CN104459140A - 一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素o、抗环瓜氨酸肽抗体、c反应蛋白的检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒。本发明提供一种检测试剂盒，包括互相独立的类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体和C反应蛋白检测试纸卡，所述类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体和C反应蛋白检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。本发明所提供的检测试剂盒通过一次加样操作就能检测出样本中类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、CRP的含量，简化了操作过程。

Description

一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒及其制备方法和用途。

背景技术

类风湿因子(rheumatoid factor,RF)可分为IgM、IgA、IgG、IgD、IgE五型(注：在临床内科学中描述为四型，没有IgD型；但在实验室诊断学中描述为5型)，是类风湿关节炎血清中针对IgG FC片段上抗原表位的一类自身抗体，类风湿因子阳性患者较多伴有关节外表现，如皮下结节及血管炎等。IgM型RF阳性率为60％-78％。

机体因咽炎、扁桃体炎、猩红热、丹毒、脓皮病、风湿热等感染A组链球菌后，可产生链球菌溶血素O抗体，即“Anti-Streptolysin O(ASO)”。

抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)是环状聚丝蛋白的多肽片段，是以IgG型为主的抗体，对类风湿性关节炎(RA)具有很好的敏感性和特异性，且抗CCP抗体阳性的RA病人骨破坏较抗CCP抗体阴性者严重。类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的慢性自身免疫性疾病。在全世界大约有1％的人罹患此病。RA能引起关节的疼痛、僵直及肿胀。在发病2年内即可能出现不可逆的骨关节损伤，并可引起多种并发症，如神经系统疾病、心包炎、淋巴腺炎等。因此，及早诊断RA及给予缓解病情的药物治疗，对控制病情非常重要。1998年，国外，首次报道的抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic cirullinated peptide antibodies,抗CCP抗体)的检测，对RA具有较高的敏感性和特异性，是RA新的血清标志物。

人类C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)是指在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质(急性蛋白)。CRP可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，从而清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞，在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用。关于CRP的研究已经有70多年的历史，传统观点认为CRP是一种非特异的炎症标志物，但近十年的研究揭示了CRP直接参与了炎症与动脉粥样硬化等心血管疾病，并且是心血管疾病最强有力的预示因子与危险因子。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种定量检测类风湿因子(RF)、抗链球菌溶血素O(ASO)、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白(CRP)的检测试剂盒，包括互相独立的类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素O和C反应蛋白检测试纸卡，所述类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素O和C反应蛋白检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述类风湿因子检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含人变性IgG，所述抗链球菌溶血素O检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含链球溶菌素O(SLO)，所述抗环瓜氨酸肽抗体检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含环瓜氨酸肽，所述C反应蛋白检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含C反应蛋白单克隆抗体，所述各硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述荧光标记物结合垫上的链球溶菌素O、人变性IgG、环瓜氨酸肽、C反应蛋白单克隆抗体采用荧光微球标记。

优选的，所述荧光标记物结合垫上的链球溶菌素O、人变性IgG、C反应蛋白单克隆抗体采用180nm荧光微球标记，EX(nm)＝650/Em(nm)＝670，具有信号受背景干扰小，检测灵敏度高，结果重复性好的优点。

优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明中所述的荧光标记物结合垫还经过预处理，预处理中所使用的预处理缓冲液包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5－7.5g/L，缓冲液的pH值为7.2－7.6。

优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：

所述预处理缓冲液的溶剂为水。

所述预处理的具体步骤为：将荧光标记物结合垫在预处理液中浸泡1.5-2.5h，取出放于36-38℃烘干。

所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。

优选的，所述底板为PVC底板。

优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。

优选的，所述类风湿因子检测试纸卡的检测线上包被有人变性IgG。。

优选的，所述抗链球菌溶血素O检测试纸卡的检测线上包被有链球菌溶血素O。

优选的，所述抗环瓜氨酸肽抗体检测试纸卡的检测线上包被有环瓜氨酸肽。

优选的，所述C反应蛋白检测试纸卡的检测线上包被有C反应蛋白单克隆抗体。

优选的，质控线上包被羊抗鼠抗体。

优选的，还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有四个平行的试纸卡卡槽，所述试纸卡分别嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有三个测试窗和四个加样孔，所述四个测试窗的位置分别与四个试纸卡的检测线和质控线的位置相配合，所述四个加样孔的位置与四个试纸卡的样品垫的位置相配合。

