CN104447958A - 自发酵液中提取恩拉霉素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种一种自发酵液中提取恩拉霉素的方法，包括恩拉霉素发酵液灭活、板框过滤湿菌体、湿菌体经摇摆颗粒机制粒，制取棕红色提取液、制取淡黄色脱色液、制取浓缩液、结晶、得到白色粉末状产品等步骤。本发明提取收率高，产品纯度高，工艺简洁，流程短，投资少，易投产。

Description

自发酵液中提取恩拉霉素的方法
技术领域
本发明涉及一种提取恩拉霉素的方法。
背景技术
恩拉霉素对革兰氏阳性菌有很强的抑制作用，其敏感细菌主要有金黄色葡萄球菌等各种革兰氏阳性球菌、枯草杆菌、炭蛆杆菌破伤风梭菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌等。长期使用后不易产生抗药性，不易被动物吸收，畜禽体内残留很少。恩拉霉素能改变肠道内的细菌群落分布，有利于饲料营养成份的消化吸收，促进动物增重和提高饲料利用率，因此被世界上许多国家推荐作为抗生素促生长剂。恩拉霉素是放线菌发酵产生的一种由不饱和脂肪酸和十几种氨基酸组成的多肽类抗生素，主要存在于发酵菌体细胞内。目前恩拉霉素商品主要为预混剂，市场上的产品有4%和8%两种含量的恩拉霉素预混剂，无直接自发酵液中提取恩拉霉素精品的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提取收率高，产品纯度高的自发酵液中提取恩拉霉素的方法。
本发明的技术解决方案是：
一种自发酵液中提取恩拉霉素的方法，其特征是：包括下列步骤：
（1）恩拉霉素发酵液1000L，发酵单位8256u/ml，含恩拉霉素8.256㎏；发酵液加热至75-80℃，保温30min，灭活，然后降温至45-50℃待用；
（2）灭活发酵液经板框过滤，并用150L纯化水套洗，然后用空气吹至无水滴出，得到湿菌体200.4㎏；
（3）湿菌体经摇摆颗粒机制粒，加入75%乙醇1200L，转速30-50转/分钟搅拌下，加入亚硫酸钠120g，用15%HCl溶液调节PH3.0，转速30-50转/分钟搅拌2h，抽滤，滤饼再用460L75%乙醇淋洗，抽干，得到棕红色提取液1605L，恩拉霉素含量为4941.2u/ml；
（4）萃取液用10%NaOH溶液调PH8.0，加入药用活性炭16㎏, 转速30-50转/分钟搅拌脱色1h，抽滤，用100L纯化水洗涤活性炭，抽干；滤液再用0.45um的精密过滤器复滤，得到淡黄色脱色液1700L；
（5）用15%HCl溶液调节脱色液PH5.0，温度45～55℃、真空度-0.085MPa浓缩，得到浓缩液205升，恩拉霉素含量为37750u/ml；
（6）搅拌转速10-30转/分钟，缓慢降温至5～8℃，结晶10h；离心，用95%乙醇洗涤晶体，湿晶体经45℃、-0.085MPa干燥8h，得到白色粉末状产品7.56㎏，产品含量970u/mg。
本发明特点：
1、生产过程中添加抗氧化剂亚硫酸钠，防止恩拉霉素在提取过程中被氧化，减少色素的产生，从而提高提取收率，产品纯度高。
2、采用乙醇自发酵液中萃取恩拉霉素，无有害气体产生，同时乙醇可以回收循环利用，降低生产成本。
3、与树脂法提取工艺比较，仅使用少量酸碱，废水排放少，有利于环境保护。
4、该项技术生产工艺简洁，流程短，投资少，易投产。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
一种自发酵液中提取恩拉霉素的方法，包括下列步骤：
1、恩拉霉素发酵液1000L，发酵单位8256u/ml，含恩拉霉素8.256㎏。
发酵液加热至75-80℃，保温30min，灭活，然后降温至45-50℃待用。
2、灭活发酵液经板框过滤，并用150L纯化水套洗，然后用空气吹至无水滴出，得到湿菌体200.4㎏，恩拉霉素含量为40.29u/mg,过滤收率为97.81%。
3、湿菌体经摇摆颗粒机制粒，加入75%乙醇1200L，转速30-50转/分钟搅拌下，加入亚硫酸钠120g，用15%HCl溶液调节PH3.0，转速30-50转/分钟搅拌2h，抽滤，滤饼再用460L75%乙醇淋洗，抽干，得到棕红色提取液1605L，恩拉霉素含量为4941.2u/ml，萃取收率为98.21%。
4、萃取液用10%NaOH溶液调PH8.0，加入药用活性炭16㎏, 转速30-50转/分钟搅拌脱色1h，抽滤，用100L纯化水洗涤活性炭，抽干。滤液再用0.45um的精密过滤器复滤，得到淡黄色脱色液1700L，恩拉霉素含量为4597.9 u/ml，脱色收率为98.56%。
5、用15%HCl溶液调节脱色液PH5.0，温度45～55℃、真空度-0.085MPa浓缩，得到浓缩液205升，恩拉霉素含量为37750u/ml，浓缩收率为99.01%。
6、搅拌转速10-30转/分钟，缓慢降温至5～8℃，结晶10h。离心，用95%乙醇洗涤晶体，湿晶体经45℃、-0.085MPa干燥8h，得到白色粉末状产品7.56㎏，产品含量970u/mg。HPLC纯度达到93%，提取总收率88.9%。

Claims (1)

1.一种自发酵液中提取恩拉霉素的方法，其特征是：包括下列步骤：
（1）恩拉霉素发酵液1000L，发酵单位8256u/ml，含恩拉霉素8.256㎏；发酵液加热至75-80℃，保温30min，灭活，然后降温至45-50℃待用；
（2）灭活发酵液经板框过滤，并用150L纯化水套洗，然后用空气吹至无水滴出，得到湿菌体200.4㎏；
（3）湿菌体经摇摆颗粒机制粒，加入75%乙醇1200L，转速30-50转/分钟搅拌下，加入亚硫酸钠120g，用15%HCl溶液调节PH3.0，转速30-50转/分钟搅拌2h，抽滤，滤饼再用460L75%乙醇淋洗，抽干，得到棕红色提取液1605L，恩拉霉素含量为4941.2u/ml；
（4）萃取液用10%NaOH溶液调PH8.0，加入药用活性炭16㎏, 转速30-50转/分钟搅拌脱色1h，抽滤，用100L纯化水洗涤活性炭，抽干；滤液再用0.45um的精密过滤器复滤，得到淡黄色脱色液1700L；
（5）脱色液用10%氢氧化钠溶液调节脱色液PH6.5，温度45～55℃、真空度-0.085MPa浓缩，得到浓缩液205升，恩拉霉素含量为37750u/ml；
（6）搅拌转速10-30转/分钟，缓慢降温至5～8℃，结晶10h；离心，用95%乙醇洗涤晶体，湿晶体经45℃、-0.085MPa干燥8h，得到白色粉末状产品7.56㎏，产品含量970u/mg。
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