将所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017在用于培养泛菌的培养基中培养的步骤。
为解决上述技术问题，本发明还提供了所述菌剂的制备方法。
本发明所提供的所述菌剂的制备方法，包括如下步骤：将所述泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017作为活性成分，得到所述菌剂。
实验证明，本发明的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017具有较强的降解无机磷和有机磷的能力：本发明的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017降解磷酸钙的解磷率达到24.19％，其降解磷酸钙的解磷率为巨大芽孢杆菌As1.223的3.64倍，差异达到显著水平，S-32无机磷待测液的pH下降3.51个单位，是As1.223的1.78倍；泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017降解卵磷脂的解磷率达到2.47％，其降解卵磷脂的解磷率为As1.223的1.46倍，差异达到显著水平，S-32有机磷待测液的pH下降3.89个单位，是As1.223的1.58倍。实验证明，本发明的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017能够降解磷磷酸氢钙、磷矿粉、磷酸铁、磷酸铝、磷酸钙；该菌还能够产生碱性磷酸酶和酸性磷酸酶降解有机磷，且该菌的酸性磷酸酶和碱性磷酸酶酶活性均高于巨大芽孢杆菌As1.223。实验证明，本发明的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017能够以多种物质作为碳源，如葡萄糖、果糖、乳糖、甘露醇和甘油。实验证明，本发明的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017具有较强的环境适应性，能够适应较广的温度、pH值和盐浓度范围，且在1-10％的NaCl质量百分浓度下仍具有降解无机磷的能力。实验证明，本发明的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017可作为微生物肥料的菌种资源，有效利用土壤中的无机磷和有机磷，用来提高作物产量、加快矿区土壤生态恢复。
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：泛菌(Pantoea sp.)
生物材料的菌株编号：S-32
生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
生物材料的保藏单位简称：CGMCC
生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101
生物材料的保藏日期：2014年11月20日
生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.10017
附图说明
图1为扫描电镜扫描观察泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017菌体的形态。
图2为泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率随时间的变化及其对环境pH的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)As1.223(高效溶磷菌株Bmp5筛选及活力和培养条件的研究，张毅民等，华南农业大学学报，2006年7月，第27卷第03期)公众可从北京市农林科学院(即申请人)获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的无机磷平板培养基的配制方法均为：将葡萄糖10.0g、(NH4)2S040.5g、酵母粉0.5g、NaCl 0.3g、KCl 0.3g、FeS04·7H200.03g、MgS04·7H200.3g、MnS04·4H200.03g和Ca3(P04)25.0g分别溶于800ml蒸馏水中，调pH至7.0用蒸馏水定容至1000ml，然后加入琼脂20.0g，灭菌。
下述实施例中的无机磷液体培养基与无机磷平板培养基相比，无机磷液体培养基不含琼脂，其它溶质及其浓度同无机磷平板培养基。
下述实施例中的有机磷平板培养基的配制方法均为：将葡萄糖10.0g、(NH4)2S040.5g、酵母粉0.5g、NaCl 0.3g、KCl 0.3g、FeS04·7H200.03g、MgS04·7H200.3g、MnS04·4H200.03g、CaCO31.0g和卵磷脂0.2g分别溶于800ml蒸馏水中，调pH至7.0，用蒸馏水定容至1000ml，然后加入琼脂20.0g，灭菌。
下述实施例中的有机磷液体培养基与有机磷平板培养基相比，有机磷液体培养基不含琼脂，其它溶质及其浓度同有机磷平板培养基。
