CN111704651B - 具有抗衰老作用的多肽rv3和rv4及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种能够延长秀丽隐杆线虫寿命的多肽及其应用，属于生物医药领域。本发明系列多肽具有氨基酸序列TX1X2AA（X1X2：任意氨基酸，优选为AF/KA）或其药学上可以接受的盐，更进一步地，所述的多肽序列在上述序列基础上，一个或多个氨基酸被删除、置换或添加后仍具有抗衰老活性的多肽，或该多肽药学上可以接受的盐。多肽具有延长秀丽线虫寿命，抵抗衰老的作用，同时具有增强运动行为能力，提高压力应激能力和改善衰老进程中运动能力衰退的作用。
Description
技术领域
本发明属于生物药物领域，更具体地说，涉及一种具有抗衰老活性的多肽及其应用。
背景技术
衰老是机体在经过性成熟时期后，细胞的自我更新和修复能力减弱，组织器官的结构和功能退化，并最终走向死亡的过程，其特征表现在压力应激能力减退，平衡状态打破和罹患疾病风险增加。随着全球人口老龄化，多种老年退行性疾病以及随之产生的巨大的医疗费用已成为越来越严重的社会问题。保持老年人群健康状态是减轻人口老龄化带来的社会负担和经济负担的关键环节。因此，探索简便易行，经济有效，安全性高并适宜推广的干预衰老及衰老相关疾病的措施和方法意义重大。
在早期的衰老研究中，科学家认为纯粹的衰老研究应与衰老相关疾病严格区分开来。衰老相关疾病一般指伴随衰老其发病率增加的疾病。目前认为的衰老相关疾病主要为心血管疾病、肿瘤、风湿、骨质疏松、白内障、二型糖尿病、高血压及老年痴呆等。但随着衰老研究的推进，人们发现多种衰老相关疾病的发生发展与衰老进程具有同源性，衰老进程本身是众多衰老相关疾病的基本风险因子。社会责任也促使生物学家意识到，单独的延长寿命并不能减轻老龄化所带来的沉重的社会经济负担，只有延长健康寿命才具有现实意义。因此，如何降低衰老相关疾病，提高老年人晚年生存质量，延长健康寿命成为衰老研究的热点所在。目前，健康寿命并无严格的指标衡量，一般认为衰老干预手段能够在延长寿命的同时，提高机体的应激能力，降低衰老相关疾病的发生发展，改善衰老相关性退化，就可称为延长健康寿命。
秀丽隐杆线虫作为研究衰老的经典模式动物，其具有如下优势：首先，寿命相对较短，在标准实验室条件下仅2-3周，使整个寿命存活分析成为可能；其次，在受控的环境条件下容易获得大量遗传上相同的动物；第三，虫体透明方便直接观察细胞和组织是如何随年龄变化的；第四，对线虫的细胞组织，神经元连接和全基因组的深入了解有助于抗衰老的研究。秀丽线虫模型的一个主要优点是可以很容易地利用遗传方法来提供生物学信息，从而确定了大量可以改变寿命的基因突变。最后，秀丽线虫的寿命表现出显著的可塑性，并且可能受到环境条件、营养条件以及基因突变的影响，即使是在受控条件下，个体寿命也可能发生变化，从而揭示衰老的随机因素。因此，秀丽隐杆线虫可以作为研究药物抗衰老活性的模型动物。
目前为止，最普遍的抗衰老方式是使用抗衰老药物。临床上使用的延缓衰老的药物大多是合成类药物，如维生素E可促进细胞分裂及抑制氧自由基生成、普鲁卡因制剂能延长细胞寿命、酰胺吡酮可延缓脑衰老等；阿司匹林通过对抗氧化应激，延缓衰老引起的机体功能下降，从而延长线虫寿命；二甲双胍作为腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激活剂，也可改善认知障碍，对延缓衰老也有一定的作用；PAL-12(一个六元肽)、白藜芦醇类似物等药物的抗衰老作用也备受青睐。
发明内容
1.要解决的问题
本发明提供一种具有抗衰老活性的多肽及其应用，本发明的多肽能有效地延长秀丽隐杆线虫的寿命，具有良好的抗衰老效果并具有很大的开发前景。
2.技术方案
为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种具有抗衰老活性的多肽，其特征在于：多肽的氨基酸序列为X-TX1X2AA或其药学上可以接受的盐；X＝H、乙酰基或丙酰基；X1和X2：任意氨基酸。
所述的一种具有抗衰老活性的多肽，其特征在于X1X2为AF或者KA。
所述的一种具有抗衰老活性的多肽，其特征在于其氨基酸序列为TAFAA(命名为RV3)或TKAAA(命名为RV4)。
所述的多肽在制备抗衰老药物中的应用。
