CN104232567A - 获得干细胞及其数据的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种获得干细胞数据的方法,其包括:(a)处理从一个体获得的一组织样本,以获得一测试样本;(b)计算该测试样本的第一部分中第一群颗粒的数量,进而获得第一数据;(c)计算该测试样本的第二部分中第二群颗粒里的一种干细胞的数量,进而获得第二数据;以及(d)根据该第一数据和该第二数据,获得第三数据。
Description
技术领域
本发明是有关一种获得细胞及其资料的方法,尤指一种获得干细胞及其数据的方法。
背景技术
随着干细胞研究的发展,干细胞已经被视为是预防医学的先趋,再加上近年来相关产业也加速成长,突显人们对于干细胞在医疗应用上的需求。由于干细胞负责体内细胞的修复和更新,所以干细胞具有维持身体器官与组织健康的功能。因此,干细胞可以视为是维持整体健康的决定性因素,并藉由干细胞开启审视健康的新窗口。
发明内容
本发明主要目的,在于提供多种方法,其是先培养、活化(或催化)、调动、刺激、生成或增加人或动物体内的干细胞(如多功能干细胞),然后从人或动物的周边血液中获得、收集或收获干细胞。
本发明另一目的,是在提供多种获得干细胞数据(如某种干细胞在取自人或动物的组织样本中每单位体积的数量)的方法。
为达到上述目的,本发明提供一种获得干细胞的方法,其包括以下步骤:(1)让一个体(如人或动物)进行或接受一行为;(2)在该个体进行或接受该行为之后,使该个体等待一段预定时间;(3)在该个体等待该段预定时间之后,从该个体取得一组织样本;以及(4)从该组织样本收集复数个干细胞。该行为可包括服用一种草药或是一种含有褐藻糖胶的物质。该段预定时间可以是介于30分钟到2小时之间、介于1小时到12小时之间或是介于12小时到36小时之间。该组织样本可包括该个体的周边血液。该些干细胞可包括复数个多功能干细胞(例如尺寸介于0.1微米至6微米之间的CD9(+),CD349(+)细胞、尺寸介于0.1微米至6微米之间的CD349(+)细胞、尺寸介于0.1微米至6微米之间的Lgr5(+)细胞、尺寸介于0.1微米至6微米之间的CD9(-),SSEA4(+)细胞)。上述获得干细胞的方法可以还包括,在收集该些干细胞之后,将该些干细胞储存在温度低于摄氏0度的环境中。该些干细胞可以被用在植牙手术、整形手术、癌症治疗、组织修复治疗、膝半月板损伤治疗或关节炎治疗。
为达到上述目的,本发明提供一种获得干细胞数据的方法,其包括以下步骤:(1)处理从一个体(如人或动物)获得的一组织样本,以获得一测试样本;(2)使用血球计数器(hemocytometer)计算该测试样本的第一部分中第一群颗粒的数量,进而获得第一数据;(3)使用流式细胞仪(flow cytometer)计算该测试样本的第二部分中第二群颗粒里的一种干细胞的数量,进而获得第二数据;以及(4)根据该第一数据和该第二数据,获得第三数据。该组织样本可包括该个体的周边血液。该第一群颗粒的尺寸和该第二群颗粒的尺寸是大于或实质上等于一门坎尺寸(threshold size),该门坎尺寸可以是1微米。该第二群颗粒可包括复数个白血球、复数个红血球、复数个血小板以及/或是复数个粒细胞(granulocyte)。该种干细胞可包括一种多潜能干细胞或是一种多功能干细胞(如尺寸介于0.1微米至6微米之间的CD9(+),CD349(+)细胞、尺寸介于0.1微米至6微米之间的CD349(+)细胞、尺寸介于0.1微米至6微米之间的Lgr5(+)细胞、尺寸介于0.1微米至6微米之间的CD9(-),SSEA4(+)细胞)。该第一数据可包括该第一群颗粒在该测试样本中每单位体积的数量。该第二数据可包括该种干细胞的数量占该第二群颗粒的数量的百分比。该第三数据可包括该种干细胞在该组织样本中每单位体积的数量。
为达到上述目的,本发明提供一种获得干细胞数据的方法,其包括下列步骤:(1)处理从一个体(如人或动物)获得的一组织样本,以获得一测试样本;(2)计算该测试样本的第一部分中第一群颗粒的数量,进而获得第一数据;(3)计算该测试样本的第二部分中第二群颗粒里的一种干细胞的数量,进而获得第二数据;以及(4)根据该第一数据和该第二数据,获得第三数据。该组织样本可包括该个体的周边血液。该第一群颗粒的尺寸和该第二群颗粒的尺寸是大于或实质上等于一门坎尺寸,该门坎尺寸可以是1微米。该第二群颗粒可包括复数个白血球、复数个红血球、复数个血小板以及/或是复数个粒细胞。该种干细胞可包括一种多潜能干细胞或是一种多功能干细胞(如尺寸介于0.1微米至6微米之间的CD9(+),CD349(+)细胞、尺寸介于0.1微米至6微米之间的CD349(+)细胞、尺寸介于0.1微米至6微米之间的Lgr5(+)细胞、尺寸介于0.1微米至6微米之间的CD9(-),SSEA4(+)细胞)。该第一数据可包括该第一群颗粒在该测试样本中每单位体积的数量。该第二数据可包括该种干细胞数量占该第二群颗粒数量的百分比。该第三数据可包括该种干细胞在该组织样本中每单位体积的数量。上述获得干细胞数据的方法可以还包括,使用血球计数器进行步骤(2),以及使用流式细胞仪进行步骤(3)。
现将经由对说明性实施例、随附图式及申请专利范围的以下详细描述的评述,使本发明以及其他组件、步骤、特征、效益及优势变得明朗。
附图说明
图1为纯化程序的流程示意图。
图2为纯化程序的流程示意图。
图3为纯化程序的流程示意图。
图4为纯化程序的流程示意图。
图5为纯化程序的流程示意图。
图6为纯化程序的流程示意图。
图7A为根据本发明中的一个实施例所绘示一种从一个体的一组织样本中获得、收集或收获大量干细胞的方法的流程图。
图7B为根据本发明中的一个实施例所绘示一种发现或侦测一种或多种新种类干细胞的方法的流程图。
