CN104370908B - 一种以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(ii)金属配合物及其合成方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物及其合成方法和应用。所述的钴(II)金属配合物是取4,6-二-(2-吡啶基)-5,6-二氢-4H-1,5-二氮杂-苯并[de]环戊烷[b]-8-蒽酮和六水合氯化钴(II)，溶解于极性溶剂中，然后混合进行配位反应获得；具体可通过溶液法或溶剂热法合成。申请人通过考察它对多种人肿瘤细胞株的增殖抑制活性，发现其具有显著高于配体的体外抗肿瘤活性；而且进一步的荷瘤裸鼠的体内抑瘤实验显示，PPCA-Co(II)对于荷人肝癌细胞BEL-7402的裸鼠模型具有良好的抑瘤效果。上述钴(II)金属配合物的结构式如下式所示：。

Description

一种以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物及其合成方法和应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种以氧化异阿朴啡衍生物(即4,6-二-(2-吡啶基)-5,6-二氢-4H-1,5-二氮杂-苯并[de]环戊烷[b]-8-蒽酮)为配体的钴(II)配合物及其合成方法和应用。

背景技术

恶性肿瘤(癌症)是目前危及人类生命的最主要疾病之一，它的致死率大约占当今世界疾病的25％，约占所有疾病死亡率的第二位，仅次于心脑血管疾病。因受到工业规模扩大和环境污染等因素影响，我国癌症发生率目前正处于快速上升阶段。化学药物治疗(即化疗)是治疗恶性肿瘤的重要手段之一，临床应用普遍。研究合成新型化合物作为潜在抗癌剂是药物化学研究领域的重要内容和热点方向。

1965年，Rosenberg等发现顺铂具有明显的抗癌活性，开创了金属配合物作为新型抗癌药物的先河(Rosenberg,B.L.,etal.Nature,1969)；之后，卡铂、奥沙利铂等第二、三代铂类抗癌药物作为金属基抗癌药物的代表也先后被研发成功。然而，顺铂类药物目前存在着不同程度的毒副作用，有时会对临床用药产生深远的影响，而且其作用靶点和作用方式都比较单一，容易产生耐药性，对肿瘤细胞的选择性不高。这些不足限制了铂类药物的应用，促使研究人员进一步致力于开发药效更好、毒副作用更小的非铂类金属抗肿瘤药物。其中，Ott等合成了钴炔烃配合物Co-ASS及其衍生物Co-Sal、Co-Benz、Co-Prop，并研究发现其对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231都具有显著的增殖抑制活性(OttI.,etal.J.Med.Chem.,2005)。

氧化异阿朴啡碱是一类药理活性显著的生物碱，且大多表现出抗肿瘤活性。如中科院上海药物研究所对从北豆根中提取的得到四种氧化异阿朴啡碱进行了细胞毒性实验，结果发现其中两种化合物对人乳腺癌细胞株(MCF-7)和小鼠白血病细胞株(p388)有比较强的毒性，其IC₅₀值为6～30μmol/L。但天然的氧化阿朴啡碱含量很低，不利于深入研究开发，因此，有机合成氧化阿朴啡碱研究是研究重点。唐煌等设计合成了一系列9-氨基取代氧化异阿朴啡碱衍生物，并选择了HKESC-1(食管癌细胞系-1)，运用MTS法测试了氧化异阿朴啡碱衍生物对它们的增殖抑制活性。实验结果显示，部分化合物的半数抑制浓度(即IC₅₀值)达到2.0μmol/L。这类衍生物通过对DNA相邻碱基对间的插入结合而抑制DNA的复制来阻碍细胞的增殖，从而表现出抗肿瘤活性(TangH,etal.Eur.J.Med.Chem.,2009)。

申请人之前申请的公开号为CN103130803A的发明专利，公开了一种具有抗肿瘤活性的4,6-二-(2-吡啶基)-5,6-二氢-4H-1,5-二氮杂-苯并[de]环戊烷[b]-8-蒽酮的氧化异阿朴啡生物碱衍生物。但截至目前，以该化合物作为活性配体的金属配合物的合成及药理活性研究报道尚属空白。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物，以及它的合成方法和应用。

