CN104395311A

CN104395311A - 制备化合物的中间体和方法

Info

Publication number: CN104395311A
Application number: CN201380033200.0A
Authority: CN
Inventors: C·韩
Original assignee: Genentech Inc
Current assignee: Genentech Inc
Priority date: 2012-04-23
Filing date: 2013-04-22
Publication date: 2015-03-04
Anticipated expiration: 2033-04-22
Also published as: BR112014026367A2; SG11201406818VA; WO2013163109A1; CA2871436C; JP2018058841A; KR102096679B1; ZA201408568B; CN104395311B; AU2013252514B2; US9221813B2; IL235234B; AU2013252514A1; RU2635359C2; JP2015514784A; JP6370772B2; US20150105557A1; EP2855473B1; MX349255B; RU2014147003A; NZ702135A

Abstract

本发明提供了用于制备可用作CHK1抑制剂的化合物的中间体及其制备方法。

Description

制备化合物的中间体和方法

相关申请

本申请要求2012年4月23日提交的美国临时申请61/637,170的优先权，将其全部内容引入本申请作为参考。

技术领域

在一个方面，本发明涉及中间体化合物和制备这些中间体化合物的方法。所述中间体化合物用于制备具有抗癌活性的化合物，例如抑制CHK1激酶活性的化合物。

背景技术

蛋白激酶是磷酸化其它蛋白的激酶。这些蛋白的磷酸化通常在蛋白上产生功能性改变。大部分激酶对丝氨酸与苏氨酸或酪氨酸产生作用，而一些激酶对全部三种发生作用。在这些功能性改变中，激酶可调节许多细胞路径。蛋白激酶抑制剂是抑制这些激酶并由此可用于影响细胞路径的化合物。

检测点激酶1("CHK1")是丝氨酸/苏氨酸激酶。CHK1调节细胞周期进程并且是细胞DNA损伤响应中的主要因子。CHK1抑制剂已经显示了使肿瘤细胞对各种基因毒性剂(genotoxic agent)例如化学治疗剂和放射剂敏化(Tse,Archie N.,et al.,"Targeting Checkpoint Kinase 1in CancerTherapeutics."Clin.Cancer Res.13(7)(2007)1955-1960)。已观察到许多肿瘤缺乏Gl DNA损伤检测点路径，导致对S和G2检测点的依赖，以修复DNA损伤和存活(Janetka,James W.,et al.,"Inhibitors of checkpoint kinases:Fromdiscovery to the clinic."Drug Discovery&Development Vol.10,No.4(2007)473-486)。

所述S和G2检测点受CHK1调节。CHK1的抑制已经显示了消去了S和G检测点，由此削弱了DNA修复并导致肿瘤细胞死亡增加。然而，非癌性细胞具有用于DNA修复和存活的功能性G检测点。

检测点激酶2("CHK2")也是丝氨酸/苏氨酸激酶。对于通过DNA损伤诱导细胞周期停滞和凋亡，CHK2的功能是极为重要的(Ahn,Jinwoo,etal,"The Chk2protein kinase."DNA Repair 3(2004)1039-1047)。CHK2在对细胞毒性损害(insult)的响应中被活化并与若干路径一起传送(propagate)检测点信号，其最终引起G1、S和G2/M相的细胞周期停滞、activation of DNA修复的活化和凋亡性细胞死亡(Bartek,Jiri,et al.,"CHK2Kinase-A BusyMessenger."Nature Reviews Molecular Cell Biology.Vol.2(12)(2001)877-886)。癌细胞长缺少一个或多个基因组完整性检查点，所以抑制CHK2可使肿瘤细胞选择性地对抗癌疗法例如γ-放射或DNA-损伤剂更加敏化。

正常细胞仍会活化其它检测点并恢复，而丧失检测点的癌细胞更可能死亡。已证实了，基于肽的CHK2抑制剂消除了G2检测点并使p53缺陷性癌细胞对DNA损伤剂敏化(Pommier,Yves,et al.,"Targeting Chk2Kinase:Molecular Interaction Maps and Therapeutic Rationale."CurrentPharmaceutical Design.Vol.11,No.22(2005)2855-2872)。

CHK1和/或CHK2抑制剂是已知的，参见例如国际公开WO2009/089352、WO2009/089359和WO2009/140320。

发明内容

本发明的一个方面涉及式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶及其立体异构体、互变异构体和可药用盐：

式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶可用作制备可用作CHK1抑制剂的化合物的方法中的中间体化合物。

本发明的另一个方面涉及制备式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶的方法。

具体实施方式

现将详细参考本发明的某些实施方案，其实例说明于所附的结构与化学式中。虽然本发明将结合所列举的实施方案加以描述，但应理解，其并非意欲将本发明限制于那些实施方案。相反，本发明意图涵盖所有替代方式、修正及等价物，其可被包含在如由权利要求所界定的本发明范围内。本领域技术人员将认识到许多类似于或相当于本文中所述的方法与物质，其可用于本发明的实施。本发明绝非受限于所述的方法与物质。如果一项或多项所并入的文献及类似物质与本申请不同或矛盾，包括但不限于所定义的术语、术语用法、所述的技术或类似情况，以本申请为准。

定义

词语“包含”和“包括”等，当在本申请说明书和所附权利要求书中使用时，意在指明所述特征、整体、组分或步骤的存在，但它们不排除一种或多种其它特征、整体、组分、步骤或其群组的存在或加入。

术语“烷基”包括直链或支链碳原子基团。

一些烷基部分可以缩写形式表示，例如甲基("Me")、乙基("Et")、丙基("Pr")和丁基("Bu")，并且其它缩写用于指定化合物的具体异构体，例如，1-丙基或正丙基("n-Pr")、2-丙基或异丙基("i-Pr")、1-丁基或正丁基("n-Bu")、2-甲基-l-丙基或异丁基("i-Bu")、1-甲基丙基或仲丁基("s-Bu")、1,1-二甲基乙基或叔丁基("t-Bu")等。在某些实施方案中，烷基可为C₁-C₆-烷基，即具有1至6个碳原子的烷基。在某些实施方案中，烷基可为C₁-C₄-烷基。在某些实施方案中，烷基可为C₁-C₃-烷基。所述缩写有时与元素缩写和化学结构组合使用，例如甲醇("MeOH")或乙醇("EtOH")。

