CN104277046B

CN104277046B - 叶绿素降解产物二氢卟吩e6衍生物的金属络合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN104277046B
Application number: CN201410517624.0A
Authority: CN
Inventors: 沈凤明; 余建鑫; 吴一书
Original assignee: HAINING FENGMING CHLOROPHYLL CO Ltd
Current assignee: HAINING FENGMING CHLOROPHYLL CO Ltd
Priority date: 2014-09-30
Filing date: 2014-09-30
Publication date: 2016-06-29
Anticipated expiration: 2034-09-30
Also published as: CN104277046A

Abstract

本发明公开了一种叶绿素降解产物二氢卟吩e6衍生物的金属络合物及其制备方法和应用。式 I所示的<b>二</b>氢卟吩e6衍生物金属络合物，R₁、R₂为H或CH₃、CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₃、n-C₄H₉等常见烷烃基，M为Cu²⁺、Zn²⁺、Fe²⁺、Mn²⁺、Ni²⁺、Co²⁺、Pd²⁺等常见二价金属离子。本发明的化合物结构明确，活性良好，具有开发成抗胃溃疡和保肝护肝药物的潜力。本发明原料来源低廉，制备方法简单，反应迅速，适合大规模工业化生产。

Description

叶绿素降解产物二氢卟吩e6衍生物的金属络合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于叶绿素类化合物领域，特别涉及叶绿素降解产物二氢卟吩e6衍生物的金属络合物及其制备方法和在医药领域中的应用。

背景技术

研究发现，蚕沙中富含叶绿素（干品中含量达0.6%~1.0%），蚕沙粗品叶绿素先经酸降解反应得到叶绿素a的稳定降解产物脱镁叶绿酸a和焦脱镁叶绿酸a,脱镁叶绿酸a可进一步碱降解为二氢卟吩e6、二氢卟吩e4、紫红素-18及二氢卟吩p6等稳定衍生物。

已经证明，叶绿素降解产物及其衍生物具有杀菌、抗诱变、促进创伤组织愈合、抗溃疡、保肝、促进造血功能和光动力治疗等多方面的生物活性。同时，研究还表明：多种金属叶绿素衍生物具有一定的生物活性，叶绿素铜衍生物的作用效果远比铁、镁、钴等金属衍生物强，对慢性荨麻疹、慢性湿疹、支气管哮喘及冻疮等变态反应都有明显功效。叶绿素铜还具有抑制挥发性硫化物、保护胃壁和抗胃蛋白酶的作用，对治疗口臭、白细胞减少症、急慢性肝炎及肝肿大、肝硬化等疾病疗效显著。叶绿素锌钠在医用上主要用于治疗慢性骨髓炎、慢性溃疡、皮肤创伤、烫伤、白血球减少症和辅助治疗缺锌症。叶绿酸铁钠在医药上可用作铁强化剂，目前国内外药理研究表明叶绿酸铁钠还具有抗菌、抗病毒、抗过敏及增强组织再生的作用，是一种良好的造血细胞复合剂，对各种原因引起的白细胞减少症及各种贫血有治疗作用。钴叶绿酸钠具有抗癌、抗过敏、抗毒素作用，临床上用作放疗、化疗病人抑制白细胞下降的药物。但是，遗憾的是，上述的叶绿素活性药物均为复杂的叶绿素混合物，而对其中最主要的活性单一组分研究仍是一片空白。因此，叶绿素的深开发有望成为一个全新的医药和保健品大家族。

目前上市的抗溃疡治疗药物主要是通过控制胃酸分泌、杀灭幽门螺旋杆菌和保护胃黏膜3个方面来实现的，现有控制胃酸和保护胃黏膜的药物不足之处主要是治标不治本，易复发、难以痊愈，而我国目前临床治疗胃溃疡药物大部分是从国外进口或仿制品，很少有自主研发的创新的抗胃溃疡新药。

我国是肝病大国，近年来病毒性肝炎、脂肪肝、酒精性肝病、药物性肝损伤和肝癌等肝病已越来越成为当今威胁人类生存健康的主要疾病之一。研究发现，从蚕沙中提取物制成的叶绿素铜钠盐，有很好的保肝护肝作用，但其成分复杂，稳定性差等缺点大大限制了其在该领域的应用。从叶绿素衍生物中研发结构明确、活性明显、单一稳定的化合物成为当前本领域的重点。

发明内容

本发明是一种叶绿素降解产物二氢卟吩e6衍生物的金属络合物合成制备方法及其在医药领域的应用。本发明的目的在于提供一种具有抗胃溃疡及保肝升白作用的结构明确、生理活性显著的二氢卟吩e6衍生物金属络合物及其合成方法。

本发明人以蚕沙叶绿素为起始原料，经过酸碱降解、提取、合成、分离纯化最终得到叶绿素稳定降解产物二氢卟吩e6衍生物金属络合物单体，其化学结构如式：

其中，M为Cu²⁺、Zn²⁺、Fe²⁺、Mn²⁺、Ni²⁺、Co²⁺、Pd²⁺或其他常见二价金属离子；

所述的R₁、R₂可以同为CH₃、CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₃、n-C₄H₉或其他常见取代或未取代的C_1-6直链或支链烷烃基，优选未取代的C_1-4直链烷基；

当所述的R₁为H时，R₂可以为CH₃、CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₃、n-C₄H₉或其他常见取代或未取代的C_1-6直链或支链烷烃基，优选未取代的C_1-4直链烷基。

本发明中所述的二氢卟吩e6衍生物金属络合物进一步优选如下所述的任何一种化合物：

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩锌络合物；

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩铜络合物；

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩亚铁络合物；

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩锌络合物；

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩铜络合物；

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩亚铁络合物；

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-丙氧酰甲基-17-丙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩铜络合物；

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-丁氧酰甲基-17-丁氧酰乙基-17,18-二氢卟吩锌络合物。

本发明以二氢卟吩e6酯衍生物为母核原料，优选2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩，2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩，2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-丙氧酰甲基-17-丙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩，进一步优选的是2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩，与不同的金属离子络合反应制备不同单体金属络合物。并研究分析了它们的生理活性，测定了它们对大、小鼠实验性胃溃疡和急性肝损伤的治疗作用。

本发明还提供了所述的如式所示的化合物的制备方法，以叶绿素降解产物二氢卟吩e6为原料，包括酯化和络合步骤；其中：

（a）酯化：叶绿素降解产物二氢卟吩e6经纯化后，在浓硫酸催化作用下与醇进行酯化反应，得到2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-取代乙基-17-取代丙基-17,18-二氢卟吩（化合物II），其中各取代基的定义均同权利要求1所述；与二氢卟吩e6酯化反应的醇为常温下为液态的C_1-6的低级醇，优选为甲醇、乙醇、丙醇或丁醇；

II

（b）络合：化合物II经纯化后在溶剂中，再与金属盐在N₂保护下，搅拌反应生成2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-取代乙基-17-取代丙基-17,18-二氢卟吩金属络合物。

在制备化合物的方法中，所述的溶剂即溶解化合物和金属盐的有机溶剂为常见低沸点单一有机溶剂或混合溶剂，优选甲醇、乙醇、丙酮和/或二氯甲烷，更优选二氯甲烷与甲醇的混合溶剂；所述溶剂与化合物的体积质量比优选10~200ml/g，进一步优选50-100ml/g；所述溶剂采用二氯甲烷与甲醇的混合溶剂时，两者的体积比优选1:1~10，进一步优选1:2~6。所述的金属盐为常规二价金属盐供锌剂、供铜剂或供亚铁剂；优选乙酸锌、硝酸锌或氯化锌为供锌剂，更优选乙酸锌；优选乙酸铜、硫酸铜或氯化铜为供铜剂，更优选乙酸铜；优选氯化亚铁、硫酸亚铁、磷酸亚铁为供亚铁剂，更优选氯化亚铁；所述的化合物与金属盐的摩尔比优选1:1~6，进一步优选1:2~5。

在制备化合物的方法中，所述的反应的温度可以在从溶剂的冰点到溶剂的沸点温度范围内变化的温度，优选0~80°C，进一步优选20~60°C。

在制备化合物的方法中，所述的反应的进程可以采用本领域中常规测试方法（如核磁共振、红外光谱、分光光度或质谱分析、HPLC或TLC）确定，以化合物消失为反应终点，优选反应时间0.5~16h，进一步优选1~10h。

在制备化合物的方法中，所述的原料即叶绿素降解产物二氢卟吩e6和化合物即2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-取代乙基-17-取代丙基-17,18-二氢卟吩金属络合物的纯化均采用硅胶柱色谱分离，展开剂为常规溶剂，优选二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮和石油醚（60-90）中的一种或多种且其中含总体积2%~0.5%的甲酸，优选1.2%~0.8%甲酸。

制备化合物的方法中，所述的化合物的制备方法可进一步参见本发明人的另一篇专利（公开号：CN103833762A）。

本发明的室温指环境温度为10-30℃。

本发明还提供了所述的如式所示的二氢卟吩e6衍生物金属络合物在制备抗胃溃疡和预防与治疗急性肝损伤以及白细胞减少症的药物中的应用。

本发明的积极进步效果在于：本发明提供了一种结构明确、活性显著的潜在药物及其合成方法，本发明的二氢卟吩e6衍生物金属络合物在抗胃溃疡、保肝升白方面活性良好，且原料来源广泛，成本低廉，制备方法简单，反应迅速，适合大规模工业化生产。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件。

实施例1：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩的制备

将二氢卟吩e₆（1.0g，1.7mmol）加入到甲醇（30ml）中，室温搅拌滴加98%的浓硫酸（1ml），氮气保护下于55℃反应5h。反应液冷却，二氯甲烷（90ml）稀释后，倒入冰水（150ml）中萃取，静置分层，有机相旋蒸浓缩至干，水洗抽滤，滤饼真空干燥后硅胶柱层析得0.75g黑色细颗粒产品，收率：75%。LC-MS(ESI)：[M+H]⁺=625。

实施例2：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩锌络合物的制备

将2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩干燥样品(1.0g，1.6mmol)研细，溶解于二氯甲烷（100ml），乙酸锌（0.5g，2.3mmol）完全溶解于甲醇（20ml），二者在N₂保护下混合均匀，室温下搅拌反应1h。反应溶液由黄褐色变蓝绿色，反应液以2倍体积二氯甲烷萃取后，加入5倍体积冰水缓慢搅拌至有机相析出固体。静至分液后有机相抽滤，水洗至滤液澄清透明，滤饼干燥后得黑色细颗粒化合物0.68g，收率68%。波谱数据如下：LC-MS(ESI)：[M+H]⁺=687，¹H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δppm：3.40(3H，s，2¹H)，8.27(1H，dd，3¹H)，6.02(1H，d，3²Hcis)，6.25(1H，d，3²Htrans)，8.7(1H，s，5-H)，3.35(3H，s，7¹-H)，3.83(2H，m，8¹H)，1.63(3H，t，8²H)，9.55(1H，s，10H)，3.46(3H，s，12¹H)，5.4(2H，s，15¹H)，3.67(3H，s，15³H)，4.33(1H，q，17H)，1.78-2.51(2H，m，17¹H)，2.16(2H，m，17²H)，3.52(3H，s，17⁴H)，4.45(H，q，18H)，1.71(3H，d，18¹H)。

实施例3：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩铜络合物的制备

将2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩干燥样品（1.0g，1.6mmol)研细，溶解于100ml二氯甲烷，(0.4g，2.0mmol)乙酸铜溶解于50ml甲醇，二者在N₂保护下混合均匀，在室温下搅拌反应0.5h。反应溶液由黄褐色变亮绿色，反应液以2倍体积二氯甲烷萃取后，加入5倍体积去离子水缓慢搅拌洗去游离铜离子。静置分液后下层有机相旋蒸浓缩至干，加水浸泡后搅拌水洗多次，至滤液澄清透明，抽滤，滤饼干燥后得黑色细颗粒化合物0.98g，收率98%，波谱数据如下：LC-MS(ESI)：[M+H]⁺=686，¹H-NMR(DMSO，500MHz)δppm：3.41(3H，s，2¹H)，8.27(1H，dd，3¹H)，6.03(1H，d，3²Hcis)，6.22(1H，d，3²Htrans)，8.71(1H，s，5H)，3.35(3H，s，7¹H)，3.83(2H，m，8¹H)，1.63(3H，m，8²H)，9.55(1H，s，10H)，3.46(3H，s，12¹H)，5.43(2H，d，15¹H)，3.67(3H，s，15³H)，4.33(1H，q，17H)，1.78-2.51(2H，m，17¹H)，2.18(2H，m，17²H)，3.52(3H，s，17⁴H)，4.45(H，q，18H)，1.73(3H，m，18¹H)。

实施例4：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩亚铁络合物的制备

将2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩干燥样品，（1.0g，1.6mmol)，研细，溶解于100ml二氯甲烷，（0.8g，4.0mmol）氯化亚铁溶解于20ml甲醇，二者在N₂保护下迅速混合均匀，在45℃水浴加热下搅拌回流反应5h。反应溶液由黄褐色变暗绿色，反应液以2倍体积二氯甲烷稀释后，去离子水洗去过量游离铁离子。静置分液后，下层有机相旋蒸浓缩至干，水洗至滤液澄清透明，抽滤，滤饼干燥后得黑色细颗粒化合物0.86g收率86%，波谱数据如下：LC-MS(ESI)：[M+H]⁺=679，¹H-NMR(DMSO，500MHz)δppm：3.45(3H，s，2¹H)，8.28(1H，dd，3¹H)，6.09(1H，d，3²Hcis)，6.26(1H，d，3²Htrans)，8.76(1H，s，5H)，3.35(3H，s，7¹H)，3.83(2H，m，8¹H)，1.63(3H，m，8²H)，9.55(1H，s，10H)，3.46(3H，s，12¹H)，5.45(2H，s，15¹H)，3.67(3H，s，15³H)，4.33(1H，q，17H)，1.78-2.51(2H，m，17¹H)，2.16(2H，m，17²H)，3.53(3H，s，17⁴H)，4.46(H，q，18H)，1.70(3H，d，18¹H)。

实施例5：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩络合物的制备

采取实施例1的相同方法，将乙醇替代甲醇制备得到2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩。LC-MS(ESI)：[M+H]⁺=653。

实施例6：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩锌络合物的制备

采取实施例2的相同方法，将2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩替代2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩制备得到。波谱数据如下：LC-MS(ESI)：[M+H]⁺=715，¹H-NMR(DMSO，500MHz)δppm：3.51(3H，s，2¹H)，8.27(1H，dd，3¹H)，6.01(1H，d，3²Hcis)，6.23(1H，d，3²Htrans)，8.67(1H，s，5H)，3.33(3H，s，7¹H)，3.98(2H，m，8¹H)，1.67(3H，t，8²H)，9.55(1H，s，10H)，3.38(3H，s，12¹H)，5.42(2H，d，15¹H)，4.13(2H，m，15³H)，1.15(3H，t，15⁴H)，4.32(1H，q，17H)，1.78-2.45(2H，m，17¹H)，1.98(2H，m，17²H)，3.82(2H，m，17⁴H)，1.08(3H，t，17⁵H)，4.43(1H，q，18H)，1.63(3H，d，18¹H)。

实施例7：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧乙酰基-17-乙氧丙酰基-17,18-二氢卟吩铜络合物的制备

采取实施例3的相同方法，将2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩替代2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩制备得到。波谱数据如下：LC-MS(ESI)：[M+H]⁺=714，¹H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δppm：3.46(3H，s，2¹H)，8.27(1H，dd，3¹H)，6.01(1H，d，3²Hcis)，6.22(1H，d，3²Htrans)，8.71(1H，s，5H)，3.35(3H，s，7¹H)，3.83(2H，m，8¹H)，1.63(3H，m，8²H)，9.55(1H，s，10H)，3.46(3H，s，12¹H)，5.42(2H，d，15¹H)，4.13(2H，m，15³H)，1.15(3H，t，15⁴H)，4.32(1H，q，17H)，1.78-2.45(2H，m，17¹H)，1.98(2H，m，17²H)，3.82(2H，m，17⁴H)，1.08(3H，t，17⁵H)，4.50(1H，q，18H)，1.69(3H，d，18¹H)。

实施例8：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩亚铁络合物的制备

采取实施例5的相同方法，将2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩替代2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩制备得到。波谱数据如下：LC-MS(ESI)：[M+H]⁺=706，¹H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δppm：3.41(3H，s，2¹H)，8.25(1H，dd，3¹H)，6.03(1H，d，3²Hcis)，6.29(1H，d，3²Htrans)，8.77(1H，s，5H)，3.35(3H，s，7¹H)，3.83(2H，m，8¹H)，1.63(3H，m，8²H)，9.55(1H，s，10H)，3.46(3H，s，12¹H)，5.42(2H，d，15¹H)，4.13(2H，m，15³H)，1.15(3H，t，15⁴H)，4.32(1H，q，17H)，1.78-2.45(2H，m，17¹H)，1.99(2H，m，17²H)，3.81(2H，m，17⁴H)，1.08(3H，t，17⁵H)，4.45(1H，q，18H)，1.65(3H，d，18¹H)。

