CN104256347B - 生物强化细胞营养素在制备抗衰老功能食品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了生物强化细胞营养素在制备抗衰老功能食品中的应用，实验证明生物强化细胞营养素含有多种易被秀丽隐杆线虫吸收的核酸、多肽、多种氨基酸、维生素、微量元素等营养物质，不含酒精，对秀丽隐杆线虫身体无任何毒副作用；利用科学界公认的秀丽隐杆线虫模型证明了生物强化细胞营养素可使线虫寿命延长，促进线虫生长发育，抗紫外辐射，促进线虫产卵，拮抗抑卵药物FUDR，提高35℃氧化应激条件下秀丽隐杆线虫生存率，因此，本发明生物强化细胞营养素能提高秀丽隐杆线虫抗衰老能力。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物强化细胞营养素的用途。
背景技术
我们人类的身体由上万亿个细胞组成,这些细胞是人体结构的基本功能单位，细胞的健康是在核酸的调控下，依靠蛋白质、多种氨基酸、多肽、多糖、多种微量元素、矿物质等带有生物活性的物质以维持细胞的正常代谢。细胞有特定的职责，协同工作，保持着我们的身体健康。身体内的每个组织由细胞构成，而相关细胞组织集群便构成了人体的器官。虽然这些器官由功能不同的细胞构成，但是，它们需要同样的基本营养成分，这便是支撑细胞代谢的基础物质。细胞是有寿命的，理论上说，如果为细胞提供合适的、足够的基本营养成分，淘汰凋亡的细胞，精确复制已经存在的健康的细胞，提高人体对于疾病的自愈能力，我们人类可延缓衰老，保持健康。
人体对于疾病的自愈能力，即是人类依靠自身的内在生命力，依靠免疫系统、神经系统和内分泌系统为主的修复机制，修复受损的细胞、摆脱疾病与亚健康状态的一种保持身体健康的能力。当人体的自愈力下降时，是因为某些人体器官组织系统缺少足够的营养因子，细胞不能正常地代谢，不能完全正确地复制健康细胞和液化凋亡的细胞。由于细胞的不正确的复制，使得细胞的正常功能打了折扣，身体的自我修复能力减低，这直接影响了人体对于疾病的抵抗能力，一旦遭遇外界不良因素，人体就会生病。
长期以来,科学家们对衰老机理众说纷纭，在众多衰老学说中，以自由基学说最受重视，目前人们普遍认为：衰老主要是由于身体的正常防卫及修复机能衰退导致的，根据衰老的自由基理论，在正常生物体新陈代谢过程中产生的活性氧自由基(ROS)，尤其是超氧阴离子自由基(02-)是引起衰老以及与衰老相关疾病的主要原因之一。
秀丽隐杆线虫(caenorhabditiselegans,c.elegans,简称线虫)是一种在土壤中自由生活的蠕虫，以大肠杆菌为食，遍布世界各个角落。被普遍视为野生型线虫N2Bristol是Staniland在英格兰Bristol附近蘑菇堆肥中分离出来的。线虫作为研究体内抗衰老作用的模式动物有许多优点。
(1)线虫的遗传背景非常清晰。
(2)线虫是多细胞真核生物。
(3)线虫易观察。
(4)线虫在实验室条件下易培养、繁殖和保存。
(5)线虫生命周期短暂，其平均寿命约2-3周，便于短时间内进行药物筛选。
(6)线虫是研究天然化合物和天然药物对生命周期和表型影响的理想模型。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种生物强化细胞营养素在制备抗衰老功能食品中的应用。
本发明的技术方案概述如下：
生物强化细胞营养素在制备抗衰老功能食品中的应用。
生物强化细胞营养素是用下述方法制成：
(一)母液的制备：
(1)选取谷类为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30％～50％的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30～60分钟；
(2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4℃以下60～90分钟，停止旋转；
(3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
(4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100℃，30～60分钟，关闭蒸汽；
(5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30℃～50℃；
(6)停止旋转，加入原料总重量1％～3％的营养配料粉，旋转30～60分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
(7)停止旋转，加入原料总重量0.2％～0.4％的复合酶，旋转1～2小时；
(8)加入原料总重量0.2％～1％食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在28～35℃发酵8～15天，即得母液备用；