图7C为根据本发明中的一个实施例所绘示一种确认、决定或评估一种或多种行为或刺激对于治愈或治疗患有一种特定疾病的一个体的效用的方法的流程图。
图8A至图8F为三位人类受试者在口服30颗褐藻糖胶补充品之前与之后的干细胞资料。
图9为根据本发明中的一个实施例所绘示一种获得人体干细胞数据的方法的流程图。
图10绘示用于流式细胞仪的前向散射系数/侧向散射系数图。
图11为一褐藻糖胶补充品的内容/成分信息。
图12为褐藻糖胶的部分分子结构。
图13为根据本发明中的一个实施例所绘示一种获得个体干细胞数据的方法的流程图。
图14A至图14C为根据本发明中的一个实施例所绘示一种用于获得干细胞数据的测量或分析方法的流程图。
图15绘示一血球计数器的一微小方格图案(microscopicgrid)。
图16绘示用于流式细胞仪的前向散射系数/侧向散射系数图。
图17A为一位人类受试者在食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第1.5小时的干细胞资料。
图17B为一流式细胞仪的一荧光分布图,其显示出在细胞核/细胞质之比为较高的区域中细胞的荧光光强度分布。
图18为根据本发明中的一个实施例所绘示一种获得一实验组参与者在四个特定时间点的干细胞数据的方法的流程图。
图19为根据本发明中的一个实施例所绘示一种获得一对照组参者在四个特定时间点的干细胞数据的方法的流程图。
图20A至图20J为五位人类受试者在口服30颗褐藻糖胶补充品之前与之后的干细胞资料。
图20K与图20L为一位人类受试者在没有口服30颗褐藻糖胶补充品之前与之后的干细胞资料。
符号说明
10 收集袋
11 过滤器
12a 试管
12b 试管
12c 试管
13 离心机
14a 试验样本
14b 试验样本
14c 试验样本
15a 分析仪器
15b 分析仪器
16 红血球分解液
19 贮存器
20a 试管
20b 试管
20c 试管
21a 试验样本
21b 试验样本
21c 试验样本
22 红血球分解液
1-20 步骤
21-43 步骤
49-59 步骤
61-70 步骤
77 垂直线
81 垂直虚线
82 水平虚线
100a 1毫米的正方形
100b 1毫米的正方形
100c 1毫米的正方形
100d 1毫米的正方形
101-104 步骤
虽然在图式中已描绘某些实施例,但本领域技术人应了解,所描绘的实施例为说明性的,且可在本发明的范畴内构想并实施彼等所示实施例的变化以及本文所述的其他实施例。
具体实施方式
图式揭示本发明的说明性实施例。其并未阐述所有实施例。可另外或替代使用其他实施例。为节省空间或更有效地说明,可省略显而易见或不必要的细节。相反,可实施一些实施例而不揭示所有细节。当相同数字或标号出现在不同图式中时,其是指相同或类似组件或步骤。
当以下描述连同随附图式一起阅读时,可更充分地理解本发明的态样,该等随附图式的性质应视为说明性而非限制性的。该等图式未必按比例绘制,而是强调本发明的原理。
以下将先介绍本发明的各种定义与描述,然后再详细说明本发明的各种实施例。
尺寸(Z)的定义:
在本发明中,所有后续段落提及的尺寸(Z)是用于描述细胞(例如干细胞或生物细胞)的大小。尺寸(Z)可以(但不限定)被描述为或是定义为:(1)细胞生物学领域或干细胞领域对于细胞的大小或代表长度的传统定义、(2)细胞的直径(特别是当细胞的形状实质上为球体时)、(3)细胞的长轴长度(特别是当细胞的形状实质上为椭圆体时)、(4)细胞的宽度(当细胞的形状近似于正方体时)、(5)细胞的长度(当细胞的形状近似于长方体时)或是(6)细胞的最大横断面或横向尺寸。藉由光学显微镜或电子显微镜(例如扫描式电子显微镜)获得的细胞影像或是藉由流式细胞仪(flowcytometer)获得的数据(例如二维的点、轮廓或是密度图)是可用于判定或测量尺寸(Z)—不论是直径、长度、宽度或是最大横断面或横向尺寸。藉由光学显微镜或电子显微镜获得的细胞影像可以是细胞的二维剖面图或立体结构。举例来说,藉由光学显微镜或电子显微镜(例如扫描式电子显微镜)先获得一个二维剖面影像,然后通过测量这个二维剖面影像中细胞的最大横断面或横向尺寸就可以获得细胞的尺寸(Z)。
干细胞定义:
干细胞有许多不同的种类,包括多功能干细胞(pluripotentstem cell)、多潜能干细胞(multipotent stem cell)以及先驱干细胞(progenitor stem cell)。先驱干细胞也可以称为专一性干细胞或单能干细胞(unipotent stem cell)。SB-1细胞、SB-2细胞、类卵裂球干细胞(blastomere-like stem cell,简称BLSC)以及极小类胚胎干细胞(very small embryonic-like stem cell,简称VSEL)是属于多功能干细胞。间质干细胞(mesenchymal stem cell,简称MSC)、多潜能成体先驱细胞(multipotent adult progenitor cell,简称MAPC)、骨髓多潜能干细胞(bone marrow derived multipotentstem cell,简称BMSC)以及多潜能成体干细胞(multipotent adultstem cell,简称MASC)是属于多潜能干细胞。