CN104357434A - 一种胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶及其制备方法。它是一种松香基三元共聚物化学名称为马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物。胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶是以胺基修饰的松香基大孔吸附树脂为载体，以戊二醛为交联剂制备而成的固定脂肪酶。该固定酶在重复使用10次后仍有90%左右的相对酶活性。本发明固定化脂肪酶不仅能在水相中催化酯类水解，而且还能在有机相中催化酯合成和酯交换等，可以广泛应用于油脂水解、皮革加工和造纸工业等领域。

Description

一种胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶及其制备方法

技术领域

本发明涉及化学固定化酶的制备方法技术领域，具体地说是涉及胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶及其制备方法。

背景技术

酶是一种应用广泛的生物催化剂，游离酶不能重复使用且价格昂贵，在工业化生产中难以实现连续化，因此固定酶的研究成为重点。在固定酶应用中对载体的要求一般有以下几点：a.载体表面应具有化学活性基团，b.载体机械强度高、比表面积大，c.载体廉价易得。d.载体对微生物的抵抗性好。常用的酶的固定化方法可分为物理固定法与化学固定法两类，进一步可以分为：吸附法、包埋法、共价法、交联法。

而具有着菲环骨架的网状胺化树脂不仅结构稳定而且来源丰富，将它应用于固定化酶符合我国近年来一直提倡的可持续发展的路线。本申请中的马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(松香基大孔吸附树脂)的制备方法记载在专利号：ZL201010100733.4，名称为《一种含松香基的三元共聚物及其制备方法》的专利文件中。

发明内容

本发明的目的是提供一种原料易得，价格低廉、稳定性好、机械强度高的载体—马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物(胺基修饰的松香基大孔吸附树脂)，并用该载体以戊二醛为交联剂固定脂肪酶，即一种胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶及其制备方法。

本发明的技术方案如下：

一种胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶，它的化学名称为：马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物固定化脂肪酶，它的初始酶活性为18.0～21.0mg.g^-1.min^-1，其在重复使用10次后仍保持着80～95％的相对酶活性。

胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备方法是将作为载体的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂加入到0.1～2.5mg/mL的脂肪酶液中，树脂与脂肪酶液的质量比为1:1～20，然后加入0.5～2.5％的交联剂，交联剂与脂肪酶液的体积比为1:1；置于温度为5～30℃的恒温摇床中振摇，交联反应0.5～3.0h；最后抽滤即得胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶。

作为优选，所述交联剂为戊二醛，所述恒温摇床振速控制在100～150r/min。

上述制备方法中采用的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂的化学名称为：马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物，为微黄色的球状颗粒，球状颗粒表面粗糙，凹凸不平，呈现孔洞和凹坑状。

本申请中胺基修饰的松香基大孔吸附树脂的制备方法包括如下步骤：

(1)将马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物即松香基大孔吸附树脂和环己烷按质量比为1:1～8置于反应容器中；在冰浴中，在搅拌状态下，向反应容器滴加二氯亚砜，马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物与SOCl₂质量比为1:1～8，滴加完毕后，继续搅拌10～20min；

(2)将步骤(1)的反应体系采用减压蒸馏装置进行减压蒸馏，蒸出环己烷和SOCl₂，得到酰化松香基大孔吸附树脂，然后用环己烷洗涤酰化松香基大孔吸附树脂，最后置于75～85℃的烘箱中烘36～60h后存放于密闭干燥器里；

(3)将干燥后的酰化松香基大孔吸附树脂中加入1,4-二氧六环作为溶剂，酰化松香基大孔吸附树脂和1,4-二氧六环的质量比为1:1～20；接着向容器中加入乙二胺，酰化松香基大孔吸附树脂和乙二胺的质量比为1:0.5～5；搅拌反应0.5～1.5h，真空抽滤并用1,4-二氧六环洗涤，即得到胺基修饰的松香基大孔吸附树脂。

所述步骤(2)中的减压蒸馏的压力为-0.09MPa～-0.1MPa，温度为室温，蒸馏时间20～30min；用环己烷洗涤酰化松香基大孔吸附树脂次数为2～5次；所述步骤(3)中用1,4-二氧六环洗涤的次数为2～5次。

本发明的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备方法可以运用到固定化淀粉酶中。

本发明的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的用途在于它在水相中催化酯类水解、有机相中催化酯合成和酯交换反中应用，同时可以广泛应用于油脂水解、皮革加工和造纸工业等领域。

