CN104430212A - 一种提高白僵蚕得率的孢子悬液及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高白僵蚕得率的孢子悬液及其应用，一种提高白僵蚕得率的孢子悬液，其原料组分包括：白僵菌孢子粉、聚山梨酯-80、蔗糖、蛋白胨、辅料物质、无菌水，所述孢子悬液中各成分的占比为：白僵菌孢子1×106-5×106个/mL、聚山梨酯-800.2份（质量百分比）、蔗糖1-3份、蛋白胨0.4-0.6份、辅料物质0.05份、其余为无菌水，所述辅料物质可以是硫酸镁、氯霉素、硫酸链霉素。公开了一种能够显著提高白僵蚕得率的白僵菌孢子悬液，提供一种优化的白僵菌悬液浓度，同时提高了白僵菌悬液的粘附性和活力，提高其发芽率，对于白僵蚕的生产在产量和质量方面都有着显著提升。
Description
技术领域
本发明属于中药生产技术领域，具体涉及一种提高白僵蚕得率的孢子悬液及其应用。
背景技术
僵蚕是一种优良的中药材，具有息风止痉、祛风止痛、化痰散结的功效，在中成药和中药方剂中应用广泛。据统计，在513种人用成药中有49种含白僵蚕，64种儿科成药中含白僵蚕的有29种。随着僵蚕药理成分和功能研究的深入，发现僵蚕水提物或醇提物在美白祛斑、抗惊厥、抗凝、降糖降脂等方面也表现出良好的功效。近年来，僵蚕相关产品的研发也开始起步，进一步拓展了僵蚕在药食领域的应用，最新资料表明，僵蚕国内年需求量已达2500-3000吨，僵蚕需求呈逐年增加的趋势，僵蚕的生产和加工具有广阔的市场前景。
僵蚕人工生产的步骤是：家蚕饲养至五龄起蚕，体表喷洒白僵菌孢子悬液，待病原充分粘附后开始喂食桑叶，一般在5-6天内家蚕出现大批量死亡，死蚕进一步僵化，最后晒干或烘干后获得僵蚕。
一般的家蚕品种在五龄期食桑七日即成熟蚕，第7天开始吐丝结茧。因此，家蚕若在第6天还不发病，一般都会在结茧过程中死亡，或者成为僵蛹，不仅降低了僵蚕得率，还增加了僵蚕收获的难度。白僵菌在保存过程中孢子活力出现一定程度地下降，往往造成僵蚕延迟发病，影响到僵蚕的得率和产量。另一方面，家蚕发病太早则会影响僵蚕收获的质量，导致收获的白僵蚕较小，因为家蚕在五龄第3-5天为盛食期，所以，提高家蚕在第5、6天的发病率对于提高白僵蚕的质量有很大影响，这就对白僵菌的粘附性、感染率、单位浓度和单位施用量等都有较大的要求。
申请号为“CN201010536189.8”的中国专利中，公开了名称为“一种用添加营养物质提高球孢白僵菌孢子萌发率的方法”的发明专利，该发明以球孢白僵菌(Beauveriabassiana)(保藏编号为CCTCC No：M209238)为发酵菌株，将其产生的孢子配制成一定浓度的孢子悬浮液，在该孢子悬浮液中添加最终浓度为0.5%-10%的麸皮浸出液，在适当的条件下(250mL的三角瓶，装液量50mL；25℃、180rpm摇床12h)进行培养。该添加麸皮浸出液的方式能够提升白僵菌孢子的萌芽率，然而该方式只能单方面的提高白僵菌孢子的萌芽率，对于白僵菌孢子的活力的保持效果和粘附性提升不明显，且每次使用都需重新发酵，时间跨度大。
申请号为“CN201110025267.2”的中国专利中，公开了名称为“一种球孢白僵菌杀虫剂悬乳剂及其制备方法”的发明专利，其特征在于按重量份数由以下成分组成：球孢白僵菌孢子粉：20-80份；乳化分散剂：10-60份；增稠剂：10-30份；悬浮稳定剂：10-30份；展着剂：10-30份；糖：10-60份；蛋白胨：1-10份；所述的球孢白僵菌孢子粉的白僵菌含孢量为500亿/克。该球孢白僵菌杀虫剂中球孢白僵菌孢子粉的配比较高，主要用做杀虫剂，不能控制家蚕的发病时间，不适合作为白僵蚕的生产。