神经干细胞(neuralstem cell)、视网膜干细胞(retina stem cell)、嗅球干细胞(olfactory bulbs stem cell)、上皮干细胞(epidermal stem cell)、肠道干细胞(intestine stem cell)、肌肉干细胞(muscle stemcell)、胰脏干细胞(pancreatic stem cell)、心脏干细胞(heartstem cell)、肝脏干细胞(liver stem cell)、肾脏干细胞(kidneystem cell)、内皮干细胞(endothelial stem cell)、脂肪干细胞(adipocyte or adipose-derived stem cell)、成体骨髓多元性诱导细胞(marrow-isolated adult multilineage inducible(MIAMI)cell)、前间质干细胞(pre-mesenchymal stem cell,简称pre-MSC)、多潜能先驱干细胞(multipotent progenitor cells,简称MPP)、谱系限制先驱干细胞(lineage-restricted progenitor cell,简称LRP)、共同髓原先驱细胞(common myeloid progenitor cell,简称CMP)以及共同淋巴球先驱细胞(common lymphocyte progenitor cell,简称CLP)是属于先驱干细胞。
在后续的段落中,跟随在细胞(表面)标记后面的符号“+”是表示干细胞可以表达这种细胞(表面)标记,也就是说流式细胞仪可以藉由某种(特定标记用的)抗体侦测到存在于干细胞表面的这种细胞(表面)标记。跟随在细胞(表面)标记后面的符号“-”是表示干细胞无法表达这种细胞(表面)标记,也就是说这种细胞(表面)标记没有存在于干细胞的表面,而且流式细胞仪也无法藉由某种(特定标记用的)抗体侦测到这种细胞(表面)标记。因此,正号“+”对干细胞而言是指细胞(表面)标记呈现阳性表达(positive expression),而负号“-”对干细胞而言则是指细胞(表面)标记呈现阴性表达(negative expression)。
SB-1细胞为含有细胞核的多功能干细胞,而且可以是CD9(+),CD349(+)细胞或CD349(+)细胞。SB-1细胞(例如CD9(+),CD349(+)细胞和CD349(+)细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是小于或等于(但不限定)4微米(micrometer)、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或介于1微米至4微米之间。以CD9(+),CD349(+)细胞为例,SB-1细胞可以表达CD9和CD349这两种细胞(表面)标记,所以SB-1细胞可用CD9(+)和CD349(+)描述其特征。以CD349(+)细胞为例,SB-1细胞可以表达CD349这种细胞(表面)标记,所以SB-1细胞可用CD349(+)描述其特征。
SB-2细胞为含有细胞核的多功能干细胞,而且可以是CD9(-),SSEA4(+)细胞或Lgr5(+)细胞。SB-2细胞(例如CD9(-),SSEA4(+)细胞和Lgr5(+)细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或介于1微米至4微米之间。以CD9(-),SSEA4(+)细胞为例,SB-2细胞可以表达SSEA4这种细胞(表面)标记,但是无法表达CD9这种细胞(表面)标记,所以SB-2细胞可用CD9(-)和SSEA4(+)描述其特征。以Lgr5(+)细胞为例,SB-2细胞可以表达Lgr5这种细胞(表面)标记,所以SB-2细胞可用Lgr5(+)描述其特征。
类卵裂球干细胞(BLSC)为含有细胞核的多功能干细胞,并且可以是CD66e(+)细胞。CD66e(+)多功能干细胞(也就是类卵裂球干细胞)的尺寸(请参阅尺寸(Z)的定义)是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或介于1微米至4微米之间。类卵裂球干细胞可以表达CD66e这种细胞(表面)标记,因而可用CD66e(+)描述其特征。
极小类胚胎干细胞(VSEL)为含有细胞核的多功能干细胞,而且可以是CD133(+),CD45(-),Lin(-)细胞或CXCR4(+),CD45(-),Lin(-)细胞。极小类胚胎干细胞(例如CD133(+),CD45(-),Lin(-)多功能干细胞和CXCR4(+),CD45(-),Lin(-)多功能干细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或介于1微米至4微米之间。以CD133(+),CD45(-),Lin(-)多功能干细胞为例,极小类胚胎干细胞可以表达CD133这种细胞(表面)标记,但是无法表达CD45和Lin这两种细胞(表面)标记,所以极小类胚胎干细胞可用CD133(+)、CD45(-)和Lin(-)描述其特征。以CXCR4(+),CD45(-),Lin(-)多功能干细胞为例,极小类胚胎干细胞可以表达CXCR4这种细胞(表面)标记,但是无法表达CD45和Lin这两种细胞(表面)标记,所以极小类胚胎干细胞可用CXCR4(+)、CD45(-)和Lin(-)描述其特征。另外,极小类胚胎干细胞略小于红血球。
间质干细胞(mesenchymal stem cell,简称MSC)为含有细胞核的多潜能干细胞,而且可以是CD13(+)多潜能干细胞、CD29(+)多潜能干细胞、CD44(+)多潜能干细胞、CD73(+)多潜能干细胞、CD90(+)多潜能干细胞或CD105(+)多潜能干细胞。间质干细胞可以表达下列一种或多种的细胞(表面)标记:CD13、CD29、CD44、CD73、CD90和CD105。因此,间质干细胞可以具有下列一种或多种的特征:CD13(+)、CD29(+)、CD44(+)、CD73(+)、C90(+)和CD105(+)。
间质干细胞是由不同的群体所组成,因此具有各种的尺寸及形状。例如,某些间质干细胞的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或介于1微米至4微米之间。另有某些间质干细胞的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)则是大于6微米、7微米或10微米。
