CN104490636A - 一种以肌肽为活性成分的外用制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种以肌肽为活性成分的外用制剂及其制备方法，所述外用制剂由以下重量份的成分组成：肌肽0.01-5份、油5-15份、磷脂1-20份、非离子表面活性剂0.5-21份和分散介质60-90份。本发明提供的含以肌肽为活性成分的外用制剂包封率高于90％，优于现有技术。本发明提供的以肌肽为活性成分的外用制剂平均粒径小于140nm，优于现有技术。经过试验考察发现，本发明提供的以肌肽为活性成分的外用制剂能促进肌肽被皮肤吸收，且优于现有技术；在37℃的条件下密闭保存3个月，本发明提供的肌肽脂质纳米乳依然保持很好的吸收效果。
Description
技术领域
本发明涉及脂质纳米乳，具体涉及一种以肌肽为活性成分的外用制剂。
背景技术
肌肽是，全称L-肌肽，(L-Carnosine)，别名N-beta-丙氨酰-L-组氨酸，由β-丙氨酸和组氨酸组成的二肽，分子量226Da，水溶性极佳。一般而言，由于皮肤的脂质性和角质层的存在，亲水性的分子很难通过皮肤障碍而被机体吸收。研究表明通过向亲水分子引入疏水基团，难增加它们透过皮肤的能力(Lintner K,Peschard O,Int J Cosmet Sci(2000)22:207–218)。通过纳米技术，将亲水性分子包裹于乳剂等两亲性体系，也能够显著增强亲水分子的生物利用度。
但是经过检索发现，没有将肌肽制成纳米乳或微乳的制剂。
因此，需要提供一种可以增加其水溶性的制剂。
发明内容
本发明的目的是涉及一种以肌肽为活性成分的外用制剂。
本发明提供的一种以肌肽为活性成分的外用制剂，其由以下成分组成：肌肽、油、磷脂、非离子表面活性剂和分散介质。
具体的，所述外用制剂由以下重量分的成分组成：肌肽0.01-5份、油5-15份、磷脂1-20份、非离子表面活性剂0.5-21份和分散介质60-90份。
上述外用制剂中，
所述非离子表面活性剂为司盘60、司盘80、聚甘油单油酸酯、吐温80、聚氧乙烯蓖麻油或聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯中的四种以上；
所述磷脂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂，优选大豆卵磷脂；
所述油为大豆油、辛酸/癸酸甘油酯、红花油或橄榄油的一种或两种，优选为辛酸/癸酸甘油酯；
所述分散介质为水、甘油或丙二醇中的一种或两种。
作为本发明的优选方案，所述外用制剂由以下重量份的成分组成：肌肽0.2-5份、辛酸/癸酸甘油酯5-15份、磷脂3.5-10份、司盘800-2份、聚甘油单油酸酯0.5-4份、吐温800.5-5份、聚氧乙烯蓖麻油0-5份、聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯0-5份、甘油40-80份和水5-20份。
进一步优选，所述外用制剂(透皮效果较佳)由以下重量份的成分组成：肌肽0.5-3份、辛酸/癸酸甘油酯10-15份、磷脂5-10份、司盘801-2份、聚甘油单油酸酯2-3份、吐温802.5-5份、聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯1-2份、甘油55-70份和水5-10份。
更进一步优选，所述外用制剂(透皮效果最佳)由以下重量份的成分组成：肌肽3份、辛酸/癸酸甘油酯15份、磷脂10份、司盘801.5份、聚甘油单油酸酯2.5份、吐温805份、聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯1份、甘油57份和水5份。
本发明的另一目的是提供所述的外用制剂的制备方法，该方法包括下述步骤：
1)分别将磷脂、肌肽溶于体积比为5：7的氯仿-正己烷溶液，和蒸馏水中，搅拌均匀后，将两溶液混合，并超声处理，所得乳剂经冷冻干燥处理，即得肌肽-磷脂复合物；
2)将步骤1)所得肌肽-磷脂复合物、油、非离子表面活性剂混合，在8000-12000rpm条件下高速剪切，至体系中无肉眼可见固形物；
