CN107703304B - 羟苯衍生物检测试剂、其制备方法及肿瘤筛查试剂 - Google Patents

羟苯衍生物检测试剂、其制备方法及肿瘤筛查试剂 Download PDF

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Abstract

本发明实施例公开了一种羟苯衍生物检测试剂、其制备方法及肿瘤检测试剂。按体积比计算，所述羟苯衍生物检测试剂的组分为：A溶液1；B溶液0.3‑0.5；C溶液0.16‑0.18；D溶液0.2‑0.6；E溶液0.07‑0.08；其中，所述A溶液为汞溶解于浓硝酸后的稀释溶液；所述B溶液为230‑250g/L的硝酸亚汞硝酸溶液；所述C溶液为3‑5g/L的对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液；所述D溶液为0.001～0.004g/L的亚硝酸钠溶液；所述E溶液为300～500g/L的硝酸镍溶液。该羟苯衍生物检测试剂的制备过程简单方便，适用于常规生产和制造。另外，其不仅对大部分良性肿瘤有较高的检出率，而且对消化道和某些高发性的非消化道肿瘤如膀胱癌、宫颈癌、乳腺癌等同样有较高的检出效果。

Description

羟苯衍生物检测试剂、其制备方法及肿瘤筛查试剂
技术领域
本发明涉及生物检测试剂技术领域，尤其涉及一种羟苯衍生物检测试剂、其制备方法及肿瘤筛查试剂。
背景技术
肿瘤是导致人体患癌的主要原因之一。肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤两大类。其中，良性肿瘤易造成患者身体乏力、食欲不振等症状，使人们对自身身体状况产生错误判断，从而忽视了对肿瘤的关注和治疗，而在恶性肿瘤期内，患者开始出现相关癌症的症状，此时的临床检测和治疗必定给肿瘤患者带来更大的经济损失、肉体折磨和精神压力。
现临床常用的确诊手段有超声检查、CT、放射性核素显像、内镜检查、细针吸取细胞检查等。这些确诊手段常常是伴随着穿刺、抽血等加重病人痛苦甚至有可能发生肿瘤转移或出血的手段，价格十分昂贵，而且对于早期的肿瘤病变检出率不高。
肿瘤的早期诊断是提高肿瘤患者治疗率、降低肿瘤患者生命危险的关键。因此，研究出一种快速、便捷、高效的早期肿瘤检测手段势在必行。
研究证实，当人体有肿瘤细胞活动时，细胞的异常增殖引发应激反应引起人体羟苯衍生物(酪氨酸、色氨酸、儿茶酚胺、香草扁桃酸(VMA)、高香草酸(HVA)、对羟苯丙酮酸、5-羟吲哚乙酸、2，5-羟苯乙酸、多巴胺、5-羟色胺等)分泌增加，并且这类物质可以通过尿液排放。
目前市面上已有用于消化道肿瘤的风险筛查的尿液肿瘤检测试剂【宋慧,侯华新,李福森,黄燕军,梁永红,赵农.尿液中单羟酚类物质含量的测定方法研究及在肿瘤筛查中的应用[J].中国现代医学杂志,2003,(02):71-72. 赵亚静,贾文玉.尿单羟酚衍生物测定在恶性肿瘤诊断中的临床意义[J].现代中西医结合杂志,2000,(11):1031.】但是这些检测试剂对非消化道肿瘤的检出率欠佳，故适用范围相对狭窄。
在实现本发明过程中，发明人发现相关技术存在以下问题：现临床常用的确诊手段检测价格十分昂贵，且对于早期的肿瘤病变检出率不高。而现有的基于尿液的肿瘤检测试剂的应用范围又相对狭窄，无法满足临床的应用需求。
发明内容
针对上述技术问题，本发明实施例提供了一种羟苯衍生物检测试剂、其制备方法及肿瘤筛查试剂，以解决现有确诊手段创伤性大、成本高、早期肿瘤的检出率不高的问题。
本发明实施例的第一方面提供一种羟苯衍生物检测试剂。按体积比计算，所述羟苯衍生物检测试剂的组分为：