下述实施例中的营养琼脂平板的配制方法均为：将蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g和NaCl 5.0g分别溶于800ml蒸馏水中，调pH至7.0，用蒸馏水定容至1000ml，然后加入琼脂20.0g，灭菌。
下述实施例中的TSB培养基的配制方法均为：将胰蛋白胨15.0g、大豆蛋白胨5.0g和NaCl 5.0g分别溶于800ml蒸馏水中，调pH至7.0，用蒸馏水定容至1000ml，灭菌。
下述实施例中的2,6-二硝基酚指示剂的配制方法均为：称取0.25g 2,6-二硝基酚(北京化工厂)溶于100mL水中，得到2,6-二硝基酚指示剂。
下述实施例中的钼锑抗显色剂的配制方法均为：称取1.5g抗坏血酸(国药集团化学试剂有限公司)，溶于100mL钼锑抗贮存液中，得到钼锑抗显色剂。钼锑抗贮存液的配制方法为：量取浓硫酸(北京化工厂)153mL缓缓地倾入约400mL蒸馏水中，搅拌、冷却得到硫酸溶液；称取10.0g钼酸铵(北京化工厂)溶于约60℃的300mL无菌超纯水中，冷却，得到钼酸铵溶液；将硫酸溶液缓缓滴入钼酸铵溶液中，得到混合液；然后向该混合液中加入100mL 0.5％(质量百分比浓度)的酒石酸锑钾(北京化工厂)溶液，用无菌超纯水定容至1L，得到钼锑抗贮存液。
下述实施例中的5mg/L磷标准液的配制方法均为：称取在105℃烘箱中烘2h后冷却的磷酸二氢钾(北京化工厂)0.439g溶于200mL水中，加入5mL浓硫酸，混合均匀冷却后转入1L容量瓶中，用无菌超纯水定容至1L，得到100mg/L磷标准液(可长期保存备用)；将100mg/L磷标准液稀释20倍得到5mg/L磷标准液(此溶液不宜久放)。
实施例1、泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的分离与鉴定
一、解磷菌的分离
1、土壤样品采集
采集山西省孝义露天矿区的复垦土壤(采集时间：2012年6月，采集人：李建华，联系方式：0351-7639390)。
2、初筛
向盛有100ml无菌水的三角瓶中加入10g上述土壤样品，振荡培养10min制成混浊液。吸取1ml上述混浊液加入盛有9ml无菌水中的试管中充分混匀(此时稀释度记为10-1)，然后从此试管中吸取1ml加入到另一盛有9ml无菌水的试管中混合均匀，以此类推制成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的土壤悬液。将10-4、10-5、10-6稀释度的土壤悬液各取1.0ml分别接种于无机磷平板培养基上，每个稀释度的土壤悬液设置三个重复，置于30℃下培养10d。将10-4、10-5、10-6稀释度的土壤悬液各取1.0ml分别接种于有机磷平板培养基上，每个稀释度的土壤悬液设置三个重复，置于30℃下培养10d。筛选到19株在无机磷平板培养基和有机磷平板培养基上均能形成较大透明圈的菌株，这19株菌株的透明圈直径(D)和菌落直径(d)比值均≥1.5。这19株菌株中的一株在无机磷平板培养基上的透明圈直径(D)和菌落直径(d)比值为4.24，在有机磷平板培养基上的透明圈直径(D)和菌落直径(d)比值为5.19，通过划线法纯化该菌株，得到其纯菌株，将该菌株命名为解磷菌S-32(简称S-32)。
3、复筛
实验重复三次，每次重复实验的具体步骤如下：
将步骤1的S-32接种到无机磷液体培养基的三角瓶中，使S-32含量为109cfu/mL，置于摇床上(150r/min)30℃振荡培养5d，然后将得到的发酵液高速离心(5000r/min)30min，将上清液倾出得到S-32无机磷待测液。
按照上述方法，将无机磷液体培养基替换为有机磷液体培养基，其他步骤均不变，得到S-32有机磷待测液。
按照上述方法，将步骤1的S-32替换为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)As1.223，其他步骤均不变，得到As1.223无机磷待测液。
按照上述方法，将步骤1的S-32替换为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)As1.223，并将无机磷液体培养基替换为有机磷液体培养基，其他步骤均不变，得到As1.223有机磷待测液。
用酸度计测定S-32无机磷待测液、S-32有机磷待测液、As1.223无机磷待测液和As1.223有机磷待测液的pH值。
采用钼锑抗比色法测定上述待测液的有效磷含量，具体方法如下：
将上述S-32无机磷待测液用无菌超纯水稀释1-100倍(根据有效磷含量决定稀释倍数，不同待测液的具体稀释倍数见表格)后吸取2mL于50mL容量瓶中，向容量瓶中加入无菌超纯水至总体积约为20mL，混合均匀后向容量瓶中滴加2,6-二硝基酚指示剂2滴，而后用10％氢氧化钠或稀硫酸溶液调节该容量瓶中的溶液的pH值至该容量瓶中的溶液呈微黄色，然后向该容量瓶中加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，加入无菌超纯水定容至50mL。在室温(20℃-25℃)下放置30min后，得到S-32无机磷溶液。在720nm的波长下用分光光度计(美国UNICO 7200型)上读取S-32无机磷溶液的数值，根据标准曲线计算S-32无机磷待测液的有效磷含量。
