CN104473870B

CN104473870B - 丁酸氯维地平脂微球注射液及其制备方法

Info

Publication number: CN104473870B
Application number: CN201410692122.1A
Authority: CN
Inventors: 刘宇; 陈立江; 王芳; 焉喜臣
Original assignee: Liaoning University
Current assignee: Liaoning University
Priority date: 2014-11-25
Filing date: 2014-11-25
Publication date: 2017-08-29
Anticipated expiration: 2034-11-25
Also published as: CN104473870A

Abstract

本发明涉及丁酸氯维地平脂微球注射液及其制备方法。由丁酸氯维地平、注射用油、乳化剂、稳定剂、等张剂、pH调节剂、注射用水组成。将等张剂溶于注射用水中，用NaOH调节pH至6.0～8.0得水相；将注射用油和稳定剂，于40‑90℃下预热；加入丁酸氯维地平，摇匀混合；加入乳化剂，采用高速分散机剪切得油相；将油相缓慢加入水相中，采用高速分散机剪切，高速剪切机的剪切速度为10000～20000rpm，每次1～5min，剪切次数为5～20次，得到稳定的初乳；初乳加入至微射流中，进行高压均质，高压均质压力为7000～20000psi，均质10‑20次。本发明可实现一步快速制备小粒径的丁酸氯维地平脂微球注射液。

Description

丁酸氯维地平脂微球注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种丁酸氯维地平脂微球注射液及其高压微射流快速制备法。

背景技术

高血压是一种以动脉压升高为特征，伴有心脏、脑、血管和肾脏等器官功能性或器质性改变的全身性疾病。高血压是我国最常见的慢性病，也是心脑血管病最主要的危险因素。丁酸氯维地平是第三代短效的二氢吡啶类钙通道阻滞剂，临床应用于围手术期高血压、急性高血压、原发性高血压等，疗效显著。丁酸氯维地平可选择性舒张动脉血管，降低全身血管阻力从而使平均动脉压降低，但不降低心充盈压(前负荷)，对心肌收缩力和静脉血管容量并没有影响。与目前许多静脉注射经肾或肝代谢的抗高血压药不同，丁酸氯维地平消除速度快，可以递增剂量精确地控制血压，而且不在体内蓄积。

对于进行心脏手术的病人来说，急性高血压会直接或间接影响手术后的发病情况，如心肌对氧的需求增加引起的心肌缺血，动脉缝合线张裂引起的出血，以及神经系统并发症。如果不及时治疗，后果不堪设想。目前，大多注射用降压药非选择性地作用于阻力血管，会诱导心脏损伤和低血容量的病人出现急性低血压。快速降压的同时需要注意防止由于血压过低引起的灌注不足和局部缺血。对于没有靶器官受损迹象并且可以口服药物的患者，口服降压药物较为适宜。然而对于已出现器官衰竭迹象或者无法口服药物的危重病人，必须通过静脉给予降压药物。因此，起效快、作用消除快、适于精确滴注控制血压并且毒性较小的抗高血压药物的出现，在围术期高血压和急性高血压的治疗中具有重要意义。

将丁酸氯维地平制备成脂微球注射液，不但解决了其水溶性差、稳定性差的问题，而且充分发挥了丁酸氯维地平快速控制血压的优势，在围术期高血压和急性高血压的治疗中具有重要意义。

在现有制备丁酸氯地平脂微球注射液的方法中，大都采用过滤的方法，筛选具有一定粒径的丁酸氯地平脂微球，步骤繁琐，在过滤时滤膜容易吸附药物，影响制剂中的药物含量，容易产生批次间的差异。此外，粒径较大，稳定性不好，易发生聚集沉降。

发明内容

本发明的目的是提供一种丁酸氯维地平脂微球注射液的配方，并通过高压微射流快速制备法，一步快速制备小粒径的丁酸氯维地平脂微球注射液。

本发明采用的技术方案是：丁酸氯维地平脂微球注射液由下述原料按重量百分比混合而成：

所述的注射用油为注射用大豆油。

所述的乳化剂选自大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂一种或二种的混合。

所述的稳定剂选自油酸、油酸钠、胆酸、胆酸钠、脱氧胆酸或脱氧胆酸盐的一种或二种的以上的混合。

所述的等张剂为甘油。

所述的pH调节剂为氢氧化钠。

本发明还提供了一种一步快速制备丁酸氯维地平脂微球注射液的方法，包括以下步骤：

1)水相：将处方量的等张剂分散于注射用水中，搅拌至全部溶解，以0.1mol/LNaOH溶液调节pH至6.0～8.0；

2)油相：称取处方量的注射用油和稳定剂，于40-90℃下预热1-5min；加入处方量的丁酸氯维地平，摇匀混合；加入乳化剂，50℃～100℃下，采用高速分散机剪切至乳化油全部溶解；