本发明与现有技术比较具有以下优点：

1)本发明制备的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂含有三元菲环骨架，具有较好的刚性，同时具有较好的机械稳定性；

2)本发明制备的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶是通过共价键固定，牢固；而且在重复使用10次后仍有95～80％的相对酶活性。

3)原料易得，价格低廉，有应用前景，本发明的固定化脂肪酶能在有机相中催化酯合成和酯交换等，可以广泛应用于油脂水解、皮革加工和造纸工业等领域。

附图说明

图1是本发明的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶重复使用的相对酶活性图；

图2是胺基修饰的松香基大孔吸附树脂电镜扫描图，a图是在放大300倍下的表面电镜扫描图；b图是在放大500倍下的表面电镜扫描图；

图3是胺基修饰的松香基大孔吸附树脂的热重分析图；

图4是胺基修饰的松香基大孔吸附树脂重复使用十次之后的热重分析图。

具体实施例

下面通过具体实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例仅仅是用于本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的的构思前提下对本发明的制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物即是胺基修饰的松香基大孔吸附树脂；马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物即是松香基大孔吸附树脂；马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物固定化脂肪酶即是胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶(实施例中简称固定酶)。

实施例1

一、本发明产品制备

1.马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物(胺基修饰的松香基大孔吸附树脂)的制备：

1)将烘干后的马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(松香基大孔吸附树脂)和环己烷，置于带有球形冷凝管、尾气吸收装置、恒压滴液漏斗和温度计的250mL的三颈瓶中，松香基大孔吸附树脂和环己烷的质量比为1:1～8，冰浴下，向三颈瓶缓慢滴加二氯亚砜，松香基大孔吸附树脂与SOCl₂质量比为1:1～8，搅拌，约30min滴完，继续搅拌15min。

2)采用减压蒸馏装置对步骤1)的反应体系进行减压蒸馏，压力为-0.09MPa，蒸馏时间为20～25min；蒸出多余的环己烷和SOCl₂，得到酰化松香基大孔吸附树脂，最后用环己烷洗涤酰化松香基大孔吸附树脂4次，置于80℃烘箱中干燥48h后存放于密闭干燥器里。

3)取酰化松香基大孔吸附树脂于单颈瓶中，向其中加入1,4-二氧六环作为溶剂，酰化松香基大孔吸附树脂和1,4-二氧六环质量比为1:1～20，接着向单颈瓶中加入乙二胺，酰化松香基大孔吸附树脂和乙二胺的质量比为1:0.5～2，搅拌反应1h，真空抽滤并用1,4-二氧六环洗涤三次，即得到胺基修饰的松香基大孔吸附树脂，真空干燥保存。

2.马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物固定化脂肪酶(胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶)的制备：

取作为载体的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂加入到10mL0.1～2.5mg/mL的脂肪酶液中，接着加10mL 0.5～2.5％的戊二醛，在温度为15℃恒温摇床中，以120r/min振速，振摇2h，抽滤树脂，即得胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶。

二、本发明产品的性能测试

1.胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的活性测定

1)聚乙烯醇橄榄油乳化液：准确称取3g聚乙烯醇，放入装有150mL馏水的烧杯中加热溶解，冷却后标定至150mL，得到2％的聚乙烯醇溶液，移入500mL的烧瓶中，并加入50mL的橄榄油，用高速搅拌机搅拌30min左右，得到乳白色聚乙烯醇橄榄油乳化液，放入4℃的冰箱中备用，每次使用前先用高速匀浆机搅拌均匀后再使用。

2).0.05mol/L NaOH标准液：取分析纯NaOH 40g加双蒸水稀释至1000ml，用标准邻苯二甲酸氢钾标定后备用，使用前稀释至0.05mol/L。

3).1％乙醇-酚酞指示剂：称1.0g酚酞溶于乙醇，用乙醇稀释至100ml存于棕色试剂瓶备用。

4).磷酸氢二钠—磷酸二氢钾缓冲液：甲液：称取17.01g的磷酸氢二钠，溶解并定容至500mL的容量瓶中备用。乙液：称取89.54g的磷酸二氢钾，溶解并定容至1000mL的容量瓶中备用。将甲液和乙液按照不同的体积混合，得到不同pH值的缓冲液。

