CN104383550A - 一种狂犬疫苗稳定剂及其应用 - Google Patents

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张传明
冷雪梅
虞华芳
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Abstract

本发明公开了一种狂犬疫苗稳定剂，由以下组分组成：牛血清白蛋白1～1.2％(W/V)；氨基酸类组合物2.1～2.7％(W/V)；山梨糖醇或甘露醇0.2～0.8％(W/V)；缓冲液20-50mmol/L，pH7.0-7.2；原人参三醇1.2～1.5％(W/V)水；该稳定剂的应用方法为：(1)BSR细胞传代、培养和扩大；(2)病毒接种、培养和收获；(3)病毒灭活；(4)配苗：病毒灭活检验合格后，加入狂犬疫苗稳定剂。该稳定剂不含有动物血清，不会对免疫的动物机体产生不良影响，且能够保证狂犬疫苗在低温、常温、高温下的稳定性。

Description

一种狂犬疫苗稳定剂及其应用
技术领域
本发明涉及生物制药领域，特别是一种狂犬疫苗稳定剂及其应用。
背景技术
由于狂犬病是致命性疾病，发病后的死亡率几乎100％，至目前为止，世界上仍未有一种有效的治疗方法。所以，凡被狂犬或不清楚是否带毒的动物咬伤后，都应立即注射狂犬疫苗。孕妇被咬伤，也应及时全程注射狂犬疫苗。我国现在制造的狂犬疫苗系用狂犬病毒固定毒接种于原代地鼠肾细胞，培养后，收获毒液，经浓缩、纯化、精制并加氢氧化铝佐剂，经全面检定合格后即为预防狂犬病的疫苗。目前狂犬病灭活疫苗生产中，通常需加入一定比例的动物血清以延长疫苗的保存期,动物血清因成分复杂，注射动物后经常会出现过敏反应或其他应激反应，甚至发生动物死亡的情况,而且现有的各种稳定剂最多只能保证狂犬疫苗在低温下的稳定性，而在常温、高温环境下无法起到稳定效果，不利于狂犬疫苗在一些低温贮存条件及设备不完善的经济落后国家和地区推广应用。
发明内容
针对上述现有技术中存在的不足，本发明提供了一种狂犬疫苗稳定剂，该稳定剂不含有动物血清，不会对免疫的动物机体产生不良影响，且能够保证狂犬疫苗在低温、常温、高温下的稳定性。
本发明提供的一种狂犬疫苗稳定剂，由以下组分组成：
牛血清白蛋白1～1.2％(W/V)；
氨基酸类组合物2.1～2.7％(W/V)；
山梨糖醇或甘露醇0.2～0.8％(W/V)；
缓冲液20-50mmol/L，pH7.0-7.2；
原人参三醇1.2～1.5％(W/V)
余量用水补齐；
优选地，由以下组分组成：
牛血清白蛋白1％(W/V)；
氨基酸类组合物2.4％(W/V)；
山梨糖醇或甘露醇0.6％(W/V)；
缓冲液30mmol/L，pH7.0；
原人参三醇1.4％(W/V)
余量用水补齐；
优选地，所述氨基酸类组合物由以下组分组成：L-赖氨酸，4-羟基异亮氨酸，L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐，三者的重量比为：L-赖氨酸：4-羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐＝(1～1.5)：(0.8～1.2)：(0.3～0.6)。
更优选地，所述L-赖氨酸，4-羟基异亮氨酸，L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐三者的重量比为：L-赖氨酸：4-羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐＝1.2：0.9：0.5。
优选地，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。
优选地，所述水为注射用水。
上述狂犬疫苗稳定剂的应用，包括如下步骤：
(1)BSR细胞传代、培养和扩大：将BSR细胞复苏后，按常规生产工艺传代和放大培养，以达到生产规模后用于接种狂犬病毒；
(2)病毒接种、培养和收获：将狂犬病毒按适当的比例接种到BSR细胞上复制增殖，待病毒滴度达到最佳水平时收获病毒细胞培养液；
(3)病毒灭活：收获的狂犬病毒经毒价检测合格后，用适当的灭活剂进行灭活；
(4)配苗：病毒灭活检验合格后，加入狂犬疫苗稳定剂和氢氧化铝佐剂，氢氧化铝佐剂终浓度400—700ug/ml。
上述(1)～(3)步骤可采用本领域中的常规技术手段，本领域技术人员有能力根据生产规模、所需产品质量选择合适的工艺参数和相关制剂，故本发明中不再赘述。
步骤(4)中，按照每100ml狂犬疫苗稳定剂中含有250～500UI效价狂犬疫苗的配比培苗。
本发明提供的一种狂犬疫苗稳定剂，不含有动物血清，不会对免疫的动物机体产生不良影响，配伍和配比科学合理，相互协同地保证狂犬疫苗在低温、常温、高温下的稳定性。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
