CN104263813B - 用于鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的引物序列、试剂盒及其方法 - Google Patents
用于鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的引物序列、试剂盒及其方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104263813B CN104263813B CN201310308711.0A CN201310308711A CN104263813B CN 104263813 B CN104263813 B CN 104263813B CN 201310308711 A CN201310308711 A CN 201310308711A CN 104263813 B CN104263813 B CN 104263813B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- primer
- fusarium oxysporum
- fusarinm solani
- test kit
- dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的引物序列、试剂盒及其分子检测方法,并且验证具有极高的特异性,利用该组引物及鉴定方法能够快速、准确地鉴定茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌,该体系的建立将对瓜类根腐病和枯萎病病害早期快速检测、土壤病菌群体分布及病害的防治具有重要意义。同时,基于TEF1-α为靶标基因的分子检测体系的建立为复杂的镰刀菌属病原菌系统学分类鉴定提供理论依据和鉴定方法。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学领域,开发出一种能够快速鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的引物序列、试剂盒及其鉴定方法。
背景技术
瓜类枯萎病是一种世界性土传维管束病害,对瓜类的产量和品质构成严重威胁,连作地块的损失率达到30%以上,严重地块甚至绝收。瓜类枯萎病是由尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)引起的,根据瓜类上不同的寄主可以将尖孢镰刀菌划分为7个专化型。该病菌在土壤和植物残体上可长期存活,并且植株的整个生育期均可发生,一旦发病就难以根除,化学药剂的施用也难以达到控制病害的效果。随着保护地瓜类生产的快速发展,瓜类根腐病也逐渐上升为主要病害之一,对瓜类的产量和质量造成了极为不利的影响。根腐病发生早、蔓延快、为害大、损失重,保护地的平均发病率为15%,高的达到72%,损失率达20%以上。瓜类根腐病的主要致病菌是茄病镰刀菌(Fusariumsolani),该病从始花期开始发病,为害植物根部,造成根部皮层腐烂,上部茎叶萎蔫死亡。
由于瓜类根腐病的发病症状特征与枯萎病极为相似,并且引起病害的主要致病菌茄病镰刀菌(Fusariumsolani)和尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)又同属于镰刀菌属。迄今为止,基于镰刀菌形态学方面的分类鉴定方法很难适用于极易发生突变的镰刀菌,操作复杂并且鉴定准确度低,很容易造成误诊,贻误防治时机、影响防治效果。
随着分子生物学技术的不断发展,镰刀菌属的鉴定工作也引入了分子系统学方法,常用于鉴定该属系统学研究的主要DNA序列包括:核糖体内转录间隔区ITS、β微管蛋白等。而茄病镰刀菌(Fusariumsolani)和尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)的ITS、β微管蛋白等序列的相似度极高,利用这些基因的多位点序列设计的鉴定引物无法区分这两种病原菌。因此,需要找到能够区分这两种病原菌的基因序列,建立一套新的分子生物学鉴定体系,能够快速、准确地鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌,该体系的建立将对瓜类根腐病和枯萎病病害早期快速检测、土壤病菌群体分布及病害的防治具有重要意义。
已有的专利号为201010567807.5的中国专利技术报道《一种检测尖孢镰刀菌的PCR方法及试剂盒》,该发明根据克隆测序的尖孢镰刀菌ITS区序列设计出特异性引物Fo1/Fo2。然而镰刀菌真菌由于种间rDNA-ITS序列相似性较高,仅以ITS区做为靶序列设计引物,有可能无法将其与同属中的其它种分开。且利用Fo1/Fo2引物并未检测到本发明中样品FO-2的尖孢镰刀菌DNA,即该引物不能鉴定所有的尖孢镰刀菌。另外,赤霉菌属分类上的许多镰刀菌种并没有ITS2同源基因,因此以ITS区为靶标序列用于区分镰刀菌种容易得出错误的系统发育推断。另一专利号为201110444010.0的中国专利技术报道《尖孢镰刀菌的分子检测方法及其引物》,该发明分析比较了尖孢镰刀菌(F.oxysporum)与其它病原真菌的CYP51C序列,设计出对尖孢镰刀菌基因组DNA有高度特异性的引物。但是CYP51基因在不同真菌中的同源基因的数量不同,多数病原真菌的CYP51的同源基因为1-2个,只有尖孢镰刀菌和禾谷镰刀菌等有3个CYP51同源基因,因此以有多个同源基因的CYP51序列为靶标基因可能造成鉴定失败。利用C1/C2该对引物并未检测到本发明中样品FO-X的尖孢镰刀菌DNA,即该引物不能鉴定所有的尖孢镰刀菌。
