CN104288204A - 一种从金银花中提取绿原酸的方法 - Google Patents

一种从金银花中提取绿原酸的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种从金银花中提取绿原酸的方法，属于药用植物有效成分提取技术领域。针对水提法、乙醇回流法、超临界萃取法和超声波提取法的不足，本发明采用甲醇溶液在温度70～130℃、密闭条件下提取金银花中绿原酸，包括以下步骤：(1)将粉碎至80～100目的金银花粉加入浓度为25～75％的甲醇溶液中，调节混合液pH值为4～7；(2)在密闭条件下提取10～60分钟，离心，取上清液，检测绿原酸的提取率为3.32～4.19％。该提取方法操作简单，提取时间短，重复性好，稳定性高，整个提取过程在密闭体系中进行，能避免有机溶剂挥发而污染环境。

Description

一种从金银花中提取绿原酸的方法
技术领域
本发明涉及一种从金银花中提取绿原酸的方法，属于药用植物有效成分提取技术领域。
背景技术
金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬干燥花蕾，是我国临床重要且常用的中药材。忍冬科忍冬属植物在全世界共有两百多种，而我国就有98种，分布于全国各省区，其中可供药用的品种高达47种。金银花中富含多种对人体健康有益的营养物质，如挥发油、黄酮类、绿原酸类、三萜类和微量元素等。近年来化学和药理研究证实，绿原酸是金银花中药理活性最强的成分之一，是金银花的主要特征成分和药用成分，通常以绿原酸的含量高低来评价金银花质量的好坏。
绿原酸是一种多酚类化合物，化学式为：C16H18O9，是植物界广泛存在的一类次生物质，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径代谢产生的苯丙素类化合物。绿原酸对消化系统、血液系统和生殖系统有较强的药理活性，具有广泛的抗菌消炎、降脂降糖和抗白血病等作用。目前，提取金银花中绿原酸的方法主要有水提法、乙醇回流法、超临界萃取法和超声波提取法。这些方法均有不足之处，水提法和乙醇回流法的提取时间较长，提取时间至少为60min。超临界萃取法的费用太高，不利于工业生产。超声法虽然仪器比较简单，但是超声提取一般在开放体系中进行，提取溶剂如有机溶剂在提取过程中易挥发到环境中，对人体和环境造成危害。
发明内容
本发明的目的是提供一种从金银花中提取绿原酸的方法。
为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：
一种从金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：
(1)将粉碎至80～100目的金银花粉加入浓度为25～75％的甲醇溶液中，调节混合液pH值为4～7；
(2)在密闭条件下提取10～60分钟，离心，取上清液，即得。
所述步骤(1)中先将金银花干燥，干燥温度为50～60℃，时间为1～3小时，再粉碎至80～100目。
所述步骤(1)中甲醇溶液的浓度为50％。
所述步骤(1)中调节混合液pH值可采用浓度较低的酸或碱，如稀的盐酸、氢氧化钠等。优选的，pH值为6。
所述步骤(1)中金银花粉与甲醇溶液的料液比为1:(10～30)g/mL。优选的，料液比为1:(10～20)g/mL。更有选的，料液比为1:20g/mL。
所述步骤(2)中提取的温度为70～130℃。优选的，提取的温度为110℃。
所述步骤(2)中提取的时间优选30分钟。
所述步骤(2)中取上清液稀释，采用高效液相色谱法检测绿原酸，色谱条件为：色谱柱：Kromasil C18(250×4.6mm，5μm)，流动相：乙腈/0.4％磷酸，13/87(v/v)，流速：1mL/min，检测波长：327nm，进样量：20μL，柱温：室温。
本发明的有益效果：
针对水提法、乙醇回流法、超临界萃取法和超声波提取法的不足，本发明采用甲醇溶液在温度70～130℃、密闭条件下提取金银花中绿原酸，操作简单，提取时间短，重复性好，稳定性高。并且整个提取过程在密闭体系中进行，避免有机溶剂挥发而污染环境。
绿原酸本身不稳定，主要是由于其分子结构中含有酯键、不饱和双键和多元酚三个不稳定部分，若提取时温度高，长时间加热将会导致绿原酸分解，造成绿原酸损失。本发明采用较低的提取温度和较短的提取时间，能有效降低绿原酸的分解，提高绿原酸的提取率。同时在提取过程中采用甲醇溶液作为提取溶剂，一方面有利于降低提取液中杂质含量(如蛋白质、多糖、鞣质等)，提高绿原酸的提取率，另一方面含甲醇的提取液不易发霉、变质，也便于后续分离、纯化操作。
本发明以金银花为原料，获取从中提取绿原酸的工艺参数，利于今后金银花资源的开发利用和绿原酸工业化生产，对推动我国金银花产业发展有着积极的意义。
附图说明
图1为本发明试验例中绿原酸标准品的标准曲线；
图2为试验例中绿原酸标准品与金银花中提取绿原酸的高效液相对比图。
具体实施方式
下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1
本实施例从金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：
(1)将原材料金银花在50℃温度下干燥2小时，粉碎至100目，得金银花粉末；
(2)将步骤(1)中金银花粉末置于聚四氟乙烯反应釜中，加入浓度为25％的甲醇溶液，料液比为1:20g/mL；
(3)用稀盐酸将步骤(2)中混合液的pH值调至4；
(4)将反应釜置于烘箱中，设置烘箱温度为110℃，提取时间为30分钟；
(5)取步骤(4)中提取物在5000r/min转速下高速离心3分钟，取上清液，即得。
实施例2
本实施例从金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：
(1)将原材料金银花在50℃温度下干燥2小时，粉碎至100目，得金银花粉末；
(2)将步骤(1)中金银花粉末置于聚四氟乙烯反应釜中，加入浓度为50％的甲醇溶液，料液比为1:20g/mL；
(3)用稀盐酸将步骤(2)中混合液的pH值调至6；
(4)将反应釜置于烘箱中，设置烘箱温度为110℃，提取时间为30分钟；
(5)取步骤(4)中提取物在5000r/min转速下高速离心3分钟，取上清液，即得。
实施例3
本实施例从金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：
(1)将原材料金银花在50℃温度下干燥2小时，粉碎至80目，得金银花粉末；
(2)将步骤(1)中金银花粉末置于聚四氟乙烯反应釜中，加入浓度为25％的甲醇溶液，料液比为1:10g/mL；
(3)用稀盐酸将步骤(2)中混合液的pH值调至6；
(4)将反应釜置于烘箱中，设置烘箱温度为130℃，提取时间为30分钟；
(5)取步骤(4)中提取物在5000r/min转速下高速离心3分钟，取上清液，即得。
实施例4
本实施例从金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：
(1)将原材料金银花在50℃温度下干燥2小时，粉碎至80目，得金银花粉末；
(2)将步骤(1)中金银花粉末置于聚四氟乙烯反应釜中，加入浓度为50％的甲醇溶液，料液比为1:20g/mL；
(3)用稀盐酸将步骤(2)中混合液的pH值调至7；
(4)将反应釜置于烘箱中，设置烘箱温度为110℃，提取时间30分钟；
(5)取步骤(4)中提取物在5000r/min转速下高速离心3分钟，取上清液，即得。
实施例5
本实施例从金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：
(1)将原材料金银花在50℃温度下干燥2小时，粉碎至80目，得金银花粉末；
(2)将步骤(1)中金银花粉末置于聚四氟乙烯反应釜中，加入浓度为50％的甲醇溶液，料液比为1:20g/mL；
(3)用稀盐酸将步骤(2)中混合液的pH值调至6；
(4)将反应釜置于烘箱中，设置烘箱温度为70℃，提取时间为30分钟；
(5)取步骤(4)中提取物在5000r/min转速下高速离心3分钟，取上清液，即得。
实施例6
本实施例从金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：
(1)将原材料金银花在50℃温度下干燥2小时，粉碎至80目，得金银花粉末；
(2)将步骤(1)中金银花粉末置于聚四氟乙烯反应釜中，加入浓度为50％的甲醇溶液，料液比为1:30g/mL；
(3)用稀盐酸将步骤(2)中混合液的pH值调至6；
(4)将反应釜置于烘箱中，设置烘箱温度为130℃，提取时间为30分钟；
(5)取步骤(4)中提取物在5000r/min转速下高速离心3分钟，取上清液，即得。
实施例7
本实施例从金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：
(1)将原材料金银花在50℃温度下干燥2小时，粉碎至80目，得金银花粉末；
(2)将步骤(1)中金银花粉末置于聚四氟乙烯反应釜中，加入浓度为50％的甲醇溶液，料液比为1:20g/mL；
(3)用稀盐酸将步骤(2)中混合液的pH值调至6；
(4)将反应釜置于烘箱中，设置烘箱温度为90℃，提取时间60分钟；
(5)取步骤(4)中提取物在5000r/min转速下高速离心3分钟，取上清液，即得。
实施例8
本实施例从金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：
(1)将原材料金银花在50℃温度下干燥2小时，粉碎至80目，得金银花粉末；
(2)将步骤(1)中金银花粉末置于聚四氟乙烯反应釜中，加入浓度为75％的甲醇溶液，料液比为1:20g/mL；
(3)用稀盐酸将步骤(2)中混合液的pH值调至6；
(4)将反应釜置于烘箱中，设置烘箱温度为110℃，提取时间为10分钟；
(5)取步骤(4)中提取物在5000r/min转速下高速离心3分钟，取上清液，即得。
对比例1
本对比例采用水提法提取金银花中绿原酸，包括以下步骤：
(1)将原材料金银花在50℃温度下干燥2小时，粉碎至80目，得金银花粉末；
(2)将步骤(1)中金银花粉末置于烧杯中，加入蒸馏水，使料液比为1:20g/mL；
(3)用稀盐酸将步骤(2)中混合液的pH值调至6；
(4)将烧杯置于90℃水浴中，提取时间为60分钟；
(5)取步骤(4)中提取物在5000r/min转速下高速离心3分钟，取上清液，即得。
对比例2
本对比例采用超声波法提取金银花中绿原酸，包括以下步骤：
(1)将原材料金银花在50℃温度下干燥2小时，粉碎至80目，得金银花粉末；
(2)将步骤(1)中金银花粉末置于烧杯中，加入浓度为50％的甲醇溶液，料液比为1:20g/mL；
(3)用稀盐酸将步骤(2)中混合液的pH值调至6；
(4)将步骤(4)中烧杯置于超声波仪中，调节超声频率为40KHz，提取时间为30分钟；
(5)取步骤(4)中提取物在5000r/min转速下高速离心3分钟，取上清液，即得。
试验例
(1)绿原酸提取率的测定
试验方法：取实施例1～8及对比例1～2中上清液各1mL，用浓度为50％的甲醇溶液定容至50mL，避光保存；采用高效液相色谱法测定绿原酸的提取率，测定结果见下表1。色谱条件如下：
色谱柱：Kromasil C18(250×4.6mm，5μm)；
流动相：乙腈/0.4％磷酸，13/87(v/v)；
流速：1mL/min；
检测波长：327nm；
进样量：20μL；
柱温：室温。
标准曲线的制作方法为：精密称取绿原酸标准品5mg，用50％甲醇溶液定容于25mL容量瓶中，吸取绿原酸标准溶液0.5、1.0、1.5、2、2.5mL分别置于10mL容量瓶中，用50％甲醇溶液定容。按1.3.1色谱条件测定，根据色谱峰的保留时间确定样品中的绿原酸。以绿原酸标准品的浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线(见图1)。得出绿原酸的回归方程为：Y＝0.5467+2.009e-5X，R＝0.9997。绿原酸进样量在0.2～1.0μg范围内线性关系良好。
绿原酸标准品与金银花中提取绿原酸的高效液相对比图见图2。
绿原酸提取率的计算公式如下式(1)所示：
式中：C为标准曲线绿原酸质量浓度(μg/mL)；n为稀释倍数；V为配成溶液的体积(mL)；m为金银花样品的质量(g)。
表1实施例1～6中绿原酸的提取率
从表1可以看出，实施例1～8中金银花与甲醇溶液的料液比、甲醇溶液浓度、提取温度、pH值对绿原酸的提取率均有影响。当料液比1:20g/mL、甲醇溶液浓度50％、提取温度110℃、pH值6时，绿原酸的提取率最高，达4.19％。同时，本发明实施例1～8中绿原酸的提取率明显高于对比例1～2。其中，实施例2较对比例1的提取率提高1.5倍，较对比例2的提取率提高1.4倍。

