CN104459157B - 一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法及应用 - Google Patents
一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104459157B CN104459157B CN201410783166.5A CN201410783166A CN104459157B CN 104459157 B CN104459157 B CN 104459157B CN 201410783166 A CN201410783166 A CN 201410783166A CN 104459157 B CN104459157 B CN 104459157B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- concentration
- alpha
- fetoprotein
- cuprous oxide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法及应用,属于新型功能材料、生物传感检测技术领域。基于二茂铁功能化的氧化亚铜立方纳米框架具有良好的催化能力,显著提高了免疫传感器的灵敏度,对甲胎蛋白的早期诊断具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用二茂铁功能化的氧化亚铜立方纳米框架,制备一种检测甲胎蛋白的电化学免疫传感器,属于新型功能材料与生物传感检测技术领域。
背景技术
甲胎蛋白是一种糖蛋白,正常情况下,这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞,但当肝细胞发生癌变时,会产生大量甲胎蛋白,而且随着病情恶化,甲胎蛋白在血清中的含量会急剧增加,甲胎蛋白就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标,因此对甲胎蛋白的早期诊断很重要。目前已有的甲胎蛋白的临床检测方法很多,如放射免疫分析、酶联免疫分析、化学发光免疫分析等。电化学免疫传感器是将免疫学方法与电化学方法相结合的一种生物传感器,利用抗原与抗体之间的特性性结合,使得它具有高灵敏性、高选择性、分析快速和操作简便等优点。因此本发明制备了一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器,实现了对甲胎蛋白的检测。
本发明利用氧化亚铜立方纳米框架具有良好的电化学催化性能,将其氨基化后,通过氨基和羧基之间的相互作用,将二茂铁甲酸连接到氧化亚铜立方纳米框架的内部和外部,增加了二茂铁的负载量,得到的二茂铁功能化的氧化亚铜立方纳米框架实现了对双氧水的双重信号放大。在检测甲胎蛋白的过程中产生了逐步放大的电化学信号,有效地增强了电化学免疫传感器的灵敏度。该方法具有成本低、灵敏度高、特异性好、检测快速等优点,而且制备过程较为简单,为目前有效检测甲胎蛋白提供了新途径。
发明内容
本发明的目的之一是基于二茂铁功能化的氧化亚铜立方纳米框架,构建了一种无酶、快速且超灵敏的夹心型电化学免疫传感器。
本发明的目的之二是将该夹心型电化学免疫传感器应用于甲胎蛋白的检测。
本发明的技术方案如下:
1. 一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法
(1)依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光,分别在超纯水和乙醇中超声清洗,氮气吹干,在电极表面滴加6 μL、1~3 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液,干燥;
(2)继续将6 μL浓度为8 ~ 12 μg/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面,于4℃冰箱中孵化1 h,清洗干净;
(3)用3 μL浓度为5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点,于4℃冰箱中孵化1 h,清洗干净;
(4)将6 μL浓度为0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的甲胎蛋白用于和捕获抗体的特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净;
(5)将6 μL浓度为1 ~ 3 mg/mL的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净,于4℃冰箱中储存备用。
二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
(1)氧化亚铜立方纳米框架的制备
首先,将8.32 ~ 16.64 mL超纯水、0.50 ~ 1.00 mL浓度为0.1 mmol/L的氯化铜溶液和0.087 ~ 0.174 g十二烷基硫酸钠在持续搅拌下混合,将装有该混合液的玻璃瓶放在温度为32~34℃的水浴中,当十二烷基硫酸钠粉末完全溶解后,加入0.18 ~ 0.36 mL浓度为1.0 mmol/L 的氢氧化钠溶液,该溶液立刻变为明亮的蓝色,表明生成了氢氧化铜沉淀,然后,在1 s内将0.92 ~1.84 mL浓度为0.1 mmol/L的盐酸羟胺溶液立刻注入玻璃瓶,搅拌20 s,在几秒钟之内溶液立即从亮蓝色变成了绿色,最后, 加入0.08 ~ 0.16 mL浓度为1.0 mmol/L的盐酸溶液,继续搅拌20 s,在几秒钟之内溶液的颜色由绿色变为黄色,溶液的全部体积为10 ~ 20 mL,将该溶液在水浴中老化1 h用于纳米晶体的生长,将3 ~ 6 mL体积分数为95%的乙醇加入到溶液中,静置1 h后超声1 min,清晰的淡黄色变为絮状,将该样品在5000 rpm下离心3 min,去除顶层溶液,沉淀用10 ~ 20 mL体积比为1:1的水和乙醇清洗,最后用5 ~ 10 mL的乙醇清洗,离心后干燥;
(2)二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
将1 ~ 2 mL浓度为2 mg/mL的氧化亚铜立方纳米框架溶液、1 ~ 2 mL的浓度为2 mg/mL二茂铁溶液、1 ~ 2 mL1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(10 mmol/L)/N-羟基琥珀酰亚胺(2 mmol/L)和1 ~ 2 mL浓度为10 μg/mL甲胎蛋白检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤,将得到的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体孵化物分散于1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中,将制得的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液,于4℃冰箱中储存备用。
甲胎蛋白的检测方法
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的免疫传感器为工作电极,在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试;
(2)选择计时电流法对甲胎蛋白进行检测,将输入电压设置为-0.4 V,取样间隔设置为0.1 s,运行时间设置为400 s;
(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL浓度为10 mol/L的双氧水溶液,然后记录电流随时间的变化,绘制工作曲线;
(4)将待测样品溶液代替甲胎蛋白标准溶液进行检测。
本发明的有益成果
(1)本发明首次将氧化亚铜立方纳米框架引入电化学免疫传感器作为标记物,利用其对双氧水具有良好的催化效果,在构建电化学免疫传感器的过程中,实现了对双氧水的多重信号放大作用。
(2)本发明通过氨基和羧基之间的相互作用,将二茂铁甲酸分子同时固定在氧化亚铜立方纳米框架的外表面和内表面,增加了二茂铁的负载量,负载量增大到100%,使检测信号增大一倍,显著提高了检测的灵敏度。
(3)本发明将制备的夹心电化学免疫传感器用于甲胎蛋白的检测,检测限低,线性范围宽,可以实现简单、快速、灵敏和特异性检测。本发明用于甲胎蛋白的检测,检测限可达到2.5 fg/mL。
具体实施方式
实施例1一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法
(1)依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光,分别在超纯水和乙醇中超声清洗,氮气吹干,在电极表面滴加6 μL、1 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液,干燥;
(2)继续将6 μL浓度为8 μg/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面,于4℃冰箱中孵化1 h,清洗干净;
(3)用3 μL浓度为5 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点,于4℃冰箱中孵化1 h,清洗干净;
(4)将6 μL浓度为0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的甲胎蛋白用于和捕获抗体的特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净;
(5)将6 μL浓度为1 mg/mL的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净,于4℃冰箱中储存备用。
实施例2一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法
(1)依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光,分别在超纯水和乙醇中超声清洗,氮气吹干,在电极表面滴加6 μL、2 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液,干燥;
(2)继续将6 μL浓度为10 μg/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面,于4℃冰箱中孵化1 h,清洗干净;
(3)用3 μL浓度为10 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点,于4℃冰箱中孵化1 h,清洗干净;
(4)将6 μL浓度为0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的甲胎蛋白用于和捕获抗体的特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净;
(5)将6 μL浓度为2 mg/mL的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净,于4℃冰箱中储存备用。
实施例3一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法
((1)依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光,分别在超纯水和乙醇中超声清洗,氮气吹干,在电极表面滴加6 μL、3 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液,干燥;
(2)继续将6 μL浓度为12 μg/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面,于4℃冰箱中孵化1 h,清洗干净;
(3)用3 μL浓度为15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点,于4℃冰箱中孵化1 h,清洗干净;
(4)将6 μL浓度为0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的甲胎蛋白用于和捕获抗体的特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净;
(5)将6 μL浓度为3 mg/mL的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净,于4℃冰箱中储存备用。
实施例4二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
(1)氧化亚铜立方纳米框架的制备
首先,将8.32 mL超纯水、0.50 mL浓度为0.1 mmol/L的氯化铜溶液和0.087 g十二烷基硫酸钠在持续搅拌下混合,将装有该混合液的玻璃瓶放在温度为32~34℃的水浴中,当十二烷基硫酸钠粉末完全溶解后,加入0.18 mL浓度为1.0 mmol/L 的氢氧化钠溶液,该溶液立刻变为明亮的蓝色,表明生成了氢氧化铜沉淀,然后,在1 s内将0.92 mL浓度为0.1 mmol/L的盐酸羟胺溶液立刻注入玻璃瓶,搅拌20 s,在几秒钟之内溶液立即从亮蓝色变成了绿色,最后, 加入0.08 mL浓度为1.0 mmol/L的盐酸溶液,继续搅拌20 s,在几秒钟之内溶液的颜色由绿色变为黄色,溶液的全部体积为10 mL,将该溶液在水浴中老化1 h用于纳米晶体的生长,将3 mL体积分数为95%的乙醇加入到溶液中,静置1 h后超声1 min,清晰的淡黄色变为絮状,将该样品在5000 rpm下离心3 min,去除顶层溶液,沉淀用10 mL体积比为1:1的水和乙醇清洗,最后用5 mL的乙醇清洗,离心后干燥;
(2)二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
将1 mL浓度为2 mg/mL的氧化亚铜立方纳米框架溶液、1 mL的浓度为2 mg/mL二茂铁溶液、1 mL1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(10 mmol/L)/N-羟基琥珀酰亚胺(2 mmol/L)和1 mL浓度为10 μg/mL甲胎蛋白检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤,将得到的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体孵化物分散于1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中,将制得的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液,于4℃冰箱中储存备用。
实施例5二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
(1)氧化亚铜立方纳米框架的制备
首先,将12.48 mL超纯水、0.75 mL浓度为0.1 mmol/L的氯化铜溶液和0.131 g十二烷基硫酸钠在持续搅拌下混合,将装有该混合液的玻璃瓶放在温度为32~34℃的水浴中,当十二烷基硫酸钠粉末完全溶解后,加入0.27 mL浓度为1.0 mmol/L 的氢氧化钠溶液,该溶液立刻变为明亮的蓝色,表明生成了氢氧化铜沉淀,然后,在1 s内将1.38 mL浓度为0.1 mmol/L的盐酸羟胺溶液立刻注入玻璃瓶,搅拌20 s,在几秒钟之内溶液立即从亮蓝色变成了绿色,最后, 加入0.12 mL浓度为1.0 mmol/L的盐酸溶液,继续搅拌20 s,在几秒钟之内溶液的颜色由绿色变为黄色,溶液的全部体积为15 mL,将该溶液在水浴中老化1 h用于纳米晶体的生长,将4.5 mL体积分数为95%的乙醇加入到溶液中,静置1 h后超声1 min,清晰的淡黄色变为絮状,将该样品在5000 rpm下离心3 min,去除顶层溶液,沉淀用15 mL体积比为1:1的水和乙醇清洗,最后用8 mL的乙醇清洗,离心后干燥;
(2)二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
将2 mL浓度为2 mg/mL的氧化亚铜立方纳米框架溶液、2 mL的浓度为2 mg/mL二茂铁溶液、2 mL1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(10 mmol/L)/N-羟基琥珀酰亚胺(2 mmol/L)和2 mL浓度为10 μg/mL甲胎蛋白检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤,将得到的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体孵化物分散于1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中,将制得的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液,于4℃冰箱中储存备用。
实施例6二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
(1)氧化亚铜立方纳米框架的制备
首先,将16.64 mL超纯水、1.00 mL浓度为0.1 mmol/L的氯化铜溶液和0.174 g十二烷基硫酸钠在持续搅拌下混合,将装有该混合液的玻璃瓶放在温度为32~34℃的水浴中,当十二烷基硫酸钠粉末完全溶解后,加入0.36 mL浓度为1.0 mmol/L 的氢氧化钠溶液,该溶液立刻变为明亮的蓝色,表明生成了氢氧化铜沉淀,然后,在1 s内将1.84 mL浓度为0.1 mmol/L的盐酸羟胺溶液立刻注入玻璃瓶,搅拌20 s,在几秒钟之内溶液立即从亮蓝色变成了绿色,最后, 加入0.16 mL浓度为1.0 mmol/L的盐酸溶液,继续搅拌20 s,在几秒钟之内溶液的颜色由绿色变为黄色,溶液的全部体积为20 mL,将该溶液在水浴中老化1 h用于纳米晶体的生长,将6 mL体积分数为95%的乙醇加入到溶液中,静置1 h后超声1 min,清晰的淡黄色变为絮状,将该样品在5000 rpm下离心3 min,去除顶层溶液,沉淀用20 mL体积比为1:1的水和乙醇清洗,最后用10 mL的乙醇清洗,离心后干燥;
