CN104398517A

CN104398517A - 乙胺嘧啶的新用途及治疗肿瘤的药物组合物

Info

Publication number: CN104398517A
Application number: CN201410708707.8A
Authority: CN
Inventors: 易韬; 周鸿鹰; 赵霞
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2014-11-28
Filing date: 2014-11-28
Publication date: 2015-03-11

Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及一种乙胺嘧啶的新用途及治疗肿瘤的药物组合物，该新用途是乙胺嘧啶在治疗卵巢癌中的应用。治疗卵巢癌的药物是以有效剂量的乙胺嘧啶为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。本发明乙胺嘧啶用于治疗卵巢癌，能有效杀灭卵巢癌细胞，抑制肿瘤细胞生长，有良好的药用价值，为临床治疗卵巢癌提供了一种新的选择。

Description

乙胺嘧啶的新用途及治疗肿瘤的药物组合物

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及乙胺嘧啶的新用途及治疗肿瘤的药物组合物。

背景技术

妇科恶性肿瘤严重危害妇女健康，卵巢癌为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，发病隐匿，临床确诊时有大约75％的患者已属晚期。据报道，美国每年有230,000名新增卵巢癌患者，同期有超过140,000患者死亡。近年卵巢癌在中国发病率也逐年增高。尽管肿瘤细胞减灭术联合化疗已经使晚期卵巢癌患者受益，其五年生存率仍然很低，徘徊在25～30％。

乙胺嘧啶(pyrimethamine，daraprim)是人工合成的非喹啉型抗疟药，中文别名为息疟定，达拉匹林，化学命名为2,4-二氨基-6-乙基-5-对氯苯基嘧啶；6-乙基-5-(4-氯苯基)-2,4-嘧啶二胺，分子式为C12H13ClN4，分子量：248.7114，CAS号：58-14-0。乙胺嘧啶为白色结晶性粉末；无臭，无味。本品在乙醇或氯仿中微溶，在水中几乎不溶。乙胺嘧啶的熔点为239～242℃，吸收系数为309～329。乙胺嘧啶分子结构式如下：

乙胺嘧啶可抑制疟原虫的二氢叶酸还原酶，因而干扰疟原虫的叶酸正常代谢，对恶性疟及间日疟原虫红细胞前期有效，常用作病因性预防药。此外，也能抑制疟原虫在蚊体内的发育，故可阻断传播。临床上用于预防疟疾和休止期抗复发治疗。1971年有人报导，口服抗疟药乙胺嘧啶因易进入中枢神经系统而成功地治疗了两例脑膜白血病病人。替莫唑胺联合乙胺嘧啶治疗脑垂体腺瘤能抑制肿瘤细胞增值，促进细胞凋亡。

至今，尚无关于以乙胺嘧啶为活性成分，或含有乙胺嘧啶的药物组合物应用于治疗卵巢癌的相关报道。

发明内容

本发明所解决的第一个技术问题是提供一种乙胺嘧啶的药物新用途。

本发明所提供的乙胺嘧啶的药物新用途是其在制备治疗肿瘤的药物中的新用途，尤其是治疗卵巢癌的药物中的新用途。

所述药物是以有效剂量的乙胺嘧啶为活性成分，加入药学上的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。具体的可以制成口服制剂或者注射剂，通过口服、静脉输入和腹腔注射的方式给药。

本发明所解决的第二个技术问题是提供一种治疗肿瘤的药物组合物，尤其是治疗卵巢癌的药物组合物，其主要活性成分为乙胺嘧啶，加入药学上的常规辅料制备而成的药剂。活性成分还可以配加其他抗肿瘤药增加协同增效的效果。

所述常规辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

以乙胺嘧啶为活性成分制备的治疗卵巢癌的药物可以制成口服剂、注射液等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

附图说明

图1、不同浓度乙胺嘧啶在体外实验中对SKOV3细胞的影响

图2、不同浓度乙胺嘧啶在体内实验对卵巢肿瘤的作用

具体实施方式

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例：

1.材料与方法

1.1材料

雌性BALB/C裸鼠由简阳达硕动物科技有限公司提供；乙胺嘧啶由sigma公司提供分子式为C12H13ClN4，分子量：248.7114，CAS号：58-14-0；DMSO为sigma公司提供纯度为＞99.5％；DMEM培养基购自Gibio BRL公司；胎牛血清(FCS)：购自Gibio BRL公司；丁胺卡那霉素购自sigma公司；消化用胰酶(Tyrisin)购自Invitrogen公司；

1.2试剂配制

DMEM完全培养基：在超净台内将超纯水400mL﹑10×DMEM 50mL、10％胎牛血清50mL和丁胺卡那霉素50mg依次加入500mL无菌瓶内，旋紧瓶盖，混匀后置4℃贮备。