按照上述方法，将S-32无机磷待测液分别替换为S-32有机磷待测液、As1.223无机磷待测液和As1.223有机磷待测液，其他步骤均不变，分别得到S-32有机磷待测液、As1.223无机磷待测液和As1.223有机磷待测液的有效磷含量。
标准曲线绘制方法如下：分别吸取5mg/L磷标准溶液0mL、2mL、4mL、6mL、8mL和10mL分别置于六个50mL容量瓶中，向每个容量瓶中分别加入无菌超纯水至总体积约为20mL，而后向每个容量瓶中加入钼锑抗显色剂5mL，摇匀后分别定容至50mL，分别得到0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L的磷标准系列溶液，在720nm的波长下用分光光度计(美国UNICO 7200型)上分别读取这些溶液的数值，绘制成标准曲线。
S-32无机磷待测液和As1.223无机磷待测液以不接种任何菌的无机磷液体培养基为空白对照，S-32有机磷待测液和As1.223有机磷待测液以不接种任何菌的有机磷液体培养基为空白对照。
按下式计算解磷率：
式中：
P－培养液中有效磷含量(mg/L)
X－解磷率(％)
V－培养液体积(mL)
W－发酵液中的磷酸钙(无机磷液体培养基)或卵磷脂(有机磷液体培养基)的质量(g)
表1、解磷菌S-32的解磷率
注：S-32表示解磷菌S-32。
结果显示，解磷菌S-32降解磷酸钙的解磷率为As1.223的3.64倍，差异达到显著水平；As1.223无机磷待测液的pH下降1.97个单位，解磷菌S-32无机磷待测液的pH下降3.51个单位，是As1.223的1.78倍；解磷菌S-32降解卵磷脂的解磷率为As1.223的1.46倍，差异达到显著水平；As1.223无机磷待测液的pH下降2.46个单位，解磷菌S-32有机磷待测液的pH下降3.89个单位，是As1.223的1.58倍。结果表明，解磷菌S-32具有较强的降解无机磷和有机磷的能力。
二、解磷菌的鉴定
从以下几个方面鉴定步骤一分离并纯化得到的解磷菌S-32：
1、形态学鉴定
将处于对数生长期且菌落大小稳定，上述步骤一分离并纯化得到的解磷菌S-32进行单菌落状态观察，主要包括菌落的大小、颜色、透明度、湿润度、菌落表面状态(是否平坦、突起、褶皱、凹陷等)、菌落边缘状态(是否整齐、不规则、放射状等)。
对处于对数生长期的解磷菌S-32，经扫描电镜扫描观察菌体的形态(图1)。
结果表明，上述步骤一分离并纯化得到的解磷菌S-32在营养琼脂平板上生长48h(解磷菌S-32处于对数生长期)后，形成圆形凸起菌落，菌落的外观为油乳状、黄色、不透亮、有光泽、表面光滑湿润、边缘整齐。电镜扫描结果(图1)显示解磷菌S-32的菌体呈杆状、无芽孢，菌体大小约为0.5-0.6μm×0.6-1.6μm。
2、生理生化特征分析
参考《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠，蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册.北京:科学出版社，2011.)和《微生物学实验》(沈萍,范秀容,李广武.微生物学实验(第三版).北京:高等教育出版社,1999.)测定上述解磷菌S-32的生理生化特征。
解磷菌S-32的生理生化特征测定结果：革兰氏阴性菌，接触酶阳性，氧化酶阴性，利用柠檬酸盐，不水解淀粉，甲基红试验阳性，V.P.试验阴性，苯丙氨酸脱氨酶阳性，还原硝酸盐，吲哚试验阴性，明胶液化阴性。解磷菌S-32以下糖醇类物质发酵产酸：D-葡萄糖，D-甘露醇，D-乳糖，D-山梨醇，D-麦芽糖，D-半乳糖，D-果糖，D-核糖，L-阿拉伯糖。
3、16S rDNA序列同源性分析
常规方法培养上述步骤一分离纯化得到的解磷菌S-32，提取菌株的总DNA作为基因扩增模板，以细菌16S rDNA的引物27f：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′和1492r：5′-TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3′进行PCR反应，得到PCR产物。PCR产物测序由北京三博远志生物技术有限责任公司完成。基因在线比对采用EzTaxon数据库，系统学进化分析采用Mega4.0软件系统。
16S rDNA基因比对结果显示解磷菌S-32与泛菌属(Pantoea sp.)有高度同源性，与Pantoea rodasii LMG 26273T(JF295053)序列相似性最高，达到了99.94％。
4、脂肪酸组成分析
使用美国MIDI公司的Sherolock全自动细菌鉴定系统对菌株进行脂肪酸组成分析，菌株活化采用TSB培养基，由北京农业生物技术研究中心完成。