3)将油相缓慢加入至水相中，加水，采用高速分散机剪切，高速剪切机的剪切速度为10000～20000rpm，每次1～5min，剪切次数为5～20次，得到稳定的初乳；

4)初乳加入至微射流中，进行高压均质，高压均质压力为7000～20000psi，均质10-20次。

优选的，丁酸氯维地平脂微球注射液的制备方法，包括如下步骤：

1)水相：将处方量的等张剂分散于注射用水中，搅拌至全部溶解，以0.1mol/LNaOH溶液调节pH至8.0；

2)油相：称取处方量的注射用油和稳定剂，于70℃下预热2min；加入处方量的丁酸氯维地平，摇匀混合；加入乳化剂，70℃下，采用高速分散机剪切至乳化油全部溶解；

3)将油相缓慢加入至水相中，加水，采用高速分散机剪切，采用高速分散机20000rpm剪切10次，每次1min，得到稳定的初乳。

4)加入至微射流中，进行高压均质，高压均质压力为15000psi，均质12次。

本发明的有益效果是：本发明制备得到的丁酸氯维地平脂微球注射液，为白色均匀乳状液体，粒径在160～260nm之间，且粒径分布均匀，Zeta电位在-30～-40mV之间；游离脂肪酸和过氧化值均符合要求。采用本发明的方法制备的丁酸氯维地平脂微球注射液在低温条件下稳定性良好。本发明通过调整剪切速度，高压均质压力和均质次数，在三者工艺条件的协同作用下，一步即可实现丁酸氯维地平脂微球注射液的制备，所得粒径可达到160nm左右，更满足人体注射需求。

附图说明

图1小鼠尾静脉给药丁酸氯维地平脂微球注射液低剂量组与高剂量组中丁酸氯维地平的血药浓度-时间曲线(n＝5)。

图2小鼠尾静脉给药丁酸氯维地平脂微球注射液低剂量组与高剂量组中丁酸氯维地平酸的血药浓度-时间曲线(n＝5)。

具体实施方式

实施例1 原料对丁酸氯维地平脂微球注射液的影响

制备方法：1)水相：将处方量的等张剂分散于注射用水中，搅拌至全部溶解，以0.1mol/L NaOH溶液调节pH至8.0；

1、乳化剂的选择

方法同上，稳定剂为油酸，乳化剂分别取大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂。以粒径、PDI、Zeta电位为指标，考察对脂微球的稳定作用。结果见表1。

表1 卵磷脂对丁酸氯维地平脂微球注射液的影响

由表1可见，乳化剂以大豆卵磷脂为宜。

2、稳定剂的选择

方法同上，乳化剂选用大豆卵磷脂，只改变稳定剂。以粒径、PDI、Zeta电位为指标，考察对脂微球的稳定作用。结果见表2。

表2 稳定剂对丁酸氯维地平脂微球注射液的影响

由表2可见，稳定剂以油酸为宜。

3、油酸用量的影响

方法同上，只改变油酸的用量。以粒径、PDI、Zeta电位为指标，考察对脂微球的稳定作用。结果见表3。

表3 油酸用量对丁酸氯维地平脂微球注射液的影响

结果表明，随着油酸用量的增加，脂微球的PDI越小，Zeta电位绝对值越大，体系越稳定。由于油酸或油酸钠为表面活性剂，有一定的溶血作用，因此在制剂稳定的前提下应尽可能减少其加入量。所以确定油酸用量为0.03％。

4、PH调节剂

选择合适的pH值对脂微球的化学稳定性的至关重要。首先，脂微球的pH值必须在人体生理耐受的范围之内；其次，pH值不仅影响药物的稳定性，而且影响卵磷脂及油相的稳定性；最后，pH值影响脂微球的Zeta电位。结果见表4。

表4 pH值对丁酸氯维地平脂微球注射液的影响

结果表明，灭菌前，随着pH的增加，PDI值减小，Zeta电位值增大。灭菌后和灭菌前相比，当pH值调为5.0和6.0时，粒径和PDI明显增大，粒径分布变宽，制剂稳定性被破坏；当pH接近中性时，药物灭菌稳定性较好；当pH调为8.0时，药物的含量最大。综上所述，确定调节pH为8.0。

实施例2 工艺条件对丁酸氯维地平脂微球注射液的影响

1、乳化温度的影响

乳化温度是指油相和水相混合剪切时的温度。乳化温度可影响乳化时油相和水相的流动性、药物的稳定性和表面活性剂的行为。以粒径，PDI、药物含量和Zeta电位为主要评价指标，在混合剪切前将油水两相预热，温度设为40℃，50℃，60℃，70℃，80℃和90℃，考察乳化温度对丁酸氯维地平脂微球的物理和化学稳定性的影响。结果见表5。

表5 乳化温度对丁酸氯维地平脂微球的影响

由表5可见，当乳化温度为70℃时，脂微球的粒径最小，药物含量最高。当温度大于70℃时，体系乳滴的运动过快，磷脂的流动性增强，小乳滴易聚集在一起形成大乳滴。且随着温度的升高，药物含量迅速下降，这是由于药物高温条件下易发生氧化和降解。当小于70℃时，油相的黏度太大，流动性差，乳化不充分。所以，乳化温度过高或过低均不利于乳化。综上所述，将乳化温度确定为70℃。

2、剪切工艺的影响

良好的初乳对于高压均质过程尤其重要。通过剪切将水相和油相充分混合，并且减小体系的粒径，以防止粒径过大而堵塞微射流管路。以初乳外观、粒径，PDI和Zeta电位为评价指标，考察剪切速度和剪切次数对初乳稳定性的影响。

(1)剪切速度：低转速15000rpm和高转速20000rpm。

(2)剪切次数：每次剪切1min。考察剪切次数5次、10次和15次。结果见表6。

表6 剪切工艺对丁酸氯维地平脂微球的影响

结果表明，剪切速度相同时，剪切次数越多，粒径越小；剪切次数相同时，剪切速度越快，粒径越小，且无漂油现象发生。剪切速度为20000rpm时，脂微球外观均良好。剪切10次后粒径变化不大，考虑到高强度剪切时仪器的损耗较大，所以将剪切强度确定为20000rpm下剪切10次，每次1min。

3、高压均质过程的考察

高压均质过程是制备脂微球的重要步骤。影响制剂粒径以及稳定性的主要因素有：均质压力和均质次数。

高压均质压力：考察高压均质压力7000、9000、11000、13000、15000、17000psi对脂微球制备的影响，高压均质10次，不同均质压力对脂微球粒径的影响见表7。

表7 均质压力对丁酸氯维地平脂微球注射液的影响

结果表明，高压均质压力越大大，脂微球的粒径越小，当均质压力为13000psi时，平均粒径小于200nm。当均质压力为15000psi时，PDI最小；当均质压力增大到17000psi时，PDI反而增大，因此，选择15000psi作为丁酸氯维地平脂微球的高压均质压力。

高压均质次数：考察高压均质次数5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次、14次以及15次对脂微球制备的影响，高压均质压力为15000psi，不同均质次数对脂微球粒径的影响见表8。

表8 高压均质次数对丁酸氯维地平脂微球注射液的影响

结果表明，随着高压均质次数的增加，脂微球的粒径和PDI逐渐降低，均质12次时脂微球粒径和PDI均最小。但是当均质次数大于12次时，脂微球的粒径和PDI均有增加趋势。考虑到微射流仪器损耗，将脂微球的高压均质次数定为12次。

实施例3 丁酸氯维地平脂微球注射液

(一)配方如下

(二)制备方法

1)水相：将处方量的甘油分散于注射用水中，搅拌至全部溶解。以0.1mol/L NaOH溶液调节pH至8.0。

2)油相：称取处方量的注射用大豆油和油酸，预热至70℃；加入处方量的丁酸氯维地平，摇匀混合；加入大豆卵磷脂，采用高速分散机剪切至大豆卵磷脂全部溶解。

3)将油相缓慢加入至水相中，加水至100mL，采用高速分散机20000rpm剪切10次，每次1min。

4)加入至微射流中，压力15000psi，均质12次。

5)装瓶，封罐，120℃灭菌30min，即得。

(三)测定结果

所得丁酸氯维地平脂微球的平均粒径为161.05±10.1nm,制得脂微球注射液丁酸氯维地平的含量为99.7％，PDI为0.051，Zeta电位在-40.1mV。

(四)药效学实验

取150只健康SD小鼠，随机分为两组，每组75只，实验前禁食12h，不禁水，再分别尾静脉给予本实施例(高剂量组)与本实施例(低剂量组)。实验动物称重后，按照计算药量给药，两组尾静脉给药后0.5min、1min、2min、3min、4min、5min、10min、15min、30min、45min、60min、120min、180min、720min、1440min小鼠摘眼球取血约0.3mL。全血置于离心管(接血之前加入肝素钠抗凝和10％SDS溶液300μL)中，迅速振荡混匀，-20℃冷冻保存，备用。

