CN1730027A - 从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法 - Google Patents

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一种从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法，它包括如下步骤：(1)粉碎植物；称取植物粉末，放入水或亲水性有机溶剂中，植物粉末与溶剂的总量比为1∶2～20，在50～100℃下回流提取2～4次，依次递减溶剂用量，过滤，得合并浓缩液，置室温或0～4℃冷藏12～48小时，离心或过滤，得澄清提取液；(2)使提取液以0.5－3BV/h的流速缓慢流过大孔吸附树脂的树脂柱。(3)用0.5～5倍树脂体积的水缓慢洗树脂柱，用10％～70％的乙醇或甲醇水溶液以0.5～2BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到抗肝炎活性部位。

Description

从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法
技术领域
本发明涉及一种从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法，特别是以亲水性溶剂提取、大孔吸附树脂富集獐牙菜属主要药用植物中抗肝炎活性部位产物工业化生产的工艺方法。
背景技术
獐牙菜属(Swertia)植物中主要药用植物抱茎獐牙菜(S.franchetia)、川西獐牙菜(S.mussotii)、印度獐牙菜(S.cliralyita)、普兰獐牙菜(S.purpurascens)等为藏医药系统用于治疗肝胆系统疾病的习用药材，为上品藏药，俗名“藏茵陈”。主要研究资料表明，獐牙菜属植物中富含三萜类、苦味素类、黄酮类和口山酮类【1，3】【1，中华人民共和国卫生部药品标准，藏药一册，1992；6，28；2，宋万志，中国龙胆属药用植物概况，中药通报，1986；11(11)643-647；3，纪兰菊，保怡等，15种獐牙菜属植物中主要药用成分的高效液相色谱测定，西北植物学报2004；24(7)1298-1302】，这些成分中的酮苷(xanthone glycosides)类是龙胆科植物重要的活性成分；芒果苷(mangiferin)具有利胆、强心、利尿及增强吗啡的镇痛作用，是藏因陈治疗肝炎的主要有效成分；当药黄素(swertisin)、对四氯化碳引起的转氨酶升高有降低作用；龙胆苦苷(gentiopicroside)、具有促进胃液及游离盐酸分泌的健胃和抗炎作用；獐牙菜苦苷(swertiamarin)有促进毛发生长和解痉、镇痛抗炎作用；獐牙菜苷(sweroside)有退热抗惊厥作用和抗肝细胞损伤，促进肝细胞修复的保肝作用。【2，4】【4，季宇彬等，中药有效成分药理与应用，1994；211，452-454，294】。
以獐牙菜属主要药用植物为单方和复方药材研制、开发的抗肝炎药物已有工业化生产。但是，提取獐牙菜属主要药用植物中抗肝炎活性部位的方法，到目前为止尚未发现有报道，也未发现有实际的产品在使用。因此而直接阻碍了以这类抗肝炎活性部位为主的高科技创新药物的研制。
发明的内容
本发明的目的是要克服上述不足开创一种从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的工业生产方法。
本发明的技术方案是其特点在于它包括如下步骤：
(1)粉碎獐牙菜属主要药用植物；称取干燥植物粉末，放入水或亲水性有机溶剂中，干燥植物粉末与水或亲水性有机溶剂的总量比为1∶2～20，在50～100℃下回流提取2～4次，每次2～5小时，依次递减溶剂用量，过滤，回收亲水性有机溶剂或水，得合并浓缩液，置室温或0～4℃冷藏12～48小时，离心或过滤法除去脂溶性成分，得澄清提取液备用；
(2)使提取液以0.5-3BV/h的流速缓慢流过装有予处理好的大孔吸附树脂的树脂柱。
(3)用0.5～5倍树脂体积的水缓慢洗树脂柱，用10％～70％的乙醇水溶液或10％～70％甲醇水溶液以0.5～2BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位。
本发明的另一特点是所述的亲水性有机溶剂为10～95％的乙醇、或10-100％甲醇。