发明内容
本发明所要解决的首要技术问题是提供鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的引物序列,该组引物灵敏度好特异性高,利用该组引物能对瓜类根腐病和枯萎病进行早期预警和防治。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的试剂盒,该试剂盒内引物灵敏度好特异性高,利用该组引物能对瓜类根腐病和枯萎病进行早期预警和防治。
本发明所要解决的再一个技术问题是提供相关的鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的方法。
本发明解决上述首要技术问题的技术方案是:一种用于鉴定茄病镰刀菌的引物序列,其特征在于:上游引物具有序列表中SEQIDNO:1所述的碱基序列,下游引物具有序列表中SEQIDNO:2所述的碱基序列。
一种用于鉴定尖孢镰刀菌的引物序列,其特征在于:上游引物具有序列表中SEQIDNO:3所述的碱基序列,下游引物具有序列表中SEQIDNO:2所述的碱基序列。
一种用于同时鉴定茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的引物序列,其特征在于:包括三条引物,第一条引物具有序列表中SEQIDNO:1所述的碱基序列,第二条引物具有序列表中SEQIDNO:2所述的碱基序列,第三条引物具有序列表中SEQIDNO:3所述的碱基序列。
本发明解决上述另一个技术问题的技术方案是:一种检测茄病镰刀菌的试剂盒,该试剂盒包含两条引物,上游引物具有序列表中SEQIDNO:1所述的碱基序列,下游引物具有序列表中SEQIDNO:2所述的碱基序列。
一种检测尖孢镰刀菌的试剂盒,其特征在于:该试剂盒包含两条引物,上游引物具有序列表中SEQIDNO:3所述的碱基序列,下游引物具有序列表中SEQIDNO:2所述的碱基序列。
一种同时检测茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的试剂盒,其特征在于:该试剂盒包含三条引物,第一条引物具有序列表中SEQIDNO:1所述的碱基序列,第二条引物具有序列表中SEQIDNO:2所述的碱基序列,第三条引物具有序列表中SEQIDNO:3所述的碱基序列。
本发明解决上述再一个技术问题的技术方案是:一种鉴定茄病镰刀菌的方法,其特征在于:提取待测样品DNA作为模版,利用上述第1组对应的引物进行PCR扩增反应,PCR产物经凝胶电泳后用溴化乙锭染色,根据凝胶中条带大小判断:若存在347-bp的DNA条带,则检测样品中含有茄病镰刀菌。
一种鉴定尖孢镰刀菌的方法,其特征在于:提取待测样品DNA作为模版,利用上述第2组对应的引物进行PCR扩增反应,PCR产物经凝胶电泳后用溴化乙锭染色,根据凝胶中条带大小判断:若存在228-bp的DNA条带,则检测样品中含有尖孢镰刀菌。
一种鉴定茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的方法,其特征在于:提取待测样品DNA作为模版,利用上述第3组对应的引物进行PCR扩增反应,PCR产物经凝胶电泳后用溴化乙锭染色,根据凝胶中条带大小判断:若存在347-bp的DNA条带,则检测样品中含有茄病镰刀菌;若存在228-bp的DNA条带,则检测样品中含有尖孢镰刀菌。
优选,所述的PCR反应的扩增体系为:1μLDNA模板(约0.4ng),引物各0.2μmoll-1,dNTP0.2μmoll-1,MgCl22mmoll-1,1×缓冲液(上海博彩生产),聚合酶1.5U个单位,双蒸水补足至25μL。
优选,所述的PCR反应条件为:95℃预变性3min,94℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸30s,进行35个循环,最后72℃延伸5min。PCR产物用1.5%的琼脂糖在1×TAE缓冲液中电泳后,用溴化乙锭显色拍照。
研究表明,茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的ITS、β微管蛋白等序列的相似度极高,在镰刀菌属种间的变异小,利用这些基因的多位点序列设计的引物特异性低,可能无法将镰刀菌属中的其他种区分开;而编码蛋白翻译装置主要部分的翻译延长因子1-α(Translationelongationfactor1-α,TEF1-α)具有较高的系统多样性,在区分茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌这两个种的多位点序列中利用率极高。首先,TEF1-α基因在Fusarium镰刀菌的种水平上包含大量信息,且不同种的TEF1-α具有遗传多样性和种内稳定性;其次,TEF1-α在Fusarium镰刀病菌基因组上只有单个拷贝;第三,目前已有扩增不同Fusarium种中TEF1-α基因的通用引物,因此TEF1-α能够作为鉴定镰刀菌不同种的特异性基因序列。通过比对茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的TEF1-α序列发现,这两个菌种之间的TEF1-α序列存在较大差异,但也有完全一致的序列片段。根据两个菌种的TEF1-α基因序列的差异,分别设计正向引物FS-F与茄病镰刀菌菌株的特异碱基序列配对,正向引物FO-F与尖孢镰刀菌菌株的特异碱基序列配对;根据两个菌种TEF1-α基因序列一致部分,设计反向引物Fu-R与这两个菌株的一致序列配对。
利用引物对FS-F和Fu-R对含有茄病镰刀菌DNA的样品进行扩增可以得到347-bp的条带;利用引物对FO-F和Fu-R对含有尖孢镰刀菌DNA的样品进行扩增可以得到228-bp的条带;利用三条引物FS-F、FO-F和Fu-R对含有茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌混合DNA的样品进行扩增可以同时得到347-bp和228-bp两个条带;利用任何一组引物对含有其他真菌DNA的样品进行扩增,都不能扩增出任何产物。
与现有技术相比,本发明利用的靶标基因TEF1-α在Fusarium镰刀菌的种水平上包含大量信息,且不同种的TEF1-α具有遗传多样性和种内稳定性;TEF1-α在Fusarium镰刀病菌基因组上只有单个拷贝,即每个镰刀病菌在种水平上都只有一个独一无二的TEF1-α基因,因此TEF1-α能够作为鉴定镰刀菌不同种的特异性基因序列。本发明根据茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的TEF1-α序列差异,设计了上述三条特异性引物,能用来快速、准确、便捷地鉴定样品中茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌,该鉴定方法为瓜类根腐病和枯萎病的治理提供技术支持。
附图说明
图1为本发明引物在TEF1-α上的位置序列;
图2为本发明引物特异性检测样品DNA扩增后的凝胶电泳图;
图3为本发明田间病株DNA扩增后的凝胶电泳图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来详细阐明本发明,但本发明并不局限于以下实施例。
菌株选用
2个茄病镰刀菌(Fusariumsolani)FS-4和FS-5、2个尖孢镰刀菌(F.oxysporum)FO-1和FO-2、禾谷镰刀菌(F.graminearum)、半裸镰刀菌(F.semitectum)、灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)、蔓枯病菌(Didymellabryoniae)、立枯病菌(Rhizoctoniasolani)和菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)。
上述菌株均保藏于宁波市农科院蔬菜研究所,也可以通过病原真菌分离纯化方法从瓜类等病株中获得。而且实验室一般可以分离得到。
DNA提取
本发明中茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌和其他病原真菌均采用简便快速的菌丝DNA提取办法,具体操作步骤如下:
用灭菌牙签从平板上刮取菌丝约100mg,置于1.5-mLEppendorf管中,加500μLDNA提取裂解液(0.2mol/LTris-HCl,0.05mol/LEDTA,0.02mol/LNaCl,1%SDS),用电钻充分研磨,振荡混匀,室温静止10min;13200r/min4℃,离心5min;取上清液约400μL于新的1.5-mLEppendorf管中,加750μL无水乙醇,混和混匀,13200r/min4℃,离心5min,弃上清;沉淀用70%乙醇洗涤,室温放置干燥5-10min,溶于30μLTE缓冲液(pH8.0),-20℃保存备用。
本发明中田间病株DNA提取方法:剪取病组织约100mg,置于1.5-mLEppendorf管中,加500μL抽提液(2%聚乙烯吡咯烷酮和DNA提取裂解液混合物),其他步骤参照菌丝DNA提取办法,将提取后的DNA溶液用UNIQ-10柱式PCR产物回收试剂盒(上海生工生产)过柱纯化,-20℃保存备用。
引物合成
根据茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌这两个菌种的TEF1-α基因序列的差异,分别设计正向引物FS-F和FO-F,反向引物Fu-R(引物所在的序列如图1所示)。
上述引物的具体序列与序列表中序列对应关系如下表1所示:
表1、本发明中所有的PCR引物序列
上述序列的引物由上海博彩合成。
引物特异性验证
以提取的茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌和其它6种真菌的DNA为模板,分别用种特异性引物FS-F、FO-F和Fu-R进行常规PCR反应,每个反应均有一个阴性对照(以无菌水作为模板)。
PCR反应的扩增体系为:1μLDNA模板(约0.4ng),三条引物各0.2μmoll-1,dNTP0.2μmoll-1,MgCl22mmoll-1,1×缓冲液(上海博彩生产),聚合酶1.5U个单位,双蒸水补足至25μL。
PCR反应条件为:95℃预变性3min,94℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸30s,进行35个循环,最后72℃延伸5min。PCR产物用1.5%的琼脂糖在1×TAE缓冲液中电泳后,用溴化乙锭显色拍照。
从电泳照片上看(如图2所示),用FS-F、FO-F和Fu-R三条引物扩增的PCR产物中,2个茄病镰刀菌(F.solani)FS-4和FS-5的DNA均能扩增到347-bp的DNA条带,2个尖孢镰刀菌(F.oxysporum)FO-1和FO-2的DNA均能扩增到228-bp的DNA条带,茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的混合DNA(Fu-1,Fu-3)能同时扩增到347-bp和228-bp的条带,而其它病原真菌没有扩增到任何条带。说明该组种特异性引物对能够鉴定茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌。
田间病株检测
将田间采集的叶片萎蔫、根茎部发病的西瓜病株提取DNA,提取方法参照病株DNA提取。提取的DNA利用FS-F、FO-F和Fu-R进行常规PCR反应,每个反应均有一个阴性对照(以无菌水作为模板)。PCR反应的扩增体系和反应条件如上所述。如图3所示,病株1、2均能扩增到228-bp的DNA条带,说明病株被尖孢镰刀菌侵染,病株7、8能扩增到347-bp的DNA条带,说明病株被茄病镰刀菌侵染,病株5扩增不到任何条带,说明病株并未被尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌这两种病菌侵染。
Claims (11)
1.一种用于鉴定茄病镰刀菌的引物序列,其特征在于:上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:1所述,下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:2所述。
2.一种检测茄病镰刀菌的试剂盒,其特征在于:该试剂盒包含权利要求1所述的引物。
3.一种鉴定瓜类茄病镰刀菌的方法,其特征在于:提取待测样品DNA作为模版,利用权利要求1所述的引物进行PCR扩增反应,PCR产物经凝胶电泳后用溴化乙锭染色,根据凝胶中条带大小判断:若存在347-bp的DNA条带,则检测样品中含有茄病镰刀菌。
4.一种用于鉴定尖孢镰刀菌的引物序列,其特征在于:上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:3所述,下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:2所述。
5.一种检测尖孢镰刀菌的试剂盒,其特征在于:该试剂盒包含权利要求4所述的引物。
6.一种鉴定瓜类尖孢镰刀菌的方法,其特征在于:提取待测样品DNA作为模版,利用权利要求4所述的引物进行PCR扩增反应,PCR产物经凝胶电泳后用溴化乙锭染色,根据凝胶中条带大小判断:若存在228-bp的DNA条带,则检测样品中含有尖孢镰刀菌。
7.一种用于同时鉴定茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的引物序列,其特征在于:包括三条引物,第一条引物的核苷酸序列如SEQIDNO:1所述,第二条引物的核苷酸序列如SEQIDNO:2所述,第三条引物的核苷酸序列如SEQIDNO:3所述。
8.一种同时检测茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的试剂盒,其特征在于:该试剂盒包含权利要求7所述的引物。
9.一种鉴定瓜类茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的方法,其特征在于:提取待测样品DNA作为模版,利用权利要求7所述的引物进行PCR扩增反应,PCR产物经凝胶电泳后用溴化乙锭染色,根据凝胶中条带大小判断:若存在347-bp的DNA条带,则检测样品中含有茄病镰刀菌;若存在228-bp的DNA条带,则检测样品中含有尖孢镰刀菌。
10.根据权利要求3或6或9所述的方法,其特征在于:所述的PCR反应的扩增体系为:1μLDNA模板,引物各0.2μmoll-1,dNTP0.2μmoll-1,MgCl22mmoll-1,1×缓冲液,聚合酶1.5U个单位,双蒸水补足至25μL。
11.根据权利要求10所述的方法,其特征在于:所述的PCR反应条件为:95℃预变性3min,94℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸30s,进行35个循环,最后72℃延伸5min;PCR产物用1.5%的琼脂糖在1×TAE缓冲液中电泳后,用溴化乙锭显色拍照。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310308711.0A CN104263813B (zh) | 2013-07-18 | 2013-07-18 | 用于鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的引物序列、试剂盒及其方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310308711.0A CN104263813B (zh) | 2013-07-18 | 2013-07-18 | 用于鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的引物序列、试剂盒及其方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104263813A CN104263813A (zh) | 2015-01-07 |
CN104263813B true CN104263813B (zh) | 2016-07-06 |
Family
ID=52155389
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310308711.0A Active CN104263813B (zh) | 2013-07-18 | 2013-07-18 | 用于鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的引物序列、试剂盒及其方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104263813B (zh) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106319039A (zh) * | 2015-12-30 | 2017-01-11 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 快速检测百合鳞茎腐烂病病原菌——尖孢镰刀菌的方法 |
CN106868114B (zh) * | 2017-01-26 | 2020-01-07 | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 | 镰刀菌病病原菌rt-pcr检测引物和探针组合及试剂盒 |
CN106834488A (zh) * | 2017-03-01 | 2017-06-13 | 浙江省农业科学院 | 番茄颈腐根腐病菌pcr检测专用引物及其检测试剂盒 |
CN108841984A (zh) * | 2018-06-29 | 2018-11-20 | 苏州百源基因技术有限公司 | 一种用于检测尖孢镰刀菌的核苷酸序列组、试剂盒及方法 |
CN109504799A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-03-22 | 上海市农业科学院 | 一种快速鉴定镰刀菌菌种的引物组合及方法 |
CN109652586A (zh) * | 2019-02-19 | 2019-04-19 | 西安博睿康宁生物科技有限公司 | 一种鉴别四种镰刀菌的方法 |
CN112029887A (zh) * | 2020-08-20 | 2020-12-04 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 用于检测茄病镰刀菌多菌灵抗性菌株的基因、引物、试剂盒及方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101434993A (zh) * | 2008-10-01 | 2009-05-20 | 山东省眼科研究所 | 角膜常见致病真菌菌种检测的液相芯片系统及其检测方法 |
CN101974650A (zh) * | 2010-11-30 | 2011-02-16 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一种检测尖孢镰刀菌的pcr方法及试剂盒 |
CN102251055A (zh) * | 2011-08-22 | 2011-11-23 | 山东省眼科研究所 | 基于环介导等温扩增技术检测镰刀菌的引物及试剂盒 |
-
2013
- 2013-07-18 CN CN201310308711.0A patent/CN104263813B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101434993A (zh) * | 2008-10-01 | 2009-05-20 | 山东省眼科研究所 | 角膜常见致病真菌菌种检测的液相芯片系统及其检测方法 |
CN101974650A (zh) * | 2010-11-30 | 2011-02-16 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一种检测尖孢镰刀菌的pcr方法及试剂盒 |
CN102251055A (zh) * | 2011-08-22 | 2011-11-23 | 山东省眼科研究所 | 基于环介导等温扩增技术检测镰刀菌的引物及试剂盒 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104263813A (zh) | 2015-01-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104263813B (zh) | 用于鉴定茄病镰刀菌或/和尖孢镰刀菌的引物序列、试剂盒及其方法 | |
