CN104357532A - 一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，涉及一种花粉萌发能力的测定方法，特别是涉及一种用于甜瓜的花粉萌发能力的测定方法。其目的是为了提供一种耗时短、操作简单、成本低的快速有效测定甜瓜花粉活力的方法。本发明一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法包括以下步骤：制备培养液；花粉萌发培养；观察统计。本发明的一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，培养液制备方便，操作简单，耗时短，成本低，效果好。本发明用于甜瓜花粉萌发能力的测定领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种花粉萌发能力的测定方法，特别是涉及一种用于甜瓜的花粉萌发能力的测定方法。
背景技术
公元前4000-2000年，生物技术首次被人类利用，将某些雄性树的花粉选择性地授予雌性树来培育棕榈树。18世纪初实现了在不同谷物植物中成功杂交。花粉的离体培养开始于20世纪50年代，Tulecke首先培养银杏的成熟花粉粒得到愈伤组织。我国的研究始于20世纪70年代，将花粉离体培养和传统育种手段相结合先后培育出大批具有研究和应用价值的品种，如烟草、小麦、玉米、甜椒等。
在生物技术工作中，珍贵、稀有遗传种质的储备很重要，而成熟花粉包含着植物的全部遗传信息，花粉贮藏是有效利用珍稀种质的简捷、高效途径。为了进行杂交授粉和人工辅助授粉,通常需要早期采集和贮藏花粉，尤其是在杂交育种中，为解决亲本花期不一致和远距离杂交的问题，都需要进行花粉贮藏，需要对花粉活力进行测定，从而打破杂交亲本的空间和时间隔离，扩大杂交育种的范围，增加获得新品种的机会。
花粉活力是指花粉具有存活、生长、萌发或发育的能力。花粉寿命表示花粉在自然状态下的生命期限，是影响花粉活力的一个重要因素。花粉活力受自身遗传特性和外界因素的影响。
在亲本花期不一致或者远距离杂交的研究中，运输及贮藏花粉经常需要对花粉活力进行测定。现有技术对花粉活力的测定中，采用固体培养基培养操作相对复杂，不便于携带和制备，无法随时使用；而采用液体培养基，一般需要培养2小时左右才能进行观察和测定，且大多需要盖上盖玻片，盖盖玻片会导致花粉生长一段时间后因缺氧死亡，无法观察花粉从开始生长到释放内容物的全过程，如何快速的培养花粉萌发，也是目前急需解决的问题。
发明内容
本发明是为了解决以上技术问题，而提供的一种耗时短、操作简单、成本低的快速有效 测定甜瓜花粉活力的方法。
本发明一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，包括以下步骤：
一、培养液的制备；
二、将一滴步骤一中制备的培养液置于载玻片上，将花粉均匀的撒在培养液上；
三、将载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，放置在黑暗或自然光中培养20-30min；
四、镜检，计算萌发率；
其中，所述的培养液包括质量浓度为10％-15％的蔗糖、质量浓度为0.01％-0.05％的硼酸和水。
可选的，本发明一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法中所述步骤一中的培养基中还包括氯化钙，所述的氯化钙的浓度为0.01％-0.05％。
本发明一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法具有如下有益效果：
1、采用本发明的快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，只需培养20-30分钟即可得到结果，大大缩短了实验时间，该方法操作简单，更适用于实际的生产应用。
2、本发明的快速有效测定甜瓜花粉活力的方法中，培养基质的配制简单易操作，相比人工及大型机械等费用、成本低。
3、采用本发明的快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，可以实时观察，提前检测花粉活力，避免直接人工授粉后由于甜瓜花粉活性的缺失，而造成的制种经济损失。
下面结合实施例和验证试验对本发明的快速有效测定甜瓜花粉活力的方法作进一步说明。
具体实施方式
实施例1
本实施例一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，包括以下步骤：
一、制备培养液：称取125g蔗糖、0.2g硼酸，加水定容至1L，溶解，即制得培养液；
二、用胶头滴管将一滴步骤一中制备的培养液置于载玻片上，将花粉均匀的撒在培养液上；
三、将载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，放置在自然光中培养30min；
四、镜检，计算萌发率。
实施例2
本实施例一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，包括以下步骤：
一、制备培养液：称取140g蔗糖、0.5g硼酸，加水定容至1L，溶解，即制得培养液；
二、用胶头滴管将一滴步骤一中制备的培养液置于载玻片上，将花粉均匀的撒在培养液上；
三、将载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，放置在黑暗中培养20min；
四、镜检，计算萌发率。
实施例3
本实施例一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，包括以下步骤：