本发明的另一特点是所述的獐牙菜属主要药用植物为：川西獐牙菜(S.mussotii)、抱茎獐牙菜(S.franchetiana)、印度獐牙菜(S.cliralyita)、普兰獐牙菜(S.purpurascens)、藏獐牙菜(S.racemosa)、红直獐牙菜(S.erythrosticta)、祁连獐牙菜(S.przewalskii)、显脉獐牙菜(S.nervosa)、四数獐牙菜(S.tetraptera)、大籽獐牙菜(S.macrosperma)、狭叶獐牙菜(S.angustifolin)、美丽獐牙菜(S.angustifolia)、当药(S.diluta)。
本发明的另一特点是所述的抗肝炎活性部位为：芒果苷(mangiferin)、当药黄素(swertisin)、酮苷(xanthone glycosides)等及龙胆苦苷(gentiopicroside)、獐牙菜苦苷(swertiamarin)、獐牙菜苷(sweroside)、苦龙胆酯苷(amarogentin)等裂环烯醚萜甙(苦苷)成分。
本发明的另一特点是所述的树脂柱内径为0.8-30cm，树脂层径高比为1∶1.5～20。
本发明具如下的优点和效果：首先，发明了一种从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法，实现了提取獐牙菜属主要药用植物中抗肝炎活性部位的工业化生产；其次，由于该方法以亲水性溶剂或水提取、选择性大孔树脂富集獐牙菜属主要药用植物中抗肝炎活性部位产物工业化生产的工艺方法，利用对水溶性成分具有选择性的大孔树脂的选择性吸附作用，从藏药獐牙菜属主要药用植物中分离和富集抗肝炎活性部位。所以，该方法简便、安全、重复性好。再次，提取率高。经测定提取率大于等于15％。
具体实施方式
实施例1：
称取100g川西獐牙菜(S.mussotii)植物的干燥全草，粉碎(≤3mm)，用850ml 95％的甲醇水溶液在70℃回流提取三次，每次2～4小时，每次用量分别为400ml，300ml，150ml，滤过，回收甲醇，并向体系加适量的水，得混浊液100ml，置室温或冷藏(0～4℃)处静置24小时，离心，得澄清溶液备用。
称取一定量的D-101吸附树脂，用适量的乙醇溶胀过夜，然后逐渐过渡到水相。准确量取100ml的湿树脂并将其转入内径为1.5cm柱中，以0.5～3BV/h的流速使100ml提取液缓慢流过树脂床。然后用50ml～500ml的水缓慢清洗树脂柱。用100ml  10％～70％的甲醇溶液以0.5～2BV/h的流速缓慢洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位，含量大于15％。
实施例2
称取100g抱茎獐牙菜(S.franchetiana)植物的干燥全草，粉碎(≤3mm)，用850ml 70％～95％的乙醇水溶液在50℃回流提取三次，每次3～5小时，每次用量分别为400ml，300ml，150ml，滤过，回收乙醇，并向体系加适量的水，得混浊液100ml，置室温或冷藏(0～4℃)处静置24小时，过滤，得澄清溶液备用。
称取一定量的D-101吸附树脂，用适量的乙醇溶胀过夜，然后逐渐过渡到水相。准确量取100ml的湿树脂并将其转入内径为1.5cm柱中，以0.5～3BV/h的流速使100ml提取液缓慢流过树脂床。然后用50ml～500ml的水缓慢清洗树脂柱。用100ml 10～70％的乙醇溶液以0.5～2BV/h的流速缓慢洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位，含量大于15％。
实施例3
称取100g藏獐牙菜(S.racemosa)植物的干燥全草，粉碎(≤3mm)，用850ml水溶液在100℃回流提取三次，每次2～3小时，每次用量分别为400ml，300ml，150ml，滤过，减压回收水，并向体系加适量的水，得混浊液100ml，置室温或冷藏(0～4℃)处静置24小时，离心，得澄清溶液备用。
称取一定量的D-101吸附树脂，用适量的乙醇溶胀过夜，然后逐渐过渡到水相。准确量取100ml的湿树脂并将其转入内径为1.5cm柱中，以0.5～3BV/h的流速使100ml提取液缓慢流过树脂床。然后用50ml～500ml的水缓慢清洗树脂柱。用100ml 10～70％的乙醇溶液以0.5～2BV/h的流速缓慢洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位，含量大于15％。
实施例4
称取100g普兰獐牙菜(S.purpurascens)植物的干燥全草，粉碎(≤3mm)，用850ml水溶液在100℃回流提取三次，每次用量分别为400ml，300ml，150ml，滤过，减压回收水，并向体系加适量的水，得混浊液100ml，置室温或冷藏(0～4℃)处静置24小时，离心，得澄清溶液备用。