本发明所述的以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物，即以4,6-二-(2-吡啶基)-5,6-二氢-4H-1,5-二氮杂-苯并[de]环戊烷[b]-8-蒽酮为配体的钴(II)金属配合物，其具有如下式所示的结构：

上述配合物的合成方法为：取4,6-二-(2-吡啶基)-5,6-二氢-4H-1,5-二氮杂-苯并[de]环戊烷[b]-8-蒽酮(以下所述的H-PPCA为4,6-二-(2-吡啶基)-5,6-二氢-4H-1,5-二氮杂-苯并[de]环戊烷[b]-8-蒽酮的简称)和六水合氯化钴(II)，溶解于极性溶剂中，然后混合进行配位反应，即得到目标产物以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物(以下所述的PPCA-Co(II)为以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物的简称)。具体的合成路线如下：

上述以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物，可采用常压溶液法或高压溶剂热法进行合成。

当采用常压溶液法进行合成时，包括以下步骤：

1)按化学计量比称取4,6-二-(2-吡啶基)-5,6-二氢-4H-1,5-二氮杂-苯并[de]环戊烷[b]-8-蒽酮和六水合氯化钴(II)，溶于极性溶剂中，得到混合溶液；

2)所得混合溶液于20～120℃条件下反应；

3)所得反应液浓缩除去部分溶剂，静置，析出，分离出固体，即得到所述的以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物。

上述溶液法的步骤1)中，所述的极性溶剂可以是选自水、甲醇、乙醇、乙腈、二甲基亚砜和丙酮中的一种或它们中任意两种以上的组合；其中甲醇和乙醇的浓度分别可以是10～100％体积，优选15～90％体积。当极性溶剂的选择为它们中两种以上的混合物时，它们之间的配比可为任意配比。所述极性溶剂的用量可根据需要确定，通常情况下，以1mmol的H-PPCA计算，全部原料所用极性溶剂的总用量一般为25～90mL。在具体的溶解步骤中，可将H-PPCA和六水合氯化钴(II)分别用极性溶剂溶解(此时，用来溶解H-PPCA的极性溶剂最好选用甲醇、乙醇或丙酮，或者是它们中任意两种以上以任意比例的组合)，再混合在一起反应；也可将H-PPCA和六水合氯化钴(II)混合后再加极性溶剂溶解。

上述溶液法的步骤2)中，回流反应是否完全可采用薄层层析跟踪检测。反应优选是采用回流反应，回流反应优选是在60～80℃的回流温度范围内进行，上述优选条件下反应的时间通常控制在8～72h，此时即可获得80～95％的产率；也可根据需要将反应时间延长至72h以上。当反应在60℃以下的常温或加热条件下进行时，反应至完全需要更长的时间。

上述溶液法的步骤3)中，浓缩除去部分溶剂通常是指浓缩除去极性溶剂加入量的70～90％。

上述溶液法中，所述H-PPCA和六水合氯化钴(II)的物质的量之比通常为1.5～4：1。

当采用溶剂热法合成时，具体包括以下步骤：

a)按化学计量比称取4,6-二-(2-吡啶基)-5,6-二氢-4H-1,5-二氮杂-苯并[de]环戊烷[b]-8-蒽酮和六水合氯化钴(II)，溶于极性溶剂中，得到混合溶液；

b)所得混合溶液置于容器中，经液氮冷冻后抽至真空，熔封，然后于30～120℃条件下反应，即得到所述的以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物。

上述溶剂热法的步骤a)中，所述的极性溶剂可以是选自水、甲醇、乙醇、乙腈、二甲基亚砜、三氯甲烷和丙酮中的一种或它们中任意两种以上的组合；其中甲醇和乙醇的浓度分别可以是10～100％体积，优选20～85％体积。当极性溶剂的选择为它们中两种以上的混合物时，它们之间的配比可为任意配比。所述极性溶剂的用量可根据需要确定，通常情况下，以1mmol的H-PPCA计算，全部原料所用极性溶剂的总用量一般为2.5～15mL。在具体的溶解步骤中，可将H-PPCA和六水合氯化钴(II)分别用极性溶剂溶解(此时，用来溶解H-PPCA的极性溶剂最好选用甲醇、乙醇或丙酮，或者是它们中任意两种以上以任意比例的组合)，再混合在一起反应；也可将H-PPCA和六水合氯化钴(II)混合后再加极性溶剂溶解。