其中，A溶液为汞溶解于浓硝酸后的稀释溶液；溶液为230-250g/L的硝酸亚汞硝酸溶液；C溶液为3-5g/L的对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液；D溶液为0.001～0.004g/L的亚硝酸钠溶液；E溶液为300～500g/L 的硝酸镍溶液。
可选地，按体积比计算，所述羟苯衍生物检测试剂的组分为：
可选地，所述A溶液为：将120g汞溶解于180mL浓硝酸后，加入两倍浓硝酸体积的超纯水稀释后制备获得的溶液。
可选地，所述B溶液为：将硝酸亚汞溶解于4.2moL/L的硝酸中制备的 241g/L的硝酸亚汞硝酸溶液。
可选地，所述C溶液为：将对二甲氨基苯甲醛溶解于10.7moL/L的硫酸中制备的5g/L的对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液。
可选地，所述D溶液为：将亚硝酸钠溶解于超纯水中制备的0.004g/L的亚硝酸钠溶液。
可选地，所述E溶液为：将硝酸镍溶解于超纯水中制备的500g/L的硝酸镍溶液。
本发明实施例的第二方面提供了一种羟苯衍生物检测试剂的制备方法。所述制备方法包括如下步骤：
将汞溶于浓硝酸中，并加入2倍浓硝酸体积的超纯水稀释，得到硝酸汞溶液；
将硝酸亚汞溶于4.2moL/L硝酸中，得到230～250g/L的硝酸亚汞溶液；
将对二甲氨基苯甲醛溶于10.7moL/L的硫酸中，得到3～5g/L的对二甲氨基苯甲醛溶液；
将亚硝酸钠溶于超纯水中，得到0.001～0.004g/L的亚硝酸钠溶液；
将硝酸镍溶于超纯水中，得到300～500g/L的硝酸镍溶液；
将所述硝酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、对二甲氨基苯甲醛溶液、亚硝酸钠溶液以及硝酸镍溶液，以预设的比例混合并摇匀后，制得所述羟苯衍生物检测试剂；
按体积比计算，所述预设的比例为：
可选地，按体积比计算，所述预设的比例为：
本发明第三方面提供了一种基于尿样检测的肿瘤筛查试剂。所述肿瘤筛查试剂包括：如上所述的，用于检测尿样中的羟苯衍生物含量的羟苯衍生物检测试剂。
本发明实施例提供的技术方案中，羟苯衍生物检测试剂的制备过程简单方便，无需用到复杂的仪器设备，且原材料容易获取，适用于常规生产和制造。另外，经临床试验数据验证，该羟苯衍生物检测试剂不仅对消化道肿瘤有较高的检出率，而且对某些高发性的非消化道肿瘤如膀胱癌、宫颈癌、乳腺癌等同样有较高的检出效果，适用于大规模的人群肿瘤普查。
附图说明
图1为本发明实施例的羟苯衍生物检测试剂的制备方法的一个实施例流程示意图；
图2为本发明实施例的羟苯衍生物检测试剂的制备方法的另一个实施例流程示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，当元件被表述“固定于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上、或者其间可以存在一个或多个居中的元件。当一个元件被表述“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件、或者其间可以存在一个或多个居中的元件。本说明书所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”、“上”、“下”、“内”、“外”、“底部”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