按以下组分和配比配置狂犬疫苗稳定剂：
牛血清白蛋白1.1％(W/V)；
氨基酸类组合物2.1％(W/V)；
甘露醇0.8％(W/V)；
磷酸盐缓冲液20mmol/L，pH7.2；
原人参三醇1.5％(W/V)
其中氨基酸类组合物按如下重量比的组分配置：L-赖氨酸：4-羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐＝1：1.2：0.6。
按溶液总体积100ml计算并准确称量上述各组分保持常温混合均匀，用注射用水补足至100ml定容，置于灭菌容器中。
实施例2
按以下组分和配比配置狂犬疫苗稳定剂：
牛血清白蛋白1.2％(W/V)；
氨基酸类组合物2.7％(W/V)；
山梨糖醇0.2％(W/V)；
磷酸盐缓冲液50mmol/L，pH7.2；
原人参三醇1.2％(W/V)
其中氨基酸类组合物按如下重量比的组分配置：L-赖氨酸：4-羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐＝1.5：0.8：0.3。
按溶液总体积100ml计算并准确称量上述各组分保持常温混合均匀，用注射用水补足至100ml定容，置于灭菌容器中。
实施例3
按以下组分和配比配置狂犬疫苗稳定剂：
牛血清白蛋白1.0％(W/V)；
氨基酸类组合物2.5％(W/V)；
山梨糖醇0.6％(W/V)；
磷酸盐缓冲液30mmol/L，pH7.0；
原人参三醇1.4％(W/V)
其中氨基酸类组合物按如下重量比的组分配置：L-赖氨酸：4-羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐＝1.2：0.9：0.5。
按溶液总体积100ml计算并准确称量上述各组分保持常温混合均匀，用注射用水补足至100ml定容，置于灭菌容器中。
实施例4
按以下组分和配比配置狂犬疫苗稳定剂：
牛血清白蛋白1.0％(W/V)；
氨基酸类组合物2.4％(W/V)；
甘露醇0.4％(W/V)；
磷酸盐缓冲液40mmol/L，pH7.2；
原人参三醇1.3％(W/V)
其中氨基酸类组合物按如下重量比的组分配置：L-赖氨酸：4-羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐＝1.3：1.0：0.4。
按溶液总体积100ml计算并准确称量上述各组分保持常温混合均匀，用注射用水补足至100ml定容，置于灭菌容器中。
实施例5
按如下步骤制备狂犬疫苗：
(1)BSR细胞传代、培养和扩大：将BSR细胞复苏后，按常规生产工艺传代和放大培养，以达到生产规模后用于接种狂犬病毒；
(2)病毒接种、培养和收获：将狂犬病毒按适当的比例接种到BSR细胞上复制增殖，待病毒滴度达到最佳水平时收获病毒细胞培养液；
(3)病毒灭活：收获的狂犬病毒经毒价检测合格后，用适当的灭活剂进行灭活；
(4)配苗：病毒灭活检验合格后，加入实施例1的狂犬疫苗稳定剂和氢氧化铝佐剂，氢氧化铝佐剂终浓度400—700ug/ml。狂犬疫苗稳定剂的加入量按照：每100ml狂犬疫苗稳定剂中含有250UI狂犬疫苗的配比培苗，分装制成2.5UI/ml规格的狂犬疫苗成品。
实施例6
本实施例与实施例5的区别仅在于，步骤(4)中，加入实施例2的狂犬疫苗稳定剂。
实施例7
本实施例与实施例5的区别仅在于，步骤(4)中，加入实施例3的狂犬疫苗稳定剂。狂犬疫苗稳定剂的加入量按照：每100ml狂犬疫苗稳定剂中含有500UI狂犬疫苗的配比培苗，分装制成5.0UI/ml的狂犬疫苗成品。
实施例8
本实施例与实施例7的区别仅在于，步骤(4)中，加入实施例4的狂犬疫苗稳定剂。
对比例1
本对比例与实施例5的区别仅在于，步骤(4)中，将狂犬疫苗稳定剂换为等量的动物血清。
对比例2
本对比例与实施例7的区别仅在于，步骤(4)中，将狂犬疫苗稳定剂换为等量的动物血清。
试验例1
将实施例5～8、对比例1～2中的产品分别放置2～8℃环境下24个月、25℃环境下12个月、37℃环境下14天，检测产品效价(UI/ml)前后变化。结果如下：
有上表结果可知，本发明提供的稳定剂能够明显提高狂犬疫苗在不同温度下的稳定性，特别是加入本发明的狂犬疫苗稳定剂后，使得狂犬疫苗能够在高温下长期保存，大大放宽了狂犬疫苗对贮存环境的严格要求。
以上对本发明所提供的一种狂犬疫苗稳定剂及其应用进行了详细介绍。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰。这些改进和修饰也应当落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (8)

1.一种狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，由以下组分组成：
牛血清白蛋白1～1.2％(W/V)；
氨基酸类组合物2.1～2.7％(W/V)；
山梨糖醇或甘露醇0.2～0.8％(W/V)；
缓冲液20-50mmol/L，pH7.0-7.2；
原人参三醇1.2～1.5％(W/V)；
水。
2.根据权利要求1所述的狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，由以下组分组成：
牛血清白蛋白1％(W/V)；
氨基酸类组合物2.4％(W/V)；
山梨糖醇或甘露醇0.6％(W/V)；
缓冲液30mmol/L，pH7.0；
原人参三醇1.4％(W/V)；
水。
3.根据权利要求1或2所述的狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，所述氨基酸类组合物由以下组分组成：L-赖氨酸，4-羟基异亮氨酸，L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐，三者的重量比为：L-赖氨酸：4-羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐＝(1～1.5)：(0.8～1.2)：(0.3～0.6)。
4.根据权利要求3所述的狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，所述L-赖氨酸，4-羟基异亮氨酸，L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐三者的重量比为：L-赖氨酸：4-羟基异亮氨酸：L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐＝1.2：0.9：0.5。
5.根据权利要求1或2所述的狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。
6.根据权利要求1或2所述的狂犬疫苗稳定剂，其特征在于，所述水为注射用水。
7.权利要求1所述狂犬疫苗稳定剂的应用，其特征在于，包括如下步骤：
(1)BSR细胞传代、培养和扩大：将BSR细胞复苏后，按常规生产工艺传代和放大培养，以达到生产规模后用于接种狂犬病毒；
(2)病毒接种、培养和收获：将狂犬病毒按适当的比例接种到BSR细胞上复制增殖，待病毒滴度达到最佳水平时收获病毒细胞培养液；
(3)病毒灭活：收获的狂犬病毒经毒价检测合格后，用适当的灭活剂进行灭活；
(4)配苗：病毒灭活检验合格后，加入狂犬疫苗稳定剂。
8.根据权利要求7所述的狂犬疫苗稳定剂的应用，其特征在于，步骤(4)中，按照每100ml狂犬疫苗稳定剂中含有250～500UI效价狂犬疫苗的配比培苗。
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