如本申请所用，术语“环烷基”是指具有3至15个环碳原子的饱和或部分不饱和的单环碳环、稠合多环碳环、桥连多环碳环或螺多环碳环。环烷基的非限制性类型为具有3至6个碳原子的饱和或部分不饱和的单环碳环。环烷基的示例性实例包括但不限于下列部分：

可在本申请中使用的其它缩写包括，例如苄基("Bn")、苯基("Ph")或乙酸酯基(acetate)("Ac")。

术语“杂环”(heterocycle)与“杂环的”(heterocyclic)包括4至7元环，其含有一、二或三个选自由氧、氮及硫组成的组的杂原子。在某些情况中，这些术语可具体地进一步受到限制，例如“5至6元杂环”仅包括五与六元环。示例性的杂环基团包括但不限于氧杂环丙基(oxiranyl)、硫杂环丙基(thiaranyl)、氮杂环丙基(aziridinyl)、氧杂环丁基(oxetanyl)、硫杂环丁基(thiatanyl)、氮杂环丁基(azetidinyl)、1,2-二硫杂环丁基(dithietanyl)、1,3-二硫杂环丁基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二硫杂环戊基(dithiolanyl)、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、1,3-二氧杂环戊基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、1,4-二氧杂环己基(dioxanyl)、1,4-氧杂硫杂环己基(oxathianyl)、吗啉基、1,4-二硫杂环己基(dithianyl)、哌嗪基、1,4-氮杂硫杂环己基(azathianyl)、硫杂氧杂环己基(thioxanyl)、氧杂环庚基(oxepanyl)、硫杂环庚基(thiepanyl)、氮杂环庚基(azepanyl)、1,4-二氧杂环庚基、1,4-氧杂硫杂环庚基、1,4-氧杂氮杂环庚基、1,4-二硫杂环庚基、1,4-硫杂氮杂环庚基和1,4-二氮杂环庚基。

示例性部分不饱和杂环基包括但不限于四氢吡啶基、二氢吡啶基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、2H-吡喃基、4H-吡喃基和吡唑啉基。

术语“杂芳基”包括含一个、两个或三个选自氧、氮和硫的杂原子的五至六元芳族环。

在某些实例中，这些术语还可被具体地限制，例如五至六元杂芳基，其中所述杂芳基含一个或两个氮杂原子。

示例性杂芳基包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、异噻唑基、噻唑基、1,2,3-三唑基、1,3,4-三唑基、l-氧杂-2,3-二唑基、l-氧杂-2,4-二唑基、l-氧杂-2,5-二唑基、l-氧杂-3,4-二唑基、1-硫杂-2,3-二唑基、l-硫杂-2,4-二唑基、l-硫杂-2,5-二唑基、l-硫杂-3,4-二唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、呋咱基和三嗪基。

术语“治疗(treat)”或“处置(treatment)”是指治疗性、预防性(prophylactic)、缓和性或防治性(preventative)的措施。对于本发明，无论是可检测的或是不可检测的，有益的或期望的临床结果包括但不限于症状的缓解(alleviation)、疾病程度的减弱、疾病的稳定化(即未恶化)状态、延迟或减缓疾病进展、疾病状态的改善或减轻(palliation)以及(不论部分还是总体)缓和(remission)。“治疗”还可表示，如果未接受治疗，与期望的生存相比延长的生存。需要治疗者包括已经具有病状或病症者以及易患有病状或病症者或其中病状或病症将被预防者。

短语“治疗有效量”或“有效量”表示当对需要上述治疗的哺乳动物给药时，式IV化合物的量足以(i)治疗或预防本申请所述具体疾病、病况或病症，(ii)减弱、改善或消除本申请所述具体疾病、病况或病症的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本申请所述具体疾病、病况或病症的一种或多种症状的发作。与上述量相对应的化合物的量将会取决于下列因素而变化：具体化合物、疾病情况及其严重度、需要治疗的哺乳动物的特性(identity)(例如重量)，但本领域技术人员仍然能常规地确定所述化合物的量。

术语“癌症”和“癌性”是指或描述其特征通常在于异常的或不受调节的细胞生长的哺乳动物的生理学情况。“肿瘤”包括一种或多种癌性细胞。癌症的实例包括但不限于癌(carcinoma)、淋巴瘤、母细胞瘤(blastoma)、肉瘤以及白血病或淋巴样恶性肿瘤。上述癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌("NSCLC")、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric cancer)或胃部癌(stomach cancer)，包括胃肠道癌；胰腺癌、成胶质细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌或肾部癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、肛门癌、阴茎癌、皮肤癌(包括黑素瘤)以及头颈部癌。

短语“可药用”表示可与其它组成部分化学上和/或毒理学上相容的物质或组合物，所述其它组成部分包括制剂和/或用其进行治疗的哺乳动物。

如本申请所述，短语“可药用盐”是指本发明化合物的可药用有机盐或无机盐。

本发明化合物还包括上述化合物的其它盐，其不必是可药用盐且可用作制备和/或纯化本发明化合物和/或将本发明化合物的对映异构体分开的中间体。

术语“哺乳动物”表示患有本申请所述疾病或处于发展本申请所述疾病风险的温血动物，并且包括但不限于豚鼠、狗、猫、大鼠、小鼠、仓鼠和灵长目动物包括人类。

术语“手性的”是指具有非重叠性镜像配偶(partner)性质的分子，而术语“非手性的”是指在其镜像配偶上可重叠的分子。

术语“立体异构体”是指化学组成相同，但原子或基团在空间中排列不同的化合物。

“非对映异构体”是指具有两个或多个手性中心并且它们的分子不是彼此的镜像的立体异构体。非对映异构体具有不懂的物理性质，例如熔点、沸点、波谱性质和反应性。非对映异构体的混合物可在高分辨分析操作例如电泳和色谱下分开。