发明内容
为了解决上述问题，本发明公开了一种提高白僵蚕得率的孢子悬液及其应用，以解决现有的白僵蚕在生产中出现的白僵蚕的产量和质量的问题，提供了一种能够显著提高白僵蚕得率的白僵菌孢子悬液，对白僵菌悬液的浓度进行了优化，同时提高了白僵菌悬液的粘附性和活力，提高其发芽率，对于白僵蚕的生产在产量和质量方面都有着显著提升。
一种提高白僵蚕得率的孢子悬液，其原料组分包括：白僵菌孢子粉、聚山梨酯-80、蔗糖、蛋白胨、辅料物质、无菌水，所述孢子悬液中各成分的占比为：白僵菌孢子 1×106-5×106个/mL、聚山梨酯-80 0.2份（质量百分比）、蔗糖 1-3份、蛋白胨 0.4-0.6份、辅料物质 0.05份、其余为无菌水。
作为一种优选方式，所述辅料物质可以是硫酸镁、氯霉素、硫酸链霉素。
作为一种优选方式，其原料及配比包括：白僵菌孢子 3×106个/mL、聚山梨酯-80 0.2份（质量百分比）、蔗糖 2份、蛋白胨 0.5份、辅料物质 1份，其余为无菌水。
一种提高白僵蚕得率的孢子悬液的制作方法，包括以下配置步骤：（1）使用聚山梨酯-80、白僵菌孢子粉和无菌水配制孢子初步悬液，可采用血球计数法进行浓度确定；（2）在所述孢子初步悬液中加入蔗糖、蛋白胨及辅料物质，混合充分溶解。
一种提高白僵蚕得率的孢子悬液的接种方法，包括以下步骤：（1）选取某一品种的家蚕进行饲养，饲养至第四次蜕皮进入五龄起蚕阶段（食桑之前）；（2）以权利要求4的方法配制孢子悬液，将孢子悬液置于喷雾器中；（3）将孢子悬液体喷于家蚕的体表，至家蚕体表全部湿润为止，一小时后将处理过的家蚕继续进行桑叶饲养，控制环境处于适宜的温度和湿度；（4）将死亡的家蚕待稍变硬后挑出，进行进一步充分僵化，然后烘干制成白僵蚕。
本发明在白僵菌悬液中加入了蔗糖跟蛋白胨，蔗糖能够为白僵菌孢子发芽提供碳源和维持渗透压，蛋白胨主要提供发芽所需氮源，提高其发芽率，营养物质能够延长白僵菌在家蚕表面的存活时间，保持白僵菌孢子的活力，同时，加入了蔗糖和蛋白胨也提高了白僵菌悬液的粘度，提高其粘附性，使其更加容易粘附在家蚕的体表，提高了其感染效率。
对白僵菌孢子悬液的孢子浓度进行优化和确定，采用了1×106-5×106个/mL的菌体浓度，该数据是根据该白僵菌孢子悬液的活力和粘附性进行调整，目的是提高家蚕在第5、6天的发病率，控制家蚕发病时间的一致性，从而提高白僵蚕的得率和质量。
在白僵菌孢子悬液中加入了氯霉素、硫酸链霉素等辅料物质，其目的是对细菌进行抑制，防止其它细菌对白僵菌孢子感染效果的影响。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例的家蚕死亡率实验结果图。
具体实施方式
本发明主要针对现有的僵蚕生产方法存在发病延迟、得率低的缺陷，提供一种提高白僵蚕得率的孢子悬浮液，该方法通过在孢子悬浮液中加入促进孢子发芽的营养物质来实现。将该悬浮液体喷家蚕后，能够增加孢子在家蚕体表的粘附性，加快孢子的发芽，提高白僵菌入侵蚕体的成功率。本发明的方法可操作性强，家蚕发病整齐，僵蚕质量和产量高。
下面将对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本实施例的原料及其配比包括：白僵菌孢子 3×106个/mL、聚山梨酯-80 0.2份（质量百分比）、蔗糖 2份、蛋白胨 0.5份、辅料物质 0.05份，其余为无菌水。