效果实施例：本发明的部分化合物对大、小鼠实验性胃溃疡和急性肝损伤的生物活性研究。

效果实施例1：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩锌络合物的抗胃溃疡活性

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩锌络合物（实施例2化合物）称量后加少量乙醇溶解注射用水稀释一定体积，健康SD大鼠50只，适应性饲养7d后，随机分为5组，并设立空白对照组，阳性对照组（叶绿素铜钠盐）。叶绿素铜钠盐是保肝药物肝宝胶囊的主要成分，用于急、慢性肝炎的辅助治疗，亦用于白细胞减少症。以此作为阳性对照能较好说明本发明的保肝升白活性。经95%乙醇灼烧和束水应急胃溃疡模型分别造模，各组分别灌胃给药，连续给药3d后，10%水合氯醛麻醉处死，按常规方法进行胃黏膜溃疡指数计算。实验结果表明：实施例2的化合物能显著减少乙醇灼烧型胃溃疡和束水应激型胃溃疡发生的面积。且与模型组比较，大鼠给药后，溃疡抑制率明显强于阳性对照样品(叶绿素铜钠盐)。具体实验结果见表1、2所示。

表1.实施例2化合物对乙醇灼烧型胃溃疡的作用（n=10）

组别	剂量(mg/kg)	溃疡面积(mm²)	溃疡评分	溃疡抑制率(%)
					模型组	——	17.86±7.03	105.30±39.98	——
实施例2	200	3.92±4.75**	27.16±20.15**	74.21
					实施例2	400	3.11±2.83**	23.46±18.33**	77.72
阳性对照组	400	5.26±3.64**	36.00±21.00**	65.81

**P<0.01vs模型组。

表2.实施例2化合物对束水应激胃溃疡的作用（n=10）

组别	剂量(mg/kg)	溃疡面积(mm²)	溃疡评分	溃疡抑制率(%)
					模型组	——	3.12±3.22	27.36±20.70	——
实施例2	200	1.94±1.34	15.38±7.72	43.79
					实施例2	400	0.72±0.40*	12.28±4.02*	55.12
阳性对照组	400	2.17±0.76	16.85±4.13	38.41

*P<0.05，**P<0.01vs模型组。

效果实施例2：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩铜络合物的对急性肝损伤保护作用

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩铜络合物（实施例3化合物）称量后加少量乙醇溶解，注射用水稀释至一定体积，将60只健康小鼠随机分为正常组、模型组、实施例3化合物（100mg/kg，200mg/kg）2个剂量组，阳性对照组（叶绿素铜钠盐）（200mg/kg）和肝苏颗粒（3.6g/kg），每组10只。正常对照组和模型组给予蒸馏水，正常组和模型组灌胃20ml/kg的溶媒，其它各组灌胃同等容量的相应药物，每日1次，连续3d。末次给药1h后，腹腔注射四氯化碳30mg/kg（注射后小鼠禁食不禁水）。四氯化碳造模24h后取血，分离血清，试剂盒测定小鼠外周血清AST、ALT活性。

结果显示，与空白对照组比较，模型组小鼠血清ALT和AST含量显著升高（P<0.01）。给药各组，与模型组比较，实施例3化合物高剂量组的小鼠血清ALT和AST含量显著降低，差异十分显著（P<0.01）。说明实施例3化合物能显著抑制血清转氨酶的升高。对小鼠急性肝损伤有一定的修复作用。实验结果详见表3。

表3.实施例3化合物对CCl₄所致小鼠急性肝损伤血液生化指标的影响(±s)

组别	剂量(mg/kg)	ALT(U/L)	AST(U/L)
				空白对照组	——	13.63±2.88	71.05±10.56
模型组	——	43.25±17.49##	173.97±66.16##
				阳性对照组	200	21.00±5.29 *	95.57±21.52 *
肝苏颗粒组	3600	30.14±12.20	114.71±31.13 *
				实施例3	100	28.71±5.19	113.30±22.78 *
实施例3	200	22.50±5.58 *	104.39±41.96 *

^*P<0.05,^**P<0.01，与模型组比较；^##P<0.01，与空白对照组比较。

效果实施例3：2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-甲氧酰甲基-17-甲氧酰乙基-17,18-二氢卟吩铜络合物（实施例3化合物）对环磷酰胺所致白细胞减少小鼠的升高白细胞作用

实施例3化合物称量后加少量乙醇溶解，注射用水稀释至一定体积，将小鼠随机分为正常组、模型组、实施例3化合物（100mg/kg，200mg/kg）2个剂量组，阳性对照组（叶绿素铜钠盐，200mg/kg）和利可君片（24mg/kg），每组10只。正常对照组和模型组给予蒸馏水，正常组和模型组灌胃20ml/kg的溶媒，其它各组灌胃同等容量的相应药物，每日1次，连续3d。造模：腹腔注射环磷酰胺50mg/kg，连续3d，第四天腹腔注射环磷酰胺造模24h后取血，用全自动三分类血液分析仪，测外周血白细胞总数。

小鼠连续3d腹腔注射环磷酰胺50mg/kg，可建立小鼠外周血白细胞减少症模型。与空白对照组比较，模型组小鼠白细胞数目显著减少(P<0.01)，同时，相同剂量条件下，实施例3升高白细胞活性与阳性对照组相近，实施例3不同剂量组升高白细胞数目成剂量依赖关系。是结果表明实施例3化合物对环磷酰胺所致白细胞减少的小鼠具有一定的升高白细胞作用，具体结果见下表4所示。

表4.实施例3化合物对环磷酰胺所致白细胞减少小鼠的升高白细胞作用（±s）

组别	剂量(mg/kg)	WBC(白细胞数目10⁹/L)
			空白对照组	——	10.25±2.68
模型组	——	2.01±1.26^##
			阳性对照组	200	4.06±2.28 *
利可君组	3600	4.49±2.69 *
			实施例3	100	2.89±1.13
实施例3	200	3.90±1.77 *

^##P<0.01，与空白对照组比较。

Claims

1.一种叶绿素降解产物二氢卟吩e6衍生物的金属络合物，其特征在于，化学结构如式I所示：

I

其中，M为二价金属离子Cu²⁺、Zn²⁺、Fe²⁺、Mn²⁺、Ni²⁺、Co²⁺或Pd²⁺；

R₁和R₂同为乙基或丙基。

2.如权利要求1所述的二氢卟吩e6衍生物金属络合物包括如下所述的任何一种化合物：

2,7,12,18-四甲基-3-乙烯基-8-乙基-13-羧基-15-乙氧酰甲基-17-乙氧酰乙基-17,18-二氢卟吩亚铁络合物。

3.一种如权利要求1所述的如式I所示的化合物的制备方法，以叶绿素降解产物二氢卟吩e6为原料，包括酯化和络合步骤，其中：

（a）酯化：叶绿素降解产物二氢卟吩e6经纯化后，在浓硫酸催化作用下与醇进行酯化反应，得到化合物II；与二氢卟吩e6酯化反应的醇为乙醇或丙醇；

II

其特征在于，（b）络合：化合物II经纯化后在溶剂中，再与金属盐在N₂保护下，搅拌反应生成化合物I，上述各取代基的定义均同权利要求1所述。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的溶剂即溶解化合物II和金属盐的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮和/或二氯甲烷。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，与化合物II络合反应的金属盐为常规二价金属盐供锌剂、供铜剂或供亚铁剂；所述供锌剂为乙酸锌、硝酸锌或氯化锌；所述供铜剂为乙酸铜、硫酸铜或氯化铜；所述供亚铁剂为氯化亚铁、硫酸亚铁或磷酸亚铁。

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述络合步骤中所述溶剂与化合物II的体积质量比为10~200ml/g；化合物II与金属盐的摩尔比为1:1~6；搅拌反应时间为0.5~16h；反应温度为0~80℃。

7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的原料即叶绿素降解产物二氢卟吩e6和化合物II的纯化均采用硅胶柱色谱分离，展开剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮和石油醚中的一种或多种且其中含总体积2%~0.5%的甲酸。

8.如权利要求1所述的二氢卟吩e6衍生物的金属络合物在制备抗胃溃疡和预防与治疗急性肝损伤以及白细胞减少症的药物中的应用。

9.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂为二氯甲烷与甲醇的混合溶剂，两者的体积比为1:1~10。

10.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂为二氯甲烷与甲醇的混合溶剂，两者的体积比为1:2~6。

11.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述供锌剂为乙酸锌；所述供铜剂为乙酸铜；所述供亚铁剂为氯化亚铁。

12.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述络合步骤中所述溶剂与化合物II的体积质量比为50~100ml/g；化合物II与金属盐的摩尔比为1:2~5；搅拌反应时间为1~10h；反应温度为20~60℃。

13.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述展开剂中含总体积1.2%~0.8%甲酸。