上述溶剂热法的步骤b)中，所述的容器通常为一端开口的厚壁玻璃管，混合溶液优选是在60～120℃条件下进行反应，在上述优选条件下反应的时间控制在12～72h时产率即可达到70～88％；也可根据需要将反应时间延长至72h以上。当反应在60℃以下的常温或加热条件下进行时，反应需要更长的时间才可获得较高的产率。

上述溶液法中，所述H-PPCA和六水合氯化钴(II)的物质的量之比通常为1.5～4：1。

本发明所述的合成方法中，所涉及的原料H-PPCA可参考公开号为CN103130803A的发明专利进行制备，也可自行设计合成。

本发明还包括上述以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明还进一步包括上述以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物为活性成份制备的抗肿瘤药物。

与现有技术相比，本发明提供了一种新的具有较强抗肿瘤活性的PPCA-Co(II)及其合成方法，申请人通过考察它对多种人肿瘤细胞株的增殖抑制活性，发现其具有显著高于配体的体外抗肿瘤活性；而且进一步的荷瘤裸鼠的体内抑瘤实验显示，PPCA-Co(II)对于荷人肝癌细胞BEL-7402的裸鼠模型具有良好的抑瘤效果。上述结果表明，本发明所述配合物PPCA-Co(II)具有较好的潜在药用价值，有望用于各种抗肿瘤药物的制备。

附图说明

图1为本发明实施例1制得的最终产物的红外谱图；

图2为本发明实施例1制得的最终产物的电喷雾质谱谱图；

图3为本发明实施例1制得的最终产物的X射线单晶衍射谱谱图；

图4为本发明实施例1制得的最终产物的紫外光谱谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述,以更好地理解本发明的内容,但本发明并不限于以下实施例。

实施例1：

准确称量物质的量为1mmol的H-PPCA与0.5mmol六水合硝酸钴(II)，将H-PPCA溶解于35mL的100％(体积)甲醇中，将六水合氯化钴(II)溶解于10mL的水中，两种溶液混合，在70℃下反应24h，浓缩蒸发除去大部分溶剂(溶剂加入量的85％)后，冷却至室温静置，析出深红色固体产物(产率95％)。

对所得深红色固体产物进行鉴定：

(1)、红外光谱，它的谱图如图1所示。

IR(KBr):3433,2973,2922,1641,1406,1251,1067,1008,894,779,587cm^-1.

(2)、电喷雾质谱，其谱图如图2所示。

ESI-MSm/z:905.2[M-H+Co+4DMSO+4CH₃OH+H₂O]⁺，其中M为H-PPCA的分子量。

(3)、元素分析结果，其下述表1所示：

表1：

(4)、X射线单晶衍射谱，其谱图如图3所示。

(5)、紫外-可见光谱，其谱图如图4所示。

因此，可以确定所得的深红色固体产物即为PPCA-Co(II)，其结构式如下：

实施例2

准确称量物质的量为2mmol的H-PPCA与0.5mmol六水合氯化钴(II)，将H-PPCA溶解于40mL的100％(体积)乙醇中，将六水合氯化钴(II)溶解于15mL的水中，两种溶液混合，在80℃下反应18h，浓缩蒸发除去大部分溶剂(溶剂加入量的83％)后，冷却至室温静置，析出深红色固体产物(产率85％)。产物经过红外光谱、电喷雾质谱、X射线单晶衍射和紫外光谱进行结构测定，确定为目标配合物PPCA-Co(II)。

实施例3

准确称量物质的量为1.5mmol的H-PPCA与0.5mmol六水合氯化钴(II)，将H-PPCA溶解于30mL的丙酮中，将六水合氯化钴(II)溶解于11mL的水中，两种溶液混合，在68℃下反应36h，浓缩蒸发除去大部分溶剂(溶剂加入量的78％)后，冷却至室温静置，析出深红色固体产物(产率90％)。产物经过红外光谱、电喷雾质谱、X射线单晶衍射和紫外光谱进行结构测定，确定为目标配合物PPCA-Co(II)。