解磷菌S-32的细胞脂肪酸组成主要特征峰值包括C12:0(27.6％)、C18:1ω7c(14.6％)和第三特征峰(C16:1ω7c/iso-C15:02-OH和/或iso-C15:02-OH/C16:1ω7c)(25.3％)，与其16S rDNA相似菌株Pantoea rodasii LMG 26273T(JF295053)相一致。
鉴于上述形态、生理生化特征分析、16S rDNA序列同源性分析和脂肪酸组成分析结果，将步骤一分离纯化得到的解磷菌S-32鉴定为泛菌属(Pantoea sp.)。该解磷菌S-32已于2014年11月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.10017。
实施例2、泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017分泌的磷酸酶活性
取用有机磷液体培养基培养实施例1的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCCNo.100175d后的上清液测定磷酸酶活性，分别采用碱性磷酸酶试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号为A059-1)和酸性磷酸酶试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号为A060-1)按照说明书的方法分别测定酸性磷酸酶活性和碱性磷酸酶酶活性。将100mL发酵液在37℃下与基质(磷酸苯二钠)作用15min产生1mg酚定义为1个金氏单位(U)。以巨大芽孢杆菌As1.223作为对照，以不加任何菌株的有机磷液体培养基作为空白对照。
结果表明，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的酸性磷酸酶和碱性磷酸酶酶活性均高于空白对照和巨大芽孢杆菌As1.223：巨大芽孢杆菌As1.223的酸性磷酸酶活性为1.93U/100mL±0.40U/100mL，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的酸性磷酸酶活性为6.94U/100mL±0.84U/100mL，为巨大芽孢杆菌As1.223的3.60倍；巨大芽孢杆菌As1.223的碱性磷酸酶活性为1.90U/100mL±0.44U/100mL，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCCNo.10017的碱性磷酸酶活性为4.12U/100mL±0.24U/100mL，为巨大芽孢杆菌As1.223的2.17倍。
实施例3、泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017环境适应及解磷能力测定
本实施例中的解磷率测定方法均同实施例1。
1、泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的环境适应性
实验重复三次，每次重复实验的具体步骤如下：
分别在4℃、20℃、28℃、37℃、60℃培养、观察、记录泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCCNo.10017的温度适应性，采用营养琼脂培养基，每个处理3次重复；调整营养琼脂培养基的NaCl浓度分别为2％、5％、7％、10％、12％、15％，每个处理3次重复，培养、观察、记录菌株耐盐性；调整营养琼脂培养基酸度分别为pH3、pH4、pH5、pH6、pH7、pH8、pH9、pH10、pH11、pH12，每个处理3次重复，培养、观察、记录菌株耐酸碱性。
结果表明，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017有较广的温度、pH值和NaCl生长适应范围，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017能在4℃-37℃、pH值为4-11的环境中生长，能耐受2％-10％的NaCl浓度。
2、不同磷源的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率
实验重复三次，每次重复实验的具体步骤如下：
以磷酸氢钙、磷矿粉、磷酸铁和磷酸铝分别代替无机磷液体培养基中的磷酸钙，其它成分同无机磷液体培养基，分别得到磷源为磷酸氢钙的无机磷液体培养基、磷源为磷矿粉的无机磷液体培养基、磷源为磷酸铁的无机磷液体培养基、磷源为磷酸铝的无机磷液体培养基。
在磷源为磷酸氢钙的无机磷液体培养基中接种实施例1的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017，使泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的含量为109cfu/mL，置于摇床上(150r/min)30℃振荡培养5d，然后将得到的发酵液高速离心(5000r/min)30min，将上清液倾出得到S-32磷酸氢钙待测液。