5).脂肪酶溶液的配制：称取5g粗脂肪酶粉溶解在100ml蒸馏水中，用离心机离心，取上清液，即为实验所用酶液。

6).脂肪酶的测定方法采用橄榄油乳化液法：

游离酶的活性测定：取离心后的粗酶溶液上层液10mL加入到三角烧瓶中，再加入4mL的乳化液，放入温度为37℃恒温水浴锅中反应10min。取出立即加入15mL的95％的乙醇溶液，再加入20mL蒸馏水和三滴乙醇酚酞溶液，用0.05mol/L的NaOH溶液滴定至微红，并达到pH计预定滴定完成值。30s内不退色。以单位时间的固定酶在1分钟内催化橄榄油乳化液生成的脂肪酸量表示酶活性：mg/mL.1min。

固定化酶的活性测定：取0.5g含水固定化酶于反应器中，加入10mL缓冲液，测定方法与游离酶相同，以单位质量的固定酶在1分钟内催化橄榄油乳化液生成的脂肪酸量表示酶活性：mg/g.1min。

7).马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物固定化脂肪酶的重复使用

分别称取0.2g，40目的马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物置于反应器中，加入pH为7.38的磷酸缓冲液，T＝37℃水浴中按橄榄油乳化液测定脂肪酶法测定脂肪酶的活性，用2mL pH为7.38的磷酸缓冲液滤洗两次，收集反应液检测酶活性。滤柱中继续加入5mL预热的pH为7.38的磷酸缓冲液，4mL预热的聚乙烯橄榄油乳化液，反应10min后洗滤收集反应液，重复以上操作10次固定化脂肪酶做重复性试验。以某一单位时间内生成的最大脂肪酸量的活性表示100，用第n次单位时间内生成的脂肪酸量与最大量的比值表示酶的相对活性，得到胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的重复使用的相对酶活性图(如图1所示)；由图可知，固定化酶在第一次使用后酶活略有降低，之后连续保持在98.33％，当到第5次，酶活性又略微下降，连续保持在96.67％，第10次后酶活依然保持在95％左右，说明本发明的固定酶具有很高的重复使用性。

2、胺基修饰的松香基大孔吸附树脂表面电镜扫描

将本发明的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂进行电镜扫描，得到图2，胺基修饰的松香基大孔吸附树脂的表面扫描电镜图。a图是胺基修饰的松香基大孔吸附树脂在放大300倍下的电镜(SEM)扫描图片；b图是胺基修饰的松香基大孔吸附树脂在5000倍条件的电镜(SEM)扫描图片。由图可知马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物表面凹凸不平，孔洞和凹坑，这些孔洞和凹坑形状各异、紧密排列，呈现出一种表面粗糙，孔量丰富的结构。

3、产品的热重分析

将本发明的马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物和马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物固定化脂肪酶重复使用十次之后进行热重分析，分别得到图3和图4。从图3可知，在200-600℃之间，马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物Ⅳ经历了3次较明显的分解过程，300℃为聚合物载体Ⅳ起始分解温度，550℃为终止分解温度，说明其具有着较好的热稳定性能。从图4可知，马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物固定化脂肪酶重复使用十次之后，在小于100℃时已经有一部分物质发生较明显的的挥发现象，这部分物质可能是载体上固定的酶或者残留的酶催化反应物；300℃时，发生比较明显的失重现象，该温度为始分解温度，终止分解温度为550℃。

4、本发明产品的元素分析

测定马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物、马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物固定化脂肪酶和脂肪酶三种物质中的C、H、N元素的百分含量，结果见表1.

表1 元素分析表

由表1可知，马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物中氮元素的含量为2.403％，马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物固定化脂肪酶中的氮元素的含量为5.630％。据氮元素守恒，计算出1g载体固定上0.34g脂肪酶。是因为酶固定到载体上。在固定化脂肪酶之后N元素含量都增高，是因为酶固定到载体上。

实施例2

一、本发明产品制备

1.胺基修饰的松香基大孔吸附树脂的制备：

1)将称取5g烘干后的松香基大孔吸附树脂和30mL环己烷，置于带有球形冷凝管、尾气吸收装置、恒压滴液漏斗和温度计的250mL的三颈瓶中，冰浴下，向三颈瓶缓慢滴加2mL二氯亚砜，搅拌，约30min滴完，继续搅拌15min。

2)采用减压蒸馏装置对步骤1)的反应体系进行减压蒸馏，压力为-0.1MPa，蒸馏时间为25～30min；蒸出多余的环己烷和SOCl₂，得到酰化松香基大孔吸附树脂，最后用环己烷洗涤酰化松香基大孔吸附树脂4次，置于80℃烘箱中干燥48h后存放于密闭干燥器里。