(二)胶料的制备：
(1)另取谷类为第二原料，用18～30℃水浸泡8～16小时；沥水，置于容器内；
(2)向容器内加入第二原料重量1～2倍的水，煮1～3小时；
(3)过滤，去除水，获得胶料备用；
(三)成品的制备：
(1)将母液与胶料按重量比为1：1～2的比例，混合，分离除渣，得混合液；
(2)加入混合液重量1％～2％的低聚异麦芽糖，混合液重量0.2％～0.7％的黄原胶，混合液重量0～1％的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
原料优选为黑糯米、黄糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五种。
述第二原料优选为黑糯米、黄糯米和白糯米至少一种。
复合酶优选为质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶。
食用菌种优选为面包酵母，甜酒曲酵母、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌至少两种。
本发明的优点：实验证明生物强化细胞营养素含有多种易被秀丽隐杆线虫吸收的核酸、多肽、多种氨基酸、维生素、微量元素等营养物质，不含酒精，对秀丽隐杆线虫身体无任何毒副作用；利用科学界公认的秀丽隐杆线虫模型证明了生物强化细胞营养素可使线虫寿命延长，促进线虫生长发育，抗紫外辐射，促进线虫产卵，拮抗抑卵药物FUDR，提高35℃氧化应激条件下秀丽隐杆线虫生存率，因此，本发明生物强化细胞营养素能提高秀丽隐杆线虫抗衰老能力。
附图说明
图1为生物强化细胞营养素上清液对秀丽隐杆线虫寿命影响的折线图；(实验组和对照组均含400μM的FUDR(抑制排卵的药物))
图2、图3为本发明生物强化细胞营养素(实验组和对照组均含100μM的FUDR(抑制排卵的药物))对秀丽隐杆线虫体型影响的结果(图2为生物强化细胞营养素上清液组，图3为阴性对照组)；
图4为本发明生物强化细胞营养素上清液饲喂秀丽隐杆线虫紫外线照射的生存曲线；
图5、6为本发明生物强化细胞营养素上清液饲喂秀丽隐杆线虫对其形态影响的结果(图5为生物强化细胞营养素上清液组，图6为阴性对照组)；
图7、8为本发明生物强化细胞营养素上清液饲喂秀丽隐杆线虫对其运动轨迹影响的结果(图7为生物强化细胞营养素上清液，图8为阴性对照组)。
图9为本发明生物强化细胞营养素上清液饲喂线虫对秀丽隐杆线虫产卵影响的结果：两组线虫后代数无统计学差异。生物强化细胞营养素上清液组生育峰期与对照组不同，生育峰期出现在第一天。
图10、11为本发明生物强化细胞营养素上清液(实验组和对照组均含100mMFUDR)对秀丽隐杆线虫体长的影响(图10为阴性对照组，图11为生物强化细胞营养素上清液组)。
图12生物强化细胞营养素有抑制FUDR的作用，其中A、B为生物强化细胞营养素组，C、D为阴性对照组。其中A、C拍摄于第6天，B、D拍摄于第8天。实验结果显示，50μMFUDR导致阴性对照组线虫产卵，但是卵并不孵化。而生物强化细胞营养素组卵全部孵化。说明生物强化细胞营养素有抑制FUDR的作用。
图13为在35℃氧化应激条件下本发明生物强化细胞营养素上清液(实验组和对照组均含100mMFUDR)对线虫生存率的影响。
具体实施方式
本发明的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好的理解本发明，但并不对本发明作任何限制。
本发明所采用的各个食用酵母菌均购自安琪酵母股份有限公司(但并不对本发明作任何限制，其它公司生产的功能相同的食用酵母菌也可以用于本发明)；各个乳杆菌购自丹麦汉森公司(但并不对本发明作任何限制，其它公司生产的功能相同的乳杆菌也可以用于本发明)。
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
生物强化细胞营养素用下述方法制成：
(一)母液的制备：
(1)选取重量比例为1:1:1:2:2的黑糯米、黄糯米、紫米、黍米和大米五种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30％的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30分钟；浸泡的目的是使原料充分吸收水份；
(2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4℃以下60分钟，停止旋转；放冷的目的是使吸水后的原料膨胀；
(3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；提前预热的目的是为了下一步通蒸汽之前的温度升高而节省能源；
(4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100℃，60分钟，关闭蒸汽；其目的是熟化并消毒；
(5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30℃；其目的为后续加入营养配料、复合酶及菌种提供合适的温度；
(6)停止旋转，加入原料总重量2％的营养配料粉，旋转30分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
(7)停止旋转，加入原料总重量0.2％的复合酶，旋转1小时；复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
(8)加入原料总重量0.2％食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在28℃发酵15天，即得母液备用；食用菌种为重量比为3:1的面包酵母菌和保加利亚乳杆菌；
(二)胶料的制备：
(1)另取重量比为1:1的黄糯米和白糯米为第二原料，用18℃水浸泡16小时；沥水，将沥水后的米置于容器内；
(2)向容器内加入第二原料重量1倍的水，煮1小时；
(3)过滤，去除水，获得胶料备用；
(三)成品的制备：
(1)将母液与胶料按重量比为1：1的比例，混合，分离除渣，得混合液；
(2)加入混合液重量1％的低聚异麦芽糖，混合液重量0.2％的黄原胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
本实施例中的旋转转速均为15转/分钟。
实施例2
生物强化细胞营养素用下述方法制成：
(一)母液的制备：
(1)选取重量比为1:1:2:1:1:2:1的黑糯米、紫米、黍米、白糯米、粟米、高粱米和大米七种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量40％的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡40分钟；
(2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4℃以下80分钟，停止旋转；
(3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
(4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100℃，50分钟，关闭蒸汽；
(5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至40℃；
(6)停止旋转，加入原料总重量1％的营养配料粉，旋转60分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
(7)停止旋转，加入原料总重量0.3％的复合酶，旋转1.5小时，复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
(8)加入原料总重量0.5％食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在32℃发酵12天，即得母液备用；食用菌种为重量比为2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和植物乳杆菌；
(二)胶料的制备：
(1)另取重量比为1：1的黄糯米和白糯米为第二原料，用30℃水浸泡8小时；沥水，置于容器内；
(2)向容器内加入第二原料重量1.5倍的水，煮2小时；
(3)过滤，去除水，获得胶料备用；
(三)成品的制备：
(1)将母液与胶料按重量比为1：1.5的比例，混合，分离除渣，得混合液；
(2)加入混合液重量2％的低聚异麦芽糖，混合液重量0.4％的黄原胶，混合液重量0.1％的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
本实施例中的旋转转速均为20转/分钟。
实施例3
生物强化细胞营养素用下述方法制成：
(一)母液的制备：
(1)选取重量比为1:1:1:2:1:0.5:1:1:0.5的黑糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米九种谷物为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量50％的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡60分钟；
(2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4℃以下90分钟，停止旋转；
(3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
(4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100℃，30分钟，关闭蒸汽；
(5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至50℃；
(6)停止旋转，加入原料总重量3％的营养配料粉，旋转30分钟；营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
(7)停止旋转，加入原料总重量0.4％的复合酶，旋转2小时，复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
(8)加入原料总重量1％食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在35℃发酵8天，即得母液备用；食用菌种为重量比为2:1:1的面包酵母、甜酒曲酵母和嗜酸乳杆菌；
(二)胶料的制备：
(1)另取黑糯米为第二原料，用25℃水浸泡10小时；沥水，置于容器内；
(2)向容器内加入第二原料重量2倍的水，煮3小时；
(3)过滤，去除水，获得胶料备用；
(三)成品的制备：
(1)将母液与胶料按重量比为1：2的比例，混合，分离除渣，得混合液；
(2)加入混合液重量2％的低聚异麦芽糖，混合液重量0.7％的黄原胶，混合液重量1％的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素。
各实施例中的转速为15-20转/分钟，其目的是例物料混匀，但对转速并不限制，达到混匀目的的其它转速也可以使用。
在实施例1－3的基础上再加以微波、气流干燥、喷雾等烘干技术，可将本发明制成粉体状食品，减轻了液体灌装的重量，方便外出携带，食用时即冲即食；
在实施例1－3的基础上再在上述成品工序中将黄原胶的加入比例提高，加入天然果胶，也可制成类似果冻状食品，或添加到巧克力、麦乳精、饼干、面包等食品中食用；也可精制成口服液服用。又可制成固体羹状食品，此外，本发明还可制成饼干、糖果、点心等食品，方便各类群体食用。
实施例4
生物强化细胞营养素上清液对线虫生物学影响试验
实验材料：野生型秀丽隐杆线虫N2(简称线虫)(购于美国NIH Nation Center forResearch Resources(NCRR)支持的Caenorhabditis Genetics Center(CGC,Universityof Minnesota,Minneapolis,MN))、大肠杆菌E.coli OP50由中国科学院化学研究所分子动态与稳态结构实验室刘扬研究院惠赠。
实验方法：
1.线虫同期化的实验方法：
方法1：
(1)挑取处于产卵期的线虫若干条在一个平板中，具体数量视所需要的线虫数量而定，一般一条产卵期线虫一小时可以产卵8个左右。
(2)30分钟后，将平板中线虫挑出，平板中的卵孵化后即处于同一发育时期。
方法2：
(1)培养大批产卵期线虫
(2)配制线虫裂解液：5M NaOH1ml+10％NaClO2ml；(溶剂是M9缓冲液)
(3)以蒸馏水冲洗平板上的线虫，将液体收集于管中；
(4)放置或轻微离心后吸走上清，合并各管的线虫，转移至1.5mlEP管中，轻微离心后留100μl上清，其余的上清吸走；
(5)EP管中加600μl蒸馏水和300μl线虫裂解液；
(6)EP管室温放置10min，期间每2min涡旋一次。10min后8000rpm离心8min，去上清
(7)无菌操作下向EP管中加入1ml灭过菌的蒸馏水或M9缓冲液，旋后离心，重复洗两遍。
(8)冲洗完毕的虫卵重新以M9缓冲液悬浮，混匀后将悬浮液分到数个平板上。
2.生物强化细胞营养素上清液的获取方法：将罐装生物强化细胞营养素分装至50ml离心管，12000rpm4℃离心15min，取上清,4℃保存备用。
实施例5
在FUDR(5-氟尿嘧啶)作用情况下，生物强化细胞营养素对线虫寿命的影响
步骤1：设置两组样品，第一组为生物强化细胞营养素(实施例3制备)上清液与大肠杆菌E.coli OP50(简称OP50)体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入上述液体200μl，涂布棒涂匀；第二组为阴性对照组为M9缓冲液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入200μl上述液体，涂布棒涂匀。实验中的OP50含400μMFUDR。
步骤2：将同期化得到的线虫卵(实施例4方法1获得)置于上述两组NGM板上。
步骤3：线虫卵孵化开始记为线虫生命起始的0天，发育为成虫后隔天转移至新的相应的NGM板上。每天观察线虫存活情况并记录。以用挑虫器末端轻触虫体无反应为线虫生命终止；线虫寿命期记为线虫从生命起始到生命终止的时间。死亡及剔除出实验的条数：对线虫死亡判断标准:无移动及吞咽动作,轻触后仍无任何反应。剔除标准：逃离至平皿壁或盖上而干死；虫卵在体内孵化而成袋样虫；钻入琼脂中。
步骤4：统计每天数据并制作线虫生存曲线
结果见图1。
图1为生物强化细胞营养素上清液对线虫寿命影响的折线图。
实验证明，实施例1、实施例2制备的生物强化细胞营养素上清液对线虫寿命影响与实施例3的影响相似。
实施例6
在FUDR作用情况下，生物强化细胞营养素对线虫生长发育的影响
步骤1：设置两组样品，第一组为生物强化细胞营养素(实施例3制备)上清液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入上述液体200μl，涂布棒涂匀；第二组为阴性对照组为M9缓冲液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入200μl上述液体，涂布棒涂匀。实验中的OP50含100μMFUDR。
步骤2：将同期化得到的线虫卵(实施例4方法2获得)置于上述两组NGM板上。
步骤3：线虫卵孵化开始记为线虫生命起始的0天，发育为成虫后隔天转移至新的相应的NGM板上。
步骤4：每天观察线虫生长发育情况并记录体长和运动轨迹，通过荧光显微镜拍照记录。
结果见表1、图2、图3、图10、图11。
表1为本发明生物强化细胞营养素上清液对线虫体长的影响数据统计表。
表1 生物强化细胞营养素上清液(含100mM FUDR)对线虫体长的影响
注：P≦0.01
图2、图3为本发明生物强化细胞营养素对线虫体型影响的结果(图2为生物强化细胞营养素上清液组，图3为阴性对照组)；
图10、11为本发明生物强化细胞营养素上清液对线虫体长的影响(图10为阴性对照组，图11为生物强化细胞营养素上清液组)。
实验证明，实施例1、实施例2制备的生物强化细胞营养素上清液对线虫生长发育的影响与实施例3的影响相似。
实施例7
生物强化细胞营养素对线虫抗紫外辐射能力的影响
步骤1：设置两组样品，第一组为生物强化细胞营养素(实施例3制备)上清液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入上述液体200μl，涂布棒涂匀；第二组为阴性对照组为M9缓冲液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入200μl上述液体，涂布棒涂匀。
步骤2：将实施例4方法1获得的同期化得到的线虫卵置于上述两组NGM板上，置于20℃恒温培养箱培养。
步骤3：线虫卵孵化开始记为线虫生命起始的0天，发育为成虫后隔天转移至新的相应的NGM板上。
步骤4：于培养第六天给予剂量为1000J/m2紫外照射，每天统计线虫死亡数目、拍照。
结果见图4、图5、图6、图7、图8。
图4为本发明生物强化细胞营养素上清液饲喂秀丽隐杆线虫紫外线照射的生存曲线；
图5、6为本发明生物强化细胞营养素上清液饲喂秀丽隐杆线虫对其形态影响的结果(图5为生物强化细胞营养素上清液组，图6为阴性对照组)；
图7、8为本发明生物强化细胞营养素上清液饲喂线虫对其线虫运动轨迹影响的结果(图7为生物强化细胞营养素上清液，图8为阴性对照组)。
实验证明，实施例1、实施例2制备的生物强化细胞营养素上清液对秀丽隐杆线虫生长发育的影响与实施例3的影响相似。
实施例8
生物强化细胞营养素对线虫产卵的影响：包括单位时间内产卵数量即产卵率、整个产卵期所有卵数量即后代数目。
步骤1：设置两组样品，第一组为生物强化细胞营养素(实施例3制备)上清液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入上述液体200μl，涂布棒涂匀；第二组为阴性对照组为M9缓冲液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入200μl上述液体，涂布棒涂匀。
步骤2：将实施例4方法1获得的同期化得到的线虫卵置于上述两组NGM板上培养；
步骤3：分别从第一组和阴性对照组平板上各挑取12条处于L4期的线虫到各自的平板中，编号后，每个平板放置1条线虫。置于20℃恒温培养箱培养。
步骤4：当线虫进入产卵期后，每隔24小时将线虫转移至新的平板中，转移4次后，线虫基本已经不再产卵。
步骤5：将所有平板继续在培养箱中培养，待线虫孵化长大后，在其进入产卵期之前对线虫数目进行计数，计算每条线虫在5个平板中产卵数的总和就是该线虫的产卵数量。
实验结果见图9
图9为本发明生物强化细胞营养素上清液饲喂线虫对线虫产卵影响的结果：两组线虫后代数无统计学差异。生物强化细胞营养素上清液组生育峰期与对照组不同，生育峰期出现在第一天。
实施例9
生物强化细胞营养素抗FUDR试验
步骤1：设置两组样品，第一组为生物强化细胞营养素(实施例3制备)上清液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入上述液体200μl，涂布棒涂匀；第二组为阴性对照组为M9缓冲液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入200μl上述液体，涂布棒涂匀。实验中的OP50含50μMFUDR。
步骤2：将实施例4方法1获得的同期化线虫卵置于上述两组NGM板上培养；
步骤3：分别从第一组和阴性对照组平板上各挑取12条处于L4期的线虫到各自的平板中，编号后，每个平板放置1条线虫。置于20℃恒温培养箱培养。
步骤4：当线虫进入产卵期后，每隔24小时将线虫转移至新的平板中，转移4次后，线虫基本已经不再产卵。
步骤5：将所有平板继续在培养箱中培养，观察线虫是否孵化。
结果见图12。其中A、B为生物强化细胞营养素组，C、D为阴性对照组。其中A、C拍摄于第6天，B、D拍摄于第8天。
实验结果显示，50μMFUDR导致阴性对照组线虫产卵，但是卵并不孵化。而生物强化细胞营养素组卵全部孵化。说明生物强化细胞营养素有抑制FUDR的作用。
实施例10在35℃氧化应激条件下生物强化细胞营养素上清液(实验组和对照组均含100mM FUDR)对秀丽隐杆线虫生存率的影响
步骤1：设置两组样品，第一组为生物强化细胞营养素(实施例3制备)上清液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入上述液体200μl，涂布棒涂匀；第二组为阴性对照组为M9缓冲液与OP50体积比为1:1混匀，每个6cmNGM培养皿滴入200μl上述液体，涂布棒涂匀。实验中的OP50含100μMFUDR
步骤2：将将实施例4方法1获得的同期化线虫卵置于上述两组NGM板上，置于20℃恒温培养箱培养。
步骤3：线虫卵孵化开始记为线虫生命起始的0天，发育为成虫后隔天转移至新的相应的NGM板上。
步骤4：20℃培养至L4期(约3.5天)，转至35℃生化培养箱，此时设为0h，以后每隔1h记录线虫死亡数目。
结果图13。
图13为在35℃氧化应激条件下本发明生物强化细胞营养素上清液(实验组和对照组均含100mMFUDR)对线虫生存率的影响。
实验证明，在35℃氧化应激条件下实施例1、实施例2制备的生物强化细胞营养素对秀丽隐杆线虫生存率的影响与实施例3的作用相似。
Claims (3)
1.生物强化细胞营养素在制备抗衰老功能食品中的应用，所述生物强化细胞营养素是用下述方法制成：
(一)母液的制备：
(1)选取谷类为原料，清洗分离杂质后，置于纸浆蒸煮机中加入原料总重量30％～50％的水，启动纸浆蒸煮机，旋转浸泡30～60分钟；
(2)停止旋转，将水放净，打开冷气机，通入冷气，旋转保持-4℃以下60～90分钟，停止旋转；
(3)关闭冷气机，打开空压机，通入室温空气，旋转，升温至室温；
(4)关闭空压机，停止旋转，通入蒸汽，旋转，保持100℃，30～60分钟，关闭蒸汽；
(5)停止旋转，打开空压机，通入室温空气，旋转，降至30℃～50℃；
(6)停止旋转，加入原料总重量1％～3％的营养配料粉，旋转30～60分钟；所述营养配料为重量比为1:2:3:1的灵芝、枸杞、蓝莓果和肉桂；
(7)停止旋转，加入原料总重量0.2％～0.4％的复合酶，旋转1～2小时；
(8)加入原料总重量0.2％～1％食用菌种，旋转使均匀；停止旋转，分装至发酵桶，在28～35℃发酵8～15天，即得母液备用；
(二)胶料的制备：
(1)另取谷类为第二原料，用18～30℃水浸泡8～16小时；沥水，置于容器内；
(2)向容器内加入第二原料重量1～2倍的水，煮1～3小时；
(3)过滤，去除水，获得胶料备用；
(三)成品的制备：
(1)将母液与胶料按重量比为1：1～2的比例，混合，分离除渣，得混合液；
(2)加入混合液重量1％～2％的低聚异麦芽糖，混合液重量0.2％～0.7％的黄原胶，混合液重量0～1％的阿胶，均质；灌装灭菌，得生物强化细胞营养素；
所述复合酶是质量比为3:3:1:1的糖化酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶；
所述食用菌种为面包酵母，甜酒曲酵母、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌至少两种。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述原料为黑糯米、黄糯米、白糯米、紫米、黍米、粟米、香米、高粱米、大米和薏米中的至少五种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述第二原料为黑糯米、黄糯米和白糯米至少一种。
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