按照上述方法，将磷源为磷酸氢钙的无机磷液体培养基分别替换为磷源为磷矿粉的无机磷液体培养基、磷源为磷酸铁的无机磷液体培养基、磷源为磷酸铝的无机磷液体培养基，其他步骤均不变，分别得到S-32磷矿粉待测液、S-32磷酸铁待测液和S-32磷酸铝待测液。
用酸度计测定S-32磷酸氢钙待测液、S-32磷矿粉待测液、S-32磷酸铁待测液和S-32磷酸铝待测液的pH值。
按照实施例1步骤一中3的钼锑抗比色法测定上述待测液的有效磷含量，具体方法如下：将S-32无机磷待测液分别替换为S-32磷酸氢钙待测液、S-32磷矿粉待测液、S-32磷酸铁待测液和S-32磷酸铝待测液，其他步骤均不变，分别得到S-32磷酸氢钙待测液、S-32磷矿粉待测液、S-32磷酸铁待测液和S-32磷酸铝待测液的有效磷含量。
S-32磷酸氢钙待测液以不接种任何菌的磷源为磷酸氢钙的无机磷液体培养基为空白对照，S-32磷矿粉待测液以不接种任何菌的磷源为磷矿粉的无机磷液体培养基为空白对照，S-32磷酸铁待测液以不接种任何菌的磷源为磷酸铁的无机磷液体培养基为空白对照，S-32磷酸铝待测液以不接种任何菌的磷源为磷酸铝的无机磷液体培养基为空白对照。结果如表2所示。
表2、不同磷源的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率
注：S-32表示泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017。
结果表明，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017对磷酸氢钙、磷矿粉、磷酸铁和磷酸铝的解磷率分别为18.38％±0.10％、0.19％±0.06％、0.51％±0.03％和2.62％±0.06％，培养液的pH分别下降2.68、3.58、4.03和3.46个单位。
3、解磷时间对泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率的影响
实验重复三次，每次重复实验的具体步骤如下：
在无机磷液体培养基中接种泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017，150r/min30℃振荡培养7d，每天取样后测定泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率和培养液pH值(图2)。以不接种任何菌株的无机磷液体培养基为阴性对照，设置3个重复，各个处理除时间不同外，其它条件均相同。
结果表明，24h时泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率达到23.91％，48h时略有下降达到23.74％，之后一直呈缓慢上升趋势，直至120h时达到最高24.61％，之后2d略有下降；培养液中有效磷含量在24h时达到1204.67mg/L后一直呈缓慢上升趋势，168h时达到1332.33mg/L；培养液pH值在24h时由6.57跌至3.40，之后呈缓慢下降趋势直至120h时跌至最低点3.25，之后2d缓慢上升至168h时到达3.30。
4、碳源对泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率的影响
实验重复三次，每次重复实验的具体步骤如下：
以蔗糖、淀粉、果糖、乳糖、甘露醇和甘油分别代替无机磷液体培养基中的葡萄糖，其它成分同无机磷液体培养基，分别得到碳源为蔗糖的无机磷液体培养基、碳源为淀粉的无机磷液体培养基、碳源为果糖的无机磷液体培养基、碳源为乳糖的无机磷液体培养基、碳源为甘露醇的无机磷液体培养基和碳源为甘油的无机磷液体培养基。
在碳源为蔗糖的无机磷液体培养基中接种实施例1的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017，使泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的含量为109cfu/mL，置于摇床上(150r/min)30℃振荡培养5d，然后将得到的发酵液高速离心(5000r/min)30min，将上清液倾出得到S-32蔗糖待测液。
按照上述方法，将碳源为蔗糖的无机磷液体培养基分别替换为碳源为淀粉的无机磷液体培养基、碳源为果糖的无机磷液体培养基、碳源为乳糖的无机磷液体培养基、碳源为甘露醇的无机磷液体培养基和碳源为甘油的无机磷液体培养基，其他步骤均不变，分别得到S-32淀粉待测液、S-32果糖待测液、S-32乳糖待测液、S-32甘露醇待测液和S-32甘油待测液。
用酸度计测定S-32蔗糖待测液、S-32淀粉待测液、S-32果糖待测液、S-32乳糖待测液、S-32甘露醇待测液和S-32甘油待测液的pH值。
按照实施例1步骤一中3的钼锑抗比色法测定上述待测液的有效磷含量，具体方法如下：将S-32无机磷待测液分别替换为S-32蔗糖待测液、S-32淀粉待测液、S-32果糖待测液、S-32乳糖待测液、S-32甘露醇待测液和S-32甘油待测液，其他步骤均不变，分别得到S-32蔗糖待测液、S-32淀粉待测液、S-32果糖待测液、S-32乳糖待测液、S-32甘露醇待测液和S-32甘油待测液的有效磷含量。