“对映异构体”是指彼此为非可重叠镜像的化合物的两种立体异构体。

本申请所使用的立体化学的定义和惯例通常采用S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill BookCompany,New York；以及Eliel,E.and Wilen,S.,"Stereochemistry of OrganicCompounds",John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994.本申请所述式I至XI化合物可含有不对称中心或手性中心，并由此以不同的立体异构形式存在。本申请所述式I至XI化合物的所有立体异构形式意在形成本发明的部分，所述立体异构形式包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物例如外消旋混合物。许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有旋转平面偏振光的平面的能力。在描述活性化合物中，词头D和L或R和S用于表示与其一个或多个手性中心有关的分子的绝对构型。词头d和l或(+)和(-)用于指示平面偏振光被化合物旋转的符号，其中(-)或l表示化合物是左旋的。词头为(+)或d的化合物为右旋的。对于给定的化学结构，除了这些立体异构体是彼此的镜像之外，它们是相同的。特定的立体异构体还可被称为对映异构体，并且上述异构体的混合物常被称为对映体混合物。对映异构体的50:50混合物被称为外消旋混合物或外消旋体，其可发生在化学反应或流程中没有立体选择性或立体特异性时。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指两种对映体物种的等摩尔混合物，没有光学活性。

术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指不同能量的可经低能垒相互转化的结构异构体。例如，质子互变异构体(也被称为质子异变互变异构体)包括经质子迁移的相互转化，例如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价互变异构体包括通过重组某些成键电子的相互转化。

本申请所用的短语“可药用盐”是指本申请所述式I至XI化合物的可药用有机盐或无机盐。示例性盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐(tannate)、泛酸盐(pantothenate)、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、糖酸盐(saccharate)、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐(methanesulfonate)("甲磺酸盐(mesylate)")、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐(pamoate)(即1,1-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。可药用盐可涉及另一种分子的内含物，例如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子。所述抗衡离子可为稳定母体化合物上电荷的任意有机或无机部分。此外，可药用盐在其结构上可具有多于一个带电原子。其中多个带电原子为可药用盐部分的实例可具有多个抗衡离子。因此，可药用盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。

如果本申请所述式I至XI的化合物是碱，可通过本领域中可用的任意合适方法制备期望的可药用盐，例如，用无机酸或有机酸处理所述游离碱，所述无机酸是例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等，所述有机酸是例如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)例如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸、α羟基酸例如柠檬酸或酒石酸、氨基酸例如天冬氨酸或谷氨酸、芳酸例如苯甲酸或肉桂酸、磺酸例如对甲苯磺酸或乙磺酸等。

如果本申请所述式I至XI的化合物是酸，可通过本领域中可用的任意合适方法制备期望的可药用盐，例如，用无机碱或有机碱处理所述游离酸，所述无机碱或有机碱是例如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等。合适盐的示例性实例包括但不限于衍生自下列碱的有机盐：氨基酸，例如甘氨酸和精氨酸；氨；伯胺、仲胺和叔胺；环状胺，例如哌啶、吗啉和哌嗪；以及衍生自下列碱的无机盐：钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂。

“溶剂化物”是指一种或多种溶剂分子与本申请所述式I至XI化合物的缔合物(association)或络合物(complex)。形成溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语“水合物”是指其中所述溶剂分子为水的络合物。

CHK 1/2抑制剂

本发明的中间体可用于制备某些取代的吡咯并[2,3-b]吡啶及其药物制剂，其例如WO2009/140320中所述可抑制CHK1和/或CHK2。这些化合物潜在地用于治疗受CHK1和/或CHK2调节的疾病、病症和/或病症。

化合物的制备

本申请所述化合物可含有不对称中心或手性中心，并由此以不同的立体异构形式存在。本申请所述式I至XI化合物的所有立体异构形式意在形成本发明的部分，所述立体异构形式包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物例如外消旋混合物。此外，本发明包括所有几何异构体和位置异构体。在本申请所示结构中，如果未指定任何特定手性原子的立体化学，则对于本申请化合物涵盖并包括所有立体异构体。如果通过表示具体构型的楔形实线(solid wedge)或虚线指定立体化学，则如此指定和定义立体异构体。

本申请所述化合物可以非溶剂化形式以及于可药用溶剂例如水、乙醇等的溶剂化形式存在，并本发明意在包括溶剂化形式和非溶剂化形式。

本申请所述化合物还可以不同的互变异构形式存在，并且所有上述形式均包括在本发明的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指不同能量的可经低能垒相互转化的结构异构体。例如，质子互变异构体(也被称为质子异变互变异构体)包括经质子迁移的相互转化，例如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价互变异构体包括通过重组某些成键电子的相互转化。

本申请所述化合物还包括同位素标记的本发明化合物，其与本申请限定的化合物相同，但事实上一个或多个原子被具有与自然中常见原子质量或质量数不同的原子质量或质量数的原子所替代。本发明化合物及其用途的范围涵盖所指定的任意具体原子或元素的所有同位素。可掺入本发明化合物的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，例如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、³²P、³³P、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl、¹²³I和¹²⁵I。某些同位素标记的本发明化合物(例如，用³H和¹⁴C的本发明化合物)可用于化合物和/或底物组织分布测定。可使用含氚的(³H)和碳-14(¹⁴C)同位素，因为其易于制备和检测。此外，具有较重同位素例如氘(即²H)的取代可获得某些治疗益处，其导致更强的代谢稳定性(例如，增加的体内半衰期或降低的剂量需要量)，并由此在某些情况下是优选的。正电子发射同位素例如¹⁵O、¹³N、¹¹C和¹⁸F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究，以检查底物受体占据(occupancy)。同位素标记的本发明化合物通常可如下制备：通过用同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂，遵循与本申请下述实施例中所披露的那些类似的流程。