更优选的，所述卡壳为塑料卡壳。

更优选的，所述四个加样孔之间还设有连接四个加样孔的横槽。

优选的，所述检测试剂盒用于同时定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、C反应蛋白的含量。

本发明所提供的定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒在检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体时采用双抗原夹心免疫层析法，在检测CRP时采用双抗体夹心法，配套免疫定量分析仪器使用。免疫分析仪器通过采集检测线(T)和质控线(C)条带荧光信号，计算T/C信号值。使用前先将不同标准品滴加到试纸卡上，分析处理建立定标曲线(T/C信号值与标准品真实值的关系)，再将检测样品时获得的T/C值与标准曲线比较，即可获得检测样品中的类风湿因子、抗链球菌溶血素O、C反应蛋白的含量。

本发明第二方面提供所述定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

1)用荧光微球标记的SLO、人变性IgG、环瓜氨酸肽、C反应蛋白单克隆抗体溶液分别喷涂抗链球菌溶血素O、类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白荧光标记物结合垫；

2)在抗链球菌溶血素O硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂SLO及羊抗鼠抗体，在类风湿因子硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂人变性IgG及羊抗鼠抗体，在抗环瓜氨酸肽抗体硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂环瓜氨酸肽及羊抗鼠抗体、在C反应蛋白硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂CRP单克隆及羊抗鼠抗体；

3)将四套样品垫、步骤1制备的荧光标记物结合垫、步骤2制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在各自的底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。

优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明中所述的荧光标记物结合垫还经过预处理，预处理中所使用的预处理缓冲液包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5－7.5g/L，缓冲液的pH值为7.2－7.6。

优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：

所述预处理缓冲液的溶剂为水。

所述预处理的具体步骤为：将荧光标记物结合垫在预处理液中浸泡2h，取出放于37℃烘干。

本发明第三方面提供所述定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒在类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白检测领域的用途。

本发明所提供的定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒通过荧光免疫层析技术同时进行检测，通过一次加样操作就能检测出样本中类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、CRP的含量，简化了操作过程，兼具灵敏性和特异性，快速准确评估类风湿关节炎临床症状。此外，所述检测试剂盒具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点，受血清(或血浆)严重血脂、溶血干扰小，当血清(或血浆)血红蛋白≤600mg/L、甘油三酯≤100mg/dL时、胆红素≤20mg/dL，对准确度的影响变差＜10％。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；the seriesMETHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODSIN ENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。

实施例1

本发明试纸卡的制备：

1)使用预处理缓冲液对荧光标记物结合垫进行预处理，预处理缓冲液为：水苏糖2g/L，明矾0.5g/L，果糖二磷酸钠1.5g/L，六偏磷酸钠0.3g/L，甘氨酸1.88g/L的水溶液，pH＝7.4，预处理的具体步骤为：将荧光标记物结合垫在预处理液中浸泡2h，取出放于37℃烘干；用适量的荧光微球标记的SLO、人变性IgG、环瓜氨酸肽、C反应蛋白单克隆抗体缓冲溶液分别喷涂经预处理的荧光标记物结合垫，制得四种荧光标记物结合垫，溶液中荧光微球与标记物的质量比为5:1，溶液的浓度为10mg/ml，喷涂量为4ul/cm；

2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂适量的SLO和羊抗鼠抗体溶液、适量的人变性IgG和羊抗鼠抗体溶液、适量的环瓜氨酸肽及羊抗鼠抗体、适量的CRP单克隆及羊抗鼠抗体，制得四种包被后的硝酸纤维素膜，喷涂溶液的浓度为1mg/ml，喷涂量为1ul/cm；

3)将样品垫、步骤1制备的荧光标记物结合垫、步骤2制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在各自的PVC底板上，切裁制得宽3-5mm的类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素O、CRP检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。

标准线曲线：

分别将浓度为0、20、50、100、150、200、250、300、400、500ng/mL的类风湿因子缓冲溶液滴加于样品垫上，每个浓度设5个重复(检测结果取5个重复的平均值)，膜层析10分钟以后，使用免疫分析仪器通过采集检测线(T)和质控线(C)条带荧光信号，分析仪的对荧光信号的检测范围是AD值0-10000，计算T/C信号值，建立类风湿因子定标曲线，其中Y轴为T/C信号值，X轴为标准品真实值。

分别将浓度为0、20、50、100、150、200、250、300、400、500、600、800pg/mL的抗链球菌溶血素O缓冲溶液滴加于样品垫上，每个浓度设5个重复(检测结果取5个重复的平均值)，膜层析10分钟以后，使用免疫分析仪器通过采集检测线(T)和质控线(C)条带荧光信号，计算T/C信号值，建立抗链球菌溶血素O定标曲线，其中Y轴为T/C信号值，X轴为标准品真实值。

分别将浓度为0、25、50、100、150、200、250、300、400、500、600、800ng/mL的抗环瓜氨酸肽抗体缓冲溶液滴加于样品垫上，每个浓度设5个重复(检测结果取5个重复的平均值)，膜层析10分钟以后，使用免疫分析仪器通过采集检测线(T)和质控线(C)条带荧光信号，计算T/C信号值，建立抗链球菌溶血素O定标曲线，其中Y轴为T/C信号值，X轴为标准品真实值。

分别将浓度为0、1、2、5、10、15、20、300、40、50、60、80、100mg/L的CRP缓冲溶液滴加于样品垫上，每个浓度设5个重复(检测结果取5个重复的平均值)，膜层析10分钟以后，使用免疫分析仪器通过采集检测线(T)和质控线(C)条带荧光信号，计算T/C信号值，建立CRP定标曲线，其中Y轴为T/C信号值，X轴为标准品真实值。

类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、CRP含量抗干扰性的检测：

将血清检测样品滴加于样品垫上，每个样品设5个重复(检测结果取5个重复的平均值)，膜层析10分钟以后，将检测样品时获得的T/C值与标准曲线比较，获得检测样品中的类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、CRP含量的检测数据，再将检测获得的类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、CRP含量数据与真实类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、CRP含量数据进行对比，获得准确度影响偏差值。

样品1：50ng/mL类风湿因子、300pg/mL抗链球菌溶血素O、50ng/ml抗环瓜氨酸肽抗体、60mg/L CRP、600mg/L血红蛋白、100mg/dL甘油三酯、10mg/dL胆红素；

样品2：100ng/mL类风湿因子、200pg/mL抗链球菌溶血素O、20ng/ml抗环瓜氨酸肽抗体、10mg/L CRP、500mg/L血红蛋白、50mg/dL甘油三酯、15mg/dL胆红素；

样品3：150ng/mL类风湿因子、150pg/mL抗链球菌溶血素O、500ng/ml抗环瓜氨酸肽抗体、2mg/L CRP、80mg/L血红蛋白、20mg/dL甘油三酯、20mg/dL胆红素；

样品4：200ng/mL类风湿因子、100pg/mL抗链球菌溶血素O、300ng/ml抗环瓜氨酸肽抗体、30mg/L CRP、150mg/L血红蛋白、30mg/dL甘油三酯、4mg/dL胆红素；

样品5：300ng/mL类风湿因子、50pg/mL抗链球菌溶血素O、600ng/ml抗环瓜氨酸肽抗体、5mg/L CRP、300mg/L血红蛋白、80mg/dL甘油三酯、9mg/dL胆红素；

空白对照样品：300mg/L血红蛋白、80mg/dL甘油三酯、9mg/dL胆红素血清样本。

样品1-5所获得的检测的类风湿因子含量数据分别为48ng/mL、97ng/mL、152/mL、215ng/mL、285ng/mL，抗链球菌溶血素O含量分别为280pg/mL、213pg/mL、145pg/mL、105pg/mL、46pg/mL，抗环瓜氨酸肽抗体含量数据分别为48ng/ml、19ng/ml、490ng/ml、285ng/ml、620ng/ml，CRP含量数据分别为65mg/L、9mg/L、2mg/L、33mg/L、5.5mg/L，准确度的影响变差＜10％，空白对照未发现明显荧光信号变化。