需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表
面活性剂、润滑剂和稳定剂等。
本发明的药物可以制成注射液、冻干粉针剂、片剂或颗粒剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
3.有益效果
相比于现有技术，本发明的有益效果为：
(1)本发明的多肽结构新颖，组成基本单位均为天然氨基酸，容易合成、分离和纯化；
(2)能够有效延长秀丽隐杆线虫的寿命，具有抗衰老的活性；
(3)本发明的多肽安全性好，不良反应和毒副反应弱，不影响秀丽隐杆线虫的生长发育，不影响线虫的生殖能力；
(4)本发明涉及的多肽抗衰老效果在秀丽隐杆线虫模型中表现良好，具体表现在显著提高线虫的运动行为能力，延缓线虫衰老进程中运动能力的衰退，延长线虫的半数生存天数，提高线虫的压力应激能力，延长线虫的寿命。
附图说明
图1多肽对秀丽隐杆线虫寿命影响实验的生存曲线。图中可以看出，RV4多肽组具有显著延长秀丽线虫寿命的效果。
图2多肽对秀丽隐杆线虫体长体宽的影响结果。其中，A图为体长结果，B图为体宽结果。结果以Mean±SEM表示，与空白组对比，n.s.为没有显著性差异，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。多肽组与空白组相比没有显著性差异，说明多肽RV3和RV4不影响秀丽线虫正常的生长发育，该多肽具有良好的安全性。
图3多肽对秀丽隐杆线虫育雏数的影响结果。结果以Mean±SEM表示，与空白组对比，n.s.为没有显著性差异，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。多肽组与空白组相比没有显著性差异，说明多肽RV3和RV4不影响秀丽线虫正常的生殖能力，该多肽具有良好的安全性。
图4多肽对秀丽隐杆线虫运动行为能力的影响结果。其中，A图为头部摆动结果，B图为身体弯曲结果，C图为咽泵频率结果。结果以Mean±SEM表示，与空白组对比，n.s.为没有显著性差异，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。RV4多肽组与空白组相比具有显著性差异，说明多肽RV4能够增强秀丽线虫的肌肉运动，提高线虫的运动行为能力。
图5秀丽隐杆线虫的急性热应激实验的生存曲线。其中A图为Day4急性热应激实验线虫的生存曲线，B图为Day8急性热应激实验线虫的生存曲线。图中可以看出，RV3和RV4多肽组均能显著提高线虫急性热压力应激的能力，说明该多肽药物能够延长线虫在热环境下的生命周期。
图6秀丽隐杆线虫的急性热应激实验的运动力评级结果。其中A图为Day4急性热应激实验线虫的运动力评级结果，B图为Day8急性热应激实验线虫的运动力评级结果。图中可以看出Day4时间点RV3和RV4多肽组中A等级的线虫占比要高于空白组，Day8时间点RV3和RV4多肽组中C等级的线虫占比要低于空白组，这进一步说明该多肽药物能够增强秀丽线虫急性热应激的能力，即在热环境下的运动行为能力。
图7秀丽隐杆线虫的急性氧化应激实验的检测结果。其中A图为Day4急性氧化应激实验的检测结果，B图为Day8急性氧化应激实验的检测结果。结果以Mean±SEM表示，与空白组对比，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。图中可以看出，RV4多肽组线虫的存活率显著高于空白组，这说明该多肽药物能够延长线虫在氧化环境下的生命周期。
图8秀丽隐杆线虫的急性氧化应激实验的运动力评级结果。其中A图为Day4急性氧化应激实验线虫的运动力评级结果，B图为Day8急性氧化应激实验线虫的运动力评级结果。图中可以看出Day8时期急性氧化应激实验中，RV3和RV4多肽组中处于A等级的线虫占比要高于空白组，这进一步说明该多肽药物能够增强秀丽线虫急性氧化应激的能力；Day4急性氧化应激实验中，多肽组和空白组没有运动力上的差异性。
图9不同年龄段的秀丽线虫的运动能力评级结果。其中A图为Day4时间点对线虫运动能力评级结果，B图为Day8时间点对线虫运动能力评级结果，C图为Day12时间点对线虫运动能力评级结果。图中可以看出，Day8和Day12时间点RV3和RV4多肽组与空白组相比，处于C等级的线虫占比要明显低于空白组，这意味着，该多肽能够延缓秀丽线虫的肌肉衰老，增加线虫的行动能力，从而延长线虫的寿命。