除非另有定义，本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本说明书中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是用于限制本实用新型。本说明书所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。
在肿瘤细胞活动时期，患者体内的细胞会异常增殖，引发应激反应，导致人体内羟苯衍生物代谢增强。因此，患者尿液中的羟苯衍生物含量会远超常人，所以尿液中的羟苯衍生物可以作为检测肿瘤的一类标志物。
羟苯衍生物是一类小分子物质，具体是指酪氨酸、色氨酸、儿茶酚胺、香草扁桃酸(VMA)、高香草酸(HVA)、对羟苯丙酮酸、5-羟吲哚乙酸、2， 5-羟苯乙酸、多巴胺、5-羟色胺等一系列的化学物质。
由此，本发明实施例提供了一种羟苯衍生物检测试剂的制备方法。通过该制备方法制备获得的羟苯衍生物检测试剂能够很好地实现尿液中羟苯衍生物含量的检测，从而应用于人群肿瘤筛查中。
如图1所示，所述羟苯衍生物检测试剂的制备方法包括如下步骤：
101、制备A溶液：称取一定重量的汞溶于浓硝酸中，并加入2倍浓硝酸体积的超纯水稀释，得到硝酸汞溶液。
102、制备B溶液：称取一定重量的硝酸亚汞溶于4.2moL/L硝酸中，得到230～250g/L的硝酸亚汞溶液。
103、制备C溶液：称取一定重量的对二甲氨基苯甲醛溶于10.7moL/L的硫酸中，得到3～5g/L的对二甲氨基苯甲醛溶液。
104、制备D溶液：称取一定重量的亚硝酸钠溶于超纯水中，得到 0.001～0.004g/L的亚硝酸钠溶液。
105、制备E溶液：称取一定重量的硝酸镍溶于超纯水中，得到300～500g/L 的硝酸镍溶液。
106、将所述A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以及E溶液，以预设的比例混合并摇匀后，制得所述羟苯衍生物检测试剂。
其中，按体积比计算，所述预设的比例为：A溶液：B溶液：C溶液：D 溶液：E溶液＝1：0.3-0.5：0.16-0.18：0.2-0.6：0.07-0.08。
与上述制备方法相适应的，本发明实施例还提供一种羟苯衍生物检测试剂，其应用本发明实施例揭露的制备方法所制备。在本发明实施例提供的羟苯衍生物检测试剂中，由于汞离子和对二甲氨基苯甲醛能够分别与尿液中的酪氨酸、色氨酸等羟苯衍生物反应产生紫红色和类紫色沉淀。因此，当尿液中的羟苯衍生物含量越高时，羟苯衍生物检测试剂反应后的颜色会越深。相反，当尿液中的羟苯衍生物含量较低时，羟苯衍生物检测试剂反应后的颜色会比较浅。
另外，考虑到尿液中含有的阴离子和尿素等物质会影响显色结果。因此，本发明实施例提供的羟苯衍生物检测试剂中还包含有亚汞离子和镍离子。其可以与尿液中的阴离子结合生成白色沉淀，排除对试剂显色的干扰。另外，羟苯衍生物检测试剂中适量的对二甲氨基苯甲醛则可以与尿液中的尿素结合生成黄色沉淀，排除尿素对显色的干扰。而适量的亚硝酸盐则可以改变尿液的澄清度，令最终的沉淀颜色更加明显。
基于上述羟苯衍生物检测试剂的显色反应，可以通过反应后羟苯衍生物检测试剂的颜色深浅来初步定性判断受测者是否存在患肿瘤的可能，进行人群的肿瘤筛查。
以下以配置1100mL的羟苯衍生物检测试剂为例，详细描述所述羟苯衍生物检测试剂的制备方法。如图2所示，在一些实施例中，所述制备方法包括如下步骤：
201、制备A溶液：称取120g汞溶于180mL浓硝酸中，再加入2倍浓硝酸体积的超纯水稀释。
202、制备B溶液：称取70g硝酸亚汞溶于适量的4.2moL/L的硝酸中，得到241g/L的硝酸亚汞溶液。
203、制备C溶液：称取5g对二甲氨基苯甲醛溶于950mL10.7moL/L硫酸中，再用蒸馏水定容至1000mL，得到5g/L的对二甲氨基苯甲醛溶液。