S-32蔗糖待测液以不接种任何菌的碳源为蔗糖的无机磷液体培养基为空白对照，S-32淀粉待测液以不接种任何菌的碳源为淀粉的无机磷液体培养基为空白对照，S-32果糖待测液以不接种任何菌的碳源为果糖的无机磷液体培养基为空白对照，S-32乳糖待测液以不接种任何菌的碳源为乳糖的无机磷液体培养基为空白对照，S-32甘露醇待测液以不接种任何菌的碳源为甘露醇的无机磷液体培养基为空白对照，S-32甘油待测液以不接种任何菌的碳源为甘油的无机磷液体培养基为空白对照，结果如表3所示。
表3、不同碳源的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率
注：S-32表示泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017。
结果表明，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017在以葡萄糖、蔗糖、淀粉、果糖、乳糖、甘露醇和甘油为碳源时的解磷率分别为24.19％±0.71％、0.75％±0.07％、0.73％±0.07％、8.29％±0.40％、1.30％±0.08％、7.40％±0.36％和5.25％±0.18％，pH值分别下降3.51、0.23、0.51、1.82、0.73、2.23和1.56个单位，以葡萄糖为碳源时的降解效果最佳。
5、初始pH值对泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率的影响
实验重复三次，每次重复实验的具体步骤如下：
调整无机磷液体培养基初始pH值至4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0，分别接种实施例1的泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017后于150r/min 30℃振荡培养5d后，测定泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017解磷率，各个处理除pH不同外，其它条件均相同。以不接种任何菌株的培养基分别作为相应pH值的培养基的阴性对照，设置3个重复。
结果表明，无机磷培养基初始pH值为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0和10.0的条件下，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017对磷酸钙的解磷率分别为13.56％±0.09％、14.10％±0.14％、22.32％±0.17％、22.69％±0.35％、22.51％±0.18％、12.87％±0.21％和12.72％±0.16％，以初始pH为7时的解磷效果最佳。
6、温度对泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率的影响
实验重复三次，每次重复实验的具体步骤如下：
接种泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017后的无机磷液体培养基分别置于20℃、25℃、30℃、35℃、40℃下摇菌培养(150r/min)，5d后测定泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCCNo.10017的解磷率和培养液pH值，各个处理除温度不同外，其它条件均相同，以不接种任何菌株的无机磷液体培养基为阴性对照，设置3个重复。
结果表明，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017在20℃、25℃、30℃、35℃和40℃下摇菌培养5d后对磷酸钙的解磷率分别为21.13％±0.13％、23.61％±1.08％、24.19％±0.71％、15.70％±0.09％和4.30％±0.26％，pH值分别下降3.15、3.33、3.51、2.73和1.63个单位，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017在温度为30℃时的解磷效果最佳。
7、钠离子浓度对泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率的影响
实验重复三次，每次重复实验的具体步骤如下：
调整无机磷培养基的NaCl质量百分浓度分别为1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％，不接种的培养基为阴性对照，设置3个重复，接种后150r/min30℃振荡培养5d，测定泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率和培养液pH值，各个处理除NaCl质量百分浓度不同外，其它条件均相同。