造血干细胞(hematopoietic stem cell,简称HSC)为含有细胞核的多潜能干细胞,而且可以是CD34(+),cKit(-),CD38(-),Lin(-)细胞或CD150(+),CD244(-),CD48(-)细胞。造血干细胞(例如CD34(+),cKit(-),CD38(-),Lin(-)多潜能干细胞和CD150(+),CD244(-),CD48(-)多潜能干细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或介于1微米至4微米之间。以CD34(+),cKit(-),CD38(-),Lin(-)多潜能干细胞为例,造血干细胞可以表达CD34这种细胞(表面)标记,但是无法表达cKit、CD38和Lin这三种细胞(表面)标记,所以造血干细胞可用CD34(+)、cKit(-)、CD38(-)和Lin(-)描述其特征。以CD150(+),CD244(-),CD48(-)多潜能干细胞为例,造血干细胞可以表达CD150这种细胞(表面)标记,但是无法表达CD244和CD48这两种细胞(表面)标记,所以造血干细胞可用CD150(+)、CD244(-)和CD48(-)描述其特征。
多潜能成体先驱细胞(multipotent adult progenitor cell,简称MAPC)为含有细胞核的多潜能干细胞,而且可以是CD13(+),SSEA1(+)细胞。CD13(+),SSEA1(+)多潜能干细胞(也就是多潜能成体先驱细胞)可以表达CD13与SSEA1这两种细胞(表面)标记。因此,多潜能成体先驱细胞可用CD13(+)和SSEA1(+)描述其特征。多潜能成体先驱细胞(例如CD13(+),SSEA1(+)多潜能干细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之间。
骨髓多潜能干细胞(bone marrow derived multipotent stemcell,简称BMSC)为含有细胞核的多潜能干细胞,而且可以是CD105(+)多潜能干细胞、CD117(+)多潜能干细胞或CD13(+),SSEA3(+)多潜能干细胞。以CD105(+)多潜能干细胞为例,骨髓多潜能干细胞可以表达CD105这种细胞(表面)标记,因而可用CD105(+)描述其特征。以CD117(+)多潜能干细胞为例,骨髓多潜能干细胞可以表达CD117这种细胞(表面)标记,因而可用CD117(+)描述其特征。以CD13(+),SSEA3(+)多潜能干细胞为例,骨髓多潜能干细胞可以表达CD13和SSEA3这两种细胞(表面)标记,因而可用CD13(+)和SSEA3(+)描述其特征。骨髓多潜能干细胞(例如CD105(+)多潜能干细胞、CD117(+)多潜能干细胞和CD13(+),SSEA3(+)多潜能干细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之间。
多潜能成体干细胞(multipotent adult stem cell,简称MASC)为含有细胞核的多潜能干细胞,而且可以是Oct4(+)多潜能干细胞、Nanog(+)多潜能干细胞或RexI(+)多潜能干细胞。以Oct4(+)多潜能干细胞为例,多潜能成体干细胞可以表达Oct4这种细胞(表面)标记,因而可用Oct4(+)描述其特征。以Nanog(+)多潜能干细胞为例,多潜能成体干细胞可以表达Nanog这种细胞(表面)标记,因而可用Nanog(+)描述其特征。以RexI(+)多潜能干细胞为例,多潜能成体干细胞可以表达RexI这种细胞(表面)标记,因而可用RexI(+)描述其特征。多潜能成体干细胞(例如Oct4(+)多潜能干细胞、Nanog(+)多潜能干细胞和RexI(+)多潜能干细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之间。
成体骨髓多元性诱导(marrow-isolated adult multilineageinducible,简称MIAMI)细胞为含有细胞核的先驱干细胞,而且可以是CD29(+),CD63(+),CD81(+),CD122(+),CD164(+)先驱干细胞。成体骨髓多元性诱导细胞可以表达CD29、CD63、CD81、CD122和CD164这五种细胞(表面)标记,因而可用CD29(+)、CD63(+)、CD81(+)、CD122(+)和CD164(+)描述其特征。成体骨髓多元性诱导细胞(例如CD29(+),CD63(+),CD81(+),CD122(+),CD164(+)先驱干细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之间。
前间质干细胞(pre-mesenchymal stem cell,简称pre-MSC)为含有细胞核的先驱干细胞,而且可以是SSEA1(+)先驱干细胞。前间质干细胞可以表达SSEA1这种细胞(表面)标记,因而可用SSEA1(+)描述其特征。前间质干细胞(例如SSEA1(+)先驱干细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之间。
多潜能先驱干细胞(multipotent progenitor cell,简称MPP)为含有细胞核的先驱干细胞,而且可以是CD34(+),cKit(+),CD38(-),Lin(-)细胞或CD150(-),CD244(+),CD48(-)细胞。多潜能先驱干细胞(例如CD34(+),cKit(+),CD38(-),Lin(-)先驱干细胞和CD150(-),CD244(+),CD48(-)先驱干细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是大于(但不限定)6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之间。以CD34(+),cKit(+),CD38(-),Lin(-)先驱干细胞为例,多潜能先驱干细胞可以表达CD34和cKit这两种细胞(表面)标记,但是无法表达CD38和Lin这两种细胞(表面)标记,所以多潜能先驱干细胞可用CD34(+)、cKit(+)、CD38(-)和Lin(-)描述其特征。以CD150(-),CD244(+),CD48(-)先驱干细胞为例,多潜能先驱干细胞可以表达CD244这种细胞(表面)标记,但是无法表达CD150和CD48这两种细胞(表面)标记,所以多潜能先驱干细胞可用CD150(-)、CD244(+)和CD48(-)描述其特征。
谱系限制先驱干细胞(lineage-restricted progenitor cell,简称LRP)为含有细胞核的先驱干细胞,而且可以是CD34(-),cKit(+),CD38(-),Lin(-)细胞或CD150(-),CD244(+),CD48(+)细胞。谱系限制先驱干细胞(例如CD34(-),cKit(+),CD38(-),Lin(-)先驱干细胞和CD150(-),CD244(+),CD48(+)先驱干细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是大于(但不限定)6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之间。以CD34(-),cKit(+),CD38(-),Lin(-)先驱干细胞为例,谱系限制先驱干细胞可以表达cKit这种细胞(表面)标记,但是无法表达CD34、CD38和Lin这三种细胞(表面)标记,所以谱系限制先驱干细胞可用CD34(-)、cKit(+)、CD38(-)和Lin(-)描述其特征。以CD150(-),CD244(+),CD48(+)先驱干细胞为例,谱系限制先驱干细胞可以表达CD244和CD48这两种细胞(表面)标记,但是无法表达CD150这种细胞(表面)标记,所以谱系限制先驱干细胞可用CD150(-)、CD244(+)和CD48(+)描述其特征。
共同髓原先驱细胞(common myeloid progenitor cell)或共同淋巴球先驱细胞(common lymphocyte progenitor cell)为含有细胞核的先驱干细胞,而且可以是CD90(+)细胞。共同髓原先驱细胞或共同淋巴球先驱细胞(例如CD90(+)先驱干细胞)的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是大于(但不限定)6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之间。共同髓原先驱细胞或共同淋巴球先驱细胞可表达CD90这种细胞(表面)标记,所以可用CD90(+)描述其特征。
造血先驱细胞(hematopoietic progenitor cell,简称HPC)为含有细胞核的先驱干细胞,而且可以是CD24(+)先驱干细胞、CD38(+)先驱干细胞、CD48(+)先驱干细胞、CD244(+)先驱干细胞或CXCR4(+)先驱干细胞。造血先驱细胞可以表达下列一种或多种的细胞(表面)标记:CD24、CD38、CD48、CD244和CXCR4。因此,造血先驱细胞可以具有下列一种或多种的特征:CD24(+)、CD38(+)、CD48(+)、CD244(+)和CXCR4(+)。
间质先驱细胞(mesenchymal progenitor cell)为含有细胞核的先驱干细胞,而且可以是CXCR4(+)先驱干细胞、SSEA1(+)先驱干细胞、CD271(+)先驱干细胞或Stro-1(+)先驱干细胞。间质先驱细胞可以表达下列一种或多种的细胞(表面)标记:CXCR4、SSEA1、CD271和Stro-1。因此,间质先驱细胞可以具有下列一种或多种的特征:CXCR4(+)、SSEA1(+)、CD271(+)或Stro-1(+)。
行为或刺激(X)的描述:
以下列出许多种行为或刺激(X)的范例。这些项目可以经过事先评估,确认能有效增加一个体(例如人体或非人体(如动物体))体内某一种或特定几种干细胞的细胞数量。
行为或刺激(X)包括:
1.服用药物,此药物可以是合成药物或是含有天然萃取物的药物;
2.服用草药或中药,此草药或中药可以是冬虫夏草、人参、枸杞、灵芝、牛樟芝以及/或是巴西蘑菇;
3.服用营养品或膳食补充品(dietary supplement),例如营养片或营养粉。此营养品或膳食补充品可以包含有下列一种或多种的物质或成分:维他命(如维他命A、维他命B、维他命B群、维他命B12、维他命D、维他命D3、维他命E等)、巨量与微量矿物质(如钙、钠、钾、氟、溴、铬、碘、硅、硒、铍、锂、钴、钒、镍等)、多醣(polysaccharide)、含岩藻糖的高分子活性醣蛋白(highmolecular weight fucose-containing glycoprotein)、海藻(包括绿藻、蓝绿藻、褐藻等)、岩藻糖(fucose)、褐藻的主要成分—褐藻糖胶(fucoidan)、小分子褐藻糖胶(oligo fucoidan)、藻类、含有褐藻糖胶的褐藻(例如生长或生产在日本冲绳县(Okinawa)的褐藻)、日本的水云(mozuku)、绿藻、蓝绿藻(或称蓝藻)、褐藻(包括水云、昆布(kelp)、裙带菜(undaria