204、制备D溶液：称取0.1g亚硝酸钠溶于2500mL超纯水中，得到0.004g/L的亚硝酸钠溶液。
205、制备E溶液：称取50g硝酸镍溶于100mL超纯水中，得到500g/L 的硝酸镍溶液。
206、将所述A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以及E溶液，以预设的比例混合并摇匀后，制得1100mL的羟苯衍生物检测试剂。
其中，按体积比计算，所述预设的比例为：A溶液：B溶液：C溶液：D 溶液：E溶液＝1：0.4：0.16：0.6：0.07。
基于本发明实施例提供的羟苯衍生物检测试剂，本发明实施例还提供了一种肿瘤检测试剂。该肿瘤检测试剂可以基于尿样检测的方法，通过本发明实施例揭露的羟苯衍生物检测试剂的显色反应结果来初步判断是否存在患有肿瘤的风险。当然，所述肿瘤检测试剂还可以根据实际需要，增加其他合适的检测试剂或者器材，而不限于所述羟苯衍生物检测试剂。
在实际使用过程中，本发明实施例提供的肿瘤检测试剂的具体使用方法可以包括如下三个方面：
一、被检者尿液采样：取早晨第一次尿液的中段部分，用滴管吸取3mL 尿液加入到装有0.6±0.1mL显色试剂的显色瓶中，摇匀后静置。待2-4mi n 显色稳定后，观察尿液沉淀颜色。
二、显色结果判断：若尿液沉淀为白色或黄色，则检测结果为阴性，若尿液沉淀为浅紫色或浅红色，则检测结果为弱阳性，若尿液沉淀为紫红色，则检测结果为阳性。当检测结果为阳性时，需在排除药物干扰一周后另作一次检测，若检测结果相同，建议及时到医院接受检查和治疗。
三、注意事项：以上检测效果在被检者检测前三日内停止服用氨基酸类、激素类药品，镇静类、止痛类、降压类药物，神经系统兴奋剂，抗菌素，保健品以及高蛋白食物等情况下为佳。
为进一步验证本发明实施例提供的羟苯衍生物检测试剂用作肿瘤检测试剂时的肿瘤筛查效果，以下结合具体的临床对比试验及其试验结果进行说明：
1、对比试剂：
所述对比试剂可以采用现有的尿液羟苯衍生物检测检测试剂。而在本临床对比实验中，使用的对比试剂的制备方法具体如下：
首先，称取90g汞溶于135mL浓硝酸中，再加入2倍浓硝酸体积的超纯水，得到A溶液。
然后，称取450g硝酸亚汞溶于适量的4moL/L的硝酸中，得到150g/L的硝酸亚汞溶液(B溶液)。并且，称取400g硝酸镍溶于适量超纯水中，得到 200g/L的硝酸镍溶液(C溶液)。
最后，将制备的A、B、C溶液按1:1.2:0.6比例混合，摇匀即配成1100mL 的对比试剂。
2、临床对比试验：
2.1、试验对象：
肿瘤组：经临床诊断确诊的恶性肿瘤患者1218名和良性肿瘤患者492名，根据肿瘤的发生部位分为胃、肝、结肠、食管、肺、前列腺、膀胱、子宫颈、乳腺、淋巴组，各组根据临床诊断结果分为恶性肿瘤组和良性肿瘤组。
对照组：经检查健康合格的正常健康人840名。被检者在检查前三日内停止服药及保健品和相关食品，具体包括氨基酸类、激素类药品，镇静类、止痛类、降压类药物，神经系统兴奋剂，抗菌素，保健品以及高蛋白食物等。
2.2、试验方法：
取被检者早晨第一次尿液的中段部分，分别用滴管吸取3mL尿液加入到实施例1和实施例3所配制的显色液中，摇匀后静置。待2-4mi n显色稳定后，观察尿液沉淀颜色。其中，840个正常人尿液样品由经检查健康合格者提供。
2.3、试验结果：
其中，表格1为使用本发明实施例的羟苯衍生物检测试剂的尿样检测结果，表格2为使用所述对比试剂的尿样检测结果。
表格1
表格2
根据表格1和表格2的对比可以看到：本发明实施例提供的羟苯衍生物检测试剂对消化道恶性肿瘤的检出率均超过95％，对某些高发性的肿瘤如膀胱癌、子宫颈癌和乳腺癌的检出率高达96％，且对于良性肿瘤的检出准确率高于对比试剂。