结果表明，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017在1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％和10％的NaCl质量百分浓度下对磷酸钙的解磷率分别为21.58％±0.40％、20.35％±0.31％、18.79％±0.17％、18.57％±0.14％、14.80±0.13％％、13.85％±0.10％、12.22±0.22％％、10.79％±0.66％、6.73％±0.03％和4.16％±0.07％，pH值分别下降2.90、2.77、2.58、2.49、2.70、2.54、2.37、2.30、1.87和1.13个单位，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017的解磷率随着NaCl质量百分浓度的增高而下降，泛菌(Pantoea sp.)S-32CGMCC No.10017在10％的NaCl浓度下仍具有解磷能力。

Claims (8)

1.泛菌(Pantoea sp.)S-32，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.10017。
2.一种菌剂，其特征在于：所述菌剂的活性成分为权利要求1所述的泛菌(Pantoeasp.)S-32 CGMCC No.10017。
3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂为下述1)或2)或3)所述菌剂：
1)用于降解无机磷的菌剂；
2)用于降解有机磷的菌剂；
3)用于降解无机磷和有机磷的菌剂。
4.根据权利要求3所述的菌剂，其特征在于：所述无机磷为磷酸氢钙、磷矿粉、磷酸铁、磷酸铝和磷酸钙中至少一种；所述有机磷为卵磷脂。
5.下述任一应用：
Ⅰ、权利要求1所述的泛菌(Pantoea sp.)S-32 CGMCC No.10017在降解无机磷和/或有机磷中的应用；
Ⅱ、权利要求2或3或4所述的菌剂在降解无机磷和/或有机磷中的应用；
Ⅲ、权利要求1所述的泛菌(Pantoea sp.)S-32 CGMCC No.10017在制备降解无机磷和/或有机磷产品中的应用；
Ⅳ、权利要求2或3或4所述的菌剂在制备降解无机磷和/或有机磷产品中的应用；
Ⅴ、权利要求1所述的泛菌(Pantoea sp.)S-32 CGMCC No.10017在制备酸性磷酸酶和/或碱性磷酸酶酶中的应用；
Ⅵ、权利要求2或3或4所述的菌剂在制备酸性磷酸酶和/或碱性磷酸酶酶中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述无机磷为磷酸氢钙、磷矿粉、磷酸铁、磷酸铝和磷酸钙中至少一种；所述有机磷为卵磷脂。
7.培养权利要求1所述泛菌(Pantoea sp.)S-32 CGMCC No.10017的方法，包括将所述泛菌(Pantoea sp.)S-32 CGMCC No.10017在用于培养泛菌的培养基中培养的步骤。
8.权利要求2或3或4所述菌剂的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1所述的泛菌(Pantoea sp.)S-32 CGMCC No.10017作为活性成分，得到所述菌剂。
CN201410806691.4A 2014-12-22 2014-12-22 一种降解有机磷和无机磷的泛菌及其应用 Active CN104498403B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410806691.4A CN104498403B (zh) 2014-12-22 2014-12-22 一种降解有机磷和无机磷的泛菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410806691.4A CN104498403B (zh) 2014-12-22 2014-12-22 一种降解有机磷和无机磷的泛菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104498403A CN104498403A (zh) 2015-04-08
CN104498403B true CN104498403B (zh) 2017-06-23

Family

ID=52939857

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410806691.4A Active CN104498403B (zh) 2014-12-22 2014-12-22 一种降解有机磷和无机磷的泛菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104498403B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104962500B (zh) * 2015-07-19 2018-05-22 中国热带农业科学院橡胶研究所 解磷细菌及其分离和培养方法和应用
