CN104304007B - 一种铁包金的离体培养方法 - Google Patents

一种铁包金的离体培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种铁包金的离体培养方法，包括如下步骤：选取铁包金植株上当年抽生的新梢，进行消毒处理后，接入腋芽萌动培养基中培养；待腋芽伸长至3‑5cm时，将萌出的嫩梢切下，转移至生根培养基中进行生根培养；取根系生长良好的试管苗进行炼苗。本发明方法简单，快速高效，有效提高了铁包金种苗的繁殖效率，保证了种苗质量。采用本发明方法，1颗当年生铁包金小苗1年后能变成约8000颗整齐的种苗，即能快速大量繁殖优质种苗，以满足药材市场及凉茶生产等企业对铁包金种苗的需求。此外，本发明还具有大田栽培后存活率高，种苗生长快速、根系（药用部分）粗壮的特点。

Description

一种铁包金的离体培养方法
技术领域
本发明属于植物组培技术领域，具体涉及铁包金离体培养方法。
背景技术
铁包金为鼠李科Rhamnaceae枣族Trib.Zizipheae Brongn.勾儿茶属植物铁包金Berchemia lineate (L.) DC.的干燥根，别名小叶铁包金、乌龙根、乌口仔、鼠乳根，原植物铁包金为藤状或矮灌木，又名老鼠耳、米拉藤、小叶黄鳝藤，生于丘陵和山地灌木丛中或林缘，分布于广东省及广西、福建、湖南、台湾等省区，越南、巴基斯坦、印度、锡金、日本亦有分布。其性味甘、淡、平，有理肺止咳、祛瘀止痛、舒肝退黄、健胃消积之功，主要用于劳伤咳血、跌打瘀痛、风湿痹痛、偏正头痛、胸胁疼痛、小儿胃纳呆滞、疳积，近有用于肝炎、肺结核咳血等。在广东地区，还是凉茶配方中的一味常用中草药。
研究人员在广西实地调查发现，铁包金的分布和资源正日渐减少，药材市场中销售的铁包金药材实际还包括同属植物光枝勾儿茶B. polyphylla Wall.exLaws.var.1eioclada Hand.-Mazz.、多叶勾儿茶B. potyphylla Wall.ex Laws.、多花勾儿茶B. floribunda(Wall.)Brongn.的根茎或全株。而铁包金种子萌发困难，有空粒现象；扦插繁殖生根不易，致使铁包金自然更新能力低。随着市场上铁包金需求量的日益增加，扩大铁包金资源已是目前亟待解决的问题。通过植物组织培养技术手段，对铁包金进行研究以得到大量种苗是快速解决铁包金资源短缺的重要手段。目前鼠李科植物通过组织培养手段成功得到组培苗的不多，关于铁包金的组织培养尚未见报道。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种铁包金的腋芽萌动培养基。
本发明的另一个目的是提供一种铁包金的生根培养基。
本发明的另一个目的是提供铁包金的离体培养方法。
本发明所采取的技术方案是：
一种铁包金腋芽萌动培养基，其组成包括：IBA 0.01～0.2 mg/L，6-BA 0.05～0.5mg/L，水解乳蛋白 0～550mg/L，蔗糖20～40g/L，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.5～6.0，加入凝固剂制备成固体培养基。
作为优选的，所述的铁包金腋芽萌动培养基的组成为：IBA 0.1 mg/L，6-BA 0.05mg/L，水解乳蛋白 500mg/L，30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂粉，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.8。
一种铁包金的生根培养基，其组成包括：IBA 0.05～0.15 mg/L，6-BA 0.05～0.5mg/L ，葡萄糖30～75 g/L，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.5～6.0，加入凝固剂制备成固体培养基。
作为优选的，所述的铁包金的生根培养基的组成为：IBA 0.1 mg/L，6-BA 0.05mg/L ，葡萄糖60g/L，琼脂粉7g/L，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.8。
一种铁包金的离体培养方法，包括如下步骤：
（1）选取铁包金植株上当年抽生的新梢，进行消毒处理后，接入上述的腋芽萌动培养基中培养；
（2）待腋芽伸长至3-5cm时，将萌出的嫩梢切下，转移至上述的生根培养基中进行生根培养；
（3）取根系生长良好的试管苗进行炼苗。
