CN104255110B - 促进紫花苜蓿种子萌发的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其是将紫花苜蓿种子置于枯草芽孢杆菌GB03菌液中进行浸泡处理，浸泡处理后取出紫花苜蓿种子进行萌发。采用上述方案对紫花苜蓿种子进行处理，可有效显著提高紫花苜蓿种子的发芽势和发芽率，缓解紫花苜蓿播种后不出苗或晚出苗，出苗不整齐，缺苗断垄的现象，提高单位面积牧草的产量。同时，枯草芽孢杆菌具有对人畜无毒无害、不污染环境、非致病性和抗逆性强等特点。本发明提供的促进紫花苜蓿种子萌发的方法操作简单，可广泛应用于牧场牧草的播种，具有重要的经济价值。

Description

促进紫花苜蓿种子萌发的方法
技术领域
本发明涉及林草种植领域，具体涉及一种促进紫花苜蓿种子萌发的方法。
背景技术
紫花苜蓿，是一种多年生草本，其根粗壮，根颈发达，是优良的豆科牧草，冠有″牧草之王″之美称。随着我国草地农业的迅速发展，近年来，紫花苜蓿作为主要牧草被大面积发展种植，使得紫花苜蓿的产量日渐提升。由于，紫花苜蓿属豆科作物，其种子硬实率较高，在萌发时种子硬实不透水或吸水较晚，从而影响种子的发芽率和出苗率，播种后不出苗或晚出苗，从而导致作物出苗不整齐，出现缺苗断垄的现象，也对杂草的根除带来了较大的困难。随着我国牧草需求量的大幅增长，提高单位面积优质牧草的产量成为亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的就是提供一种促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其可有效提高紫花苜蓿种子的发芽势及发芽率，保证紫花苜蓿种子的可靠萌发。
为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
一种促进紫花苜蓿种子萌发的方法，其是将紫花苜蓿种子置于枯草芽孢杆菌GB03菌液进行浸泡处理，浸泡处理后取出紫花苜蓿种子进行萌发处理。
具体的操作为：
S1：对紫花苜蓿种子进行消毒处理，消毒处理后置于无菌水中进行初级浸泡处理；
S2：配制枯草芽孢杆菌GB03菌液；
S3：将紫花苜蓿种子置于枯草芽孢杆菌GB03菌液中进行浸泡处理；
S4：对浸泡处理后的紫花苜蓿种子进行萌发处理。
详细的方案为：
步骤S1中消毒处理为先用60～72％的乙醇处理0.8～1.2min，再用1.8～2.2％的NaClO消毒9～11min后，然后用无菌水搅动漂洗7～8次，每次2.8～3.2min。步骤S1中初级浸泡处理是将消毒处理后的紫花苜蓿种子在避光条件下置于无菌水中浸泡23.5～24.5h。
配制枯草芽孢杆菌GB03菌液的具体操作为：配制LB液体培养基，灭菌冷却后在每100mL的LB液体培养基中加入50～100μL的枯草芽孢杆菌GB03菌液，然后进行菌株培养，当菌液浓度OD600为0.8～1.0时，取出备用。
浸泡处理的时间为5～60min，优选浸泡处理的时间为5～10min。
紫花苜蓿种子萌发处理的温度为24～25℃，并进行遮光处理。萌发处理可与传统紫花苜蓿种子的萌发操作一至。
采用上述方案对紫花苜蓿种子进行处理，其可有效显著提高紫花苜蓿种子的发芽势和发芽率，缓解紫花苜蓿播种后不出苗或晚出苗，出苗不整齐，缺苗断垄的现象，提高单位面积牧草的产量。同时，枯草芽孢杆菌具有对人畜无毒无害、不污染环境、非致病性和抗逆性强等特点。本发明提供的促进紫花苜蓿种子萌发的方法操作简单，可广泛应用于牧场牧草的播种，具有重要的经济价值。
附图说明
图1、2为紫花苜蓿种子在枯草芽孢杆菌GB03菌液中不同浸泡时长对种子发芽势的影响；
图3为紫花苜蓿种子在枯草芽孢杆菌GB03菌液中不同浸泡时长对种子发芽率的影响；
图1中1-1(实施例6)浸泡时间为0min，1-2(实施例1)浸泡时间为5min，1-3(实施例2)浸泡时间为10min，1-4(实施例3)浸泡时间为20min，1-5(实施例4)浸泡时间为30min，1-6(实施例5)浸泡时间为60min；
图2、3中″＊”表示与处理0min(实施例6)的对照比较达到显著水平(P＜0.05)。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行具体说明。应当理解，以下文字仅仅用以描述本发明的一种或几种具体的实施方式，并不对本发明具体请求的保护范围进行严格限定。
实施例1
对紫花苜蓿种子消毒处理：精选一批紫花苜蓿种子，先用70％的乙醇处理1min，然后使用2％NaClO消毒10min后，再用无菌水漂洗7次，每次3min，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡24h。
枯草芽孢杆菌GB03菌液制备：先配制溶菌肉汤LB液体培养基：按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉的比例为1∶2∶1配制，溶剂为蒸馏水；调pH到7.2，高温为132℃灭菌，待冷却温度为20℃后，每100mL的LB液体培养基加入100μL的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为250r/min下，温度为30℃的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为1.0时，取出备用；
种子菌液处理：在灭菌的离心管中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时5min，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于25℃黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24h后统计发芽率，计算发芽势；
将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。
实施例2
对紫花苜蓿种子消毒处理：精选一批紫花苜蓿种子，先用70％的乙醇处理1min，然后使用2％NaClO消毒10min后，再用无菌水漂洗8次，每次3min，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡24h。
枯草芽孢杆菌GB03菌液制备：先配制溶菌肉汤LB液体培养基：按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉的比例为1∶2∶1配制，溶剂为蒸馏水；调pH到7.2，高温为115℃灭菌，待冷却温度为20℃后，每100mL的LB液体培养基加入50μL的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为180r/min下，温度为30℃的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为0.8时，取出备用；
种子菌液处理：在灭菌的离心管中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时10min后，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于25℃黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24h后统计发芽率，计算发芽势；
将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。
实施例3
对紫花苜蓿种子消毒处理：精选一批紫花苜蓿种子，先用68％的乙醇处理1.2min，然后使用2.2％NaClO消毒9min后，再用无菌水漂洗8次，每次3.2min，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡23.5h。
枯草芽孢杆菌GB03菌液制备：先配制溶菌肉汤LB液体培养基：按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉的比例为1∶2∶1配制，溶剂为蒸馏水；调pH到7.2，高温为115℃灭菌，待冷却温度为20℃后，每100mL的LB液体培养基加入50μL的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为180r/min下，温度为30℃的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为0.8时，取出备用；
种子菌液处理：在灭菌的离心管中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时20min后，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于24℃黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24h后统计发芽率，计算发芽势；
将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。
实施例4
对紫花苜蓿种子消毒处理：精选一批紫花苜蓿种子，先72％的乙醇处理0.8min，然后使用2.2％NaClO消毒11min后，再用无菌水漂洗8次，每次3.2min，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡25.5h。
枯草芽孢杆菌GB03菌液制备：先配制溶菌肉汤LB液体培养基：按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉的比例为1∶2∶1配制，溶剂为蒸馏水；调pH到7.2，高温为115℃灭菌，待冷却温度为35℃后，每100mL的LB液体培养基加入100μL的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为180r/min下，温度为25℃的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为1.0时，取出备用；
种子菌液处理：在灭菌的离心管中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时30min后，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于26℃黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24h后统计发芽率，计算发芽势；
将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。
实施例5
对紫花苜蓿种子消毒处理：精选一批紫花苜蓿种子，先用70％的乙醇处理1min，然后使用2％NaClO消毒11min后，再用无菌水漂洗8次，每次3.2min，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡23.5h。
枯草芽孢杆菌GB03菌液制备：先配制溶菌肉汤LB液体培养基：按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉的比例为1∶2∶1配制，溶剂为蒸馏水；调pH到7.2，高温为132℃灭菌，待冷却温度为20℃后，每100mL的LB液体培养基加入50μL的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为180r/min下，温度为30℃的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为0.8时，取出备用；
种子菌液处理：在灭菌的离心管中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时60min后，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于25℃黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24h后统计发芽率，计算发芽势；
将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。
实施例6
对紫花苜蓿种子消毒处理：精选一批紫花苜蓿种子，先用70％的乙醇处理1min，然后使用2％NaClO消毒10min后，再用无菌水漂洗8次，每次3min，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净。然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡24h。
种子菌液处理：将消毒处理后的紫花苜蓿种子平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，每皿50粒，置于25℃黑暗条件培养，每天统计观察发芽情况，培养24h后统计发芽率，计算发芽势；
将种子整齐排列在培养皿中，每天统计其发芽状况；发芽势为发芽第一天的统计结果，发芽率为发芽第八天的统计结果。
对结果进行统计记录，如附图1、2、3所示：
(1)枯草芽孢杆菌GB03菌液浸泡处理紫花苜蓿种子5min和10min，可显著(P＜0.05)提高紫花苜蓿种子的发芽势，分别显著(P＜0.05)提高发芽势67.8％和36.8％；
(2)枯草芽孢杆菌GB03菌液浸泡处理紫花苜蓿种子5min和10min，发芽率较对照组(实施例6)分别显著(P＜0.05)提高16.3％和12.5％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在获知本发明中记载内容后，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对其作出若干同等变换和替代，这些同等变换和替代也应视为属于本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种促进紫花苜蓿种子萌发的方法，具体包括如下操作步骤：
对紫花苜蓿种子消毒处理：先用70％的乙醇处理1min，然后使用2％的NaClO消毒10min后，再用无菌水漂洗7次，每次3min，洗涤过程中不断搅动，将种子表面的酒精和次氯酸钠冲洗干净，然后将消毒完全的紫花苜蓿种子在黑暗条件下置于无菌水中浸泡24h；
枯草芽孢杆菌GB03菌液制备：按照氯化钠、胰蛋白胨和酵母粉1:2:1的比例配制LB液体培养基，溶剂为蒸馏水，调pH到7.2，高温115℃灭菌，待冷却温度为20℃后，每100mL的LB液体培养基加入50μL的枯草芽孢杆菌GB03菌液，在转速为180r/min下，温度为30℃的恒温培养摇床上培养过夜后，测定菌液浓度为OD600为0.8时，取出备用；
种子菌液处理：在灭菌的离心管中加入培养好的GB03菌液，然后将消毒处理后的紫花苜蓿种子浸泡在菌液中，计时5min后，迅速取出种子，平铺在已灭菌铺有两层滤纸的培养皿中，铺种之前，在滤纸上滴入等量无菌水，至滤纸表面形成水膜为止，取出的种子均匀的铺在滤纸上，置于25℃黑暗条件培养。
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