CN105524895B (zh) * 2016-01-26 2018-08-31 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 来源于巨大芽孢杆菌的酸性磷酸酶及其编码基因与应用
CN107574132B (zh) * 2017-08-23 2020-11-17 九江学院 一种降解难溶性磷和有机磷农药的芽孢杆菌
CN110484461B (zh) * 2019-07-09 2021-03-12 中国医学科学院医药生物技术研究所 贫养杆菌属新物种及其应用
EP3892716A1 (en) * 2020-04-07 2021-10-13 Biofor System d.o.o. Novel plant growth promoting bacterial strains, an improved method for encapsulation of bacteria and a biofertilizer comprising encapsulated bacteria prepared by the said method
CN111763637A (zh) * 2020-06-16 2020-10-13 陕西省微生物研究所 一种有机无机磷降解复合菌剂及其筛选和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN104498403A (zh) 2015-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104498403B (zh) 一种降解有机磷和无机磷的泛菌及其应用
Son et al. Solubilization of insoluble inorganic phosphates by a novel salt-and pH-tolerant Pantoea agglomerans R-42 isolated from soybean rhizosphere
CN111235076B (zh) 一种天神芽孢杆菌、其菌剂及在重金属修复领域的应用
CN110184220B (zh) 一株高效解磷解钾菌及其应用
CN110616179B (zh) 一株铜绿假单胞菌dgnk-jl2及其应用
CN102250808B (zh) 一株产acc脱氨酶的小麦内生固氮菌及其用途
CN104694416A (zh) 一种耐重金属植物根际促生菌新种Burkholderia sp.D414及其应用
CN107815478A (zh) 利用小金色链霉菌bjx007发酵生产春雷霉素的方法
CN109280628A (zh) 一种肠杆菌菌种及其在促进毛竹生长中的应用
Zheng et al. Encapsulation of Bacillus pumilus G5 from polyvinyl alcohol‑sodium alginate (PVA-SA) and its implications in improving plant growth and soil fertility under drought and salt soil conditions
CN113862199B (zh) 一种苯腈类除草剂的降解菌株及其生产的菌剂
CN102286401B (zh) 一株产acc脱氨酶并拮抗赤霉病菌的水稻内生固氮菌及其用途
CN102286400A (zh) 一株提高作物抗病、抗逆的水稻内生固氮菌及其用途
CN102260641B (zh) 一株高效降解有机污染物多菌灵的细菌及其用途
CN107841477A (zh) 一株砷氧化菌在降低稻米三价砷污染中的应用
Wafula et al. Isolation and characterization of bacillus species from soil in Ngere tea catchment area of Murang’a county, Kenya
CN102533928A (zh) 一种以多环芳烃为底物的降解菌的筛选方法
CN102286402B (zh) 产acc脱氨酶并拮抗多种病原真菌的大豆根际固氮菌及其用途
CN103074243A (zh) 一株伯克霍尔德氏菌qz7及其产生生物表面活性剂的应用
CN103343097B (zh) 一株固氮微球菌及其用途
CN103289931B (zh) 一种花域芽孢杆菌菌株sj及其在制备烟草抗病毒制剂和促生剂中的应用
CN113564081B (zh) 一种产呕吐毒素降解酶的德沃斯氏菌scs-3及其应用
CN112680376B (zh) 一株水稻根际克雷伯氏菌及其应用
CN109182189A (zh) 一株高产的氧化微杆菌及其应用
CN103333837B (zh) 一株固氮节杆菌及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant