CN104390974A - 一种尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于尿液检测试剂，具体涉及一种对人体内异常代谢物—色氨酸检测试剂及制备方法。所述尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂，包括Hg²⁺、Hg₂ ²⁺、Ni²⁺、WO₄ ^2-、SO₄ ^2-、NO₃ ^-和SeO₃ ^2-的水溶液。所述制备方法包括如下步骤：硫酸溶液的制备；硝酸溶液的制备；A溶液的制备；B溶液的制备；C溶液的制备；D溶液的制备；E溶液的制备和混合。本发明提供的技术方案，原材料易得，低廉，制备过程简单，获得的试剂性能稳定，用于癌症检测具有普适性强、灵敏度高和特异性好等特点，检测过程简单，时间短，易于判断，特别适合于大规模的人群普查及癌症患者的治疗效果检测。

Description

一种尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂及制备方法

技术领域

本发明属于尿液检测试剂，具体涉及一种对人体内异常代谢物—色氨酸检测试剂及制备方法。

背景技术

癌症死亡率在所有疾病中占据首位，是人类健康的第一杀手已成为威胁人类生命和健康的一大病因，据统计每隔25年，癌症患者的人数就要翻一番。不仅如此，癌症的死亡人数也在全球迅猛上升，2030年这个数字可能会增至1320万。因此，癌症的防治已成为全球的卫生战略重点之一，而治疗癌症的关键在于早期发现、早期诊断和早期治疗。影像检测往往只能发现中晚期肿瘤类疾病，难以达到早期发现的目的，且价格昂贵，操作复杂，不适合大规模的人群普查。

尿液筛查试剂是通过肿瘤类疾病病人尿液中异常代谢物的检测进行筛查，实验数据表明其比目前的肿瘤标志物灵敏1000倍，比CT、MRI等影像检测灵敏10万倍，可以用于提前判断恶性肿瘤发生的可能性，且避免了抽血这项容易引起感染的环节。

但由于尿液中成分复杂，某些微量成分或者因其他病因导致的代谢异常产物同样会与检测试剂中的汞离子、亚汞离子结合生成颜色沉淀，会严重干扰检测结果的准确性，因此目前的尿液代谢物检测试剂虽然灵敏很高，但常常会出现假阳性问题，大大降低了检测的准确性，造成误诊，限制了其应用价值。

发明内容

本发明提供了一种尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂及制备方法，用以解决检测准确性低的问题。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：所述尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂，包括Hg²⁺、Hg₂ ²⁺、Ni²⁺、WO₄ ^2-、SO₄ ^2-、NO₃ ^-和SeO₃ ^2-的水溶液。

优选地是，所述尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂中的浓度为Hg²⁺0.09～0.21mol/L，Hg₂ ²⁺的浓度为0.27～0.85mol/L，Ni²⁺的浓度为2.0～6.3mmol/L，WO₄ ^2-的浓度为1.2～4mmol/L，SeO₃ ^2-的浓度为0.65～4.7mmol/L。

本发明还提供了尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂的制备方法，包括如下步骤：

1)硫酸溶液的制备：将市售浓硫酸用水稀释至原体积的2～6倍，冷却至室温备用；

2)硝酸溶液的制备：将市售浓硝酸用水稀释至原体积的2～6倍，冷却至室温备用；

3)A溶液的制备：称取一定量的硫酸汞溶于步骤1)配置的所述硫酸溶液中获得A溶液；

4)B溶液的制备：称取一定量的硝酸亚汞溶于步骤2)配置的所述硝酸溶液中获得B溶液；

5)C溶液的制备：称取一定量的硝酸镍溶于水中获得C溶液；

6)D溶液的制备：称取一定量的钨酸钠溶于水中获得D溶液；

7)E溶液的制备：称取一定量的亚硒酸溶于水中获得E溶液；

8)混合：将步骤3)、4)、5)和6)中制备的A、B、C、D和E溶液按1:(1.2～1.8):(0.3～0.9):(0.2～0.7):(0.2～0.5)体积比混合，即得所述尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂。

公知常识中，所述市售浓硫酸浓度约为98％，所述市售浓硝酸浓度约为65％。

优选地是，步骤3)中Hg²⁺含量为0.3～0.9mol/L。

优选地是，步骤4)中Hg₂ ²⁺含量为0.5～3.5mol/L。

优选地是，步骤5)中Ni²⁺含量为0.005～0.035mol/L。

优选地是，步骤6)中WO₄ ^2-含量为0.01～0.03mol/L。

优选地是，步骤6)中SeO₃ ^2-含量为0.015～0.03mol/L。

癌细胞导致的代谢异常，会使尿液中色氨酸含量较常人大幅上升，本发明通过试剂中的亚汞离子和亚硒酸与色氨酸发生络合反应产生红色、类红色沉淀，从而据此初步判断是否携带癌细胞，该检测方法具有高灵敏度的特点；另外，镍离子、汞离子能与尿液中其他的阴离子(如卤素离子、亚硝酸根离子)反应生成白色络合物沉淀，从而消除这些离子与Hg₂ ²⁺结合，导致假阳性；而钨酸根离子能与尿液中的有机化物如马尿酸、葡萄糖醛酸等有机酸反应生成相应的有机酸络合物非红色沉淀，与尿液中的磷酸盐等电解质反应生成磷钨杂多酸络合物非红色沉淀，还能结合因其他疾病导致异常代谢的血红蛋白结合并使之沉淀，从而大大排除干扰，提高了检测试剂的特异性。

本发明提供的技术方案，原材料易得，低廉，制备过程简单，获得的试剂性能稳定，用于癌症检测具有普适性强、灵敏度高和特异性好等特点，检测过程简单，时间短，易于判断，特别适合于大规模的人群普查及癌症患者的治疗效果检测。

具体实施方式

所有原材料均为分析纯级别的普通化学制剂，制备过程也都在常温、常压下进行。

实施例1

所述尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂，包括Hg²⁺、Hg₂ ²⁺、Ni²⁺、WO₄ ^2-、SO₄ ^2-、NO₃ ^-和SeO₃ ^2-的水溶液，其中Hg²⁺的浓度为0.21mol/L，Hg₂ ²⁺的浓度为0.27mol/L，Ni²⁺的浓度为6.3mmol/L，WO₄ ^2-的浓度为1.2mmol/L，SeO₃ ^2-的浓度为2.6mmol/L。

制备过程如下：

1)市售浓硫酸1份用水稀释成3份，冷却至室温备用；

2)市售浓硝酸1份用水稀释成3份，冷却至室温备用；

3)A溶液的制备：称取一定量的硫酸汞溶于步骤1)的硫酸溶液中，其中汞离子含量为0.8mol/L；

4)B溶液的制备：称取一定量的硝酸亚汞溶于步骤2)的硝酸溶液中，其中亚汞离子含量为0.8mol/L；

5)C溶液的制备：称取一定量硝酸镍溶解到蒸馏水中，其中镍离子含量为0.03mol/L；

6)D溶液的制备：称取一定量的钨酸钠溶于蒸馏水中，其中钨酸根离子含量为0.015mol/L；

7)E溶液的制备：称取一定量的亚硒酸溶于蒸馏水中，其中亚硒酸离子含量为0.025mol/L；

8)混合：将制备的A、B、C、D和E溶液按1:1.3:0.8:0.3:0.4体积比均匀混合，即得尿液色氨酸检测试剂。

实施例2

所述尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂，包括Hg²⁺、Hg₂ ²⁺、Ni²⁺、WO₄ ^2-、SO₄ ^2-、NO₃ ^-和SeO₃ ^2-的水溶液，其中Hg²⁺的浓度为0.15mol/L，Hg₂ ²⁺的浓度为0.55mol/L，Ni²⁺的浓度为2.0mmol/L，WO₄ ^2-的浓度为2.4mmol/L，Se₃ ^2-的浓度为1.1mmol/L。

制备过程如下：

1)市售浓硫酸1份用水稀释成4份，冷却至室温备用；

2)市售浓硝酸1份用水稀释成4份，冷却至室温备用；

3)A溶液的制备：称取一定量的硫酸汞溶于步骤1)的硫酸溶液中，其中汞离子含量为0.6mol/L；

4)B溶液的制备：称取一定量的硝酸亚汞溶于步骤2)的硝酸溶液中，其中亚汞离子含量为1.5mol/L；

5)C溶液的制备：称取一定量硝酸镍溶解到蒸馏水中，其中镍离子含量为0.01mol/L；

6)D溶液的制备：称取一定量的钨酸钠溶于蒸馏水中，其中钨酸根离子含量为0.02mol/L；

7)E溶液的制备：称取一定量的亚硒酸溶于蒸馏水中，其中亚硒酸根离子含量为0.015mol/L；

8)混合：将制备的A、B、C、D和E溶液按1:1.5:0.8:0.5:0.3体积比均匀混合，即得尿液色氨酸检测试剂。

实施例3

所述尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂，包括Hg²⁺、Hg₂ ²⁺、Ni²⁺、WO₄ ^2+-、SO₄ ^2-、NO₃ ^-和SeO₃ ^2-的水溶液，其中Hg²⁺的浓度为0.09mol/L，Hg₂ ²⁺的浓度为0.85mol/L，Ni²⁺的浓度为2.3mmol/L，WO₄ ^2-的浓度为4.0mmol/L，SeO₃ ^2-的浓度为3.4mmol/L。

制备过程如下：

1)市售浓硫酸1份用水稀释成5份，冷却至室温备用；

2)市售浓硝酸1份用水稀释成5份，冷却至室温备用；

3)A溶液的制备：称取一定量的硫酸汞溶于步骤1)的硫酸溶液中，其中汞离子含量为0.4mol/L；

4)B溶液的制备：称取一定量的硝酸亚汞溶于步骤2)的硝酸溶液中，其中亚汞离子含量为2.2mol/L；

5)C溶液的制备：称取一定量硝酸镍溶解到蒸馏水中，其中镍离子含量为0.02mol/L；

6)D溶液的制备：称取一定量的钨酸钠溶于蒸馏水中，其中钨酸根离子含量为0.025mol/L；

7)E溶液的制备：称取一定量的亚硒酸溶于蒸馏水中，其中亚硒酸根离子含量为0.03mol/L；

8)混合：将制备的A、B、C、D和E溶液按1:1.7:0.5:0.7:0.5体积比均匀混合，即得尿液色氨酸检测试剂。

实施例4 对比例

所述尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂，包括Hg²⁺、Hg₂ ²⁺、SO₄ ^2-和NO₃ ^-的水溶液。

制备过程如下：市售浓硫酸1份用水稀释成3份，冷却至室温，称取一定量的硫酸汞溶解其中，其中汞离子含量为0.8mol/L；市售浓硝酸1份用水稀释成3份，冷却至室温，称取一定量的硝酸亚汞溶解其中，其中亚汞离子含量为0.8mol/L；将上述两种溶液按1:1.3体积比均匀混合，即得对比例检测试剂。

实施例5 效果验证试验

1.试验对象

1)经临床诊断确诊为恶性肿瘤(已经临床检测手段确诊)的患者共957名，年龄20-80，男女各占一半，其中确诊的癌症有甲状腺癌、肝癌、胃癌、食道癌、乳腺癌、宫颈癌、鼻咽癌等；

2)非肿瘤良性疾病组654名，年龄20-80岁，男女各半；

3)正常健康人组1854名，年龄20-80岁，男女各半为经检查健康合格者。

2.试验方法

所有试验对象均取新鲜洁净尿液4mL加入装有0.5ml试剂(实施例1制备的检测试剂)的安瓿中，稍加振荡静置约5min，将沉淀颜色与标准比色板对照判定结果，结果及颜色如下表1所示：