3)取5g酰化松香基大孔吸附树脂于单颈瓶中，向其中加入20mL 1,4-二氧六环作为溶剂，接着向单颈瓶中加入溶有1ml乙二胺的10ml 1.4-二氧六环的溶液，搅拌反应1h，真空抽滤并用1,4-二氧六环洗涤三次，即得到胺基修饰的松香基大孔吸附树脂，真空干燥保存。

2.胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备：

取2g胺基修饰的松香基大孔吸附树脂加入到10mL 0.5mg/mL的脂肪酶液中，接着加10mL 1.0％的戊二醛，在温度为15℃恒温摇床中，以60r/min振速，振摇2h，抽滤树脂，即得胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶。

二、本发明产品的性能测试

性能测试方法同实施例1，经测定产品初始酶活性为18.16mg.g^-1.min^-1，重复使用5次后相对酶活性为80.90％。

实施例3

一、本发明产品制备

1.胺基修饰的松香基大孔吸附树脂的制备：

1)将称取5g烘干后的松香基大孔吸附树脂和40mL环己烷，置于带有球形冷凝管、尾气吸收装置、恒压滴液漏斗和温度计的250mL的三颈瓶中，冰浴下，向三颈瓶缓慢滴加10mL二氯亚砜，搅拌，约30min滴完，继续搅拌15min。

2)采用减压蒸馏装置对步骤1)的反应体系进行减压蒸馏，压力为-0.09MPa，蒸馏时间为20～25min；蒸出多余的环己烷和SOCl₂，得到酰化松香基大孔吸附树脂，最后用环己烷洗涤酰化松香基大孔吸附树脂5次，置于85℃烘箱中干燥36h后存放于密闭干燥器里。

3)取5g酰化松香基大孔吸附树脂于单颈瓶中，向其中加入30mL 1,4-二氧六环作为溶剂，接着向单颈瓶中加入溶有2ml乙二胺的10ml 1.4-二氧六环的溶液，搅拌反应1h，真空抽滤并用1,4-二氧六环洗涤五次，即得到胺基修饰的松香基大孔吸附树脂，真空干燥保存。

2.胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备：

取1g胺基修饰的松香基大孔吸附树脂加入到10mL 1.5mg/mL的脂肪酶液中，接着加10mL 2.0％的戊二醛，在温度为15℃恒温摇床中，以100r/min振速，振摇2h，抽滤树脂，即得胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶。

二、本发明产品的性能测试

性能测试方法同实施例1，经测定产品初始酶活性为18.94mg.g^-1.min^-1，重复使用10次后相对酶活性为83％。

实施例4

一、本发明产品制备

1.胺基修饰的松香基大孔吸附树脂的制备：

1)将称取5g烘干后的松香基大孔吸附树脂和50mL环己烷，置于带有球形冷凝管、尾气吸收装置、恒压滴液漏斗和温度计的250mL的三颈瓶中，冰浴下，向三颈瓶缓慢滴加25mL二氯亚砜，搅拌，约30min滴完，继续搅拌15min。

2)采用减压蒸馏装置对步骤1)的反应体系进行减压蒸馏，压力为-0.09MPa，蒸馏时间为20～25min；蒸出多余的环己烷和SOCl₂，得到酰化松香基大孔吸附树脂，最后用环己烷洗涤酰化松香基大孔吸附树脂3次，置于75℃烘箱中干燥60h后存放于密闭干燥器里。

3)取5g酰化松香基大孔吸附树脂于单颈瓶中，向其中加入40mL 1,4-二氧六环作为溶剂，接着向单颈瓶中加入溶有8ml乙二胺的10ml 1.4-二氧六环的溶液，搅拌反应1h，真空抽滤并用1,4-二氧六环洗涤三次，即得到胺基修饰的松香基大孔吸附树脂，真空干燥保存。

2.胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备：

取0.5g胺基修饰的松香基大孔吸附树脂加入到10mL 2.5mg/mL的脂肪酶液中，接着加10mL 2.5％的戊二醛，在温度为15℃恒温摇床中，以160r/min振速，振摇2h，抽滤树脂，即得胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶。

二、本发明产品的性能测试

性能测试方法同实施例1，经测定产品初始酶活性为18.33mg.g^-1.min^-1，重复使用10次后相对酶活性为80.1％。

实施例5

一、本发明产品制备

1.胺基修饰的松香基大孔吸附树脂的制备：

1)将称取5g烘干后的松香基大孔吸附树脂和50mL环己烷，置于带有球形冷凝管、尾气吸收装置、恒压滴液漏斗和温度计的250mL的三颈瓶中，冰浴下，向三颈瓶缓慢滴加6mL二氯亚砜，搅拌，约30min滴完，继续搅拌15min。

2)采用减压蒸馏装置对步骤1)的反应体系进行减压蒸馏，压力为-0.09MPa，蒸馏时间为20～25min；蒸出多余的环己烷和SOCl₂，得到酰化松香基大孔吸附树脂，最后用环己烷洗涤酰化松香基大孔吸附树脂4次，置于80℃烘箱中干燥48h后存放于密闭干燥器里。

3)取5g酰化松香基大孔吸附树脂于单颈瓶中，向其中加入20mL 1,4-二氧六环作为溶剂，接着向单颈瓶中加入溶有2ml乙二胺的10ml 1.4-二氧六环的溶液，搅拌反应1h，真空抽滤并用1,4-二氧六环洗涤三次，即得到胺基修饰的松香基大孔吸附树脂，真空干燥保存。

2.胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备：

取0.5g胺基修饰的松香基大孔吸附树脂加入到10mL 1.0mg/mL的脂肪酶液中，接着加10mL 1.5％的戊二醛，在温度为15℃恒温摇床中，以120r/min振速，振摇2h，抽滤树脂，即得胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶。

二、本发明产品的性能测试

性能测试方法同实施例1，经测定产品初始酶活性为20.83mg.g^-1.min^-1，重复使用10次后相对酶活性为94.93％。

Claims (10)

1.一种胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶，其特征在于：该酶的初始酶活性为18.0~21.0mg.g^-1.min^-1，其在重复使用10次后保持着80~95%的相对酶活性。

2.一种如权利要求1所述的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于：将作为载体的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂加入到0.1~2.5mg/mL的脂肪酶液中，树脂与脂肪酶液的质量比为1:1~20，然后加入0.5~2.5%的交联剂，交联剂与脂肪酶液的体积比为1 : 1；置于温度为5~30℃的恒温摇床中振摇，交联反应0.5~3.0h；最后抽滤即得胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶。

3.根据权利要求2所述的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于：所述交联剂为戊二醛。

4.根据权利要求2所述的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于：胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的初始酶活性18.0~21.0mg.g^-1.min^-1，其在重复使用10次后保持着80~95%的相对酶活性。

5.根据权利要求2所述的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于：所述恒温摇床振速控制在100~150 r/min。

6.根据权利要求2~5任一所述的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于：所述胺基修饰的松香基大孔吸附树脂的化学名称为：马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物的胺化物，其为微黄色的球状颗粒，球状颗粒表面粗糙，凹凸不平，呈现孔洞和凹坑状。

7.根据权利要求6所述的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于：所述胺基修饰的松香基大孔吸附树脂的制备方法包括如下步骤：

（1）将马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物即松香基大孔吸附树脂和环己烷按质量比为1:1~8置于反应容器中；在冰浴中，在搅拌状态下，向反应容器滴加二氯亚砜，马来松香丙烯酸乙二醇酯-(甲基)丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物与SOCl₂质量比为1:1~8，滴加完毕后，继续搅拌10~20min；

（2）将步骤（1）的反应体系采用减压蒸馏装置进行减压蒸馏，蒸出多余的环己烷和SOCl₂，得到酰化松香基大孔吸附树脂，然后用环己烷洗涤酰化松香基大孔吸附树脂，最后置于75~85℃的烘箱中烘36~60h后存放于密闭干燥器里；

（3）将干燥后的酰化松香基大孔吸附树脂中加入1,4-二氧六环作为溶剂，酰化松香基大孔吸附树脂和1,4-二氧六环的质量比为1:1~20；接着向容器中加入乙二胺，酰化松香基大孔吸附树脂和乙二胺的质量比为1:0.5~5；搅拌反应0.5~1.5h，真空抽滤并用1,4-二氧六环洗涤，即得到胺基修饰的松香基大孔吸附树脂。

8.根据权利要求6所述的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的减压蒸馏的压力为-0.09 MPa ~ -0.1MPa，温度为室温，蒸馏时间20~30min；用环己烷洗涤酰化松香基大孔吸附树脂次数为2~5次；所述步骤（3）中用1,4-二氧六环洗涤的次数为2~5次。

9.根据权利要求2所述的胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于：该方法运用到固定化淀粉酶中。

10.胺基修饰的松香基大孔吸附树脂固定化脂肪酶的用途，其特征在于：它在水相中催化酯类水解、有机相中催化酯合成和酯交换反应中应用。