1.3细胞培养

SKOV3细胞为贴壁生长细胞，在含有10％胎牛血清和丁胺卡那霉素的DMEM组织培养基中培养。传代时，从培养箱中取出培养瓶，吸掉培养基后，用无血清培养基洗涤2次，加入0.1％的胰酶，显微镜下观察细胞收缩变圆后，加入完全培养基终止胰酶作用，并吹打使细胞分散脱落，收集液体，2000rpm，离心3分钟，细胞沉淀用完全培养基重悬，吹打均匀后分瓶培养。一般3天传代1次。

1.4MTT肿瘤细胞生长抑制观察

SKOV3细胞按2.0×10⁵/孔接种于六孔培养皿中。次日，待细胞均匀贴壁后进行加药。按照乙胺嘧啶0、25μg、50μg和100μg分别加入，每组设立3个复孔，实验重复3次。

MTT，3-(4,5)二甲苯噻唑-2,5联苯四唑溴，是黄色的水溶性盐。MTT比色分析是定量检测细胞线粒体活性的标准方法，其原理是活细胞摄入MTT后，能将其还原成紫-蓝色沉淀。96孔板中细胞转染48小时后，用无菌枪尖吸去培养液。以完全培养基稀释MTT，使终浓度为2mg/ml，每孔加入50μl,将细胞放回5％CO₂培养箱中孵育4小时，再吸去含MTT的培养基，每孔加入150μl二甲亚砜(DMSO)，用酶标仪在540nm波长处读取吸收值。以未处理组细胞的吸收值为100％对照，计算处理后细胞的生存率。

1.5人卵巢癌裸鼠腹腔种植瘤模型的建立

1)收集对数生长期的SKOV3细胞，2000rpm离心3分钟，细胞沉淀用无血清DMEM培养基洗涤2次，计数后调整细胞浓度为5×10⁷/ml；

2)在5只4～6周龄、20～25g左右的雌性裸鼠的背部皮下接种5×10⁶个细胞(0.1ml)，其目的是为腹腔种植准备新鲜的肿瘤组织；

3)5周后，当背部肿瘤结节直径达1cm左右时，取下肿瘤，并去除坏死组织；

4)将新鲜肿瘤组织剪成直径小于1mm的细小颗粒，加入足够的无血清、无抗生素DMEM培养液混匀，用14号针头(直径为1.2mm)将肿瘤颗粒悬液注入15只裸鼠的腹腔内，每只裸鼠注射0.5ml。

1.6实验动物的治疗研究

接种后第7天肉眼或显微镜下可见种植的肿瘤结节。因此，腹腔接种肿瘤后第7天开始治疗。15只裸鼠随机分为3组，每组5只。3组裸鼠分别按下述剂量行腹腔内注射，一周一次，共4次。终止实验，处死裸鼠，取下腹腔内肿瘤结节并称重。

A：200μg乙胺嘧啶+50ul DMSO+200ul 5％葡萄糖水

B：400μg乙胺嘧啶+50ul DMSO+200ul 5％葡萄糖水

C：200ul 5％葡萄糖水

1.7结果

1.7.1乙胺嘧啶抑制SKOV3细胞增殖作用

发明人使用MTT细胞活性检测乙胺嘧啶抑制SKOV3细胞增殖作用。结果显示，与空白对照组相比较，治疗组细胞活性值明显降低，100μg组在48小时后细胞全部死亡，验证了乙胺嘧啶在体外能增强抑制人卵巢上皮癌细胞株SKOV3的增殖，图1所示为3个复孔3次试验平均值。

1.7.2抑制裸鼠腹腔种植瘤的生长

体内实验对卵巢肿瘤重量的作用如图2所示，与5％葡萄糖组相比，200μg和400μg组腹腔肿瘤生长明显受抑制，各组肿瘤重量分别为1.03±0.26g，0.020±0.00g和0g(P＜0.01)。用乙胺嘧啶进行治疗明显抑制腹腔肿瘤重量生长。

综上，本发明采用乙胺嘧啶治疗卵巢癌作用显著，为临床治疗卵巢癌提供了一种全新的选择。

Claims

1.乙胺嘧啶在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的肿瘤为卵巢癌。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述的药物是以有效剂量的乙胺嘧啶为活性成分，加入药学上的常规辅料制备而成的药剂。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的药剂是口服制剂或者注射剂。

5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的药剂每制剂单位含有乙胺嘧啶0.01～1克。

6.治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：它是以有效剂量的乙胺嘧啶为活性成分，加入药学上的常规辅料制备而成的药剂。

7.根据权利要求6所述的治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述的药剂是口服制剂或者注射剂。

8.根据权利要求4或5所述的治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述的药剂每制剂单位含有乙胺嘧啶0.01～1克。

9.治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：以有效剂量的乙胺嘧啶与抗肿瘤药为活性成分，加入药学上的常规辅料制备而成的药剂。