称取一定量的D-101吸附树脂，用适量的乙醇溶胀过夜，然后逐渐过渡到水相。准确量取100ml的湿树脂并将其转入内径为1.5cm柱中，以0.5～3BV/h的流速使100ml提取液缓慢流过树脂床。然后用50ml～500ml的水缓慢清洗树脂柱。用100ml 10～70％的甲醇溶液以0.5～2BV/h的流速缓慢洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位，含量大于15％。
实施例5
称取500g大籽獐牙菜(S.macrosperma)植物的干燥全草，粉碎(≤3mm)，用4250ml 50～70％的乙醇水溶液在60℃回流提取三次，每次用量分别为2000ml，1250ml，1000ml，滤过，回收乙醇，并向体系加适量的水，得混浊液500ml，置室温或冷藏(0～4℃)处静置24小时，离心，得澄清溶液备用。
称取一定量的D-101吸附树脂，用适量的乙醇溶胀过夜，然后逐渐过渡到水相。准确量取1000ml的湿树脂并将其转入内径为10cm柱中，以0.5～3BV/h的流速使500ml提取液缓慢流过树脂床。然后用500ml～5000ml的水缓慢清洗树脂柱。用1000ml  10～70％的乙醇溶液以0.5～2BV/h的流速缓慢洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位，含量大于15％。
实施例6
称取1000g狭叶獐牙菜(S.angustifolin)植物的干燥全草，粉碎(≤3mm)，用8500ml  50％～95％的甲醇水溶液在70℃回流提取二次，每次用量分别为5000ml，3500ml，滤过，回收甲醇，并向体系加适量的水，得混浊液1000ml，置室温或冷藏(0～4℃)处静置24小时，离心，得澄清溶液备用。
称取一定量的D-101吸附树脂，用适量的乙醇溶胀过夜，然后逐渐过渡到水相。准确量取2000ml的湿树脂并将其转入内径为20cm柱中，以0.5～3BV/h的流速使1000ml提取液缓慢流过树脂床。然后用1000ml～5000ml的水缓慢清洗树脂柱。用2000ml 10～70％的甲醇溶液以0.5～2BV/h的流速缓慢洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位，含量大于15％。
实施例7
称取5000g印度獐牙菜(S.cliralyita)植物的干燥全草，粉碎(≤3mm)，用50000ml 20％～50％的甲醇水溶液在50℃回流提取四次，每次用量分别为25000ml，20000ml，15000ml，10000ml，滤过，回收甲醇，并向体系加适量的水，得混浊液5000ml，置室温或冷藏(0～4℃)处静置24小时，离心，得澄清溶液备用。
称取一定量的D-101吸附树脂，用适量的乙醇溶胀过夜，然后逐渐过渡到水相。准确量取10000ml的湿树脂并将其转入内径为30cm柱中，以0.5～3BV/h的流速使5000ml提取液缓慢流过树脂床。然后用5000ml～50000ml的水缓慢清洗树脂柱。用10000ml 10～70％的乙醇溶液以0.5～2BV/h的流速缓慢洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位，含量大于15％。
实施例8
称取200g红直獐牙菜(S.erythrosticta)植物的干燥全草，粉碎(≤3mm)，用2000ml 20％～50％的乙醇水溶液在50℃回流提取四次，每次用量分别为800ml，600ml，300ml，300ml，滤过，回收甲醇，并向体系加适量的水，得混浊液200ml，置室温或冷藏(0～4℃)处静置24小时，离心，得澄清溶液备用。
称取一定量的D-101吸附树脂，用适量的乙醇溶胀过夜，然后逐渐过渡到水相。准确量取200ml的湿树脂并将其转入内径为5cm柱中，以0.5～3BV/h的流速使200ml提取液缓慢流过树脂床。然后用100ml～1000ml的水缓慢清洗树脂柱。用200ml 10～70％的甲醇溶液以0.5～2BV/h的流速缓慢洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位，含量大于15％。
实施例9
称取100g祁连獐牙菜(S.przewalskii)或显脉獐牙菜(S.nervosa)植物的干燥全草，粉碎(≤3mm)，用850ml 70～95％的乙醇水溶液在50℃回流提取三次，每次3～5小时，每次用量分别为400ml，250ml，200ml，滤过，回收乙醇，并向体系加适量的水，得混浊液100ml，置室温或冷藏(0～4℃)处静置24小时，过滤，得澄清溶液备用。
称取一定量的D-101吸附树脂，用适量的乙醇溶胀过夜，然后逐渐过渡到水相。准确量取100ml的湿树脂并将其转入内径为1.5cm柱中，以0.5～3BV/h的流速使100ml提取液缓慢流过树脂床。然后用50ml～500ml的水缓慢清洗树脂柱。用100ml 10～70％的乙醇溶液以0.5～2BV/h的流速缓慢洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位，含量大于15％。
实施例10
称取100g四数獐牙菜(S.tetraptera)或美丽獐牙菜(S.angustfolia)或当药(S.diluta)植物的干燥全草，粉碎(≤3mm)，用850ml  甲醇、乙醇混合溶剂在60℃回流提取三次，每次用量分别为400ml，250ml，200ml，滤过，回收上述混合液，并向体系加适量的水，得混浊液100ml，置室温或冷藏(0～4℃)处静置24小时，离心，得澄清溶液备用。
称取一定量的D-101吸附树脂，用适量的乙醇溶胀过夜，然后逐渐过渡到水相。准确量取100ml的湿树脂并将其转入内径为2cm柱中，以0.5～3BV/h的流速使100ml提取液缓慢流过树脂床。然后用50ml～500ml的水缓慢清洗树脂柱。用100ml 10～70％的甲醇溶液以0.5～2BV/h的流速缓慢洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位，含量大于15％。

Claims (5)

1、一种从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法，其特征在于它包括如下步骤：
(1)粉碎獐牙菜属主要药用植物；称取干燥植物粉末，放入水或亲水性有机溶剂中，干燥植物粉末与水或亲水性有机溶剂的总量比为1∶2～20，在50～100℃下回流提取2～4次，每次2～5小时，依次递减溶剂用量，过滤，回收亲水性有机溶剂或水，得合并浓缩液，置室温或0～4℃冷藏12～48小时，离心或过滤除去脂溶性成分，得澄清提取液备用；
(2)使提取液以0.5-3BV/h的流速缓慢流过装有予处理好的大孔吸附树脂的树脂柱。
(3)用0.5～5倍树脂体积的水缓慢洗树脂柱，用20％～80％的乙醇水溶液或20％～80％甲醇水溶液以0.5～2BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到棕黄色或黄色的抗肝炎活性部位。
2、如权利要求1所述的一种从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法，其特征在于所述的亲水性有机溶剂为10～95％的乙醇、10-100％甲醇与水的混合液，或甲醇、乙醇和水，或甲醇、乙醇混合液。
3、如权利要求1所述的一种从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法，其特征在于所述的獐牙菜属主要药用植物为：川西獐牙菜(S.mussotii)、抱茎獐牙菜(S.franchetiana)、印度獐牙菜(S.cliralyita)、普兰獐牙菜(S.purpurascens)、藏獐牙菜(S.racemosa)、红直獐牙菜(S.erythrosticta)、祁连獐牙菜(S.przewalskii)、显脉獐牙菜(S.nervosa)、四数獐牙菜(S.tetraptera)、大籽獐牙菜(S.macrosperma)、狭叶獐牙菜(S.angustifolin)、美丽獐牙菜(S.angustifolia)、当药(S.diluta)。
4、如权利要求1或2或3所述的一种从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法，其特征在于所述的抗肝炎活性部位为：芒果苷(mangiferin)、当药黄素(swertisin)、酮苷(xanthone glycosides)等及龙胆苦苷(gentiopicroside)、獐牙菜苦苷(swertiamarin)、獐牙菜苷(sweroside)、苦龙胆酯苷(amarogentin)等裂环烯醚萜甙(苦苷)成分。
5、如权利要求1所述的一种从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法，其特征在于所述的树脂柱内径为0.8-30cm，树脂层径高比为1∶1.5～20。
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