一、制备培养液：称取100g蔗糖、0.3g硼酸，加水定容至1L，溶解，即制得培养液；
二、用胶头滴管将一滴步骤一中制备的培养液置于载玻片上，将花粉均匀的撒在培养液上；
三、将载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，放置在自然光中培养25min；
四、镜检，计算萌发率。
实施例4
本实施例一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，包括以下步骤：
一、制备培养液：称取150g蔗糖、0.1g硼酸，加水定容至1L，溶解，即制得培养液；
二、用胶头滴管将一滴步骤一中制备的培养液置于载玻片上，将花粉均匀的撒在培养液上；
三、将载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，放置在自然光中培养30min；
四、镜检，计算萌发率。
实施例5
本实施例一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，包括以下步骤：
一、制备培养液：称取110g蔗糖、0.4g硼酸，加水定容至1L，溶解，即制得培养液；
二、用胶头滴管将一滴步骤一中制备的培养液置于载玻片上，将花粉均匀的撒在培养液上；
三、将载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，放置在黑暗中培养20min；
四、镜检，计算萌发率。
经镜检验证，实施例1-5中培养的花粉，萌发率高于95％，花粉管长度为花粉粒直径的6-8倍，花粉管生长的一致性高，适于萌发率的观察和计算。
验证试验
为了验证本发明快速有效测定甜瓜花粉活力的方法的效果，设计以下试验进行验证。
不同培养基配方对甜瓜花粉活力测定的影响
1、设计9组含蔗糖和硼酸的不同浓度梯度的培养培养液，编号1-9；3组添加不同浓度氯化钙的培养液，编号10-12；由于目前没有针对甜瓜花粉的培养基，也没有同属种花粉的培养基，所以选用花粉基本培养基作为对照：蔗糖浓度2％，硼酸浓度0.1％，氯化钙浓度0.1％(所述浓度均为质量浓度)。具体参数如表1所示。
表1对比试验中各成分的配比
2、滴一滴培养液在载玻片上，将花粉均匀的撒在培养基上。将载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，黑暗室温培养后用显微镜观察萌发情况，选择三个视野计算萌发率，取平均值。
具体操作步骤：按上表中数据称取蔗糖、硼酸和氯化钙，分别搅拌溶于水中，并编号1-12。用同样的方法配制对照用的培养基并标注CK。早晨七点之前摘取实验用的刚刚开放的甜瓜花(此时花粉活性最大)；用胶头滴管取13种培养基各一滴，滴在干净的载玻片上，将载玻片放在铺有湿润滤纸的培养皿中；将新鲜的甜瓜花粉均匀的撒在培养基上。在室温和光照条件下分别培养30分钟后记录花粉管的生长长度、萌发率和生长的一致性等实验结果，结果如表2所示。
表2不同配方培养液对花粉管长度、萌发率和生长一致性的影响
由表2可知，不同培养基之间结果有较大差异，随着蔗糖浓度的升高花粉管的生长速度逐渐加快；而硼酸浓度的增大则抑制花粉管的生长，当硼酸浓度≥0.1％时，花粉管的生长明显受到抑制；氯化钙对花粉管的生长没有太大影响。同时，由上表可知，采用目前的花粉基础培养基培养甜瓜花粉，完全不能萌发，说明花粉基础培养基并不适用于甜瓜花粉的培养。
不同光照条件对甜瓜花粉活力测定的影响
按上述方法，取三组7号培养基均匀的撒上花粉后分别放在室温下的强光、自然光和黑暗条件下培养半小时后观察实验结果。结果见表3。
表3不同光照条件对甜瓜花粉活力测定的影响
由表3可知，在强光条件下花粉管无法生长，自然光条件下长势最好，黑暗条件下生长速度稍慢。
不同培养温度对甜瓜花粉活力测定的影响
取三组7号培养基均匀的撒上花粉后分别放在自然光条件下的4℃、15℃和25℃的条件下培养30分钟后观察实验结果。结果见表4。
表4不同培养温度对甜瓜花粉活力测定的影响
由表4可以看出，在4℃时花粉基本没有萌发，随着温度的升高花粉管的生长速度逐渐增大，在室温时花粉管生长速度较快已经达到判断花粉活力的要求，在生产应用上无需再升高温度培养。
不同培养时间对甜瓜花粉活力测定的影响
在7号培养基25℃自然光条件下培养期间连续观察生长情况可以看到，大概十分钟左右花粉粒开始萌发长出花粉管，20分钟时花粉管长到2-3倍花粉直径，30分钟时花粉管长度达到8倍左右花粉直径。由此可知，最佳的培养时间为20-30min。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式作出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，其特征在于包括以下步骤：
一、培养液的制备；
二、将一滴步骤一中制备的培养液置于载玻片上，将花粉均匀的撒在培养液上；
三、将载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，放置在黑暗或自然光中培养20-30min；
四、镜检，计算萌发率；
其中，所述的培养液包括质量浓度为10％-15％的蔗糖、质量浓度为0.01％-0.05％的硼酸和水。
2.根据权利要求1所述的一种快速有效测定甜瓜花粉活力的方法，其特征在于：所述步骤一中的培养基中还包括氯化钙，所述的氯化钙的浓度为0.01％-0.05％。
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