CN104490909B

CN104490909B - 一种咖啡酸衍生物在制备具有抗rsv病毒作用的药物中的应用

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Publication number: CN104490909B
Application number: CN201410721701.4A
Authority: CN
Inventors: 吴霞; 李药兰; 叶文才; 王国才; 王英; 张晓琦
Original assignee: Jinan University
Current assignee: Jinan University
Priority date: 2014-12-03
Filing date: 2014-12-03
Publication date: 2017-06-23
Anticipated expiration: 2034-12-03
Also published as: CN104490909A

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体公开了一种咖啡酸衍生物在制备具有抗RSV病毒作用的药物中的应用。所述的咖啡酸衍生物为槲皮素‑3‑O‑(6″‑O‑E‑咖啡酰基)‑ β‑D‑葡萄糖苷，具有高效、低毒的抗RSV病毒作用，其抗RSV病毒的IC₅₀值为0.78，远远小于病毒唑的IC₅₀值3.6。

Description

一种咖啡酸衍生物在制备具有抗RSV病毒作用的药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种咖啡酸衍生物在制备具有抗RSV病毒作用的药物中的应用。

背景技术

呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus, RSV）是一种常见的呼吸道感

染病原体，其首次感染多发生于周岁以内的婴儿期，主要可导致婴幼儿期肺炎和支气管炎，也是引发儿童支气管哮喘的重要危险因素之一，严重危害婴幼儿健康。RSV 感染在世界范围内均非常普遍，据统计，世界不同地区每年因RSV 感染而需住院治疗的患儿为0.5%~2%，住院病人死亡率为0.5%~3.5%。此外，RSV 感染不能产生持续的免疫性，可导致宿主发生终生感染和再感染循环，故也是老年人和免疫力低下人群呼吸道疾病的重要感染原，并可诱发细支气管炎、肺炎及造成慢性阻塞性肺病恶化，进而导致住院率和死亡率的提高。

目前，临床上对RSV感染尚无特异有效的治疗和预防药物。利巴韦林是被美国食品药品管理局（FDA）批准用于治疗RSV感染的唯一化学药物，是目前公认的对RSV具一定疗效的广谱抗病毒药物。但毒性较高，使用周期长、费用高尚不能普遍推广。因此，寻找和开发高效、低毒的新型抗RSV药物具有重要意义。

槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷的结构是由咖啡酸、葡萄糖与

黄酮类的槲皮素连接而成的结构。分类时可以分为咖啡酸衍生物，由于其结构与黄酮苷类更为接近，一般将其归为黄酮苷类化合物。目前，该化合物已从多种植物中分离出来，但都是被当做黄酮类成分被报到（Journal of Natural Products, 2001, 64: 671-673.）。在众多报道中也未提及该化合物具有抗RSV病毒作用。

虽然专利CN 102219686 A和CN 102219687 B公开了具有抗RSV病毒的咖啡酸类衍生物，如：3,5-O- 二咖啡酰奎宁酸、3,4-O- 二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、3,5-O- 二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,4-O- 二咖啡酰奎宁酸甲酯、4,5-O- 二咖啡酰奎宁酸甲酯和5-O- 咖啡酰奎宁酸及1α，2β-O-二咖啡酰环戊-3β-醇等具有抗RSV病毒作用，但是这些衍生物的结构都是属于由咖啡酸和五元环和六元环的酸或醇相连接，结构与槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷的结构差异很大。况且，目前发现的具有抗RSV病毒的咖啡酸类衍生物还比较少，仅仅为CN 102219686 A和CN 102219687 B中公开的少数几种，咖啡酸类衍生物存在成千上万种结构，并非每一种都具有抗RSV病毒作用，还有待我们从中进一步开发出具有高效、低毒的抗RSV药物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中抗RSV病毒药物的不

足，提供一种咖啡酸衍生物在制备具有抗RSV病毒作用的药物中的应用。

本发明所要解决的另一技术问题是，提供一种具有抗RSV病毒作用的药物。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种咖啡酸衍生物在制备具有抗RSV病毒作用的药物中的应用，所述的咖啡酸衍生物为槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷，具有如式I 所示的化学结构：