其接种步骤为：（1）选取某一品种的家蚕进行饲养，饲养至第四次蜕皮后五龄起蚕阶段（食桑之前），2小时之后，挑选出来进入后续处理，该处理组设置30头蚕；（2）以上述的方法配置孢子悬液，将孢子悬液置于喷雾器中；（3）将孢子悬液体喷于家蚕的体表，至家蚕体表全部湿润为止，一小时后将处理过的家蚕继续进行桑叶饲养，控制饲养环境处于适宜的温度和湿度，7天内每天调查其死亡情况；（4）记录每天死亡家蚕数，将死亡的家蚕待稍变硬后挑出，进行进一步充分僵化，然后烘干制成白僵蚕。
实施例2：
本实施例的原料及其配比包括：白僵菌孢子 3×106个/mL、聚山梨酯-80 0.2份（质量百分比）、其余为无菌水。
其接种步骤为：（1）选取某一品种的家蚕进行饲养，饲养至第四次蜕皮后五龄起蚕阶段（食桑之前），2小时之后，挑选出来进入后续处理，该处理组设置30头蚕；（2）以上述的方法配置孢子悬液，将孢子悬液置于喷雾器中；（3）将孢子悬液体喷于家蚕的体表，至家蚕体表全部湿润为止，一小时后将处理过的家蚕继续进行桑叶饲养，控制饲养环境处于适宜的温度和湿度，7天内每天调查其死亡情况；（4）记录每天死亡家蚕数，将死亡的家蚕待稍变硬后挑出，进行进一步充分僵化，然后烘干制成白僵蚕。
实施例1和2的实验结果如图1所示。
在进行不同实施例的实验接种过程中，发现本发明提供的白僵菌孢子接种液相对于常用的白僵菌孢子接种液在粘附性方面具有更加优异的效果，与五龄蚕的体表有较高的亲和力，降低了生产人员的操作难度，也提高了白僵菌孢子的感染成功率。
由图1可以看出，本发明公布的白僵菌孢子接种液组能够加快家蚕发病死亡时间。对照组第5天死亡率为4.17%，而试验组死亡率达到29.9%，相应的第6天的死亡率试验组也有明显的提升，此外，到家蚕上蔟前为止，对照组僵化率为70.1%，新接种液组僵化率达到83.3%。因此，用本接种方法可以明显提高家蚕发病率和僵蚕得率，尤其是第5-7天的发病率，此时死亡的家蚕所制得的白僵蚕的质量是最高的，增加僵蚕质量和收益。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种提高白僵蚕得率的孢子悬液，其特征在于，其原料组分包括：白僵菌孢子粉、聚山梨酯-80、蔗糖、蛋白胨、辅料物质、无菌水，所述孢子悬液中各成分的占比为：白僵菌孢子 1×106-5×106个/mL、聚山梨酯-80 0.2份（质量百分比）、蔗糖 1-3份、蛋白胨 0.4-0.6份、辅料物质 0.05份、其余为无菌水。
2.根据权利要求1所述的一种提高白僵蚕得率的孢子悬液，其特征在于，所述辅料物质可以是硫酸镁、氯霉素、硫酸链霉素。
3.根据权利要求1所述的一种提高白僵蚕得率的孢子悬液，其特征在于，其原料及配比包括：白僵菌孢子 3×106个/mL、聚山梨酯-80 0.2份（质量百分比）、蔗糖 2份、蛋白胨 0.5份、辅料物质 0.05份，其余为无菌水。
4.一种提高白僵蚕得率的孢子悬液的制作方法，其特征在于，包括以下配置步骤：（1）使用聚山梨酯-80、白僵菌孢子粉和无菌水配制孢子初步悬液，可采用血球计数法进行浓度确定；（2）在所述孢子初步悬液中加入蔗糖、蛋白胨及辅料物质，混合充分溶解。
5.一种提高白僵蚕得率的孢子悬液的接种方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）选取某一品种的家蚕进行饲养，饲养至第四次蜕皮进入五龄起蚕阶段（食桑之前）；（2）以权利要求4的方法配制孢子悬液，将孢子悬液置于喷雾器中；（3）将孢子悬液体喷于家蚕的体表，至家蚕体表全部湿润为止，一小时后将处理过的家蚕继续进行桑叶饲养，控制环境处于适宜的温度和湿度；（4）将死亡的家蚕待稍变硬后挑出，进行进一步充分僵化，然后烘干制成白僵蚕。
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