步骤（1）所述消毒处理的具体步骤为：用自来水浸泡冲洗后，先放入75% 酒精中浸泡10～20s，后转入0.1%氯化汞溶液表面消毒7～8min，用无菌水冲洗5～6次。
步骤（2）和（3）的培养条件为：培养室光照度保持在1500～2000Lx，光照时间为12～14h/d，组培快繁时控制温度为25±3℃，种质离体保存时控制温度为15～20℃。
本发明的有益效果是：
本发明方法简单，快速高效，有效提高了铁包金种苗的繁殖效率，保证了种苗质量。采用本发明方法，1颗当年生铁包金小苗1年后能变成约8000颗整齐的种苗，即能快速大量繁殖优质种苗，以满足药材市场及凉茶生产等企业对铁包金种苗的需求。此外，本发明还具有大田栽培后存活率高，种苗生长快速、根系（药用部分）粗壮的特点。
附图说明
图1为腋芽萌出；
图2为小苗生根；
图3为炼苗2周后的小苗；
图4为移栽3个月后的小苗。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
实施例1 本发明的基础研究
一、腋芽萌动
（1）植物生长调节剂NAA和6-BA对带节茎段腋芽萌动的影响
植物生长调节剂NAA和6-BA对带节茎段腋芽萌动的影响见表1，以1/2MS为基本培养基，培养基中添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH调节为5.8，培养温度为(25±1) ℃，连续光照14 h/d，光照强度1500-2000Lx。（若无特别说明，下同）培养40天后记录苗生长质量、统计腋芽萌动率和落叶率。
由表1可知，腋芽苗生长情况均不理想，生长1个月后苗均出现不同程度落叶现象，可见NAA和6-BA组合不适合铁包金腋芽萌动培养。从总体生长情况看，当NAA和6-BA浓度均为0.05 mg/L时，腋芽萌动率为76.67%，苗生长质量较好。
表1 NAA和6-BA的不同浓度配比的腋芽萌动效果
注：
“﹢﹢﹢”表示生长情况较好，腋芽苗出现中度落叶，叶大小大部分正常，苗浅度黄化、褐化。
“﹢﹢”表示生长情况较差，腋芽苗出现严重落叶，叶大小不正常，苗黄化、褐化较严重。
“﹢”表示生长情况差，腋芽萌动后生长缓慢或不生长。
（2）碳源种类对腋芽萌动培养的影响。
以1/2 MS + NAA 0.05 mg/L + 6-BA 0.05 mg/L为培养基，分别添加30 g/L的蔗糖和葡萄糖。每个试验处理接种6瓶，每瓶接种5个。培养40天后记录苗生长质量、统计腋芽萌动率和落叶率。
不同处理对腋芽萌动培养的结果见表2。
表2不同碳源种类的腋芽萌动培养效果
如表2所示，培养基使用葡萄糖对腋芽的诱导率没有显著性差异，且对腋芽萌动未达到理想效果，即未克服腋芽苗绿叶掉落、苗黄化和褐化的问题。
（3）添加活性炭或硝酸银对腋芽萌动培养的影响
以1/2 MS + NAA 0.05 mg/L + 6-BA 0.05 mg/L为培养基，分别添加活性炭（0.1%、0.3%和0.5%）和AgNO3（1mg/L、3mg/L、5mg/L和10mg/L），以空白为对照。培养40天后记录苗生长质量、统计腋芽萌动率和落叶率，结果见表3。
表3 添加活性炭或硝酸银对腋芽萌动培养的影响
从表3可见，培养基中添加活性炭或硝酸银对腋芽的诱导率没有显著性差异，对腋芽萌动均未达到理想效果，且添加硝酸银对腋芽的生长产生不利的影响。添加活性炭处理中，随着活性炭浓度的升高，腋芽苗萌动后生长缓慢或基本不生长。
（4）因腋芽苗的生长情况不佳，尝试更换生长素种类。实验结果见表4。
表4 IBA和6-BA的不同浓度组合的腋芽萌动培养效果
表5不同水平IBA和6-BA对腋芽萌动率和落叶率的LSD多重比较
表4的实验结果显示，IBA和6-BA的不同浓度配比对腋芽萌动的效果有影响。对腋芽萌动率和落叶率的影响作方差分析和LSD多重比较，如表5所示， IBA和6-BA的不同浓度配比对腋芽萌发率均没有显著性影响，但对落叶率的影响有差别。从表4可见，植物生长调节剂配比分别为IBA 0.05 mg/L+6-BA 0.05 mg/L和IBA 0.1 mg/L+6-BA 0.05 mg/L时，落叶率最低，分别是17.78%和20.74%，芽苗培养效果最好，芽伸长，苗黄化、褐化和枯萎现象较轻。
（5）不同基本培养基对腋芽萌动培养的影响
以IBA 0.05 mg/L+6-BA 0.05 mg/L和IBA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L作2种植物生长调节剂配比，分别选用3种基本培养基B5、WPM和 1/2 MS。培养40天后记录苗生长质量、统计腋芽萌动率和落叶率。
不同基本培养基对腋芽萌动培养的影响见表6。
表6 不同基本培养基对腋芽萌动培养的影响