表1 尿液中检测色氨酸乙酸判定标准

检测标准	符号	颜色
			阴性	-	浅黄色或白色

弱阳性	±	浅红色
			阳性	+	红色
强阳性	++	深红色

3.实验结果：

1)癌症筛查：

表2 各组尿液比较

表3 不同恶性肿瘤检测结果

癌症名	甲状腺癌	肝癌	胃癌	食道癌	乳腺癌	宫颈癌	鼻咽癌
								患者例数	131	212	105	120	50	47	292
阳性数	130	211	105	118	50	47	291
								阳性率	99.2％	99.5％	100％	98.3％	100％	100％	99.7％

如上所示，在医院所提供的957名恶性肿瘤患者中，检测出阳性患者有947名，检出率达98.95％，在正常组(0.16％)和非肿瘤良性疾病组(3.21％)中检出皆低于5％，说明本发明提供的尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂进行恶性肿瘤的筛查灵敏度高，阳性率高，表3的结果同时也证明本制剂能广泛的鉴别不同恶性肿瘤。

实施例6 对比例

与实施例4的试验对象相同，试验方法中所用检测试剂为实施例4中制备的对比例检测试剂，测试结果如表4

表4 各组尿液比较

通过对比例可以进一步对比发现，本发明提供的技术方案大大降低了假阳性的概率，提供了检测的精确度。

实施例7

为进一步验证此试剂效果，我们用该试剂观察了各种恶性肿瘤部分病例的动态变化，即治疗前与治疗(手术、放疗、化疗)后的检测结果，详见表5。

表5 治疗前后尿液色氨酸变化

以上结果表明，本制剂用于尿液检测可以作为恶性肿瘤治疗(手术、放疗、化疗)评价的客观指标，尿液中色氨酸测定和其他的肿瘤标记物一样，是能够反映患者的病情变化，其浓度是会随着患者病情的变化而发生改变的。说明本试剂是能够对癌症患者的疗效观察及预后是有帮助的。

Claims (8)

1.一种尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂，其特征在于，包括Hg²⁺、Hg₂ ²⁺、Ni²⁺、WO₄ ^2-、SO₄ ^2-、NO₃ ^-和SeO₃ ^2-的水溶液。

2.根据权利要求1所述一种尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂，其特征在于，所述尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂中的浓度为Hg²⁺0.09～0.21mol/L，Hg₂ ²⁺的浓度为0.27～8.5mol/L，Ni²⁺的浓度为2.0～6.3mmol/L，WO₄ ^2-的浓度为1.2～4mmol/L，SeO₃ ^2-的浓度为0.65～4.69mmol/L。

3.权利要求1或2所述一种尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)硫酸溶液的制备：将市售浓硫酸用水稀释至原体积的2～6倍，冷却至

室温备用；

2)硝酸溶液的制备：将市售浓硝酸用水稀释至原体积的2～6倍，冷却至

室温备用；

3)A溶液的制备：称取一定量的硫酸汞溶于步骤1)配置的所述硫酸溶液

中获得A溶液；

4)B溶液的制备：称取一定量的硝酸亚汞溶于步骤2)配置的所述硝酸溶

液中获得B溶液；

5)C溶液的制备：称取一定量的硝酸镍溶于水中获得C溶液；

6)D溶液的制备：称取一定量的钨酸钠溶于水中获得D溶液；

7)E溶液的制备：称取一定量的亚硒酸溶于水中获得E溶液；

8)混合：将步骤3)、4)、5)和6)中制备的A、B、C和D溶液按1:(1.2～

1.8):(0.3～0.9):(0.2～0.7):(0.2～0.5)体积比混合，即得所述尿液中

肿瘤标志物色氨酸检测试剂。

4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤3)中Hg²⁺含量为0.3～0.9mol/L。

5.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤4)中Hg₂ ²⁺含量为0.5～3.5mol/L。

6.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤5)中Ni²⁺含量为0.005～0.035mol/L。

7.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤6)中WO₄ ^2-含量为0.01～0.03mol/L。

8.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤7)中SeO₃ ^2-含量为0.015～0.03mol/L。