用于制备本发明化合物的起始原料和试剂通常可从商业来源例如Sigma-Aldrich Chemical(Milwaukee,WI)得到或使用本领域技术人员公知的方法可容易地制备(例如，经通常述于下列文献中的方法来制备：Louis F.Fieser and Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-19,Wiley,N.Y.(1967-1999ed.)，或包括附录的Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin(还可经Beilstein在线数据库得到))。

如上所述，在一个方面，本发明涉及式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶：

及其立体异构体、互变异构体和可药用盐。

在另一个方面中，本发明涉及制备式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶的方法。

在本发明的一个实施方案中，式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶可通过下述方法制备，所述方法包括对式II的4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶进行溴化：

所述溴化可使用本领域已知的溴化剂来进行，例如选自但不限于以下的溴化剂：溴、三溴化吡啶、二氯一溴吡啶鎓(pyridiniumdichlorobromate)、1,3-二溴-5,5-二甲基己内酰脲、四溴环己二烯酮或N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)。本领域技术人员还应会发现述于Larock,R.C.Comprehensive Organic Transformations,2nd ed.,Wiley-VCH,NY,1999,pp.619-628中的反应条件、溶剂、试剂和其它要素可用于芳族溴化例如式I化合物的溴化。

式II的4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶注册为CAS#[23709-47-9]并且可以目录号699268商购自Sigma Aldrich。

所述溴化可在酸性条件下进行，例如在溶剂中的混悬液中进行，所述溶剂可选自有机酸例如本领域已知的那些，例如乙酸。在某些实施方案中，适于溴化的溶剂可选自但不限于乙酸、DMSO、DMF、DMA、乙腈、二氯甲烷或氯仿。

在本发明的一个实施方案中，可用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)作为溴化剂对式II的4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶进行溴化。

在本发明的一个实施方案中，可用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)作为溴化剂在乙酸中的混悬液对式II的4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶进行溴化。

在本发明的一个实施方案中，使用过量的N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)，例如约1.60当量的4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶。

在本发明的一个实施方案中，式II的4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶的溴化可用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)作为溴化剂在约25℃在乙酸中混悬18h。

在本发明的另一个实施方案中，制备式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶的方法包括以下步骤：

(a)对式III的4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶进行硝化：

得到式II的4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶：

和

(b)对式II的4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶进行溴化，得到式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶。

式III的4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶注册为CAS#[55052-28-3]并可以目录号696218商购自Sigma Aldrich。

适用于步骤(b)的硝化的硝化剂可为硝酸。

步骤(b)的硝化可在酸性条件下进行。在某些实施方案中，通过使用硫酸来满足所述酸性条件。

如上所述，在用于制备可用作CHK1抑制剂的式IV化合物的方法中，式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶可用作起始原料或中间体：

其中：

A选自直接键(direct bond)或CR^aR^b；

R选自C₁-C₆烷基、-O(C₁-C₆烷基)、-NH(C₁-C₆烷基)、饱和的或部分不饱和的C₃-C₆环烷基、苯基、饱和的或部分不饱和的4至6员杂环、5或6员杂芳基、8至10员双环芳基、8至10员双环杂环和8至10员双环杂芳基，其中所述烷基、环烷基、苯基、杂环、杂芳基和芳基任选地取代有一个或多个选自以下的基团：OH、CN、卤素、氧代(除了不在苯基、芳基或杂芳基上之外)、CF₃、环丙基、环丙基甲基、-SO₂R¹、C₁-C₆烷基、-O(C₁-C₆烷基)、-S(C₁-C₆烷基)、NR^eR^f和苯基，其中所述苯基任选地取代有一个或多个选自以下的基团：OH、CN、卤素、CF₃、C₁-C₃烷基、-O(C₁-C₃烷基)和NR^gR^h；

R³和R⁴独立地选自氢或C₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基任选地取代有OH、F、-O(C₁-C₃烷基)或C₃-C₆环烷基，或者

R³和R⁴与它们所连接的原子一起形成5或6元环；

R⁵选自氢和CH₃，或者

A为CR^aR^b，R^a和R^b为氢，且R³和R⁵与它们所连接的原子一起形成5或6元环；

R⁶选自氢、F、OH、-OCH、C₁-C₃烷基和环丙基，或者

A为直接键，R^6a为氢且R³和R⁶与它们所连接的原子一起形成5或6元环；

R^6a选自氢、F、OH和CH₃；

R⁷为氢，或者

A为CR^aR^b且R³和R⁷与它们所连接的原子一起形成5或6元环；

R^a为氢，或者

R⁴和R^b不存在且R³和R^a与它们所连接的原子一起形成5或6元环；

R^b为氢或不存在；

R^c和R^d独立地选自氢和C₁-C₃烷基，或者

R^c和R^d与它们所连接的原子一起形成5或6元环；

R^e和R^f独立地选自氢和C₁-C₃烷基；

R^g和R^h独立地选自氢和C₁-C₃烷基；

Rⁱ为C₁-C₃烷基；且

p为0、1、2或3。

式IV化合物可用作如WO2009/140320所述的CHK1抑制剂，将所述专利文献的全部内容引入本申请作为参考。具体地，可使用式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶作为用于制备化合物WO2009/140320的CHK1抑制剂的方法中的起始原料或中间体，其述于实施例1、1A、IB、2、3、3A、4、5、6、7、15、16、17、18、19、2021、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、45、46、47、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71A、71B、72、73、75、76、77、78、83、86、87、90、90A、90B、93、94、95、98、99、100、105、106、108、110、114、121、123、126、128、129、130、131、132A、132B、134、135、136、137、138、139、140、141、144、145、146、147、149、150、151、152、158、161、162、163、164、167、168、170、171、172、173、174、175、182、183A、183B和184中。本领域技术人员能够调整由式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶起始制备这些CHK1抑制剂的反应条件，式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶可用作制备化合物的方法中的起始原料或中间体并且基于本发明。

根据包括以下步骤的方法，可由式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶起始，制备式IV化合物：

(a)将式I化合物还原：

得到式V化合物：

(b)使式V化合物与式VI化合物进行反应：

其中R²如上文所定义，得到式VII化合物：

其中R²如上文所定义；

(c)在标准S_NAr反应条件下，使式VII化合物与式VIII化合物进行反应：

其中A、R³、R⁵、R⁶、R^6a、R⁷和p如上文所定义且PG为胺保护基团；

得到式IX化合物：

其中A、R²、R³、R⁵、R⁶、R^6a、R⁷和p如上文所定义；

(d)将式IX化合物脱保护，得到式IV化合物：

其中R⁴如上文所定义。

将WO2009140320中方案2、3、4和5的条件和试剂描述了化合物11的制备可用于制备式IV化合物的上述方法中，将其内容引入作为参考。

可替换地，根据包括以下步骤的方法，可由式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶起始，制备式IV化合物：

(a)在标准S_NAr反应条件下，使式I化合物：

与式VIII化合物：

进行反应，制备式X化合物：

其中A、R²、R³、R⁵、R⁶、R^6a、R⁷和p如上文所定义；

(b)将式X化合物还原，得到式XI化合物：

使式XI化合物与式VI化合物进行反应：

其中R²如上文所定义，得到式IX化合物：

其中R²如上文所定义；

(d)将式IX化合物脱保护，得到式IV化合物：

其中R⁴如上文所述。

本领域技术人员应当理解的是WO2009140320中方案2、3、4和5的条件和试剂还可用于制备式IV化合物的上述方法中，将其内容引入作为参考。

分离方法

在制备本申请所述式I至XI化合物的方法中，可有利地将反应产物彼此分离和/或与起始原料分离。通过本领域的常用技术，将每步或系列步骤的期望产物分离和/或纯化(在下文中分离)至期望的均匀程度。上述分离通常涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱。色谱可涉及许多种方法，包括例如：反相和正相；尺寸排阻；离子交换；高、中和低压液相色谱方法和仪器；小量分析；模拟移动床(SMB)和制备型薄层或厚层色谱，以及小量薄层和快速色谱技术。

另一类分离方法涉及用所选试剂处理混合物以结合期望产物、未反应的起始原料、反应副产物等或以其它方式使期望产物未反应的起始原料、反应副产物等可分离。上述试剂包括吸附剂(adsorbent)或吸收剂(absorbent)，例如活性炭、分子筛、离子交换介质等。可替换地，，上述试剂可为酸(就碱性物质而言)、碱(就酸性物质而言)、结合试剂(例如抗体、结合蛋白)、选择性螯合剂(例如冠醚)、液/液离子萃取试剂(LIX)等。

适当分离方法的选择取决于所涉及物质的性质。例如，蒸馏和升华中的沸点和分子量，色谱中极性官能团的存在或不存在，多相萃取中物质在酸性和碱性介质中的稳定性等。本领域技术人员将会使用最可能实现期望分离的技术。

通过本领域技术人员公知的方法例如色谱和/或分级结晶，基于其物理化学差异，可将非对映异构体分离成它们的单独非对映异构体。可通过以下方法分离对映异构体：通过与适当光学活性化合物(例如，手性助剂例如手性醇或Mosher酰氯)进行反应将对映体混合物转化成非对映异构体混合物，分离所述非对映异构体并将单独非对映异构体转化(水解)成相应的纯对映异构体。此外，本申请所述的一些式I至XI化合物可为阻转异构体(例如，取代的联芳)并将其视为本发明的部分。还可使用手性HPLC柱分离对映异构体。

可使用例如使用光学活性剂形成非对映异构体的方法，通过解析外消旋混合物，得到基本上不含其立体异构体的单一立体异构体，例如对映异构体(Eliel,E.and Wilen,S."Stereochemistry of Organic Compounds,"JohnWiley&Sons,Inc.,New York,1994；Lochmuller,C.H.,(1975)J.Chromatogr.,113(3):283-302)。可通过任意合适的方法分开并分离出本申请所述式I至XI的手性化合物的外消旋混合物，所述方法包括：(1)与手性化合物形成离子、非对映异构体的盐并通过分级结晶或其它方法分离，(2)与手性衍生试剂形成非对映异构体化合物，分离非对映异构体并将其转化为纯的立体异构体，和(3)在手性条件下直接分离基本上纯的或富集的(enriched)立体异构体。参加："Drug Stereochemistry,Analytical Methods and Pharmacology,"Irving W.Wainer,Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York(1993).

在方法(1)中，通过使对映体纯的手性碱(例如番木鳖碱(brucine)、奎宁、士的宁(strychnine)、麻黄碱、α-甲基-β-苯基乙基胺(安非他命)等)与携带酸性官能团(例如羧酸和磺酸)的不对称化合物进行反应，可形成非对映异构体盐。通过分级结晶或离子色谱，可诱导非对映异构体盐将其分离。对于氨基化合物的光学异构体的分离，加入手性羧酸或磺酸可导致非对映异构体盐的形成，所述手性羧酸或磺酸例如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸。

可替换地，通过方法(2)，使需要解析的底物与手性化合物的一种对映异构体进行反应，形成非对映异构体对(E.and Wilen,S."Stereochemistry of Organic Compounds",John Wiley&Sons,Inc.,1994,p.322)。通过使不对称化合物与对映体纯的衍生试剂进行反应，可形成非对映异构体化合物，例如薄荷基衍生物，然后将非对映异构体分离并水解，得到纯的或富集的对映异构体。确定光学纯度的方法涉及制备外消旋混合物的手性酯，例如薄荷基酯，例如在碱存在下的(-)氯甲酸薄荷基酯，或Mosher酯，α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基乙酸酯(Jacob III.J.Org.Chem.,(1982)47:4165)，并分析两种阻转异构的对映异构体或非对映异构体存在时的¹H NMR谱。先后通过正相或反相色谱、阻转异构的萘基-异喹啉的分离方法，可分离阻转异构体化合物的稳定非对映异构体(WO 96/15111)。通过方法(3)，使用手性固定相，通过色谱可分离两种对映异构体的外消旋混合物("Chiral LiquidChromatography"(1989)W.J.Lough,Ed.,Chapman and Hall,New York；Okamoto,J.Chromatogr.,(1990)513:375-378)。可通过用于区分具有不对称碳原子的其它手性分子的方法，例如旋光度和圆二色谱，可区分富集的或纯化的对映异构体。

给药和药物制剂

可通过适于需要治疗的疾病的任意方便途径给药式IV化合物。合适的途径包括口服、胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、皮内、鞘内和硬膜外)、经皮、直肠、鼻、局部(包括含服和舌下)、阴道、腹膜内、肺内和鼻内。

所述化合物可以任意方便的给药形式来给药，例如片剂、粉剂、胶囊剂、溶液剂、分散剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶剂、乳剂、贴剂等。上述组合物可含有药物制剂中的常规组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、增甜剂、填充剂(bulking agent)和其它活性剂。如果需要胃肠外给药，所述组合物应当是无菌的并且呈适于注射或输注的溶液或混悬液形式。

典型的制剂通过将式IV化合物和载体或赋形剂混合来制备。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员公知的并且详细地述于例如Ansel,Howard C,et al,Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,AlfonsoR.,et al.Remington:The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；and Rowe,Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago,Pharmaceutical Press,2005中。所述制剂还可包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、增甜剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂和其它已知的添加剂，以提供药物(即式IV化合物或其药物组合物)的优美外观或有助于药品(即药剂)的制造。

一个实施方案包括药物组合物，其包含式IV化合物或其立体异构体或可药用盐。另一个实施方案提供了药物组合物，其包含式IV化合物或其立体异构体或可药用盐，以及可药用载体或赋形剂。

用式IV化合物治疗的方法

通过给药一种或多种式IV化合物或其立体异构体或可药用盐，式IV化合物可用于治疗或预防疾病或病况。在一个实施方案中，以可检测地抑制CHK1活性的量，用式IV化合物或其立体异构体或可药用盐以及可药用载体、佐剂或媒介物治疗人类患者。

预防或治疗受CHK1和/或CHK2调节的疾病或病症的方法可包括对需要上述治疗的哺乳动物给药有效量的式IV化合物。

在另一个实施方案中，提供了治疗哺乳动物中过度增殖性疾病的方法，包括对上述哺乳动物给药治疗有效量的式IV化合物或其立体异构体或可药用盐。

在另一个实施方案中，提供了在需要上述治疗的哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，所述癌症包括下文所鉴定的疾病，其中所述方法包括对所述哺乳动物给药治疗有效量的式IV化合物或其立体异构体或可药用盐。

在某些实施方案中，式IV的CHK1抑制剂(即式I化合物)与DNA损伤剂组合给药。通常，应当在给药式IV的CHK1抑制剂之前给药DNA损伤剂。DNA损伤剂包括(吉西他滨(gemcitabine))、(伊立替康(irinotecan)或CPT-11)、(替莫唑胺(temozolomide))、(卡培他滨(capecitabine))、(托泊替康(topotecan))、顺铂(cisplatin)、(奥沙利铂(oxaliplatin))、(卡铂(carboplatin))、喜树碱(camptothecin)、阿糖胞苷(ara-C)(阿糖胞苷(cytarabine))、5-FU(氟尿嘧啶(fluorouracil))、(环磷酰胺(cyclophosphamide))、或(磷酸依托泊苷(etoposide phosphate))、(替尼泊苷(teniposide))、阿霉素或阿霉素(多柔吡星(doxorubicin))、柔红霉素(daunorubicin),(培美曲塞(pemetrexed))和放射物(radiation)。在某些实施方案中，所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、喜树碱、顺铂、阿糖胞苷和5-FU。在某些实施方案中，所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺和卡培他滨。在某些实施方案中，所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂和阿糖胞苷。在某些实施方案中，所述DNA损伤剂选自吉西他滨和伊立替康。在其批准或推荐剂量下给药所述DNA损伤剂。

由于CHK1抑制剂具有增强许多抗癌药物活性的能力，因此期望通过本申请所述组合物和方法可治疗多种肿瘤类型。这些疾病包括但不限于：心脏：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支气管原癌(小细胞癌、未分化小细胞癌、未分化大细胞癌、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨性错构瘤(chondromatous hamartoma)、间皮瘤；胃肠道：食道(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌肿瘤、胰腺瘤)、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌肿瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管状腺癌、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道：肾(腺癌、维尔姆斯瘤(Wilm's tumor)[肾母细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤(teratoma)、胚胎性癌、畸胎瘤(teratocarcinoma)、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样肿瘤、脂肪瘤)；肝：肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管上皮癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞性腺瘤、血管瘤；骨：骨源性肉瘤(osteogenic sarcoma)(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤(Ewing's sarcoma)、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(osteochronfroma)(骨软骨性外生骨疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤(chondroblastoma)、软骨粘液样纤维瘤(chondromyxofibroma)、骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统：颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄瘤(xanthoma)、畸形性骨炎)、脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤(meningiosarcoma)、神经胶质瘤病(gliomatosis))、脑(星形细胞瘤、神经管母细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤[松果体瘤]、多形性胶质母细胞瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；妇科学：子宫(子宫内膜癌)、子宫颈(子宫颈癌、肿瘤前子宫颈非典型增生(pre-tumor cervical dysplasia))、卵巢(卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类的癌]、粒层-泡膜细胞瘤、塞尔托利-莱迪希(Sertoli-Leydig)细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄样肉瘤(胚胎型横纹肌肉瘤]、输卵管(癌)；血液学：血液(髓性白血病[急性和慢性]、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞型白血病、骨髓增殖性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征)、何杰金病、非何杰金氏淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；皮肤：恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、发育异常痣(molesdysplastic nevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕疙瘩、银屑病；乳腺：浸润性乳腺癌(浸润性导管癌和浸润性小叶癌)等；以及肾上腺：神经母细胞瘤。术语过度增殖性疾病包括上文所鉴定的疾病。本申请所提供的术语“癌性细胞”包括罹患任意一种上文所鉴定疾病的细胞。

在本申请的某些实施方案中，所述癌症选自结肠直肠癌(包括Ras突变)、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、卵巢癌、转移性乳腺癌、胰腺癌、肝胆管癌(包括肝细胞癌、胆管癌和胆管上皮癌)、胃癌、睾丸癌、头颈部鳞状细胞癌、白血病(包括急性髓细胞样白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞样白血病和慢性淋巴样白血病)、淋巴瘤(包括套细胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤)和前列腺癌。

在本申请的某些实施方案中，所述癌症为实体瘤癌症。

在本申请的某些实施方案中，所述癌症选自胰腺癌、卵巢癌和结肠直肠癌.

在本申请的某些实施方案中，所述癌症选自结肠直肠癌(包括Ras突变)、小细胞肺癌、非小细胞肺癌和神经胶质瘤。在某些实施方案中，所述CHK1抑制剂与DNA损伤剂组合给药。在另一个实施方案中，所述DNA损伤剂为伊立替康。

在本申请的某些实施方案中，所述癌症选自非小细胞肺癌、卵巢癌、转移性乳腺癌、胰腺癌、肝胆管癌(包括肝细胞癌、胆管癌和胆管上皮癌)和胃癌。在某些实施方案中，所述CHK1抑制剂与DNA损伤剂组合给药。在另一个实施方案中，所述DNA损伤剂为吉西他滨。

在本申请的某些实施方案中，所述癌症选自结肠直肠癌(包括Ras突变)、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、肝胆管癌(包括肝细胞癌、胆管癌和胆管上皮癌)、胃癌、睾丸癌和头颈部鳞状细胞癌。在某些实施方案中，所述CHK1抑制剂与DNA损伤剂组合给药。在另一个实施方案中，所述DNA损伤剂选自顺铂、奥沙利铂和卡铂。

在本申请的某些实施方案中，所述癌症选自白血病(包括急性髓细胞样白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞样白血病和慢性淋巴样白血病)、淋巴瘤(包括套细胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤)和前列腺癌。在某些实施方案中，所述CHK1抑制剂与DNA损伤剂组合给药。在另一个实施方案中，所述DNA损伤剂为阿糖胞苷。

本申请的另一个实施方案提供了式IV化合物或其立体异构体或可药用盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

在另一个实施方案中，治疗或预防受CHK1和/或CHK2调节的疾病或病症的方法，包括对需要上述治疗的哺乳动物给药有效量的式IV化合物或其立体异构体或可药用盐。

在另一个实施方案中，预防或治疗癌症的方法，包括对需要上述治疗的哺乳动物单独或与一种或多种具有抗癌性质的其它化合物组合给药有效量的式IV化合物。

当一种或多种上述药物触发CHK1依赖性细胞周期检测点时，期望CHK1抑制剂增强多种抗癌药物(或DNA损伤剂)的活性。

式IV化合物可用在治疗哺乳动物过度增殖性疾病的组合物中，其中所述组合物包含治疗有效量的式IV化合物或其立体异构体或可药用盐与抗肿瘤药物的组合，所述抗肿瘤药物选自有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢物、反义DNA或RNA、嵌入性抗生素(intercalating antibiotics)、生长因子抑制剂、信号转导抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、维甲酸受体调节剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物应答调节物(biological responsemodifiers)、抗激素、血管生成抑制剂、抗雄激素、靶向抗体、HMG-CoA还原酶抑制剂和异戊二烯基蛋白转移酶(prenyl-protein transferase)抑制剂。

式IV化合物还可用在治疗哺乳动物过度增殖性疾病的方法中，所述方法包括对所述哺乳动物给药治疗有效量的式IV化合物或其立体异构体或可药用盐与抗肿瘤药物的组合，所述抗肿瘤药物选自有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢物、反义DNA或RNA、嵌入性抗生素、生长因子抑制剂、信号转导抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、维甲酸受体调节剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物应答调节物、抗激素、血管生成抑制剂、抗雄激素、靶向抗体、HMG-CoA还原酶抑制剂和异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂。

另一个实施方案提供了式IV化合物用于疗法中。在另一个实施方案中，所述用途还包括DNA损伤剂的使用。

另一个实施方案提供了式IV化合物用于治疗过度增殖性疾病。在另一个实施方案中，所述过度增殖性疾病为癌症，包括上文所鉴定的疾病。在另一个实施方案中，所述用途还包括DNA损伤剂的使用。

式IV化合物可用在用于抑制哺乳动物异常细胞生长的药物组合物中，所述组合物包含一定量的式IV化合物或其立体异构体或可药用盐与一定量化学治疗剂的组合，其中所述化合物、立体异构体或盐和所述化学治疗剂的量合起来可有效抑制异常细胞生长。许多化学治疗剂式本领域中已知的。在某些实施方案中，所述化学治疗剂选自有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢物、反义DNA或RNA、嵌入性抗生素、生长因子抑制剂、信号转导抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、维甲酸受体调节剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物应答调节物、抗激素、血管生成抑制剂、抗雄激素、靶向抗体、HMG-CoA还原酶抑制剂和/或异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂。

式IV化合物可用在用于抑制哺乳动物异常细胞生长或治疗过度增殖性病症的方法中，其中所述方法包括对所述哺乳动物给药一定量的式IV化合物或其立体异构体或可药用盐与放射疗法的组合，其中所述化合物或盐的量与所述放射疗法的组合可在哺乳动物中有效抑制异常细胞生长或治疗过度增殖性病症。给予放射疗法的技术是本领域中已知的，并且这些技术可用于本申请所述的组合疗法中。如本申请所述，可确定该组合疗法中式IV化合物的给药。

通常认为，式IV化合物可使异常细胞对用于杀死和/或抑制上述细胞生长的放射治疗更敏化。相应地，式IV化合物可用于使哺乳动物异常细胞对放射治疗敏化的方法中，所述方法包括对所述哺乳动物给药一定量的式IV化合物或其立体异构体或可药用盐，所述量可有效使异常细胞对放射治疗敏化。可根据本申请所述确定有效量上述化合物的手段或通过本领域技术人员已知的方法确定该方法中需要使用的所述化合物、立体异构体或盐的量。

另一个实施方案提供了式IV化合物或其立体异构体或可药用盐在制备用于治疗过度增殖性疾病的药物中的用途。在另一个实施方案中，所述过度增殖性疾病可为癌症，包括上文所鉴定的疾病。在另一个实施方案中，所述用途还包括DNA损伤剂的使用。

另一个实施方案提供了式IV化合物在制备药物中的用途，所述药物在治疗经受癌症疗法的患者中用作CHK1和/或CHK2抑制剂，所述癌症包括上文所鉴定的疾病。在另一个实施方案中，所述用途还包括DNA损伤剂的使用。

另一个实施方案提供了式IV化合物在治疗过度增殖性疾病中的用途。在另一个实施方案中，所述过度增殖性疾病为癌症，其包括上文所鉴定的疾病。在另一个实施方案中，所述用途还包括DNA损伤剂的使用。

另一个实施方案提供了式IV化合物在制备药物中的用途，所述药物在治疗经受癌症疗法的患者中用作CHK1和/或CHK2抑制剂。在另一个实施方案中，所述用途还包括DNA损伤剂的使用。

在另一个实施方案中，本申请提供了包含式IV化合物的药物组合物，其用于治疗过度增殖性疾病。

在另一个实施方案中，本申请提供了包含式IV化合物的药物组合物，其用于治疗癌症。

组合疗法

本申请所述式IV化合物及其立体异构体和可药用盐可单独或与用于治疗的其它治疗剂组合使用。式IV化合物可与一种或多种其它药物组合使用，所述其它药物是例如通过不同作用机制起作用的抗炎化合物。药物组合制剂或用药方案(dosing regimen)中的第二种化合物优选对式IV化合物具有互补活性，因此它们不会不利地影响彼此。上述分子适当地以对指定目的有效量的组合存在。所述化合物可与单一药物组合物一起给药或分开给药，并且当分开给药时，可以任意次序同时或先后进行给药。上述先后给药在时间上可以是接近的或远离的。

实施例

为了说明本发明，包括下列实施例。然而，应当理解的是，本实施例并非限制本发明，而仅仅意在表明实践本发明的方法。本领域技术人员应当理解的是，上述化学反应可容易地适用于制备本发明化合物的替换方法，其被视为在本发明的范围内。

在下文所述实施例中，除非另有说明，否则所有温度均以摄氏度(℃)为单位来描述。试剂购自供应商例如Sigma-Aldrich ChemicalCompany，并且除非另有说明，否则所述试剂不经进一步纯化即可使用。

5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶的制备：

步骤1：向浓硫酸(150mL)中，分份加入4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(50.0g)，同时保持混合物的内温在10℃以下(注意：加入时放热)。慢慢加入浓硝酸(30.0mL)和浓硫酸(60.0mL)的混合物，同时保持混合物的内温在10℃以下(注意：加入时放热)。将反应混合物在0℃搅拌30min。慢慢加入冷水(750mL)，同时保持混合物的内温在20℃以下(注意：加入时放热)。经由过滤收集所得固体并先后用pH 7缓冲溶液、水和乙腈洗涤。经由过滤收集产物并在真空干燥箱中在50℃干燥过夜，得到52g(92％产率)4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶，为浅黄色固体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ13.5(s,1H),8.91(s,1H),8.36(d,J＝5.2Hz,1H),7.50(d,J＝5.2Hz,1H)。¹³C NMR(75MHz,DMSO-d₆)δ148.0,145.7,134.7,132.5,127.2,120.9,110.0。HRMSC₇H₃ClN₃O₂[M-H]^-计算值：199.9919，实测值：199.9921。

步骤2：在25℃，向4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(50.0g)在乙酸(300mL)中的混悬液中分小份加入N-溴代琥珀酰亚胺(NBS,70.9g,1.60当量)。将反应混合物在25℃搅拌18h。历时30min，慢慢加入水(3.0mL)，得到浅黄色浆液。竟有过滤收集所得固体，并先后用饱和亚硫酸钠溶液、水和甲醇的2:2:1(v/v/v)混合物、水以及甲醇和水的1:1(v/v)混合物洗涤。将滤饼在真空中在50℃干燥箱中干燥过夜，得到44.9g(65％产率)5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶，为浅黄色固体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ13.7(s,1H),8.93(s,1H),8.66(s,1H)。¹³C NMR(75MHz,DMSO-d₆)δ146.9,146.4,133.9,133.2,127.0,116.7,111.3。HRMS C₇H₂BrClN₃O₂[M-H]^-计算值：273.9024，实测值：273.9031。

Claims

1.式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶及其立体异构体、互变异构体和可药用盐：

2.制备式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶的方法：

包括对式II的4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶进行溴化，得到式I的5-溴-4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶的步骤，

式II化合物

3.权利要求2的方法，其中所述溴化使用选自有机酸的溶剂进行。

4.权利要求3的方法，其中所述有机酸为乙酸。

5.权利要求2至4中任一项的方法，其中通过溴化剂进行溴化，所述溴化剂选自溴、三溴化吡啶、二氯一溴吡啶、1,3-二溴-5,5-二甲基己内酰脲、四溴环己二烯酮或N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)。

6.权利要求5的方法，其中所述溴化剂为N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)。

7.权利要求2至6中任一项的方法，包括以下步骤：

(a)对式III的4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶进行硝化，

得到式II的4-氯-3-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶

8.权利要求7的方法，其中所述硝化使用硝化剂进行，所述硝化剂选自硝酸。

9.权利要求8的方法，其中所述硝化在酸性条件下进行。

10.权利要求9的方法，其中所述硝化在硫酸的存在下进行。