注：“——”表示不作记录，由于使用B5培养基培养的腋芽苗生长缓慢或不生长，所以无法记录落叶数，因此不统计其落叶率。
从表6中可见，基本培养基为WPM和1/2 MS的腋芽萌动率分别为96.67%和86.67%，显著高于B5。WPM培养的腋芽苗生长最好，芽苗伸长，绿叶掉落程度轻，叶色翠绿，且基本不存在枯萎的现象，而1/2 MS的次之，B5的最差。
综合腋芽萌动率、落叶率和生长情况3指标，WPM培养基最优，1/2 MS培养基次之，B5培养基最差。
二、组培苗的生根
以腋芽萌动中生长所得小苗为材料，当小苗长至3-5cm高时进行生根试验。
（1）碳源种类对生根的影响
以WPM+IBA 0.1 mg/L+6-BA 0.05 mg/L为生根培养基，分别以30 g/L蔗糖和葡萄糖为碳源。培养30d后记录苗生长质量、统计生根率。
表7 不同碳源种类对生根培养的影响
从表7可见，选择葡萄糖作碳源时，腋芽苗的生根率较高，生根率为71.43%，且苗生长良好。
（2）葡萄糖用量对生根的影响
以WPM+IBA 0.1 mg/L+6-BA 0.05 mg/L为生根培养基，葡萄糖用量分别为30、45、60和75 g/L。培养30d后记录苗生长质量、统计生根率。
葡萄糖浓度对一步生根培养的影响见表8。
表8 不同葡萄糖浓度对生根培养的影响
由表8可见，葡萄糖用量选择60 g/L有利于分化根和苗的生长。
（3）基本培养基种类对生根培养的影响
以IBA 0.1 mg/L+6-BA 0.05 mg/L为培养基植物生长调节剂配比，葡萄糖60 g/L，分别以1/2 WPM和WPM为基本培养基。培养30d后记录苗生长质量、统计生根率。
基本培养基种类对一步生根培养的影响见表9。
表9 不同基本培养基种类对生根培养的影响
三、炼苗与移栽
选择根系发达且健壮的生根苗，取出瓶外，洗净根部培养基，置于装有清水的敞口瓶中，水没过根部，培养温度为( 25±1) ℃，连续光照14 h/d，光照强度为1500-2000 Lx，每隔2-3天更换清水，如此炼苗1-2周，待长出新根即可移栽到大田。
根系发达且生长良好的试管苗经过炼苗后，植株长势良好，叶色逐渐加深，茎部木质化程度增加，植株直立，移栽成活率100%，见图3、图4。
实施例2 栽培实验
实验组1
腋芽萌动培养基：IBA 0.1 mg/L，6-BA 0.05 mg/L，水解乳蛋白 500mg/L，30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂粉，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.8。
生根培养基：IBA 0.1 mg/L，6-BA 0.05mg/L ，葡萄糖60g/L，琼脂粉7g/L，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.8。
实验组2
腋芽萌动培养基：IBA 0.05 mg/L，6-BA 0.05 mg/L，30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂粉，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.8。
生根培养基：IBA 0.1 mg/L，6-BA 0.05mg/L ，葡萄糖60g/L，琼脂粉7g/L，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.8。
实验组3
腋芽萌动培养基：IBA 0.15 mg/L，6-BA 0.10 mg/L，水解乳蛋白 500mg/L，20g/L的蔗糖，7g/L的琼脂粉，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.5。
生根培养基：IBA 0.05 mg/L，6-BA 0.10mg/L ，葡萄糖30g/L，琼脂粉7g/L，WPM培养基补足至1L，pH值调至6.0。
实验组4
腋芽萌动培养基：IBA 0.05 mg/L，6-BA 0.50 mg/L，水解乳蛋白 500mg/L，40g/L的蔗糖，7g/L的琼脂粉，WPM培养基补足至1L，pH值调至6.0。
生根培养基：IBA 0.15 mg/L，6-BA 0.50mg/L ，葡萄糖75g/L，琼脂粉7g/L，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.5。
各实验组的离体培养方法，包括如下步骤：
（1）选取铁包金植株上当年抽生的新梢，进行消毒处理后，接入腋芽萌动培养基中培养。
消毒处理的具体步骤为：用自来水浸泡冲洗后，先放入75% 酒精中浸泡10～20s ，后转入0.1%氯化汞溶液表面消毒7～8min，用无菌水冲洗5～6次。
（2）待腋芽伸长至3～5cm时，将萌出的嫩梢切下，转移至生根培养基中进行生根培养。
培养条件为：培养室光照度保持在1500～ 2000Lx，光照时间为12～14h/d，组培快繁时控制温度为25±3℃，种质离体保存时控制温度为15～20℃。
（3）取根系生长良好的试管苗进行炼苗。
各实验组的培养结果如表10所示。
表10 各实验组的培养情况
以上实验数据表明，本发明的组培方法简单，快速高效，有效提高了铁包金种苗的繁殖效率，保证了种苗质量。
以上实施例仅为介绍本发明的优选案例，对于本领域技术人员来说，在不背离本发明精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进，都应被视为本发明的一部分。

Claims (7)

1.培养基作为铁包金腋芽萌动培养基的应用，其特征在于，所述培养基的组成包括：IBA 0.01～0.2 mg/L，6-BA 0.05～0.5 mg/L，水解乳蛋白 0～550mg/L，蔗糖20～40g/L，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.5～6.0，加入凝固剂制备成固体培养基。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述培养基的组成为：IBA 0.1 mg/L，6-BA0.05 mg/L，水解乳蛋白 500mg/L，30g/L的蔗糖，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.8，加入凝固剂制备成固体培养基。
3.培养基作为铁包金的生根培养基的应用，其特征在于，所述培养基的组成包括：IBA0.05～0.15 mg/L，6-BA 0.05～0.5 mg/L ，葡萄糖30～75 g/L，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.5～6.0，加入凝固剂制备成固体培养基。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述培养基的组成为：IBA 0.1 mg/L，6-BA0.05mg/L ，葡萄糖60g/L，WPM培养基补足至1L，pH值调至5.8，加入凝固剂制备成固体培养基。
5.一种铁包金的离体培养方法，包括如下步骤：
（1）选取铁包金植株上当年抽生的新梢，进行消毒处理后，接入权利要求1或2所述的腋芽萌动培养基中培养；
（2）待腋芽伸长至3-5cm时，将萌出的嫩梢切下，转移至权利要求3或4所述的生根培养基中进行生根培养；
（3）取根系生长良好的试管苗进行炼苗。
6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，步骤（1）所述消毒处理的具体步骤为：用自来水浸泡冲洗后，先放入75% 酒精中浸泡10～20s ，后转入0.1%氯化汞溶液表面消毒7～8min，用无菌水冲洗5～6次。
7.根据权利要求5所述 的培养方法，其特征在于，步骤（2）和（3）的培养条件为：培养室光照度保持在1500～ 2000Lx，光照时间为12～14h/d，组培快繁时控制温度为25±3℃，种质离体保存时控制温度为15～20℃。
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CN112119915B (zh) * 2020-10-28 2021-11-19 中国科学院昆明植物研究所 一种鸡骨常山种苗的组培快繁和离体保存方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101491216B (zh) * 2009-03-09 2011-11-09 浙江省农业科学院 一种吴茱萸组培快繁方法
KR101270269B1 (ko) * 2011-03-24 2013-06-04 대한민국 숙지삽목을 이용한 천연기념물 먹넌출 증식방법
CN103004593A (zh) * 2012-12-11 2013-04-03 浙江农林大学 薄壳山核桃组培芽微型嫁接方法
CN103563745B (zh) * 2013-10-12 2015-10-21 杭州市园林绿化股份有限公司 一种北美冬青的组织培养方法

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