3)将分散介质加入步骤2)产物，8000-12000rpm条件下高速剪切，得初乳，初乳经高压均质机处理，所用压力800-2000bar，循环次数5-10次，即得透明清亮状肌肽脂质纳米乳。
步骤1)中：
所述氯仿-正己烷溶液的用量为磷脂重量的10-5倍体积；
所述蒸馏水的用量为胶原三肽重量的20-50倍体积。
本发明还提供了上述外用制剂在制备抗氧化的化妆品中的应用。
本发明提供的以肌肽为活性成分的外用制剂具有以下优点：
1、本发明提供以肌肽为活性成分的外用制剂，通过将肌肽与磷脂、油、非离子表面活性剂、分散介质进行适当的配比，配比合理，尤其是选用多种非离子表面活性剂，避免了单一表面活性剂不能完全融合到肌肽内的缺点，最终组合的纳米乳稳定性好。
2、制备方法：本发明先将磷脂、肌肽在溶剂和水中搅拌均匀，冷冻干燥后得到肌肽-磷脂的复合物，然后加入油、非离子表面活性剂高速剪切，再加入分散介质告诉剪切，形成初乳，多次高压均质后，使得肌肽包裹于磷脂脂质纳米乳中，解决了水溶性的问题，增强了肌肽稳定性，以及在皮肤外用领域中的应用。
3、本发明提供的含以肌肽为活性成分的外用制剂包封率高于90％，优于现有技术。
4、本发明提供的以肌肽为活性成分的外用制剂平均粒径小于140nm，优于现有技术。
5、经过试验考察发现，本发明提供的以肌肽为活性成分的外用制剂能促进肌肽被皮肤吸收，且优于现有技术；在37℃的条件下密闭保存3个月，本发明提供的肌肽脂质纳米乳依然保持很好的吸收效果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1：以肌肽为活性成分的外用制剂
1、组成：
2、制备方法：
1)将磷脂溶于70ml氯仿-正己烷溶液(氯仿与正己烷的体积比为5：7)，将肌肽溶于10ml蒸馏水中，搅拌均匀后，将两溶液混合，并超声处理，所得乳剂经冷冻干燥处理，即得肌肽-磷脂复合物；
2)将肌肽-磷脂复合物、辛酸/癸酸甘油酯、聚甘油单油酸酯、吐温80、聚氧乙烯蓖麻油、聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯混合，在8000rpm条件下高速剪切，至体系中无肉眼可见固形物；
3)将甘油和水加入步骤2)产物，12000rpm条件下高速剪切，得初乳，初乳经高压均质机处理，所用压力800bar，循环5次，即得透明清亮状外用制剂。
实施例2：以肌肽为活性成分的外用制剂
1、组成：
2、制备方法：
1)将磷脂溶于100ml氯仿-正己烷溶液(氯仿与正己烷的体积比为5：7)，将肌肽溶于25ml蒸馏水中，搅拌均匀后，将两溶液混合，并超声处理，所得乳剂经冷冻干燥处理，即得肌肽-磷脂复合物；
2)将肌肽-磷脂复合物、辛酸/癸酸甘油酯、司盘80、聚甘油单油酸酯、吐温80、聚氧乙烯蓖麻油混合，在12000rpm条件下高速剪切，至体系中无肉眼可见固形物；
3)将甘油和水加入步骤2)产物，8000rpm条件下高速剪切，得初乳，初乳经高压均质机处理，所用压力1200bar，循环7次，即得透明清亮状外用制剂。
实施例3：以肌肽为活性成分的外用制剂
1、组成：
2、制备方法：
1)将磷脂溶于200ml氯仿-正己烷溶液(氯仿与正己烷的体积比为5：7)，将肌肽溶于150ml蒸馏水中，搅拌均匀后，将两溶液混合，并超声处理，所得乳剂经冷冻干燥处理，即得肌肽-磷脂复合物；
2)将肌肽-磷脂复合物、辛酸/癸酸甘油酯、司盘80、聚甘油单油酸酯、吐温80、聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯混合，在10000rpm条件下高速剪切，至体系中无肉眼可见固形物；
3)将甘油和水加入步骤2)产物，10000rpm条件下高速剪切，得初乳，初乳经高压均质机处理，所用压力2000bar，循环10次，即得透明清亮状外用制剂。
实施例4：以肌肽为活性成分的外用制剂
1、组成：
2、制备方法：
1)将磷脂溶于100ml氯仿-正己烷溶液(氯仿与正己烷的体积比为5：7)，将肌肽溶于30ml蒸馏水中，搅拌均匀后，将两溶液混合，并超声处理，所得乳剂经冷冻干燥处理，即得肌肽-磷脂复合物；
2)将肌肽-磷脂复合物、辛酸/癸酸甘油酯、司盘80、聚甘油单油酸酯、吐温80、聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯混合，在12000rpm条件下高速剪切，至体系中无肉眼可见固形物；
3)将甘油和水加入步骤2)产物，8000rpm条件下高速剪切，得初乳，初乳经高压均质机处理，所用压力1500bar，循环5次，即得透明清亮状外用制剂。
实施例5：以肌肽为活性成分的外用制剂
1、组成：
2、制备方法：
1)将磷脂溶于80ml氯仿-正己烷溶液(氯仿与正己烷的体积比为5：7)，将肌肽溶于10ml蒸馏水中，搅拌均匀后，将两溶液混合，并超声处理，所得乳剂经冷冻干燥处理，即得肌肽-磷脂复合物；
2)将肌肽-磷脂复合物、辛酸/癸酸甘油酯、司盘80、聚甘油单油酸酯、吐温80、聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯混合，在8000rpm条件下高速剪切，至体系中无肉眼可见固形物；
3)将甘油和水加入步骤2)产物，12000rpm条件下高速剪切，得初乳，初乳经高压均质机处理，所用压力800bar，循环8次，即得透明清亮状外用制剂。
对比例1：脂质纳米胶囊
参考CN200710190222.4(CN101161238A)的实施例1，加入肌肽0.5g，具体方法为：
1)油相的制备：称取0.5g肌肽、15g辛酸癸酸甘油酯和10g的三棕榈酸甘油酯于60度的水浴中溶解为均一的油相；
2)水相的制备：称取10g去离子水和60g甘油于60度水浴中搅拌成均一的甘油水溶液，然后再加入5g卵磷脂，搅拌至磷脂完全分散到甘油水溶液中，作为水相；
3)O/W乳液的制备：将油相于60度条件下加入水相中搅拌至均一的O/W乳液，然后将该乳液在800bar压力条件下经过高压均质循环6次，最后将得到的乳液常温冷却至形成半透明年凑液体，即得脂质纳米胶囊。
实验例1：包封率测定
1、实验样品
样品1-5：实施例1-5制备的产品；
对照品：对比例1制备的产品。
2、实验方法：采用透析法，取1ml以肌肽为活性成分的外用制剂放入透析袋中，40ml去离子水进行8h透析。包封率(encapsulating efficiency,EE)按如下公式计算：
EE＝析后外用制剂中肌肽含量/肌肽外用制剂理论含量×100％。
3、结果：见表1。
表1：不同样品包封率
| 名称 | 样品1 | 样品2 | 样品3 | 样品4 | 样品5 | 对照品 |
| 包封率 | 90.8％ | 92.1％ | 98.5％ | 97.6％ | 96.9％ | 34.8％ |
表1结果显示：经过8h的透析试验，样品1-5有着极好的包封率，极显著优于对照品。
结果说明：本发明提供的含肌肽的脂质纳米乳包封率高于90％，优于现有技术。
实验例2：粒径测定
1、试验样品：同实验例1。
2、粒径测定：
采用Malvern Zetasizer 3000HSA粒度分析仪检测粒径，测定前，将样品1-5和对照品用Millipore超纯水稀释30倍。
3、试验结果：见表2：
表2：不同样品粒径大小
| 名称 | 样品1 | 样品2 | 样品3 | 样品4 | 样品5 | 对照品 |
| 平均粒径 | 137nm | 102nm | 76nm | 82nm | 89nm | 231nm |
由表2可见，样品1-5乳化后的平均粒径小于对照品。
结果表明：本发明提供的以肌肽为活性成分的外用制剂平均粒径小于140nm，优于现有技术。
实验例3：体外透皮试验
1、实验样品：
样品1-5：实施例1-5制备的产品；
对照品1：0.2％的肌肽水溶液，测试前，通过稀释，将不同试样中肌肽浓度统一为0.2％；
对照品2：对比例1制备的产品。
2、试验方法：取(25±5)g雄性小鼠，用6％的Na2S溶液脱去腹部毛，断颈处死后立即剪下腹部皮肤，剔除皮下组织和脂肪，用纯化水反复冲洗。将皮肤固定在扩散池上，角质层朝上，用纯化水作为接受液，转速为180rpm，扩散面积为3.3cm2，接受池总体积为18ml，37℃水浴循环。取1克实验样品(样品1-5或对照品1、2)放于鼠皮上，于1，2，4，6，8h分别取接受液2ml，并补充相同体积的空白接受液，通过HPLC法测定各样品含量，并计算单位面积累积透过量Q，计算公式如下：
Q＝ΣCnV/A
式中：
Cn代表第n次取样的样品浓度，V代表接受池的液体的体积，A代表扩散面积。
在第6个月后，用本发明的产品再重复进行上次实验。
6个月的保存方法是，置于37℃条件下，密闭放置。
3、实验结果：
3.1：不同样品单位面积累积透过量：见表3
表3：不同样品单位面积累积透过量(μg/cm2)
| 名称 | 样品1 | 样品2 | 样品3 | 样品4 | 样品5 | 对照品1 | 对照品2 |
| 透过量 | 372.5 | 286.1 | 439.8 | 428.1 | 437.5 | 100.5 | 18.7 |
表3结果显示：分别与对照品1、2相比，样品1-5能极显著的增加肌肽的透过量，其中样品3-5增加肌肽的透过量更加明显。
3.2：6个月后不同样品单位面积累积透过量：见表4
表4：6个月后不同样品单位面积累积透过量(μg/cm2)
| 名称 | 样品1 | 样品2 | 样品3 | 样品4 | 样品5 | 对照品1 | 对照品2 |
| 透过量 | 90.6 | 72.1 | 230.7 | 218.6 | 220.3 | 6.2 | 1.5 |
表4结果显示：分别与对照品1、2相比，样品3-5能极显著的增加肌肽的透过量，其中样品3效果最佳。
结果表明：本发明提供的以肌肽为活性成分的外用制剂能促进肌肽被皮肤吸收，且优于现有技术；在37℃的条件下密闭保存6个月，本发明提供的以肌肽为活性成分的外用制剂依然保持很好的吸收效果。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (7)
1.一种以肌肽为活性成分的外用制剂，其由以下成分组成：肌肽0.01-5份、油5-15份、磷脂1-20份、非离子表面活性剂0.5-21份和分散介质60-90份。
2.根据权利要求1所述的外用制剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂为司盘60、司盘80、聚甘油单油酸酯、吐温80、聚氧乙烯蓖麻油或聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯中的四种以上。
3.根据权利要求1或2所述的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂由以下重量份的成分组成：肌肽0.2-5份、辛酸/癸酸甘油酯5-15份、磷脂3.5-10份、司盘800-2份、聚甘油单油酸酯0.5-4份、吐温800.5-5份、聚氧乙烯蓖麻油0-5份、聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯0-5份、甘油40-80份和水5-20份。
4.根据权利要求1或2所述的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂由以下重量份的成分组成：肌肽0.5-3份、辛酸/癸酸甘油酯10-15份、磷脂5-10份、司盘801-2份、聚甘油单油酸酯2-3份、吐温802.5-5份、聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯1-2份、甘油55-70份和水5-10份。
5.根据权利要求4所述的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂由以下重量份的成分组成：肌肽3份、辛酸/癸酸甘油酯15份、磷脂10份、司盘801.5份、聚甘油单油酸酯2.5份、吐温805份、聚乙二醇辛酸/癸酸甘油酯1份、甘油57份和水5份。
6.一种制备权利要求1-5任一项所述的外用制剂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1)分别将磷脂、肌肽溶于体积比为5：7的氯仿-正己烷溶液，和蒸馏水中，搅拌均匀后，将两溶液混合，并超声处理，所得乳剂经冷冻干燥处理，即得肌肽-磷脂复合物；
2)将步骤1)所得肌肽-磷脂复合物、油、非离子表面活性剂混合，在8000-12000rpm条件下高速剪切，至体系中无肉眼可见固形物；
3)将分散介质加入步骤2)产物，8000-12000rpm条件下高速剪切，得初乳，初乳经高压均质机处理，所用压力800-2000bar，循环次数5-10次，即得透明清亮状外用制剂。
7.权利要求1-5任一项所述的外用制剂在制备抗氧化的化妆品中的应用。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150408 |