实施例4

准确称量物质的量为1.6mmol的H-PPCA与0.5mmol六水合氯化钴(II),将H-PPCA溶解于60mL的由90％(体积)甲醇和水(90％(体积)甲醇和水体积比为10:1)组成的混合溶液中，将六水合氯化钴(II)溶解于20mL的90％(体积)乙醇中，两种溶液混合，在65℃下反应24h，浓缩蒸发除去大部分溶剂(溶剂加入量的85％)后，冷却至室温静置，析出棕色固体产物(产率87％)。产物经过红外光谱、电喷雾质谱、X射线单晶衍射和紫外光谱进行结构测定，确定为目标配合物PPCA-Co(II)。

实施例5

准确称量物质的量为0.1mmol的H-PPCA与0.05mmol六水合氯化钴(II)，将两者加入到一端封闭的20cmPyrex厚壁玻璃管中，再滴加入77％(体积)甲醇3.0mL，滴加水0.5mL，液氮冷冻混合液后，在抽真空条件下将其开口端熔封，混匀后置于80℃的烘箱中反应48h，得到深红色固体产物(产率79％)。产物经过红外光谱、电喷雾质谱、X射线单晶衍射和紫外光谱进行结构测定，确定为目标配合物PPCA-Co(II)。

实施例6

准确称量物质的量为0.2mmol的H-PPCA与0.05mmol六水合氯化钴(II)，将两者加入到一端封闭的20cmPyrex厚壁玻璃管中，再滴加入73％(体积)乙醇4.0mL，滴加水1.0mL，液氮冷冻混合液后，在抽真空条件下将其开口端熔封，混匀后置于75℃的烘箱中反应72h，得到深红色固体产物(产率73％)。产物经过红外光谱、电喷雾质谱、X射线单晶衍射和紫外光谱进行结构测定，确定为目标配合物PPCA-Co(II)。

实施例7

准确称量物质的量为0.15mmol的H-PPCA与0.05mmol六水合氯化钴(II)，将两者加入到一端封闭的20cmPyrex厚壁玻璃管中，再滴加入由100％(体积)甲醇和100％(体积)乙醇(100％(体积)甲醇和100％(体积)乙醇的体积比为3:2)组成的混合溶液3.5mL，滴加水0.3mL，液氮冷冻混合液后，在抽真空条件下将其开口端熔封，混匀后置于60℃的烘箱中反应36h，得到深红色固体产物(产率70％)。产物经过红外光谱、电喷雾质谱、X射线单晶衍射和紫外光谱进行结构测定，确定为目标配合物PPCA-Co(II)。

实施例8

准确称量物质的量为0.11mmol的H-PPCA与0.05mmol六水合氯化钴(II)，将两者加入到一端封闭的20cmPyrex厚壁玻璃管中，再滴加入由40％(体积)甲醇和90％(体积)丙酮(40％(体积)甲醇和90％(体积)丙酮的体积比为2:1)组成的混合溶液3.0mL，滴加水1.0mL，液氮冷冻混合液后在抽真空条件下将其开口端熔封，混匀后置于120℃的烘箱中反应28h，得到深红色固体产物(产率79％)。产物经过红外光谱、电喷雾质谱、X射线单晶衍射和紫外光谱进行结构测定，确定为目标配合物PPCA-Co(II)。

为了充分说明本发明所述的H-PPCA在制药中的用途，申请人对PPCA-Co(II)进行了抗肿瘤活性实验。

一、PPCA-Co(II)对多种人肿瘤细胞株的增殖抑制活性实验：

1、细胞株与细胞培养

本实验选用人肝癌细胞Hep-G2、人卵巢癌细胞SK-OV-3、人卵巢癌/顺铂耐药SK-OV-3/DDP、膀胱癌细胞T-24、人肝癌细胞BEL-7402和人正常肝细胞HL-7702等6种人细胞株。

所有细胞株均培养在含10wt％小牛血、100U/mL青霉素、100U/mL链霉素的RPMI-1640培养液内，置37℃含体积浓度5％CO₂孵箱中培养。

2、待测化合物的配制

所用的PPCA-Co(II)的纯度≥95％，将其DMSO储液用生理缓冲液稀释后配制成20μmol/L的终溶液，其中助溶剂DMSO的终浓度≤1％，测试该浓度下化合物对各种肿瘤细胞生长的抑制程度。

3、细胞生长抑制实验(MTT法)

(1)取对数生长期的肿瘤细胞，经胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培养液配制成浓度为5000个/ml的细胞悬液，以每孔190μl接种于96孔培养板中，使待测细胞密度至1000～10000孔(边缘孔用无菌PBS填充)；

(2)5％CO₂，37℃孵育24h，至细胞单层铺满孔底，每孔加入一定浓度梯度的药物10μL，每个浓度梯度设4个复孔；

(3)5％CO₂，37℃孵育48小时，倒置显微镜下观察；

(4)每孔加入10μL的MTT溶液(5mg/mLPBS，即0.5％MTT)，继续培养4h；

(5)终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入150μL的DMSO充分溶解甲瓒沉淀，振荡器混匀后，在酶标仪用波长为570nm，参比波长为450nm测定各孔的光密度值；

(6)同时设置调零孔(培养基、MTT、DMSO)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、DMSO)。

(7)根据测得的光密度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强。利用公式：

计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率，再以Bliss法分别计算各受试化合物对多种人肿瘤细胞株及人正常肝细胞株的IC₅₀值。其结果如下表2所示。

表2：H-PPCA、PPCA-Co(II)及顺铂对六种细胞株的IC₅₀值(μM)

从上表中所示的体外抗肿瘤活性测试结果来看，钴配合物PPCA-Co(II)对5种受测的人肿瘤细胞株的增殖抑制活性普遍高于配体H-PPCA，与对应配体相比，提高了4～20倍以上，表明该配合物通过将配体与钴(II)有机地配位结合，形成了显著的正协同效应。其中，配合物对肝癌细胞Hep-G2、膀胱癌细胞T-24及人卵巢癌/顺铂耐药细胞SK-OV-3/DDP的抑制作用较高，其IC₅₀值分别为5.2±0.9μM、3.7±0.6μM和0.9±0.2μM。尤其是该配合物能够很好地抑制人卵巢癌/顺铂耐药株SK-OV-3/DDP细胞的增殖，IC₅₀值低至0.9±0.2μM，与同为金属配合物的临床药物顺铂相比，增殖抑制活性提高了约70倍，也表明其与顺铂具有完全不同的抗肿瘤机制，这十分有利于克服多种肿瘤细胞对铂类药物的耐药性。此外，PPCA-Co(II)对其它四种肿瘤株(Hep-G2、SK-OV-3、T-24、BEL-7402)的增殖抑制活性也高于顺铂，显示出其抗肿瘤的广谱性和广泛适用性。

另一方面，PPCA-Co(II)对人正常肝脏细胞HL-7702的细胞毒性又非常小，不仅远低于顺铂(15.6±0.3μM)，也低于配体(64.5±0.4μM)。即使在最大给药浓度100μM下，其对正常肝细胞的抑制率仍低于50％，即肝细胞毒性很低，又使其具备了良好的抗肿瘤选择性。

二、荷瘤裸鼠的体内抑瘤实验

1、所用的药材

动物：品系：BALB/c-nu；等级：SPF级；周龄：5-6w；体重：18-20g；性别：雄性；来源：北京华阜康生物科技股份有限公司，生产许可证号：SCXK(京)2014-0004；动物实验场所：中国医学科学院放射医学研究所(天津，使用许可证号：SYXK(津)2014-0002)；饲养环境：SPF级，IVC独立通风系统；保持恒定温度(26±2℃)和湿度(40-70％)，开灯、熄灯各12h；饲料：选用SPF小鼠繁殖饲料,购自北京科澳协力饲料有限公司；主要试剂和器械：试剂：DMSO、0.9％生理盐水、75％医用酒精、4％多聚甲醛；器械：手术剪刀、眼科镊子、套管针，电子游标卡尺。

2、细胞培养

与前述细胞培养方法相同。

3、荷人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型的制备

首先，收集处于对数生长期的肝癌BEL-7402细胞，用无血清培养基细胞调制成5×10⁷个/mL活细胞浓度悬液。用1ml注射器抽取0.2mL悬液，约含1×10⁷个活细胞，然后接种于裸小鼠右腋窝皮下，待皮下肿瘤长至约1cm³时，作为皮下移植瘤模型制作的瘤源，在裸小鼠身上传代。其次，待BEL-7402在裸鼠身上传4代待其生长稳定后，选取肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤鼠，颈椎脱位处死，用75％医用酒精消毒动物皮肤，剖离组织块，除去坏死部分，将瘤组织剪成1.5mm³左右小块，用套管针接种于裸鼠右腋窝皮下。用电子游标卡尺测量移植瘤瘤径，待肿瘤体积生长至100～300mm³时，将动物随机分组。

4、药效实验

荷人肝癌BEL-7402瘤裸小鼠随机分成溶媒组、高剂量组、低剂量组和顺铂阳性对照组，每组7只动物。于分组当天开始腹腔注射给药，PPCA-Co(II)每天给药，顺铂隔天给药。每隔三天用电子游标卡尺测瘤径，量体重。于第17天颈椎脱位处死，剖离肿瘤，称重，拍照，计算抑瘤率。其中肿瘤体积计算公式：V＝a×b²/2，其中a为长径，b为短径；相对肿瘤体积RTV＝V_t/V₀，其中V_t为每次测量时的体积，V₀为分组时的体积；相对肿瘤增值率T/C％＝(T_RTV/C_RTV)×100％。其结果如下表3所示。

表3.PPCA-Co(II)对荷人肝癌BEL-7402细胞裸鼠的体内抑瘤结果

注：a为p<0.001,b为p<0.01,c为p<0.01.

从上表中所示的体内抑瘤实验结果来看，本文配合物PPCA-Co(II)对于荷人肝癌BEL-7402瘤裸鼠具有较好的增殖抑制活性，且表现出给药浓度依赖性。当PPCA-Co(II)的给药浓度为2.5mg/kg时，已经产生明显的抑瘤效果，瘤体积从空白组的约1816mm³下降到约1084mm³；而当PPCA-Co(II)的给药浓度达到5mg/kg时，无论从瘤体积的减小情况(V＝561.9±260.2mm³)，还是从相对肿瘤增殖率T/C(30.9％)来看，PPCA-Co(II)的抑瘤效果均达到更佳效果，且已超过临床化疗药物-顺铂在2mg/kg给药浓度下的抑瘤率(V＝602.8±331.2mm³，T/C＝33.4％)。

综上所述，本发明所述的基于氧化异阿朴啡碱衍生物的新型钴(II)配合物PPCA-Co(II)表现出优异的体外和体内抗肿瘤活性，以及良好的细胞毒性选择性，表明本发明以H-PPCA为配体合成新型抗肿瘤配合物PPCA-Co(II)的设计思路和合成方法是切实可行的。钴配合物所表现出的抗肿瘤活性使其具有了良好的潜在药用价值，有望用于各种抗肿瘤药物的制备。

Claims (5)

1.一种以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物，其结构式如下式所示：

2.权利要求1所述的以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物的合成方法，包括以下步骤：

1)按化学计量比称取4,6-二-(2-吡啶基)-5,6-二氢-4H-1,5-二氮杂-苯并[de]环戊烷[b]-8-蒽酮和六水合氯化钴(II)，溶于极性溶剂中，得到混合溶液；其中，所述的极性溶剂为选自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或它们中任意两种以上的组合；

2)所得混合溶液于20～120℃条件下反应；

3)所得反应液浓缩除去部分溶剂，静置，析出，分离出固体，即得到所述的以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物。

3.权利要求1所述的以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物的合成方法，包括以下步骤：

a)按化学计量比称取4,6-二-(2-吡啶基)-5,6-二氢-4H-1,5-二氮杂-苯并[de]环戊烷[b]-8-蒽酮和六水合氯化钴(II)，溶于极性溶剂中，得到混合溶液；其中，所述的极性溶剂为选自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或它们中任意两种以上的组合；

b)所得混合溶液置于容器中，经液氮冷冻后抽至真空，熔封，然后于30～120℃条件下反应，即得到所述的以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物。

4.权利要求1所述的以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

5.以权利要求1所述的以氧化异阿朴啡衍生物为配体的钴(II)金属配合物为活性成分制备的抗肿瘤药物。