Claims (10)

1.一种从金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将粉碎至80～100目的金银花粉加入浓度为25～75％的甲醇溶液中，调节混合液pH值为4～7；
(2)在密闭条件下提取10～60分钟，离心，取上清液，即得。
2.根据权利要求1所述的从金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤(1)中先将金银花干燥，干燥温度为50～60℃，时间为1～3小时，再粉碎。
3.根据权利要求1所述的从金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤(1)中甲醇溶液的浓度为50％。
4.根据权利要求1所述的从金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤(1)中金银花粉与甲醇溶液的料液比为1:(10～30)g/mL。
5.根据权利要求4所述的从金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤(1)中金银花粉与甲醇溶液的料液比为1:(10～20)g/mL。
6.根据权利要求5所述的从金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤(1)中金银花粉与甲醇溶液的料液比为1:20g/mL。
7.根据权利要求1所述的从金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤(2)中提取的温度为70～130℃。
8.根据权利要求7所述的从金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤(2)中提取的温度为110℃。
9.根据权利要求1所述的从金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤(2)中提取的时间为30分钟。
10.根据权利要求1所述的从金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤(2)中取上清液稀释，采用高效液相色谱法检测绿原酸，色谱条件为：色谱柱：Kromasil C18，规格250×4.6mm，流动相：乙腈/0.4％磷酸，体积比13/87，流速：1mL/min，检测波长：327nm，进样量：20μL，柱温：室温。
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