pinnatifida)、羊栖菜(sargassumfusiforme)等)、植化素(phytochemical)(例如异黄酮素(isoflavones)、植物雌激素(phytoestrogen)等)、茄红素(lycopene)、绿茶素(green tea essence)、表没食子儿茶素没食子酸脂(epigallocatechin gallate,简称EGCG)、醣质营养素(gluconutrients)(例如半乳糖(Galactose)、木糖(Xylose)、葡萄糖(Glucose)、甘露糖(Mannose)、乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine)、乙酰半乳糖胺(N-acetyl galactosamine)、乙酰神经胺酸(N-acetyl neuraminic acid)等)、鱼油、香桩、取自植物、叶子、果实、蔬菜、鱼、海藻或藻类的营养素;
4.励行素食饮食;
5.食用健康食品或有机食品;
6.服用另类(非传统的)药物;
7.接受另类疗法或另类治疗(例如葛森疗法(Gersontherapy)、布鲁士癌症疗法(the Breuss cancer cure)等);
8.接受针灸治疗;
9.接受按摩(例如足底按摩);
10.做运动(例如走路、慢跑、跳舞、体操、瑜珈、有氧运动、太极拳等);
11.睡觉(其目的在于评估睡眠质量);
12.冥想;
13.进行由个人、保健专家或医生设计的健康改善计划或疾病治疗计划;
14.服用某种可以改善体内器官健康状况的营养品,例如服用可以改善前列腺健康状况的茄红素;
15.进行复健计划,以治疗伤害、治疗由手术造成的创伤或是治疗疾病;
16.饮用药酒(药酒乃是将一种或数种药材浸泡在酒里存放一段时间而制成),例如饮用人参药酒(人参药酒是将人参浸泡在高酒精浓度米酒里一个月的时间而制成);
17.服用政府部门或机构(例如美国食品药物管理局)核准用于治疗特定疾病(例如癌症、皮肤病、肾脏病等)的一种或数种药物;
18.接受政府部门核准用于治疗特定疾病(例如癌症、皮肤病、肾脏病等)的一种或数种治疗方法;
19.从事或参与宗教活动,例如祷告或拜神等;
20.接受阳光(或日光)直接照射或间接照射,而接受照射的时间可以是:(1)日出前10分钟至日出后50分钟(此时含有大量的红外线)的早晨时段、(2)上午11点30分(11:30AM)至下午12点30分(12:30PM)(此时含有大量的紫外线)的中午时段、或是(3)日落前50分钟至日落后10分钟(此时含有大量的红外线)的下午时段;
21.照射日光灯或发光二极管(LED)发出的光源,而日光灯或发光二极管(LED)发出的光源可包含可见光的整个光谱(spectrum)、红外线的整个光谱、红光的整个光谱、绿光的整个光谱、蓝光的整个光谱、紫外线的整个光谱或混合上述一种以上光线的整个光谱;
22.进行或接受改善身体自愈力的计划、治疗、方法、仪器以及/或是系统,例如病后、伤后或术后用于改善身体自愈力的方法或治疗(如高压氧治疗);
23.饮用咖啡(例如黑咖啡);
24.喝茶(例如绿茶、红茶或茉莉花茶;
25.饮用红酒;
26.服用褪黑激素(melatonin);
27.聆听音乐,例如莫扎特交响曲或贝多芬交响曲;
28.口服一颗或多颗褐藻补充品,其中每一颗褐藻补充品可以含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶或小分子褐藻糖胶,有关褐藻补充品的叙述可以参考以下第一实验和图11的叙述;
29.注射含有褐藻糖胶或小分子褐藻糖胶的物质(如营养品或补充品);
30.服用或摄取4.5克(或超过3.5克)的冲绳褐藻补充品,此冲绳褐藻补充品包括重量百分比为80%(或是超过70%)的日本水云粉(有关冲绳褐藻补充品的叙述请参阅以下第一实验和图11的相关叙述),其中4.5克的冲绳褐藻补充品例如含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是包括重量百分比超过60%的褐藻糖胶,图12揭示褐藻糖胶的部分分子结构;
31.服用荷尔蒙补充品或是注射荷尔蒙;以及
32.服用营养品、营养产品、营养液、营养饮料、营养补充剂或营养食品,其含有:(1)各种的胺基酸(例如精胺酸(Arginine)、组胺酸(Histidine)、离胺酸(Lysine)、天门冬胺酸(Aspartic acid)、麸胺酸(Glutamic acid)、丝胺酸(Serine)、羟丁胺酸(或称苏胺酸,Threonine)、天门冬酰胺酸(Asparagine)、麸酰胺酸(Glutamine)、半胱胺酸(Cysteine)、硒半胱胺酸(Selenocysteine)、甘胺酸(Glycine)、脯胺酸(Proline)、色胺酸(Tryptophan)、丙胺酸(Alanine)、缬胺酸(Valine)、异白胺酸(Isoleucine)、白胺酸(Leucine)、甲硫胺酸(Methionine)、苯丙胺酸(Phenylalanine)、酪胺酸(Tyrosine)等)、(2)均衡胺基酸(balanced amino acid)、或是(3)九种人体必需胺基酸(也就是,组胺酸、异白胺酸、白胺酸、离胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、羟丁胺酸、色胺酸以及缬胺酸)。例如,(a)含红豆、绿豆或黑豆发酵物的产品、(b)含一种或数种水果(例如甜菜(sugar beet)、苹果、番石榴、奇异果、葡萄、菠萝、火龙果、青木瓜、西红柿、酪梨等)发酵物的液态物、饮料或饮品、(c)将一种或数种药材浸泡在酒里存放一段时间而制成的药酒,例如将人参浸泡在高酒精浓度的米酒里一个月时间而制成的人参药酒。