van Dam et al. | A mobile pathogenicity chromosome in Fusarium oxysporum for infection of multiple cucurbit species | |
Barnes et al. | Multigene phylogenies reveal that red band needle blight of Pinus is caused by two distinct species of Dothistroma, D. septosporum and D. pini | |
Dhib et al. | Multiplex PCR assay for the detection of common dermatophyte nail infections | |
Wonni et al. | Analysis of Xanthomonas oryzae pv. oryzicola population in Mali and Burkina Faso reveals a high level of genetic and pathogenic diversity | |
Schneider et al. | Detection of pine needle diseases caused by Dothistroma septosporum, Dothistroma pini and Lecanosticta acicola using different methodologies | |
CN107164471B (zh) | 一种快速鉴别中药材僵蚕中白僵菌真伪的分子鉴定方法 | |
Du et al. | LAMP Detection and Identification of the Blackleg Pathogen Leptosphaeria biglobosa ‘brassicae’ | |
CN102154278B (zh) | 一种小麦矮腥黑粉菌的快速检测方法及其特异性scar标记 | |
Jin et al. | Development of conventional and nested PCR assays for the detection of Ophiocordyceps sinensis | |
Poon et al. | Differential gene expression analysis of Secreted in Xylem (SIX) genes from Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4 in Musa acuminata cv. Berangan and potential application for early detection of infection | |
Li et al. | Incidence of sugarcane ratoon stunting disease in the major cane-growing regions of China | |
CN104651493B (zh) | 鉴定辣椒疫霉PcORP1基因核苷酸点突变及其对氟噻唑吡乙酮抗药性的方法 | |
Zhang et al. | Molecular variation of Sporisorium scitamineum in Mainland China revealed by internal transcribed spacers | |
CN102796825B (zh) | 特异性检测旱稻孢囊线虫的pcr方法 | |
CN107287316B (zh) | 甜菜孢囊线虫的特异性scar标记以及快速scar-pcr分子检测方法 | |
CN104975083B (zh) | 一种快速鉴定烟粉虱meam1、med两隐种的引物及其鉴定方法 | |
CN102154279B (zh) | 一种小麦矮腥黑粉菌的检测方法及特异性scar标记 | |
CN101760554B (zh) | 检测灰霉病菌群体对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗性频率的引物序列及方法 | |
CN104498593B (zh) | 鉴定或辅助鉴定仓储豆象的引物对及其试剂盒 | |
CN104120124B (zh) | 用于特异性检测小麦条锈菌的scar标记及检测方法 | |
CN101838705A (zh) | 一种水果或蔬菜上洋葱伯克氏菌群的检测及种的鉴定方法 | |
Silva et al. | Genetic diversity of Mycosphaerella fijiensis in Brazil analyzed using an ERIC-PCR marker | |
Grundy et al. | A molecular approach to explore the extent of the threatened fungus Hypocreopsis rhododendri within wood | |
CN104120125B (zh) | 用于检测小麦条锈菌的特异性scar标记 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |