CN104337799A - 甘草查尔酮a的抗菌用途 - Google Patents

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郝淮杰
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郑新
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Abstract

本发明公开了甘草查尔酮A的抗菌用途。通过实验，证明了甘草查尔酮A的抗菌作用，可以用于制备抗菌药物、食品添加剂或化妆品等。

Description

甘草查尔酮A的抗菌用途
技术领域
本发明涉及甘草查尔酮A的一种抗菌用途，具体地涉及甘草查尔酮A在制备抗菌药物或食品中的用途。
背景技术
查尔酮类化合物属于中草药的一种化学成分，主要存在于甘草，红花，广豆根等药用植物中，也是现代工业中比较常用的一类黄色素。查尔酮类化合物由于其结构特点而具有较大的柔性，因此表现出了广泛的药理学作用，主要包括抗肿瘤、清除氧自由基以及抗氧化以及抗菌作用等，其抗菌作用尤其针对革兰氏阳性菌，而且某些化合物的作用效果与庆大霉素作用相当。
从甘草根中提取出来的查尔酮又可以细分为以下几种新的组分：刺查尔酮，查尔酮A，查尔酮B，查尔酮C以及查尔酮D，具体结构见附图1。这些查尔酮与之前的传统意义上的查尔酮又有所不同，因为其在2’-位置上的氧的缺失，被命名为刺甘草查尔酮。1975年，甘草查尔酮A(Licochalcone A，分子式C21H2204，分子量338.39698)首次被报道，具有广泛的生物学活性。有研究表明，查尔酮A对食物中的污染的微生物有比较强烈的抑制作用，而且查尔酮A可以抵抗高温。但查尔酮A对热处理过的由L-丙氨酸诱导产芽孢菌产生的芽孢没有抑制作用。与阳离子抗生物肽在3％(wt/vol)氯化钠或者20ug/ml蛋白酶存在的情况下失去抗菌的活性相比较，查尔酮A仍然具有抗菌活性。甘草查尔酮A的抗链球菌尤其是抗变形链球菌及猪链球菌作用未见报道。
发明内容
本发明公开了甘草查尔酮A的抗菌用途，尤其是在抗链球菌和葡萄球菌的用途。甘草查尔酮A可以用于制备抗菌药物，也可以制备抗菌食品或食品添加剂，制备抗菌化妆品。
本发明公开的甘草查尔酮A的抗菌用途中的细菌为链球菌。其中链球菌可为导致人类和动物疾病的链球菌，如A族链球菌、变形链球菌、肺炎链球菌或猪链球菌。本发明在公开的甘草查尔酮A的抗菌用途中的细菌可以为葡萄球菌，特别是金黄色葡萄球菌。
本发明通过实验证明甘草查尔酮A对上述细菌有广泛、强烈的抑制作用。首先进行了培养基、甘草查尔酮A溶液、MIC板和接种物的制备，然后对甘草查尔酮A的抗菌作用进行观察。实验结果显示甘草查尔酮A对所实验的链球菌、葡萄球菌有较好的抑菌作用。
将甘草查尔酮A作为活性成分原料，添加适当的辅料，通过适当制剂工艺，可以制成相应的药物剂型，制备抗菌药物，也可以通过适当的食品工艺，制备食品添加剂，或通过化妆品制备工艺，制备有抗菌作用的化妆品，不限于以上所述，可以利用其抗菌作用，将甘草查尔酮A用于其他任何方面。
附图说明
图1为查尔酮的化学分子式示意图，其中l.查尔酮A 2查尔酮B 3查尔酮C 4查尔酮D 5刺查尔酮 6查尔酮。
图2为甘草查尔酮A对变形链球菌(Streptococcus mutans ATCC55677)的生长抑制作用图。过夜培养的变形链球菌菌株S.mutans ATCC55677以1％的比例接种到新培养基中，分别在接种后0h，4h和6h后加入不同浓度的查尔酮A溶液(0.5MIC，MIC)，每隔1h观察记录细菌的OD600。
图3为甘草查尔酮A对A族链球菌GAS G519的生长抑制作用图。过夜培养的A族链球菌菌株GAS G519以1％的比例接种到新培养基中，并加入不同浓度的甘草查尔酮A，继续培养11h，每隔1h测量一次OD600。
图4为甘草查尔酮A对猪链球菌血清2型的生长抑制作用图。过夜培养的猪链球菌血清2型菌株05ZYH33，以1％的比例接种到新培养基中，每隔1h测量一次0D600，继续培养4.5h后，加入不同浓度的甘草查尔酮A(0，0.5MIC，MIC)，然后继续培养5h。
具体实施方式
实施例  甘草查尔酮A的抗菌作用
一、实验材料
1.菌株：变形链球菌(Streptococcus mutans)，购自ATCC，编号为ATCC55677；猪链球菌血清2型05ZYH33(Streptococcus suis serotype2)(PLoS ONE2(3)：e315)，购自中国CDC传染病预防控制所；A族链球菌中国分离株(GASG519)(Journal of Clinical Microbiology，2009，47(3)：715-720)，购自中国CDC传染病预防控制所。
2.实验器材
甘草查尔酮A：购自Sigma公司；THB培养基：购自BD公司；酵母提取物，蛋白胨：购自OXOID公司。CO2孵箱：日本三洋公司，生物安全柜：美国Thermo公司。
二.实验方法
1.液体培养基的制备
THB培养基(30gTHB每升)或者LB(10g氯化钠、5g酵母提取物、10g蛋白胨每升)，113℃15min高压灭菌后4℃冰箱保存待用。
2.甘草查尔酮A溶液的制备
将甘草查尔酮A用无水乙醇配成12mg/ml的母液，无菌条件下依照试验需要用液体培养基进行倍比稀释。
3.半数抑菌浓度(MIC50)板的制备
在生物安全柜内无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的甘草查尔酮A溶液分别加到无菌的96孔培养板中，第1至第9孔加药液，每孔100μl，第10孔加100μl的液体培养基作为对照。
3.接种物的制备
将过夜复苏培养的链球菌菌液按1％接种量接种到5mlTHB液体培养基中，37℃5％CO2培养箱中静置培养。细菌长至对数生长中期，其菌量大概为109CFU/m1数量级时备用。
4.甘草查尔酮A抗菌作用观察
将培养接种物菌液用培养基十倍稀释，100μl/孔加到对应的含甘草查尔酮A溶液与96孔培养板中，密封后置37℃5％CO2培养箱中静置孵育24h，观察甘草查尔酮A溶液的抗菌作用。
5.结果判断
药物和菌共孵育24h后，各孔取100μl涂THB或LB平板，37℃5％CO2培养箱中静置培养24h，以完全无菌生长的最低药物浓度定为MIC。当阳性对照孔(即不含药物)内细菌明显生长试验才有意义。
三.实验结果
如表1所示，半数抑菌浓度平板实验证实甘草查尔酮A对变形链球菌、猪链球菌血清2型，A族链球菌均有明显的抑制效果，最低抑菌浓度在μg/ml水平。然后分别测试甘草查尔酮A对变形链球菌菌株ATCC55677(图2)，A族链球菌G519(图3)以及猪链球菌菌株05ZYH33(图4)生长抑制情况，这些细菌的生长速度在加入甘草查尔酮A后明显受到抑制。
表1.甘草查尔酮A对各菌株的最低抑制浓度(MIC)
四.实验结论：
从上面实验结果可以看出，甘草查尔酮A对变形链球菌、猪链球菌血清型2型及A族链球菌等多种链球菌均具有较好的抗菌抑菌活性。利用甘草查尔酮A的抗菌作用，作为活性成分，通过药物制剂技术，加上药学上的辅料，可以制备抗菌药物；也可以通过食品工艺，制备抗菌食品添加剂或抗菌食品；也可以通过化妆品制备技术，制备抗菌化妆品。不限于此，利用甘草查尔酮A的该抗菌作业可以用作其他可能的方面。

Claims (7)

1.甘草查尔酮A在制备抗菌药物中的用途。
2.甘草查尔酮A在制备抗菌食品添加剂中的用途。
3.甘草查尔酮A在制备抗菌化妆品中的用途。
4.根据权利要求1到3任一所述用途，其中细菌为链球菌。
5.根据权利要求4所述用途，其中细菌为变形链球菌。
6.根据权利要求4所述用途，其中细菌为猪链球菌。
7.根据权利要求4所述用途，其中细菌为A族链球菌。
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