另外,进行上述的行为或刺激(X)可以将剂量、强度、持续时间、施行频率(每一个行为可包括一种以上的细部行为(sub-action),例如以每次间隔一小时的方式服用一颗药物共三次)以及/或是施行时间(例如一天的时段(如早晨、中午、下午、傍晚、晚上)、用餐之前、用餐当中、用餐之后、季节(如春天、夏天、秋天、冬天)等)等因素纳入考虑。举例来说,当个体(例如人体或非人体)服用药物或营养品时,可将剂量(例如克数)以及时间(例如早餐前、早餐后、睡前)等因素纳入考虑。又例如,当个体(例如人体或非人体)照射阳光时,可将一天的时段(例如早晨、中午或下午)、季节(例如春天、夏天、秋天或冬天)以及持续照射时间(例如30分钟、1小时或2小时)等因素纳入考虑。
个体(S)与组织样本(P)的描述:
个体(S)可以是人体,例如孩童、青少年、成年男子、成年女子或老年人。或者,个体(S)也可以是非人体(或称非人体生物),例如宠物(动物)、农场动物、实验用动物或疾病模式动物(disease-model animal)。以下列出宠物、农场动物、实验用动物或疾病模式动物的范例:灵长类动物(如猴子或大猩猩)、狗、啮齿动物(如老鼠或豚鼠)、猫、马、牛、羊、猪、鸡、鸭、鹅、鸟、大象、青蛙、鱼等。个体(S)的叙述可以用在后续的各个实施例中。在本发明中,个体(S)可以作为参与者或受试者。
含有各种细胞的组织样本(P)可以从个体(S)的体液(bodilyfluid)或固体组织(solid tissue)取出、获得、得到或取得。个体(S)的体液可以是血液(如周边血液(peripheral blood))或是骨髓等。当个体(S)为人体时,体液可以是人体的骨髓或是人体的血液(如周边血液)。周边血液是指体内循环流动的血液。个体(S)的固体组织可以是神经、肌肉、皮肤、内脏、骨骼、肾脏、肝脏、胰脏、胸腺、脂肪细胞或是脂肪组织等。当组织样本(P)是从个体(S)的体液取得时,组织样本(P)可以是体液样本,例如周边血液样本、全血样本或骨髓样本。全血可以从个体(S)(如人体)的周边血液收集取得,然后和抗凝剂混合而成,但是尚未进行其它的处理。当组织样本(P)是从个体(S)的固体组织取得时,组织样本(P)可以是固体组织样本,例如肌肉样本或脂肪细胞样本。当个体(S)为人体时,组织样本(P)可以是人体骨髓样本或是人体血液样本(如周边血液样本或全血样本)。
检测或测量方法(M0):
当取自个体(其可参阅个体(S)的叙述)的组织样本为血液样本(如周边血液样本或全血样本)时,检测或测量方法(M0)可以透过执行分析前的准备程序(Y0)然后再执行分析程序(T0)的方式从血液样本中获得有关一种或多种干细胞(如前所述)的结果或数据。该结果或数据可包括每一种干细胞的数量。
分析前的准备程序(Y0)可以透过下列两种方式中的任何一种来处理取自个体的血液样本。
用于准备程序(Y0)的第一种方式叙述如下。首先,将混合液(cocktail)加到装有全血(其从上述个体取得)的试管中,并在均匀混合全血和混合液之后,获得血液样本。举例来说,当混合液为100微升(μL)的富含人类先驱细胞混合液(Human Progenitor Enrichment Cocktail)时,试管内则装有2毫升(mL)的全血。接着,将血液样本在室温(如27℃左右)培养一段时间(例如20分钟左右)。在完成培养后,以第一溶液稀释血液样本,然后慢慢地将两者混合。待完成混合后,获得稀释样本。所述的第一溶液可以是2%胎牛血清(fetal bovine serum,简称FBS)/磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline,简称PBS)。接着,将稀释样本慢慢倒入装有试剂(例如)的试管中。在倒入的过程中,须避免稀释样本与试剂相互混合,以及让稀释样本位在试剂上面。接着,将含有稀释样本与试剂的混合物在室温(如摄氏27℃左右)下以适当的转速(例如每分钟3,000转)离心一段时间(例如20分钟),待离心完成后,可形成四个明显的分层。这四个明显的分层由上而下分别是血浆层、富含多种细胞的细胞层、试剂层以及红血球层。接下来,将血浆层、富含多种细胞的细胞层以及试剂层的上半部放入到另一试管中,然后以适当的转速(例如每分钟3,000转)离心一段时间(例如20分钟),待离心完成后,可获得离心样本。接着,移除离心样本的上清液(supernatant),并使离心样本内的多种细胞重新悬浮于第二溶液(例如2% FBS/PBS)中。再来,将适当的缓冲液(如3X红血球分解液(red-blood-cell (RBC) lysis buffer)加到第二溶液中,并使含有缓冲液的第二溶液在室温培养一段时间(例如10分钟),然后以第三溶液(例如2% FBS/PBS)冲洗第二溶液(此时含有缓冲液)内的多种细胞两次。待冲洗完成后,使多种细胞重新悬浮于第四溶液(例如含有1%或2%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,简称BSA)的磷酸盐缓冲液)中,以获得含有多种细胞和第四溶液的混合物。在本发明中,让0.1克的牛血清白蛋白溶解在10毫升的磷酸盐缓冲液中,可以获得含有1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液;让0.2克的牛血清白蛋白溶解在10毫升的磷酸盐缓冲液中,可以获得含有2%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。接着,将含有适当抗体的试剂加到含有多种细胞和第四溶液的混合物中,进而形成试验样本。此试验样本可以被用于后续的分析程序(T0)中。