而对比试剂对消化道良性肿瘤的检出率较低，对某些非消化道肿瘤如膀胱癌、子宫颈癌、乳腺癌的检出效果均弱于羟苯衍生物检测试剂。
由此可见，本发明实施例提供的羟苯衍生物检测试剂在用作肿瘤检测试剂时，对肿瘤尤其是良性肿瘤的检出率高于现有的检测试剂，适用于消化道肿瘤和某些高发性的非消化道肿瘤的检测。与原有试剂相比，检测范围更大，适用人群更广泛，检测结果更精确。
可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及本发明构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。

Claims (10)

1.一种羟苯衍生物检测试剂，其特征在于，按体积比计算，所述羟苯衍生物检测试剂的组分为：
其中，所述A溶液为将汞溶于浓硝酸中，并加入2倍浓硝酸体积的超纯水稀释，得到硝酸汞溶液；所述B溶液为230-250g/L的硝酸亚汞硝酸溶液；所述C溶液为3-5g/L的对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液；所述D溶液为0.001～0.004g/L的亚硝酸钠溶液；所述E溶液为300～500g/L的硝酸镍溶液。
2.根据权利要求1所述的羟苯衍生物检测试剂，其特征在于，按体积比计算，所述羟苯衍生物检测试剂的组分为：
3.根据权利要求2所述的羟苯衍生物检测试剂，其特征在于，所述A溶液为：将120g汞溶解于180mL浓硝酸后，加入两倍浓硝酸体积的超纯水稀释后制备获得的溶液。
4.根据权利要求2所述的羟苯衍生物检测试剂，其特征在于，所述B溶液为：将硝酸亚汞溶解于4.2moL/L的硝酸中制备的241g/L的硝酸亚汞硝酸溶液。
5.根据权利要求2所述的羟苯衍生物检测试剂，其特征在于，所述C溶液为：将对二甲氨基苯甲醛溶解于10.7moL/L硫酸中制备的5g/L的对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液。
6.根据权利要求2所述的羟苯衍生物检测试剂，其特征在于，所述D溶液为：将亚硝酸钠溶解于超纯水中制备的0.004g/L的亚硝酸钠溶液。
7.根据权利要求2所述的羟苯衍生物检测试剂，其特征在于，所述E溶液为：将硝酸镍溶解于超纯水中制备的500g/L的硝酸镍溶液。
8.一种羟苯衍生物检测试剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
将汞溶于浓硝酸中，并加入2倍浓硝酸体积的超纯水稀释，得到硝酸汞溶液；
将硝酸亚汞溶于4.2moL/L硝酸中，得到230～250g/L的硝酸亚汞溶液；
将对二甲氨基苯甲醛溶于10.7moL/L的硫酸中，得到3～5g/L的对二甲氨基苯甲醛溶液；
将亚硝酸钠溶于超纯水中，得到0.001～0.004g/L的亚硝酸钠溶液；
将硝酸镍溶于超纯水中，得到300～500g/L的硝酸镍溶液；
将所述硝酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、对二甲氨基苯甲醛溶液、亚硝酸钠溶液以及硝酸镍溶液，以预设的比例混合并摇匀后，制得所述羟苯衍生物检测试剂；
按体积比计算，所述预设的比例为：
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，按体积比计算，所述预设的比例为：
10.一种基于尿样检测的肿瘤筛查试剂，其特征在于，包括如权利要求1-7任一所述的，用于检测尿样中的羟苯衍生物含量的羟苯衍生物检测试剂。
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