图10不同年龄段的秀丽线虫的运动能力检测结果。其中A图为Day4时间点对线虫运动能力检测结果，B图为Day8时间点对线虫运动能力检测结果，C图为Day12时间点对线虫运动能力检测结果。结果以Mean±SEM表示，与空白组对比，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。图中可以看出，RV4多肽组与空白组相比，头部摆动次数显著高于空白组，且咽泵频率也高于空白组，这意味着，RV4多肽能够延缓秀丽线虫的肌肉衰老，增加线虫的运动行为能力，延缓线虫行动力的衰退，从而延长线虫的寿命。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。以下所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员均可能利用以下揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修饰或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
多肽RV3：TAFAA和多肽RV4：TKAAA由江苏省合成多肽药物发现与评价工程中心合成，纯度分别为97.30％，93.85％。
实施例1
多肽对秀丽隐杆线虫模型的寿命影响实验
1.实验材料
大肠杆菌OP50，培养条件：振荡培养箱，220rpm，37℃培养
野生型秀丽隐杆线虫，培养条件：恒温恒湿培养箱，20℃，湿度45％-55％
5-FUDR：15.6μg/ml
NaN3：0.4M
H2O2：30mM
RV3：Thr-Ala-Phe-Ala-Ala，10nM
RV4：Thr-Lys-Ala-Ala-Ala，10nM
2.实验方法
秀丽隐杆线虫的同步化：选取线虫密度适中的NGM培养皿，用挑针挑取L4期的幼虫，转移到空白的NGM培养皿，一共挑取20只左右，待它们发育到成虫并且产下第一批卵后，将成虫全部挑走，大约12h后，卵孵化成幼虫，即可得到同步化后的L1期幼虫。
秀丽隐杆线虫寿命实验的前期准备：用1ml M9缓冲液冲洗NGM培养基，收集含有L1期幼虫的缓冲液于EP管中，4℃层析柜放置5min，1500x g/4℃离心3min，弃掉上清，100μl缓冲液重悬混匀后，于显微镜下计数线虫，然后稀释线虫浓度为30worms/10μl；取已接种大肠杆菌OP50的NGM培养皿，加入10μl的线虫稀释液，最后显微镜下观察计数，保证线虫数目在30只左右，然后将NGM培养皿置于恒温培养箱中培养。
秀丽隐杆线虫寿命实验：待L1期线虫发育到L4期，加入100μl的15.6μg/ml的5-FUDR，用来抑制秀丽线虫产卵；待线虫发育为成虫，开始给药，分为control组，10nM给药组，此时记为寿命实验的第1天；此后每天给药，每天观察记录存活、死亡和意外死亡的线虫数，观察记录线虫状态，直到最后一只线虫死亡。判断死亡的标准是：秀丽线虫对强光或敲击平板没有反应，高倍镜下咽部肌肉没有运动，最后用挑虫针敲击线虫的头部，若依然没有反应即可判断为死亡。死亡的线虫需要挑出培养皿，大肠杆菌OP50耗尽时及时添加。对数据进行Kaplan-Meier统计分析，数据结果以Median±SE表示，与Control组对比，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。
3.实验结果
(1)秀丽隐杆线虫寿命实验结果记录：
表1秀丽隐杆线虫的剩余数的记录结果
RV4多肽组的死亡出现天数和空白组相比要相对推迟，且线虫的最长寿命为33天，比空白组多5天；RV3组的死亡出现天数和空白组相比要相对推迟，线虫的最长寿命为30天，比空白组多2天，详见表1和图1。
(2)秀丽隐杆线虫的半数死亡天数：
表2秀丽隐杆线虫的半数死亡天数的检测结果
注：以上结果用Median±SE表示；与Control组比，*P<0.05，**P<0.01
RV4给药组的半数死亡天数与空白组相比，具有非常显著性差异，说明RV4多肽具有显著延长秀丽线虫寿命的作用，能够延长寿命4天；RV3多肽的半数死亡天数与空白组相比，没有显著性差异。详见表2和图1，实验结果具有统计学意义。
实施例2多肽对秀丽隐杆线虫的生长发育影响实验
1.实验材料
同实施例1。
2.实验方法
秀丽隐杆线虫的同步化：同实施例1。
秀丽隐杆线虫的生长发育实验：收集同步化至L1期的幼虫，铺在已接种大肠杆菌OP50的NGM固态培养基上，分为Control组，10nM给药组，置于恒温恒湿培养箱中进行培养72h，检测线虫成虫时期的体长和体宽，检测方法如下：每组分别挑取秀丽隐杆线虫20只，挑至新的NGM固态培养基上，然后滴加50μlNaN3，浓度为0.4M，待大部分虫体僵直后，于倒置显微镜下拍照记录，然后用Photoshop的标尺工具，即可测量秀丽线虫的体长和体宽。对数据进行One-way ANOVAY统计分析，数据结果以Mean±SEM表示，与Control组对比，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。
3.实验结果
表3多肽对秀丽隐杆线虫的体长体宽的影响
注：以上结果用Mean±SEM表示；与Control组比，*P<0.05，**P<0.01
多肽组与空白组相比，秀丽线虫的体长和体宽均没有显著性差异，这意味着，RV3和RV4多肽均不影响秀丽隐杆线虫正常的生长发育，说明此多肽具有良好的安全性。详见表3和图2，实验结果具有统计学意义。
实施例3多肽对秀丽隐杆线虫的生殖能力影响实验
1.实验材料
同实施例1。
2.实验方法
秀丽隐杆线虫同步化：同实施例1。
秀丽隐杆线虫的生殖能力检测：收集同步化后L1期的幼虫，铺在已接种大肠杆菌OP50的NGM固态培养基上，分为Control组，10nM给药组，置于恒温恒湿培养箱中培养至L4期幼虫。每组分别挑取1只L4期幼虫于新的NGM固态培养基上，并保证在该线虫的产卵期内，每天将线虫转移到新的培养基上，含有虫卵的培养基继续在培养箱中培养24h，然后对每个平板上的幼虫进行计数相加，直到该线虫的产卵结束，相加后的数据即该线虫的子代总数目。每组重复记录10只线虫的子代数目。对数据进行One-way ANOVAY统计分析，数据结果以Mean±SEM表示，与Control组对比，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。
3.实验结果
表4多肽对秀丽隐杆线虫的育雏数的影响
注：以上结果用Mean±SEM表示；与Control组比，*P<0.05，**P<0.01
多肽组与空白组相比，秀丽线虫产生的子代总数没有显著性差异，这意味着，RV3和RV4多肽不影响秀丽隐杆线虫正常的生殖能力，说明此多肽具有良好的安全性。详见表4和图3，实验结果具有统计学意义。
实施例4
多肽对秀丽隐杆线虫的运动行为能力影响实验
1.实验材料
同实施例1。
2.实验方法
秀丽隐杆线虫同步化：同实施例1。
秀丽隐杆线虫的运动行为能力检测：同步化后L1期的幼虫，铺在已接种大肠杆菌OP50的NGM固态培养基上，分为Control组，10nM给药组，置于恒温恒湿培养箱中培养48h。然后检测以下三种运动行为能力的指标：头部摆动频率，每组挑取20只线虫至新的干净的培养基上，使其适应恢复1h后，加入适量M9缓冲液，在倒置显微镜下观察记录30s内，线虫头部从一侧摆到另一侧再摆回来的次数；身体弯曲频率，每组挑取20只线虫至新的干净的培养基上，使其适应恢复1h后，在倒置显微镜下观察记录30s内，线虫的身体弯曲次数，线虫向前爬行一个波长的距离记为一次身体弯曲；咽泵运动频率，每组挑取20只线虫至已接种大肠杆菌OP50的培养基上，使其适应恢复1h后，在倒置显微镜下放大到能够看清线虫的咽泵运动，每只线虫录像30s，然后用PotPlayer以0.3倍速慢放录像，记数线虫的咽泵次数。对数据进行One-way ANOVAY统计分析，数据结果以Mean±SEM表示，与Control组对比，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。
3.实验结果
表5多肽对秀丽隐杆线虫的运动行为能力的影响
注：以上结果用Mean±SEM表示；与Control组比，*P<0.05，**P<0.01
RV4多肽组和空白组相比，具有显著性差异。这意味着，RV4多肽能够显著增强秀丽隐杆线虫的肌肉运动，提高线虫的运动行为能力；RV3多肽与空白组相比，没有显著性差异。详见表5和图4，实验结果具有统计学意义。
实施例5
秀丽隐杆线虫模型的压力应激实验
1.实验材料
同实施例1。
2.实验方法
秀丽隐杆线虫的同步化：同实施例1。
秀丽线虫的压力应激实验前期准备：同实施例1的寿命实验。
秀丽线虫的急性热应激实验：取连续给药第4天的秀丽隐杆线虫，然后置于35℃恒温培养箱中进行压力应激实验，每隔4h记录一次线虫的生死，直到最后一只线虫死亡，判断死亡的标准同寿命实验；同时，在实验开始后的第24h，对存活的秀丽线虫的运动行为能力进行评级，行动力分为三个等级，A、B、C，判断标准如下：线虫能够自主爬行定义为A，线虫仅在挑针触碰头部后开始挪动定义为C，介于两者状态之间的定义为B；取连续给药第8天的线虫，置于35℃恒温培养箱中，每隔2小时记录一次线虫的生死，直到最后一次死亡，判断死亡标准和行动力评级标准同上述第4天的热应激实验。对数据进行Kaplan-Meier统计分析，数据结果以Median±SE表示，与Control组对比，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。
秀丽线虫的急性氧化应激实验：分别取连续给药第4天和第8天的秀丽隐杆线虫，置于30mM的H2O2中浸泡4h，然后转移到NGM固态培养基上恢复24h后，于显微镜下记录秀丽线虫的存活数和死亡数，并对存活线虫的运动行为能力进行评级，判断死亡标准和行动力评级标准同急性热应激实验。对数据进行One-way ANOVAY统计分析，数据结果以Mean±SEM表示，与Control组对比，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。
3.实验结果
(1)秀丽隐杆线虫热应激实验结果记录：
表6热应激Day4秀丽线虫的剩余数的记录结果
表7热应激Day8秀丽线虫的剩余数的记录结果
Day4急性热应激实验结果显示，RV3和RV4多肽组的死亡出现时间和空白组相比没有差异，但RV3多肽组的线虫最长存活时间为32h，比空白组多4h；Day8急性热应激实验结果显示，RV4多肽组的死亡出现时间和空白组相比要相对推迟，且两个给药组的线虫最长存活时间为18h，比空白组多4h，详见表6、表7和图5。
(2)秀丽隐杆线虫热应激实验的半数死亡时间：
表8热应激Day4秀丽线虫的半数死亡时间的检测结果
注：以上结果用Median±SE表示；与Control组比，*P<0.05，**P<0.01
表9热应激Day8秀丽线虫的半数死亡时间的检测结果
注：以上结果用Median±SE表示；与Control组比，*P<0.05，**P<0.01
Day4急性热应激实验结果显示，RV3多肽组的半数死亡时间与空白组相比，具有显著性差异，而RV4多肽组没有差异性；Day8急性热应激实验结果显示，RV3和RV4多肽组的半数死亡时间与空白组相比，均具有显著性差异，说明RV3和RV4多肽均能显著提高线虫急性热压力应激的能力，在35℃的热压力应激下，给药组的半数死亡时间要比空白组多4-6h。详见表8、表9和图5，实验结果具有统计学意义。
(3)秀丽隐杆线虫热应激实验的运动能力评级：
表10热应激Day4秀丽线虫的运动力评级检测结果
注：线虫能够自主爬行定义为A，线虫仅在挑针触碰头部后开始挪动定义为C，介于两者状态之间的定义为B
表11热应激Day8秀丽线虫的运动力评级检测结果
注：线虫能够自主爬行定义为A，线虫仅在挑针触碰头部后开始挪动定义为C，介于两者状态之间的定义为B
Day4热应激运动力评级结果显示，RV3和RV4多肽组中，处于A等级的线虫占比要高于空白组；Day8热应激运动力评级结果显示，给药组中处于C等级的线虫要低于空白组，这说明该多肽药物能够增强秀丽线虫急性热应激的能力，详见表10、表11和图6。
(4)秀丽隐杆线虫氧化应激实验的检测结果：
表12氧化应激Day4秀丽线虫的存活率检测结果
注：以上结果用Mean±SEM表示；与Control组比，*P<0.05，**P<0.01
表13氧化应激Day8秀丽线虫的存活率检测结果
注：以上结果用Mean±SEM表示；与Control组比，*P<0.05，**P<0.01
Day4和Day8氧化应激实验结果显示，RV4多肽组与空白组相比，线虫的存活率具有显著性差异，这说明RV4多肽药物能够显著增强秀丽线虫急性氧化应激的能力。详见表12、表13和图7，实验结果具有统计意义。
(5)秀丽隐杆线虫氧化应激实验的运动能力评级：
表14氧化应激Day4秀丽线虫的运动力评级检测结果
注：线虫能够自主爬行定义为A，线虫仅在挑针触碰头部后开始挪动定义为C，介于两者状态之间的定义为B
表15氧化应激Day8秀丽线虫的运动力评级检测结果
注：线虫能够自主爬行定义为A，线虫仅在挑针触碰头部后开始挪动定义为C，介于两者状态之间的定义为B
Day8氧化应激运动力评级结果显示，RV3和RV4多肽组中，处于A等级的线虫占比要高于空白组，这说明该多肽药物能够增强秀丽线虫急性氧化应激的能力；Day4氧化应激运动力评级结果中，多肽组和空白组没有运动力上的差异性，详见表14、表15和图8。
实施例6
秀丽隐杆线虫模型的运动能力衰老实验
1.实验材料
同实施例1。
2.实验方法
秀丽隐杆线虫的同步化：同实施例1。
秀丽线虫的运动能力衰老实验前期准备：同实施例1的寿命实验。
秀丽线虫的运动能力衰老实验：分别取连续给药第4天，第8天和第12天的秀丽隐杆线虫，检测线虫的运动行为能力，包括头部摆动频率和咽泵频率，检测方法同实施例4中的运动力检测。同时对存活线虫的运动力进行评级，评级标准同实施例5中的运动力评级。对数据进行One-way ANOVAY统计分析，数据结果以Mean±SEM表示，与Control组对比，*P<0.05为显著性差异，**P<0.01为非常显著性差异。
3.实验结果
(1)秀丽线虫不同生存天数的运动能力评级结果：
表16不同年龄段的秀丽线虫的运动能力评级结果
注：线虫能够自主爬行定义为A，线虫仅在挑针触碰头部后开始挪动定义为C，介于两者状态之间的定义为B
Day8和Day12时间点对线虫运动能力评级结果显示，RV3和RV4多肽组中，处于C等级的线虫占比要低于空白组；RV4多肽组中位于A等级的线虫占比要高于空白组，这意味着，该多肽能够延缓秀丽线虫的肌肉衰老，增加线虫的运动行为能力，从而延长线虫的寿命，详见表16和图9。
(2)秀丽线虫不同生存天数的运动能力检测结果：
表17不同年龄段的秀丽线虫的运动能力检测结果
注：以上结果用Mean±SEM表示；与Control组比，*P<0.05，**P<0.01
Day4,Day8和Day12时间点对线虫运动能力检测结果显示，RV4多肽组与空白组相比，头部摆动次数具有显著性差异，而对咽泵频率的影响在第4天时具有显著性差异，在第8天和第12天，咽泵频率非显著性地高于空白组，这意味着，该多肽能够延缓秀丽线虫的肌肉衰老，增加线虫的运动行为能力，延缓线虫行动力的衰退，从而延长线虫的寿命；RV3多肽组和空白组相比没有显著差异性。详见表17和图10，实验结果具有统计意义。
序列表
<110> 南京安吉生物科技有限公司
<120> 具有抗衰老作用的多肽RV3和RV4及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> RV3(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 1
Thr Ala Phe Ala Ala
1 5
<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> RV4(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 2
Thr Lys Ala Ala Ala
1 5
Claims (4)
1.一种具有抗衰老活性的多肽，其特征在于其氨基酸序列为TAFAA或TKAAA。
2.根据权利要求1所述的多肽在制备抗衰老药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的多肽中还加入一种或多种药学上可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、润滑剂和稳定剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的多肽制成注射剂、冻干粉针剂、片剂或颗粒剂。
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