CN104450677A - 一种大豆dna的提取方法 - Google Patents

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刘曼
逄淑梅
牟特
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Abstract

本发明属于生物技术领域，涉及一种大豆DNA的提取方法。一种大豆DNA的提取方法，主要步骤包括：首先将大豆粉碎成粉末状，与CTAB裂解缓冲液充分混合裂解，然后加入酚：氯仿：异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入氯仿：异戊醇进行抽提，离心后上清液加入等体积的异丙醇进行沉淀30min，离心弃上清，保留沉淀，再用无水乙醇溶液洗涤沉淀，离心后的沉淀干燥后用TE溶解，加入RNAse酶37℃孵育30min，所得溶液即为大豆DNA溶液，-20℃贮存备用。本发明的大豆DNA的提取方法的有益效果是：可以从大豆干种子中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，操作简单、耗时短、利于快速检测。

Description

一种大豆DNA的提取方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种大豆DNA的提取方法。
背景技术
大豆是我国乃至全世界重要的经济与粮食作物，是食用油和植物蛋白最丰富、最廉价的来源。为了提高大豆的产量，满足人们对大豆的需求量，科研人员采用基因工程与分子辅助育种方法，培育了一些高产、优质和抗逆以及适合农场机械化种植的转基因大豆品种。2010年国际农业生物技术应用服务组织(ISAAA)的数据显示：2010年转基因大豆仍然是最主要的转基因作物，种植面积约7330万公顷，占全球转基因作物种植面积的50%左右。中国从上世纪末开始进口耐除草剂转基因大豆，各种与转基因大豆相关的产品越来越多地进入市场。为保障广大消费者的知情权和选择权，满足国际贸易的需要，建立准确、快速、高效的转基因成分检测技术至关重要。核酸检测技术，尤其是常规聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光PCR法，核酸检测的关键因素是提取到高质量的DNA。在做PCR试验时，首先面临的一个问题即是模板DNA的提取。对于大豆来说，一般实验室都是利用幼苗叶片为材料，经液氮研磨提取DNA。此过程必须要经过浸种催芽、幼苗培养、液氮研磨等过程，一般要用两周左右的时间才能进行DNA的提取并进一步开展实验。常规提取方法耗费时间长，步骤繁琐，并且提取的DNA纯度不高，质量差等。
发明内容
本发明的目的是建立简单、高效、稳定的一种提取大豆DNA的方法。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种大豆DNA的提取方法，包括以下步骤:（1）首先将大豆粉碎成粉末状，分别称取0.1g制备好的样品，加入到两支2ml离心管中；（2）加入2%CTAB裂解缓冲液，震荡混匀，65℃孵育30min。（3）加入酚：氯仿：异戊醇，震荡均匀，12000r/min离心20min。（4）吸取上清液，放入1.5ml离心管中，加入氯仿：异戊醇，震荡均匀，12000r/min离心15min。（5）吸取上清液，放入另一1.5ml离心管中，加入等体积的异丙醇，沉淀30min，12000r/min离心10min。（6）弃去上清，加入无水乙醇溶液洗涤，12000r/min,离心1min。（7）弃去上清，沉淀室温干燥，加入50ul TE溶液溶解沉淀。（8）加入5ulRNAse酶溶液，37℃孵育30min，-20℃贮存备用。
步骤（1）中所述的样品为大豆干种子经粉碎后，直径小于0.1mm的颗粒。
步骤（2）中2%CTAB裂解缓冲液的配方为：CTAB 4g、50mmolTris-HCL PH8.0、0.7molNaCl、10mmolEDTA PH8.0、20mmol 2-巯基乙醇。
本发明的大豆DNA的提取方法的有益效果是：可以从大豆干种子中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，操作简单、耗时短、利于快速检测。用本发明的方法得到的DNA浓度为118.15ng/μl，OD260/ OD280的值为1.85。
具体实施方式
本发明的一种提取大豆干种子DNA方法，包括以下步骤：
（1）首先将大豆粉碎成粉末状，达到直径小于0.1mm的颗粒；分别称取0.1g制备好的样品，加入到两支2ml离心管中；
（2）加入600ul 2%CTAB裂解缓冲液，震荡混匀，65℃孵育30min；2%CTAB裂解缓冲液：CTAB 4g、50mmolTris-HCL PH8.0、0.7molNaCl、10mmolEDTA PH8.0、20mmol 2-巯基乙醇；
（3）加入500ul酚：氯仿：异戊醇，震荡均匀，12000r/min离心20min，酚、氯仿、异戊醇的体积比为25:24:1；
（4）吸取上清液，放入1.5ml离心管中，加入250ul 氯仿：异戊醇，震荡均匀，12000r/min离心15min；氯仿、异戊醇的体积比为24:1；
（5）吸取上清液，放入另一1.5ml离心管中，加入等体积的异丙醇，沉淀30min，12000r/min离心10min；
（6）弃去上清，加入无水乙醇溶液洗涤，12000r/min，离心1min；
（7）弃去上清，干燥，加入50ulTE溶液溶解沉淀；
（8）加入5ulRNAse酶溶液，37℃孵育30min；-20℃贮存备用。

Claims (3)

1.一种大豆DNA的提取方法，包括以下步骤:（1）首先将大豆粉碎成粉末状，分别称取0.1g制备好的样品，加入到两支2ml离心管中；（2）加入2%CTAB裂解缓冲液，震荡混匀，65℃孵育30min；
（3）加入酚：氯仿：异戊醇，震荡均匀，12000r/min离心20min；
（4）吸取上清液，放入1.5ml离心管中，加入氯仿：异戊醇，震荡均匀，12000r/min离心15min；
（5）吸取上清液，放入另一1.5ml离心管中，加入等体积的异丙醇，沉淀30min，12000r/min离心10min；
（6）弃去上清，加入无水乙醇溶液洗涤，12000r/min,离心1min；
（7）弃去上清，沉淀室温干燥，加入50ul TE溶液溶解沉淀；
（8）加入5ulRNAse酶溶液，37℃孵育30min，-20℃贮存备用。
2.根据权利要求1所述的大豆DNA的提取方法，其特征在于：步骤（1）中所述的样品为大豆干种子经粉碎后，直径小于0.1mm的颗粒。
3.根据权利要求1所述的大豆DNA的提取方法，其特征在于：步骤（2）中2%CTAB裂解缓冲液的配方为：CTAB 4g、50mmolTris-HCL PH8.0、0.7molNaCl、10mmolEDTA PH8.0、20mmol 2-巯基乙醇。
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