CN105859382A - 一种用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料，通过以下方法制备：将动物粪便和秸秆粉混合，接种腐熟混合菌，堆肥发酵，得腐熟料；扩大培养苏云金芽孢杆菌，得甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液；扩大培养球孢链霉菌和巨大芽孢杆菌，按比例混合，得促效菌混合液；将竹炭、硅藻土、沸石粉按比例混合，得土壤改良剂；将腐熟料、甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂混合，干燥、粉碎、过筛、造粒，得微生物有机肥料。本发明提供的微生物有机肥料肥力高，不仅能够真正有效抑制甘蔗宿根矮化病的发病率，而且还可以改良土壤，增加土壤的活性，提高甘蔗的产量，缩短甘蔗的成熟期，具有很高的经济效益和社会效益。

Description

一种用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料及其制备方法

技术领域

本发明涉及发酵有机肥料领域，具体地说是一种用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料及其制备方法。

背景技术

我国是农业大国，耕地面积约为20.3亿亩，排世界第四。众所周知，农业生产的发展离不开肥料，但近年来由于我国农业生产过量和不科学使用化肥，使得土壤中的有机质、中微量元素严重不足，造成了土壤板结、肥料利用率下降、农产品品质下降，同时还出现了环境污染、病虫害高发等不良现象。

目前，市面上的肥料从性质上来讲，分为无机肥料、有机肥料和生物肥料。其中无机肥料又称化学肥料，其成分中所含的氮、磷、钾等营养元素都以无机化合物的形式存在，主要有复合肥、单质肥料、专用肥、中微量元素肥。有机肥料是以农业废弃物、禽畜粪便、城市生活垃圾等为原料就地取材，发酵而成的含有植物需要的大量营养成分的一类肥料，其不仅对土壤无污染，而且营养元素比较完全，对土壤具有一定改良作用。但是使用有机肥料也有存在养分含量低，不易分解，不能及时满足作物高产的要求，而且传统的有机肥的积制和使用也很不方便，制备方法不当也会使肥料中含有病原微生物，或混入某些有毒有害物质。生物肥料是以微生物的生命活动导致作物得到特定肥料效应的一种比较复杂的肥料制品，通常使用的生物菌肥用的并不是菌而是剂，即菌的分泌物，在土壤中是菌的分泌物在起作用，因此若使生物菌成活对于土壤环境有着极高的要求。目前生物肥料主要包括生物菌剂、生物菌肥和生物有机肥。其中生物有机肥是以动植物残体（如畜禽粪便、农作物秸秆等）为来源并经无害化处理、腐熟的有机物料复合而成的一类兼具微生物肥料和有机肥效应的一类肥料。因此，其不仅可以为土壤提供高效、持久的肥力，而且可以改良土壤环境，是近年来行业内争相研究的热点。

甘蔗（Saccharum officinarum）为多年生高大实心草本，根状茎粗壮发达，在中国台湾、福建、广东、海南、广西、四川、云南等南方热带地区广泛种植；甘蔗适合栽种于土壤肥沃、阳光充足、冬夏温差大的地方；成熟后主要用于制造蔗糖，且可提炼乙醇作为能源替代品，具有较高的种植经济效益。甘蔗矮化病是影响甘蔗产量的重要病害之一，其致病机理是由于病原菌寄生于甘蔗的木质部中，分泌产生胶状物质，堵塞甘蔗的木质部导管，致使养分不能向上运输，造成甘蔗矮化，发育不良。近年来，宿根种植甘蔗的矮化病病原菌感染率大概在30%左右，造成甘蔗大幅减产，严重影响甘蔗种植的经济效益。目前，防治甘蔗宿根矮化病的方法有采用温水浸泡种茎或温水浸泡结合茎尖组培技术脱除甘蔗宿根矮化病的病原。然而，温水浸泡的温度通常为50-52℃，该温度极为接近甘蔗芽的临界致死温度，另外老芽和嫩芽能承受的温度也不一样，温度过低脱毒效果差，温度过高，又容易导致甘蔗芽死亡，而且茎尖脱毒培养技术需要取的茎尖大小为0.1-0.2mm，需要精密的仪器以及对操作人员的要求比较高，使得该方法的应用受到较大局限。到目前为止，在现有技术中尚未发现有针对防治甘蔗宿根矮化病的生物有机肥的研究报道。因此，行业内若能开发一种防治甘蔗宿根矮化病的生物肥料，这对改良土壤、提高干蔗产量具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料及其制备方法，为甘蔗宿根矮化病防治提供一种新型微生物有机肥，以提高甘蔗产量。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料，通过以下步骤制备：

（a）将动物粪便和秸秆粉按质量比为2-3:1混合，得发酵原料；在所述发酵原料中接种腐熟混合菌，调节水分含量至50-55%，40-65℃堆肥发酵10-15天；得腐熟料；所述腐熟混合菌为枯草芽孢杆菌培养液与嗜热地衣芽孢杆菌培养液按体积比为1.5-2.5:1组成的混合液；所述腐熟混合菌的接种量为所述发酵原料重量的8-12%；

（b）将活化后的苏云金芽孢杆菌扩大培养至活菌含量达到10⁹cfu/mL，得甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液；

（c）将活化后的球孢链霉菌和巨大芽孢杆菌分别进行扩大培养，将培养得到的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液按体积比为0.5-1.5:1混合，得促效菌混合液；

（d）将竹炭、硅藻土、沸石粉按质量比为1-2:0.5-1:1-2混合，得土壤改良剂；

（e）将所述腐熟料、甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂按质量体积比为70-75kg:1L:0.5-1L:23-28kg混合均匀，低温干燥，将干燥后的肥料进行粉碎、过筛，将过筛后的肥料进行造粒，即得用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料。

在制备所述微生物有机肥料的步骤（a）的动物粪便是指猪粪、鸡粪、兔子粪、牛粪等家畜家禽常见的粪便，优选猪粪；秸秆粉是指将秸秆打碎成粒径大小为粉碎至0.5-1.0cm，所述秸秆为小麦秸秆、玉米秸秆、水稻秸秆、芦苇秸秆等农作物常见秸秆，优选小麦秸秆。

在制备所述微生物有机肥料的步骤（a）的堆肥发酵期间每隔3天翻堆1次。

在制备所述微生物有机肥料的步骤（a）所述的枯草芽孢杆菌培养液与嗜热地衣芽孢杆菌培养液中的活菌数分别10⁸-10⁹ cfu/mL。

在制备所述微生物有机肥料的步骤（c）所述的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液中的活菌数分别10⁹-10¹⁰ cfu/mL。

在制备所述微生物有机肥料的步骤（d）所述的竹炭、硅藻土、沸石粉的质量比优选为1:1:1。

在制备所述微生物有机肥料的步骤（e）所述的低温干燥是指在35-45℃下干燥24-48h。

在制备所述微生物有机肥料的步骤（e）所述的过筛是指过60目筛网，所述的造粒的粒径大小为1.5-2.0mm。

本发明还提供了一种用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料的制备方法，采用以下步骤：

（a）将动物粪便和秸秆粉按质量比为2-3:1混合，得发酵原料；在所述发酵原料中接种腐熟混合菌，调节水分含量至50-55%，40-65℃堆肥发酵10-15天；得腐熟料；所述腐熟混合菌为枯草芽孢杆菌培养液与嗜热地衣芽孢杆菌培养液按体积比为1.5-2.5:1组成的混合液；所述腐熟混合菌的接种量为所述发酵原料重量的8-12%；

（b）将活化后的苏云金芽孢杆菌扩大培养至活菌含量不低于10⁹cfu/mL，得甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液；

（c）将活化后的球孢链霉菌和巨大芽孢杆菌分别进行扩大培养，将培养得到的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液按体积比为0.5-1.5:1混合，得促效菌混合液；

（d）将竹炭、硅藻土、沸石粉按质量比为1-2:0.5-1:1-2混合，得土壤改良剂；

（e）将所述腐熟料、甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂按质量体积比为70-75kg:1L:0.5-1L:23-28kg混合均匀，低温干燥，将干燥后的肥料进行粉碎、过筛，将过筛后的肥料进行造粒，即得用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料。

本发明提供的微生物有机肥料的制备方法中步骤（a）的动物粪便是指猪粪、鸡粪、兔子粪、牛粪等家畜家禽常见的粪便，优选猪粪；秸秆粉是指将秸秆打碎成粒径大小为粉碎至0.5-1.0cm，所述秸秆为小麦秸秆、玉米秸秆、水稻秸秆、芦苇秸秆等农作物常见秸秆，优选小麦秸秆。

本发明提供的微生物有机肥料的制备方法中步骤（a）所述的枯草芽孢杆菌培养液与嗜热地衣芽孢杆菌培养液中的活菌数分别10⁸-10⁹ cfu/mL。

本发明提供的微生物有机肥料的制备方法中步骤（c）所述的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液中的活菌数分别10^9-10¹⁰cfu/mL。

本发明提供的微生物有机肥料的制备方法中步骤（e）所述的低温干燥是指在35-45℃下干燥24-48h。

本发明提供的微生物有机肥料的制备方法中步骤（e）所述的过筛是指过60目筛网，所述的造粒的粒径大小为1.5-2.0mm。

本发明首次开发了一种用于甘蔗宿根矮化病害防治的微生物肥料，是以动物粪便和秸秆为原料，接种了特定的腐熟混合菌，得到了腐熟料；再以腐熟料为基料，将甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂按一定比例添加到基料中，最终制备了一种新型微生物有机肥料。该肥料产品中特有的甘蔗宿根矮化病病原抑制菌-苏云金芽孢杆菌、球孢链霉菌、巨大芽孢杆菌三种菌协同促效能有效防治甘蔗宿根矮化病，严格控制其发病率，与此同时，肥料中的添加的天然材料竹炭、硅藻土、沸石粉作为混合土壤改良剂，所具有的良好吸附性能，可有效提高土壤的吸水、保水、保肥性能，且腐熟料是动物粪便和秸秆经过腐熟混合菌无公害处理后形成的有机肥料，腐殖酸含量高、速效氮、速效磷、速效钾的含量明显增加。通过实验证明，在甘蔗生长中施用该肥料可明显抑制甘蔗宿根矮化病的发生，显著提高甘蔗的产量，较现有普通有机肥具有更大的推广应用价值。

具体来讲，本发明较现有技术相比，具有如下优势：

（1）本发明提供的微生物有机肥所含的对甘蔗宿根矮化病防治菌株-苏云金芽孢杆菌，对甘蔗木质部赖氏菌生长具有较强的抑制率，可以有效控制甘蔗宿根矮化病的发病几率；

（2）本发明提供的微生物有机肥除含宿根矮化病病原抑制菌外，还富含球孢链霉菌、巨大芽孢杆菌两种促效菌，三种菌菌群间彼此促进、相互协同，对甘蔗宿根矮化病害的抑制效果更强，且大大提高了甘蔗植株的生长水平；

（3）本发明提供的微生物有机肥将有机腐熟料和土壤改良剂有机结合，使最终产品肥效高，吸水、保水、保肥性能好，可安全放心替代目前有机肥和化肥，改善土壤污染问题，提高甘蔗产量。

本发明提供的制备方法成本低，工艺简单，可操作性强，便于推广应用，得到的微生物肥料肥力高，干态方便运输和施用，不仅能够有效抑制甘蔗宿根矮化病的发病率，而且还可以改良土壤，增加土壤的活性，提高甘蔗的产量，缩短甘蔗的成熟期，具有很高的经济效益和社会效益。

具体实施方式

下面实施例用于进一步详细说明本发明，但不以任何形式限制本发明。

本发明中各种菌的活化按本领域常规技术进行，将活化后的菌种进行扩大培养，其扩大培养所用的培养基均为行业内常用培养基。

实施例1

（1）腐熟混合菌的制备：分别将活化后的枯草芽孢杆菌、嗜热地衣芽孢杆菌接种三角瓶培养基中，接种量为3-5%（V/V），培养12h后接种至发酵罐培养基扩培，扩培至菌种活菌数达10⁸ cfu/mL即得枯草芽孢杆菌培养液和嗜热地衣芽孢杆菌培养液；

其中枯草芽孢杆菌的培养基组分按质量百分比含量计：葡萄糖6%，酵母提取物 1%，蛋白胨 0.2%，CaCO₃ 1%，其余为水；培养温度为28-32℃；

嗜热地衣芽孢杆培养基菌的培养基组分按质量百分比含量计：0.5%酵母膏，0.5%蛋白胨，5%红糖，0.1%吐温-80，0.05%氯化钠，0.05%磷酸氢二钾，0.05%硫酸镁，0.05%碳酸钙，其余为水；培养温度为60-65℃；

将枯草芽孢杆菌培养液和嗜热地衣芽孢杆菌培养液按体积比为2:1混合，得腐熟混合菌；

（2）粪便秸秆腐熟料的制备：将猪粪和玉米秸秆粉按质量比为2:1混合均匀，得发酵原料；在发酵原料中添加接种量为10%（g/g）的腐熟混合菌，调节水分含量至55%，松散置于发酵池中，在45-50℃的保温条件下进行发酵，发酵过程中每隔3天翻堆一次，发酵12天达到腐熟，即得腐熟料；

（3）甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液：将活化后的苏云金芽孢杆菌划线接种于LB固体培养基上，培养24h，挑取活化的菌落，分别接种于LB液体培养基中，37℃、180rpm培养20 h，得种子液；将种子液以10%的接种量（V/V）接种于发酵培养基中， 37℃、转速300rpm、通风比1:1培养24h，使菌种细胞数达10⁹cfu/mL即得甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液；其中发酵培养基以质量百分比计：1%葡萄糖，0.6%磷酸氢二钾，0.3%磷酸二氢钾，0.15%尿素，0.5%酵母粉，0.41‰硫酸镁，其余为水，pH值为7.0-7.2；

（4）促效菌混合液的制备：将活化后的球孢链霉菌和巨大芽孢杆菌分别进行扩大培养：

球孢链霉菌先采用PDA培养基培养，即先将球孢链霉菌按接种量为5%（V/g）接种于PDA斜面培养基上，放置在 28℃恒温培养箱中培养2天，再用自制培养基1号进行扩大生产培养，待孢子数量指数达10⁹cfu/mL，即得含有大量孢子的球孢链霉菌孢子液。自制培养基1号其配制方法为：木屑、麸皮、玉米粉按质量比为1:1:2混合后加入总料85%的水分混合均匀，85℃灭菌30min即可；

巨大芽孢杆菌的扩培采用肉汤培养基，接种量为5%（V/g），培养8h后加入等体积量的新鲜培养基继续培养6h，待活菌数达10⁹cfu/mL，得巨大芽孢杆菌培养液；

将球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液按体积比为1:1混合，得促效菌混合液；

（5）土壤改良剂的配制：将竹炭、硅藻土、沸石粉按质量比为1:1:1混合，得土壤改良剂；

（6）将腐熟料、甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂按质量体积比为75kg:1L:1L:23kg混合均匀，在40℃低温干燥48h，将干燥后的肥料进行粉碎，过60目筛网，将过筛后的肥料进行造粒，即得用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料。

实施例2

（1）腐熟混合菌的制备：采用实施例步骤（1）扩培获得枯草芽孢杆菌培养液和嗜热地衣芽孢杆菌培养液；将枯草芽孢杆菌培养液和嗜热地衣芽孢杆菌培养液按体积比为1.5:1混合，得腐熟混合菌；

（2）粪便秸秆腐熟料的制备：将猪粪和小麦秸秆粉按质量比为3:1混合均匀，得发酵原料；在发酵原料中添加接种量为8%（g/g）的腐熟混合菌，调节水分含量至50%，松散置于发酵池中，在40-45℃的保温条件下进行发酵，发酵过程中每隔3天翻堆一次，发酵15天达到腐熟，即得腐熟料；

（3）甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液：将活化后的苏云金芽孢杆菌按照实施例1步骤（3）的方法进行扩培，待扩培活菌数达10⁹cfu/mL即得甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液；

（4）促效菌混合液的制备：按照实施例1步骤（4）的方法将活化后的球孢链霉菌和巨大芽孢杆菌分别进行扩大培养，将获得的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液按体积比为0.5:1混合，得促效菌混合液；

（5）土壤改良剂的制备：将竹炭、硅藻土、沸石粉按质量比为2:0.5:2混合，得土壤改良剂；

（6）将腐熟料、甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂按质量体积比为70kg:1L:1L:28kg混合均匀，在35℃低温干燥48h，将干燥后的肥料进行粉碎，过60目筛网，将过筛后的肥料进行造粒，即得用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料。

实施例3

（1）腐熟混合菌的制备：采用实施例步骤（1）扩培获得枯草芽孢杆菌培养液和嗜热地衣芽孢杆菌培养液；将枯草芽孢杆菌培养液和嗜热地衣芽孢杆菌培养液按体积比为2.5:1混合，得腐熟混合菌；

（2）粪便秸秆腐熟料的制备：将猪粪和小麦秸秆粉按质量比为2.5:1混合均匀，得发酵原料；在发酵原料中添加接种量为12%（g/g）的腐熟混合菌，调节水分含量至53%，松散置于发酵池中，在50-55℃的保温条件下进行发酵，发酵过程中每隔3天翻堆一次，发酵11天达到腐熟，即得腐熟料；

（3）甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液：将活化后的苏云金芽孢杆菌按照实施例1步骤（3）的方法进行扩培，待扩培活菌数达10⁹cfu/mL即得甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液；

（4）促效菌混合液的制备：按照实施例1步骤（4）的方法将活化后的球孢链霉菌和巨大芽孢杆菌分别进行扩大培养，将获得的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液按体积比为1.5:1混合，得促效菌混合液；

（5）土壤改良剂的制备：将竹炭、硅藻土、沸石粉按质量比为1.5:0.8:1.5混合，得土壤改良剂；

（6）将腐熟料、甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂按质量体积比为72kg:1L:0.8L:25kg混合均匀，在40℃低温干燥48h，将干燥后的肥料进行粉碎，过60目筛网，将过筛后的肥料进行造粒，即得用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料。

实施例4

（1）腐熟混合菌的制备：采用实施例步骤（1）扩培获得枯草芽孢杆菌培养液和嗜热地衣芽孢杆菌培养液；将枯草芽孢杆菌培养液和嗜热地衣芽孢杆菌培养液按体积比为2:1混合，得腐熟混合菌；

（2）粪便秸秆腐熟料的制备：将猪粪和玉米秸秆粉按质量比为3:1混合均匀，得发酵原料；在发酵原料中添加接种量为10%（g/g）的腐熟混合菌，调节水分含量至55%，松散置于发酵池中，在60-65℃的保温条件下进行发酵，发酵过程中每隔3天翻堆一次，发酵10天达到腐熟，即得腐熟料；

（3）甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液：将活化后的苏云金芽孢杆菌按照实施例1步骤（3）的方法进行扩培，待扩培活菌数达10⁹cfu/mL即得甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液；

（4）促效菌混合液的制备：按照实施例1步骤（4）的方法将活化后的球孢链霉菌和巨大芽孢杆菌分别进行扩大培养，将获得的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液按体积比为1.2:1混合，得促效菌混合液；

（5）土壤改良剂的制备：将竹炭、硅藻土、沸石粉按质量比为2:1:1.5混合，得土壤改良剂；

（6）将腐熟料、甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂按质量体积比为75kg:1L:1L:28kg混合均匀，在40℃低温干燥36h，将干燥后的肥料进行粉碎，过60目筛网，将过筛后的肥料进行造粒，即得用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料。

实施例5

（1）腐熟混合菌的制备：采用实施例步骤（1）扩培获得枯草芽孢杆菌培养液和嗜热地衣芽孢杆菌培养液；将枯草芽孢杆菌培养液和嗜热地衣芽孢杆菌培养液按体积比为1.5:1混合，得腐熟混合菌；

（2）粪便秸秆腐熟料的制备：将猪粪和小麦秸秆粉按质量比为2.6:1混合均匀，得发酵原料；在发酵原料中添加接种量为12%（g/g）的腐熟混合菌，调节水分含量至54%，松散置于发酵池中，在55-60℃的保温条件下进行发酵，发酵过程中每隔3天翻堆一次，发酵12天达到腐熟，即得腐熟料；

（3）甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液：将活化后的苏云金芽孢杆菌按照实施例1步骤（3）的方法进行扩培，待扩培活菌数达10⁹cfu/mL即得甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液；

（4）促效菌混合液的制备：按照实施例1步骤（4）的方法将活化后的球孢链霉菌和巨大芽孢杆菌分别进行扩大培养，将获得的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液按体积比为1.0:1混合，得促效菌混合液；

（5）土壤改良剂的制备：将竹炭、硅藻土、沸石粉按质量比为1:1:2混合，得土壤改良剂；

（6）将腐熟料、甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂按质量体积比为73kg:1L:0.5L:24kg混合均匀，45℃低温干燥24h，将干燥后的肥料进行粉碎，过60目筛网，将过筛后的肥料进行造粒，即得用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料。

对比例1

复合肥购于四川三嘉复合肥有限责任公司，属于常用的普通复合肥。

实施例6

本发明实施例及对比例提供的肥料对甘蔗宿根矮化病病原菌的抑菌性能检测。

采用打孔法，分别以感染宿根矮化病的甘蔗植物根组织液作为指示剂，将本发明实施例1制备的产品与对比例1复合肥分别进行抑菌性能的检测实验。具体为：在无菌富集培养基中加入培养基体积的5%的感染宿根矮化病的甘蔗根组织液（10g感染宿根矮化病的甘蔗植物根组织打浆后用水定容到100ml），然后倒入培养皿中，待平板中培养基凝固后，用打孔器对称均匀给培养皿中凝固好的培养基打三个大小一致的孔，三个孔中分别加入相同对应浓度（0.01g/mL、0.1g/mL、0.5g/mL）的本发明制备的微生物肥料和对比例提供复合肥水溶液80μl，另设置一个孔中加入等量的生理盐水作的空白对照。37℃恒温培养24h后观察抑菌圈的大小。每组试验设三个平行试验。测量24h后实验组及空白对照各个孔周围透明抑菌圈的大小，试验组抑菌圈大小的平均值减去空白对照即为所要检测的抑菌性能。

测结果见表1。

表1 本发明实施例及对比例对甘蔗宿根矮化病病原菌的抑制检测结果

从表1中的数据可以得出，本发明制备的甘蔗宿根矮化病害防治的微生物肥料能有效抑制抑菌甘蔗宿根矮化病病原菌的生长和繁殖，且在用量小较小的情况下就可以起到一定抑制效果，而普通复合肥对其抑制效果较差。

实施例7 大田抗病试验

在试验田中种植感染宿根矮化病病原菌的甘蔗，分成A、B、C三组，取本发明实施例1制备的肥料，按照常规施用量施于A组作为实验组，以分别施用对比例1提供的复合肥和不添加任何肥料的B、C两组作为对比组，种植前将肥料与土壤混合后，施入种植沟内，覆土下种，肥料不直接与种茎接触，观察施用不同肥料对甘蔗宿根矮化病抗感染的能力。栽种植株和试验田均为随机分配。

以广东省广州市九龙镇甘蔗种植基地为试验田，分成A、B、C三组，每组试验田大小为0.5亩，甘蔗每组间隔5m，甘蔗种苗为“粤糖94-128”，且均预先浸泡24h感染宿根矮化病的甘蔗植物根组织液（10g感染宿根矮化病的甘蔗植物根组织打浆后用水定容到100ml）。A组：施用本发明实施例2制备的微生物有机肥，施用量60kg/亩；B组对照组：施用普通复合肥，施用量60kg/亩；C组对照组：不施加任何肥料。对A、B、C三组进行正常日常管理，观察并记录甘蔗植株的发病情况。

试验结果显示：与B、C两组相比，A组发病植株显著减少，其发病率仅为5.8%；而B组甘蔗发病率为75.2%，发病植株变矮，生长缓慢，蔗茎变细；C组甘蔗发病率为90.1%，发病植株明显变矮，蔗茎较细。由此说明，本发明制备的微生物有机肥对甘蔗宿根矮化病病菌有极好的抵抗或杀灭作用，施用后甘蔗植株宿根矮化病的发病率大大降低。

实施例8 普通大田试验

以广东省广州市九龙镇甘蔗种植基地为试验田，分成A、B、C三组，每组试验田大小为5亩，甘蔗种苗为“粤糖94-128”。A组：施用本发明实施例1制备的复合微生物肥料，按照常规施用量施于A组作为实验组，以分别施用对比例1提供的复合肥和不添加任何肥料为B组和C组作为对比组，种植前将肥料与土壤混合后，施入种植沟内，覆土下种，肥料不直接与种茎接触。A组取本发明实施例1制备的肥料，施用量60kg/亩；B组：施用对比例1提供的复合肥，施用量60kg/亩；C组：不施加任何肥料。对A、B、C三组进行正常日常管理，观察并记录甘蔗植株的生长状况、发病情况、甘蔗产量。栽种植株和试验田均为随机分配。

生长成熟后对比发现，B、C两组甘蔗有常见病害出现，需施加农药加以维护；试验A组只有极为轻度的常见病害，无需施药。且A组生长较快，种植10个月左右植株即达到成熟可收割，B组生长次之，需要11个月左右达到成熟，有少部分植株感染常见病害，其总产量较A组减产16.2%；C组生长较为缓慢，需要12个月左右才能达到成熟，有部分植株感染常见病害，其总产量较A组减产25.3%。由此说明：A组甘蔗在施用本发明制备的微生物有机肥，生长速度得到提高，达到成熟时间更快，且抗病害能力也得到显著增强。

Claims (10)

1.一种用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料，其特征在于，通过以下步骤制备：

（a）将动物粪便和秸秆粉按质量比为2-3:1混合，得发酵原料；在所述发酵原料中接种腐熟混合菌，调节水分含量至50-55%，40-65℃堆肥发酵10-15天；得腐熟料；所述腐熟混合菌为枯草芽孢杆菌培养液与嗜热地衣芽孢杆菌培养液按体积比为1.5-2.5:1组成的混合液；所述腐熟混合菌的接种量为所述发酵原料重量的8-12%；

（b）将活化后的苏云金芽孢杆菌扩大培养至活菌含量达到10⁹cfu/mL，得甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液；

（c）将活化后的球孢链霉菌和巨大芽孢杆菌分别进行扩大培养，将培养得到的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液按体积比为0.5-1.5:1混合，得促效菌混合液；

（d）将竹炭、硅藻土、沸石粉按质量比为1-2:0.5-1:1-2混合，得土壤改良剂；

（e）将所述腐熟料、甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂按质量体积比为70-75kg:1L:0.5-1L:23-28kg混合均匀，低温干燥，将干燥后的肥料进行粉碎、过筛，将过筛后的肥料进行造粒，即得用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料。

2.根据权利要求1所述的用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料，其特征在于，步骤（a）的堆肥发酵期间每隔3天翻堆1次。

3.根据权利要求1所述的用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料，其特征在于，步骤（a）所述的枯草芽孢杆菌培养液与嗜热地衣芽孢杆菌培养液中的活菌数分别≥10⁸ cfu/mL。

4.根据权利要求1所述的用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料，其特征在于，步骤（c）所述的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液中的活菌数分别≥10⁹cfu/mL。

5.根据权利要求1所述的用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料，其特征在于，步骤（d）所述的竹炭、硅藻土、沸石粉的质量比为1:1:1。

6.根据权利要求1、2、3、4或5所述的用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料，其特征在于，步骤（e）所述的低温干燥是指在35-45℃下干燥24-48h。

7.一种用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料的制备方法，其特征在于，采用以下步骤：

将动物粪便和秸秆粉按质量比为2-3:1混合，得发酵原料；在所述发酵原料中接种腐熟混合菌，调节水分含量至50-55%，40-65℃堆肥发酵10-15天；得腐熟料；所述腐熟混合菌为枯草芽孢杆菌培养液与嗜热地衣芽孢杆菌培养液按体积比为1.5-2.5:1组成的混合液；所述腐熟混合菌的接种量为所述发酵原料重量的8-12%；

（b）将活化后的苏云金芽孢杆菌扩大培养至活菌含量达到10⁹cfu/mL，得甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液；

（c）将活化后的球孢链霉菌和巨大芽孢杆菌分别进行扩大培养，将培养得到的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液按体积比为0.5-1.5:1混合，得促效菌混合液；

（d）将竹炭、硅藻土、沸石粉按质量比为1-2:0.5-1:1-2混合，得土壤改良剂；

（e）将所述腐熟料、甘蔗宿根矮化病病原抑制菌培养液、促效菌混合液以及土壤改良剂按质量体积比为70-75kg:1L:0.5-1L:23-28kg混合均匀，低温干燥，将干燥后的肥料进行粉碎、过筛，将过筛后的肥料进行造粒，即得用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料。

8.根据权利要求7所述的用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料的制备方法，其特征在于，步骤（a）所述的枯草芽孢杆菌培养液与嗜热地衣芽孢杆菌培养液中的活菌数分别≥10⁸ cfu/mL。

9.根据权利要求7所述的用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料的制备方法，其特征在于，步骤（c）所述的球孢链霉菌培养液和巨大芽孢杆菌培养液中的活菌数分别≥10⁹cfu/mL。

10.根据权利要求7、8或9所述的用于甘蔗宿根矮化病害防治的新型微生物有机肥料的制备方法，其特征在于，步骤（e）所述的低温干燥是指在35-45℃下干燥24-48h。