实施例2

对比例试纸卡的制备：只改变预处理缓冲液配方，对比例试纸卡的预处理缓冲液为25mM甘氨酸缓冲液，pH＝7.4，其他步骤均与实施例1中制备步骤相同。

类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、CRP的灵敏性和检测限对比实验：

用荧光仪器进行判断，分析仪的对荧光信号的检测范围是AD值0-10000，根据仪器的性能，CUTOFF值为50，在特定浓度下，90％以上检测例AD值≥50，即认为试剂盒能够用于该浓度下的检测。

采用5％BSA生理盐水溶液作为空白样本，空白样本应不含被测物。取0.3-5.3ng/mL梯度浓度的类风湿因子已知血样进行灵敏性检测，每间隔0.2ng/mL设置一个梯度，每个梯度设置20个样本，记录检测结果。结果显示实施例1所制备的试纸卡最低检测限为0.5ng/mL，对比例试纸卡的最低检测限高于5.3ng/mL。

采用5％BSA生理盐水溶液作为空白样本，空白样本应不含被测物。取1-50pg/mL的抗链球菌溶血素O已知血样进行灵敏性检测，每间隔1pg/mL设置一个梯度，每个梯度设置20个样本，记录检测结果。结果显示实施例1所制备的试纸卡最低检测限为3pg/mL，对比例试纸卡的最低检测限高于50pg/mL。

采用5％BSA生理盐水溶液作为空白样本，空白样本应不含被测物。取0.05-0.99mg/L的CRP已知血样进行灵敏性检测，每间隔0.02mg/L设置一个梯度，每个梯度设置20个样本，记录检测结果。结果显示实施例1所制备的试纸卡最低检测限为0.05mg/L，对比例试纸卡的最低检测限高于0.99mg/L。

采用5％BSA生理盐水溶液作为空白样本，空白样本应不含被测物。取1-100ng/mL的抗环瓜氨酸肽抗体已知血样进行灵敏性检测，每间隔0.5ng/mL设置一个梯度，每个梯度设置20个样本，记录检测结果。结果显示实施例1所制备的试纸卡最低检测限为1.5ng/mL，对比例试纸卡的最低检测限高于100ng/L。

综上所述，本发明所提供的检测试剂盒具有良好的抗干扰性和特异性，且具有很好的灵敏性，阴性本底更低，有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (9)

1.一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒，包括互相独立的类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体和C反应蛋白检测试纸卡，所述类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体和C反应蛋白检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述类风湿因子检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含人变性IgG，所述抗链球菌溶血素O检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含链球溶菌素O，所述抗环瓜氨酸肽抗体检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含环瓜氨酸肽，所述C反应蛋白检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含C反应蛋白单克隆抗体，所述各硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述荧光标记物结合垫上的链球溶菌素O、人变性IgG、环瓜氨酸肽、C反应蛋白单克隆抗体采用荧光微球标记。

2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。

3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述类风湿因子检测试纸卡的检测线上包被有人变性IgG，所述抗链球菌溶血素O检测试纸卡的检测线上包被有链球菌溶血素O，所述抗环瓜氨酸肽抗体检测试纸卡的检测线上包被有环瓜氨酸肽。

4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述C反应蛋白检测试纸卡的检测线上包被有C反应蛋白单克隆抗体。

5.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各质控线上包被羊抗鼠抗体。

6.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有四个平行的试纸卡卡槽，所述试纸卡分别嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有四个测试窗和四个加样孔，所述三个测试窗的位置分别与四个试纸卡的检测线和质控线的位置相配合，所述四个加样孔的位置与四个试纸卡的样品垫的位置相配合。

7.如权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述四个加样孔之间还设有连接四个加样孔的横槽。

8.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒用于同时定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的含量。

9.如权利要求1-8任一权利要求所述的定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

1)用荧光微球标记的SLO、人变性IgG、环瓜氨酸肽、C反应蛋白单克隆抗体溶液分别喷涂抗链球菌溶血素O、类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白荧光标记物结合垫；

2)在抗链球菌溶血素O硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂SLO及羊抗鼠抗体，在类风湿因子硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂人变性IgG及羊抗鼠抗体，在抗环瓜氨酸肽抗体硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂环瓜氨酸肽及羊抗鼠抗体、在C反应蛋白硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂CRP单克隆及羊抗鼠抗体；

3)将四套样品垫、步骤1制备的荧光标记物结合垫、步骤2制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在各自的底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。