（式I ）。

作为一种优选方案，所述的具有抗RSV病毒作用的药物含有治疗有效量的槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷和药学上可接受的载体。

作为一种优选方案，所述的具有抗RSV病毒作用的药物制成散剂、丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、气雾剂或注射剂。

一种具有抗RSV病毒作用的药物，其含有槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、3-O-咖啡酰奎宁酸和病毒唑。

作为一种优选方案，所述的槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、3-O-咖啡酰奎宁酸和病毒唑的质量比为1~4:1~4:1~4。

作为一种进一步优选方案，所述的槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、3-O-咖啡酰奎宁酸和病毒唑的质量比为4:1~4:1。

作为一种优选方案，所述药物中含有治疗有效量的槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、3-O-咖啡酰奎宁酸、病毒唑和药学上可接受的载体。

作为一种优选方案，所述的药物制成散剂、丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、气雾剂或注射剂。

本发明具有如下有益效果：（1）本发明从成千上万种咖啡酸衍生物中筛选出了具有抗RSV病毒作用的槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷，具有高效、低毒的抗RSV病毒作用，其抗RSV病毒的IC50值为0.78，远远小于病毒唑的IC50值3.6，说明其抗病毒效果要优于病毒唑的抗病毒效果；其选择性系数SI值>256，远远高于病毒唑的17.3，说明其比病毒唑更具有高效、低毒的抗RSV病毒作用；（2）槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷与病毒唑及3-O-咖啡酰奎宁酸特异性组合后能够产生协同作用，能够起到更好的抗病毒效果。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限制。

实施例1 咖啡酸衍生物抗RSV病毒活性测定

细胞、病毒和实验材料：病毒为呼吸道合胞病毒(RSV)，宿主细胞为喉癌细(Hep-2)；阳性对照药为病毒唑；细胞生长在质量百分比浓度为10％的小牛血清(FBS) 的MEM 培养基中；维持液为1％ FBS 的MEM 培养基。

样品溶液的配制：将槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、槲皮素、槲皮苷、咖啡酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、3-O-咖啡酰奎宁酸、5-O-咖啡酰奎宁酸和病毒唑用维持液配分别配成200μg/mL 和100μg/mL 的样品溶液。

用四唑盐(MTT) 比色法测定化合物的细胞毒性：将Hep-2细胞培养在96孔培养板中，等单层细胞长好后，加入用维持液稀释好的样品(浓度为200.0~3.1 μg/mL)，在37℃，5％CO₂培养箱中培养3天。加入10μlMTT溶液(5mg/mL，用缓冲溶液配置)，继续培养4小时。吸出样品溶液，加入二甲亚砜，室温下，将96孔板置于微空孔板振荡器中振荡10分钟。用酶标仪测定各孔的OD值，测量波长为570nm，参比波长为630nm，计算样品对细胞的半数致死毒性浓度(CC50)。每组设4个平衡孔，每组实验重复3次。计算结果，画出曲线，求出半数毒性浓度(CC50)。

通过观察样品对细胞病变效应的抑制程度(cytopathic effectreductionassay) 测定抗病毒活性：将Hep-2细胞培养在96孔培养板中，等单层细胞长好后，加入用维持液稀释好的100倍半数感染量(100TCID50)的病毒液，再加入用维持液稀释好的系列浓度样品溶液(浓度为100～0.4μg/mL)。在37℃，5％CO₂培养箱中培养3～4天。每天于倒置显微镜下观察细胞病变效应(CPE) 的程度，并记录：-表示无CPE ；+表示0～25％细胞有CPE；2+表示25～50％细胞有CPE ；3+表示50～70％细胞有CPE；4+表示75～100％细胞有CPE。最后估计出半数抑制浓度(IC50)。选择性指数(SI)＝CC50/IC50。实验结果见表1。

上表中的数据CC₅₀越大，表明毒性越低；IC₅₀越小说明抗病毒作用越好；选择性指数SI值越大说明化合物的越具有高效低毒作用。

从数据中可以看出，槲皮素、槲皮苷和咖啡酸的IC₅₀值比较大，基本上不具备抗RSV病毒的作用。而由槲皮苷和咖啡酸结合而形成的槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷的IC₅₀值很小，具有很好的抗病毒效果，其抗病毒效果要远远优于阳性对照药病毒唑（利巴韦林），且比上述几种咖啡酰基奎宁酸类化合物的抗RSV病毒效果要好很多。从SI值来看，槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷的SI值>256，比病毒唑及其它咖啡酰基奎宁酸类化合物要高，说明槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷比其他化合物的毒性低抗病毒效果好。

实施例2 咖啡酸衍生物药物组合物抗RSV病毒活性测定

测试样品溶液的配置：将槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、病毒唑、3-O-咖啡酰奎宁酸、5-O-咖啡酰奎宁酸、组合物1为槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷：病毒唑：3-O-咖啡酰奎宁酸（质量比4:4:1）、组合物2为槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷：病毒唑：3-O-咖啡酰奎宁酸（质量比4:2:1）、组合物3为槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷：病毒唑：3-O-咖啡酰奎宁酸（质量比1:1:1）、组合物4为槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷：病毒唑（质量比1:1）、组合物5为槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷：3-O-咖啡酰奎宁酸（质量比1:1）、组合物6为槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷：病毒唑：5-O-咖啡酰奎宁酸（质量比1:1:1）用维持液配分别配成200μg/mL 和100μg/mL 的样品溶液进行抗RSV病毒活性测试。测试方法及所使用的材料与实施例1相同。

从表2中可以看出，将槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、病毒唑和3-O-咖啡酰奎宁酸三种成分组合后其IC₅₀的值分别为0.31、0.42和0.5，均小于单独使用槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷的0.78；槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷、病毒唑和3-O-咖啡酰奎宁酸三种成分组合的SI值分别为>645，>476和350远远大于单独使用槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷的256，说明槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、病毒唑和3-O-咖啡酰奎宁酸三种成分组合后产生了协同作用，抗病毒作用得到了明显的增强，选择性系数得到了明显的提高。

从表2中的试验数据还可以看出，当槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷只与病毒唑或3-O-咖啡酰奎宁酸组合后并不能产生协同效果，说明槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷需三种成分组合后才能产生协同效果。槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、病毒唑和5-O-咖啡酰奎宁酸三种成分组合后也并未产生协同效果，说明只有将槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷与病毒唑和3-O-咖啡酰奎宁酸这三种成分特异性组合后方能起到协同增效作用。

实施例3 槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷片剂的制备

将槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷1g 与微晶纤维素27g 及硬脂酸镁2g 混合，混合物用单冲压片机打成直径6mm，重量300mg的片。本片剂中每片含槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷10mg。

实施例4 槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷散剂的制备

将槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷5g与淀粉25g混合，加水制成软材，过12目筛进行造粒，干燥后得到散剂。本散剂中，每300mg中含槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷50mg。

实施例5 药物组合物胶囊剂的制备

将槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷：病毒唑：3-O-咖啡酰奎宁酸（质量比4:4:1）的药物组合物1g与乳糖27g、硬脂酸镁2g混合，以每300mg填充胶囊。本胶囊剂中，每个胶囊含药物组合物10mg。

Claims

1.一种具有抗呼吸道合胞病毒作用的药物，其特征在于，含有槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、3-O-咖啡酰奎宁酸和病毒唑；所述的槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、3-O-咖啡酰奎宁酸和病毒唑的质量比为1~4:1~4:1~4。

2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述的槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷、3-O-咖啡酰奎宁酸和病毒唑的质量比为4:1~4:1。

3.根据权利要求1或2所述的药物，其特征在于，药物中含有治疗有效量的槲皮素-3-O-(6″-O-E-咖啡酰基)- β-D-葡萄糖苷、3-O-咖啡酰奎宁酸、病毒唑和药学上可接受的载体。

4.根据权利要求1或2所述的药物，其特征在于，所述的药物制成散剂、丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、气雾剂或注射剂。