(2)二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
将2 mL浓度为2 mg/mL的氧化亚铜立方纳米框架溶液、2 mL的浓度为2 mg/mL二茂铁溶液、2 mL1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(10 mmol/L)/N-羟基琥珀酰亚胺(2 mmol/L)和2 mL浓度为10 μg/mL甲胎蛋白检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤,将得到的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体孵化物分散于1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中,将制得的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液,于4℃冰箱中储存备用。
实施例7甲胎蛋白的检测步骤
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的免疫传感器为工作电极,在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试;
(2)选择计时电流法对甲胎蛋白进行检测,将输入电压设置为-0.4 V,取样间隔设置为0.1 s,运行时间设置为400 s;
(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL浓度为10 mol/L的双氧水溶液,然后记录电流随时间的变化,绘制工作曲线;
(4)将待测样品溶液代替甲胎蛋白标准溶液进行检测。
(5)该电化学免疫传感器甲胎蛋白检测线性范围为0.000005 ~ 10 ng/mL,检测限2.5 fg/mL。
Claims (2)
1.一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)氧化亚铜立方纳米框架的制备
首先,将8.32 ~ 16.64 mL超纯水、0.50 ~ 1.00 mL浓度为0.1 mmol/L的氯化铜溶液和0.087 ~ 0.174 g十二烷基硫酸钠在持续搅拌下混合,将装有该混合液的玻璃瓶放在温度为32~34℃的水浴中,当十二烷基硫酸钠粉末完全溶解后,加入0.18 ~ 0.36 mL浓度为1.0 mmol/L的氢氧化钠溶液,溶液立刻变为明亮的蓝色,表明生成了氢氧化铜沉淀,然后,在1 s内将0.92 ~1.84 mL浓度为0.1 mmol/L的盐酸羟胺溶液立刻注入玻璃瓶,搅拌20 s,在几秒钟之内溶液立即从亮蓝色变成了绿色,最后, 加入0.08 ~ 0.16 mL浓度为1.0 mmol/L的盐酸溶液,继续搅拌20 s,在几秒钟之内溶液的颜色由绿色变为黄色,溶液的全部体积为10 ~ 20 mL,将该溶液在水浴中老化1 h用于纳米晶体的生长,将3 ~ 6 mL体积分数为95%的乙醇加入到溶液中,静置1 h后超声1 min,清晰的淡黄色变为絮状,将该样品在5000 rpm下离心3 min,去除顶层溶液,沉淀用10 ~ 20 mL体积比为1:1的水和乙醇清洗,最后用5 ~ 10 mL的乙醇清洗,离心后干燥;
(2)二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
将1 ~ 2 mL浓度为2 mg/mL的氧化亚铜立方纳米框架溶液、1 ~ 2 mL的浓度为2 mg/mL二茂铁溶液、1 ~ 2 mL1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺和1 ~ 2 mL浓度为10 μg/mL甲胎蛋白检测抗体混合,震荡12 h,离心洗涤,将得到的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体孵化物分散于1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中,将制得的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液,于4℃冰箱中储存备用;
所述的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的浓度为10 mmol/L,所述的N-羟基琥珀酰亚胺的浓度为2 mmol/L;
(3)免疫传感器的制备
1)依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光,分别在超纯水和乙醇中超声清洗,氮气吹干,在电极表面滴加6 μL、1~3 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液,干燥;
2)继续将6 μL浓度为8 ~ 12 μg/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面,于4℃冰箱中孵化1 h,清洗干净;
3)用3 μL浓度为5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点,于4℃冰箱中孵化1 h,清洗干净;
4)将6 μL浓度为0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的甲胎蛋白用于和捕获抗体的特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净;
5)将6 μL浓度为1 ~ 3 mg/mL的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净,于4℃冰箱中储存备用。
2.一种根据权利要求1所述的制备方法制备的基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器对甲胎蛋白的检测方法,其特征在于,步骤如下:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的免疫传感器为工作电极,在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试;
(2)选择计时电流法对甲胎蛋白进行检测,将输入电压设置为-0.4 V,取样间隔设置为0.1 s,运行时间设置为400 s;
(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL浓度为10 mol/L的双氧水溶液,然后记录电流随时间的变化,绘制工作曲线;
(4)将待测样品溶液代替甲胎蛋白标准溶液进行检测。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410783166.5A CN104459157B (zh) | 2014-12-17 | 2014-12-17 | 一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410783166.5A CN104459157B (zh) | 2014-12-17 | 2014-12-17 | 一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法及应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104459157A CN104459157A (zh) | 2015-03-25 |
CN104459157B true CN104459157B (zh) | 2015-10-21 |
Family
ID=52905541
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410783166.5A Expired - Fee Related CN104459157B (zh) | 2014-12-17 | 2014-12-17 | 一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法及应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104459157B (zh) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104880559B (zh) * | 2015-05-16 | 2016-06-22 | 济南大学 | 一种Pt-氮化碳/石墨烯胰腺癌肿瘤标志物CA199生物传感器的制备方法及应用 |
CN105486679B (zh) * | 2016-01-03 | 2017-04-19 | 济南大学 | 一种基于金杂化炭黑插层还原石墨烯的甲胎蛋白电致化学发光传感器的制备方法 |
CN105699464B (zh) * | 2016-03-05 | 2018-04-13 | 济南大学 | 一种基于氧化亚铜掺杂钯纳米粒子标记的免疫传感器的制备方法及应用 |
CN106108891A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-11-16 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 一种铂纳米柱修饰的微电极阵列及其制备方法 |
CN109991298B (zh) * | 2019-04-30 | 2021-03-16 | 山东理工大学 | 一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器的制备方法及应用 |
CN110412097B (zh) * | 2019-08-12 | 2021-08-20 | 济南大学 | 一种超灵敏检测microRNA的光电化学传感器的制备方法 |
CN111289592B (zh) * | 2020-02-28 | 2022-07-22 | 北京农业信息技术研究中心 | 同时活体检测植物体内多种糖类的微阵列传感器及其制备与应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101995462A (zh) * | 2010-10-29 | 2011-03-30 | 济南大学 | 检测兽药残留物的标记型电化学免疫传感器的制备及应用 |
CN102507953A (zh) * | 2011-10-20 | 2012-06-20 | 济南大学 | 一种测定甲胎蛋白的电化学免疫传感器的制备方法 |
CN102735732A (zh) * | 2012-07-19 | 2012-10-17 | 西南大学 | 纳米氧化亚铜无酶过氧化氢传感器电极的制备及应用 |
CN102980925A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-03-20 | 济南大学 | 一种夹心型电化学免疫传感器、其制备方法及其用途 |
CN103913565A (zh) * | 2014-04-26 | 2014-07-09 | 济南大学 | 一种双功能标记物构建的免疫传感器的制备方法及其应用 |
-
2014
- 2014-12-17 CN CN201410783166.5A patent/CN104459157B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101995462A (zh) * | 2010-10-29 | 2011-03-30 | 济南大学 | 检测兽药残留物的标记型电化学免疫传感器的制备及应用 |
CN102507953A (zh) * | 2011-10-20 | 2012-06-20 | 济南大学 | 一种测定甲胎蛋白的电化学免疫传感器的制备方法 |
CN102735732A (zh) * | 2012-07-19 | 2012-10-17 | 西南大学 | 纳米氧化亚铜无酶过氧化氢传感器电极的制备及应用 |
CN102980925A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-03-20 | 济南大学 | 一种夹心型电化学免疫传感器、其制备方法及其用途 |
CN103913565A (zh) * | 2014-04-26 | 2014-07-09 | 济南大学 | 一种双功能标记物构建的免疫传感器的制备方法及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Graphene wrapped Cu2O nanocubes: non-enzyme electrochemical sensors for the detection of glucose and hydrogen peroxide with enhanced stability;Minmin Liu等;《Biosensors and Bioelectronics》;20130216;第45卷;摘要 * |
禽白血病病毒高灵敏电化学检测与致病菌高效控制技术研究;尚昆;《中国优秀硕士学位论文全文数据库》;20140515(第201405期);第19-22页第2.2.2节,图2 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104459157A (zh) | 2015-03-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104459157B (zh) | 一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN103852460B (zh) | 基于适配体的磁纳米荧光传感器检测抗生素多残留的方法 | |
CN104459124B (zh) | 一种基于HS-β-CD-Ag-GOD共轭物的电化学免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN104328192B (zh) | 核酶放大的高灵敏电化学免疫分析方法 | |
CN104391117B (zh) | 一种基于PPy-NH2GO-Ag2Se@CdSe的胃癌抗原电致化学发光传感器的制备方法及应用 | |
Shen et al. | Ultrasensitive aptasensor for isolation and detection of circulating tumor cells based on CeO2@ Ir nanorods and DNA walker | |
CN103116023A (zh) | 用于检测肿瘤标志物的电化学发光免疫传感器及其制备方法和应用 | |
CN104391123B (zh) | 一种基于花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料构建的生物传感器的制备方法及应用 | |
CN107328930B (zh) | 一种基于双信号响应比率型丝网印刷电极免疫传感器的制备及应用 | |
CN104880456A (zh) | 一种基于GO/MWCNTs-COOH/Au@CeO2构建的电化学发光免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN106066324A (zh) | 一种电致化学发光生物传感器标记物的制备方法及应用 | |
CN110554027A (zh) | 一种基于氧化铁阵列共反应促进金纳米簇电致发光响应的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN109613244A (zh) | 一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN105842460A (zh) | 一种基于银杂化硫化铋的电致化学发光免疫传感器的制备方法 | |
CN105606681A (zh) | 一种基于金铜-多壁碳纳米管-二氧化锰构建的生物传感器的制备方法及应用 | |
ES2567803T3 (es) | Aparato y método para el flujo lateral de ensayos de afinidad | |
CN105699464B (zh) | 一种基于氧化亚铜掺杂钯纳米粒子标记的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN106525920B (zh) | 基于末端延伸酶电化学核酸适体传感器测癌胚抗原的方法 | |
CN104198563B (zh) | 铅离子负载金磁性多壁碳纳米管传感器的制备方法及应用 | |
Gholami et al. | A paper-based optical sensor for the screening of viruses through the cysteine residues of their surface proteins: A proof of concept on the detection of coronavirus infection | |
CN104792999A (zh) | 一种基于双纳米金探针检测标志物的蛋白芯片 | |
CN106770215B (zh) | 一种多功能化的铁钴磁性纳米传感器的制备方法及其产品和应用 | |
CN104407139B (zh) | 一种多重功能化石墨烯黑色素瘤传感器的制备方法及应用 | |
CN109490282B (zh) | 一种基于NiFe2O4纳米管催化增强的卵巢癌标志物比率型电致化学发光传感平台 | |
CN104198706B (zh) | 一种肿瘤标志物电化学免疫传感器的制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20151021 Termination date: 20191217 |