测定丁酸氯维地平脂微球注射液高剂量组及低剂量组尾静脉给药经时血药浓度，尾静脉给药后的血药浓度曲线见图1和2。

由图1和图2可见，低浓度组与高浓度组相比，3min以前，丁酸氯维地平的血药浓度相差较大；3min以后，丁酸氯维地平的血药浓度相差不大，结果表明丁酸氯维地平在体内迅速代谢，血药浓度迅速降低。30min时，丁酸氯维地平的血药浓度趋近于0；1440min时，代谢物丁酸氯维地平酸的血药浓度趋近于0。两剂量组的血药浓度-时间曲线趋势相同。

采用DAS 2.0处理数据，按三室模型进行数据拟合并计算出丁酸氯维地平和代谢物丁酸氯维地平酸的药动学参数。主要药代动力学参数表明，丁酸氯维地平的t_1/2在4min左右，代谢物丁酸氯维地平酸的t_1/2在20min左右。T-检验结果表明两剂量组中丁酸氯维地平和代谢物丁酸氯维地平酸的t_1/2不具有显著性差异(P>0.05)。这是由于t_1/2由药物性质决定，不受药物剂量的影响。进一步证实了丁酸氯维地平的半衰期较短，在体内迅速代谢生成丁酸氯维地平酸。AUC_0-t、CL、MRT_0-t均有显著性差异(P<0.05)。

丁酸氯维地平半衰期短，起效快，消除快，药效持续时间短，可用于快速、精确控制血压。本发明将丁酸氯维地平制备成脂微球注射液，不但解决了其水溶性差、稳定性差的问题，而且充分发挥了丁酸氯维地平快速控制血压的优势。本发明采用微射流法快速一步制备丁酸氯维地平脂微球注射液，工艺简单。最终得到粒径在160nm左右，且粒径分布均匀，Zeta电位在-30～-40mV，稳定性良好的脂微球注射液。

实施例3 丁酸氯维地平脂微球注射液

处方：

制备方法：

(1)水相：将处方量的甘油分散于注射用水中，搅拌至全部溶解。以0.1mol/L NaOH溶液调节pH至6.0。

(2)油相：称取处方量的注射用大豆油和油酸，预热至70℃；加入处方量的丁酸氯维地平，摇匀混合；加入大豆卵磷脂，采用高速分散机剪切至大豆卵磷脂全部溶解。

(3)将油相缓慢加入至水相中，加水至100mL，采用高速分散机20000rpm剪切15次，每次1min。

(4)加入至微射流中，压力15000psi，均质15次。

(5)装瓶，封罐，120℃灭菌25min，即得。

所得丁酸氯维地平脂微球的平均粒径为237.21nm,PDI为0.183，Zeta电位在-33.8mV。

实施例4 丁酸氯维地平脂微球注射液处方

制备方法：

(1)水相：将处方量的甘油分散于注射用水中，搅拌至全部溶解。以0.1mol/L NaOH溶液调节pH至8.0。

(3)将油相缓慢加入至水相中，加水至100mL，采用高速分散机15000rpm剪切20次，每次3min。

(4)加入至微射流中，压力15000psi，均质10次。

(5)装瓶，封罐，100℃灭菌40min，即得。

所得丁酸氯维地平脂微球的平均粒径为263.37nm,PDI为0.169，Zeta电位在-36.4mV。

实施例5 丁酸氯维地平脂微球注射液处方

处方：

制备方法：

(1)水相：将处方量的甘油分散于注射用水中，搅拌至全部溶解。以0.1mol/L NaOH溶液调节pH至7.0。

(2)油相：称取处方量的注射用大豆油和胆酸钠，预热至70℃；加入处方量的丁酸氯维地平，摇匀混合；加入大豆卵磷脂，采用高速分散机剪切至大豆卵磷脂全部溶解。

(3)将油相缓慢加入至水相中，加水至100mL，采用高速分散机15000rpm剪切20次，每次1min。

(4)加入至微射流中，压力17000psi，均质15次。

(5)装瓶，封罐，125℃灭菌60min，即得。

所得丁酸氯维地平脂微球的平均粒径为257.19nm,PDI为0.179，Zeta电位在-38.2mV。

实施例6 丁酸氯维地平脂微球注射液处方

处方：

制备方法：

(2)油相：称取处方量的注射用大豆油和脱氧胆酸，预热至70℃；加入处方量的丁酸氯维地平，摇匀混合；加入大豆卵磷脂，采用高速分散机剪切至大豆卵磷脂全部溶解。

(3)将油相缓慢加入至水相中，加水至100mL，采用高速分散机20000rpm剪切20次，每次4min。

(4)加入至微射流中，压力13000psi，均质20次。

(5)装瓶，封罐，115℃灭菌50min，即得。

实施例7 丁酸氯维地平脂微球注射液处方

处方：

制备方法：

(2)油相：称取处方量的注射用芝麻油和脱氧胆酸钠，预热至50℃；加入处方量的丁酸氯维地平，摇匀混合；加入蛋黄卵磷脂，采用高速分散机剪切至蛋黄卵磷脂全部溶解。

(3)将油相缓慢加入至水相中，加水至100mL，采用高速分散机15000rpm剪切30次，每次3min。

(4)加入至微射流中，压力11000psi，均质10次。

(5)装瓶，封罐，120℃灭菌15min，即得。

所得丁酸氯维地平脂微球的平均粒径为289.05nm,PDI为0.192，Zeta电位在-35.2mV。

实施例8 丁酸氯维地平脂微球注射液处方

处方：

制备方法：

(3)将油相缓慢加入至水相中，加水至100mL，采用高速分散机20000rpm剪切20次，每次1min。

(4)加入至微射流中，压力13000psi，均质20次。

(5)装瓶，封罐，115℃灭菌30min，即得。

所得丁酸氯维地平脂微球的平均粒径为258.24nm,PDI为0.158，Zeta电位在-34.6mV。

实施例9 丁酸氯维地平脂微球注射液处方

处方

制备方法：

(2)油相：称取处方量的注射用大豆油和油酸钠，预热至90℃；加入处方量的丁酸氯维地平，摇匀混合；加入大豆卵磷脂，采用高速分散机剪切至大豆卵磷脂全部溶解。

(4)加入至微射流中，压力14000psi，均质15次。

(5)装瓶，封罐，125℃灭菌30min，即得。

所得丁酸氯维地平脂微球的平均粒径为249.05nm,PDI为0.136，Zeta电位在-36.1mV。

实施例10 丁酸氯维地平脂微球注射液处方

处方

制备方法：

(3)将油相缓慢加入至水相中，加水至100mL，采用高速分散机20000rpm剪切10次，每次1min。

(4)加入至微射流中，压力15000psi，均质15次。

(5)装瓶，封罐，115℃灭菌30min，即得。

所得丁酸氯维地平脂微球的平均粒径为239.27nm,PDI为0.140，Zeta电位在-37.4mV。

Claims

1.丁酸氯维地平脂微球注射液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）水相：将处方量的等张剂分散于注射用水中，搅拌至全部溶解，以0.1 mol/L NaOH溶液调节pH至8.0；

2）油相：称取处方量的注射用油和稳定剂，于70℃下预热2min；加入处方量的丁酸氯维地平，摇匀混合；加入乳化剂，70℃下，采用高速分散机剪切至乳化油全部溶解；

3）将油相缓慢加入至水相中，加水，采用高速分散机剪切，采用高速分散机20000 rpm剪切10次，每次1 min，得到稳定的初乳；

4）初乳加入至微射流中，进行高压均质，高压均质压力为15000psi，均质12次；

所述的丁酸氯维地平脂微球注射液，由下述原料按重量百分比组成：丁酸氯维地平0.01 ~ 0.09%、注射用油1.00 ~ 30.00%、乳化剂0.01~5.00%、稳定剂0.01~5.00%、等张剂0.50~3.00%、pH调节剂1.00~30.00%、注射用水余量；

所述的乳化剂选自大豆卵磷脂；

所述的稳定剂选自油酸。

2.根据权利要求1所述的丁酸氯维地平脂微球注射液的制备方法，其特征在于，所述的注射用油为注射用大豆油。

3.根据权利要求1所述的丁酸氯维地平脂微球注射液的制备方法，其特征在于，所述的等张剂为甘油。

4.根据权利要求1所述的丁酸氯维地平脂微球注射液的制备方法，其特征在于，所述的pH调节剂为氢氧化钠。