用于准备程序(Y0)的第二种方式叙述如下。首先,将6%羟乙基淀粉(Hetastarch)加入到全血(其从上述个体取得)中(6%羟乙基淀粉与全血的体积比为1:5),以获得血液样本。6%羟乙基淀粉是一种磷酸盐缓冲液(PBS)内含有6%的羟乙基淀粉的溶液,也就是每100毫升(mL)的磷酸盐缓冲液含有6克的羟乙基淀粉。接着,让血液样本在室温(如约27℃)静置或培育一段时间(例如至少30分钟)。待血液样本形成上下两个分层后,在不扰动下分层(其为红血球层)的情况下,将上分层(其为细胞层)以吸取器(pipette)移出并放置到一试管中,然后再将试管内的上分层以适当的转速(例如每分钟3,000转)离心一段时间(例如15分钟),并在离心完成后获得离心样本。接下来,将离心样本的上清液移除,并以适当的盐溶液(如PBS)冲洗离心样本的颗粒。然后,使颗粒重新悬浮于一适当溶液(例如含有1%或2%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液)中,以获得含有颗粒和适当溶液的混合物。最后,将含有适当抗体的试剂加到含有颗粒和适当溶液的混合物中,进而形成试验样本。此试验样本可以被用于后续的分析程序(T0)中。
在完成准备程序(Y0)之后,以分析程序(T0)分析从准备程序(Y0)第一种或第二种方式获得的试验样本,进而得到血液样本中有关一种或多种干细胞的一组结果或数据。该组结果或数据可透过量化、质化或描述等方式呈现。此处所述的一种或多种干细胞可以包括下列一种或多种干细胞:至少一种多功能干细胞(例如SB-1细胞、SB-2细胞、类卵裂球干细胞、极小类胚胎干细胞、其它种类的多功能干细胞以及/或是一群选定的两种或两种以上的多功能干细胞)、至少一种多潜能干细胞(例如间质干细胞、其它种类的多潜能干细胞以及/或是一群选定的两种或两种以上的多潜能干细胞)、造血干细胞以及至少一种先驱干细胞。
分析程序(T0)可以透过流式细胞技术(flow cytometry)完成。流式细胞技术可以透过流式细胞仪(flow cytometer,其为一种分析仪器)执行细胞计数、细胞分类以及生物标记侦测等步骤来分析血液样本的参数。流式细胞仪可以用来分析血液样本中特定的细胞(表面)标记是否呈现阳性表达。藉由流式细胞仪,上述有关一种或多种干细胞的结果或数据可包括干细胞的种类以及上述一种或多种干细胞的相关数值(例如数量、百分比以及/或是尺寸大小)。
检测或测量方法(M1):
检测或测量方法(M1)可以透过执行纯化程序(Y1)然后再执行分析程序(T1)的方式来完成。纯化程序(Y1)可以透过下列三种方式中的任何一种方式来处理取自一个体(其可参阅个体(S)的叙述)的一组织样本。有关该组织样本的说明可参阅组织样本(P)的叙述。例如,当该组织样本是从上述个体的体液(例如人体血液、周边血液或是骨髓)取得时,该组织样本为一体液样本(例如周边血液样本、全血样本或是骨髓样本)。当该组织样本是从上述个体的固体组织(例如肌肉或脂肪细胞)取得时,该组织样本为一固体组织样本(例如肌肉样本或脂肪细胞样本)。另外,若该组织样本是从上述个体的固体组织取得,在进行纯化程序(Y1)之前,会在该组织样本中加入胶原蛋白酶(collagenase),并且让该组织样本与胶原蛋白酶在适当的温度下(此温度可以是37℃左右、30℃以上、介于35℃至39℃之间或是介于30℃至40℃之间)作用至少6或8小时。
在纯化程序(Y1)的第一种方式中,请参阅图1所示,首先将上述的组织样本移到含有抗凝血剂(例如二价阳离子螯合剂)的收集袋10里。此二价阳离子螯合剂(divalent cation chelatingagent)可以是乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,简称EDTA)。接着,利用装在收集袋10底部的过滤器11,让该组织样本中的小细胞流出收集袋10而被收集到试管12a里。可通过过滤器11的小细胞的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或是介于1微米至4微米之间。接下来,利用离心机13将试管12a以适当的离心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、介于500g至2,500g之间、介于800g至1,600g之间)离心一段时间(例如18分钟左右、12分钟以上、16分钟以上、10至30分钟、15至22分钟)。待试管12a完成离心后,这些小细胞会被分离出来。最后,将这些小细胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS与BSA),并使这些小细胞重新悬浮于此溶液中,以获得含有这些小细胞和此溶液的试验样本14a。试验样本14a可用于后续的分析程序(T1)中。
在纯化程序(Y1)的第二种方式中,请参阅图2所示,若上述的组织样本是从固体组织取得,则将经过胶原蛋白酶处理的组织样本(如前所述)放入到试管12b中。接着,利用离心机13以低转速产生的离心力(例如大约100g、介于50g至450g之间或是介于80g至250g之间)将试管12b离心一段时间(例如10分钟左右、8分钟以上、12分钟以上、8至15分钟、9至20分钟),然后再以高转速产生的离心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、介于500g至2,500g之间或是介于800g至1,600g之间)将试管12b离心一段时间(例如18分钟左右、12分钟以上、16分钟以上、10至30分钟、15至22分钟)。待试管12a完成离心后,可从组织样本中分离出小细胞。这些分离出来的小细胞的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或是介于1微米至4微米之间。最后,将这些小细胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS与BSA),并使这些小细胞重新悬浮于此溶液中,以获得含有这些小细胞和此溶液的试验样本14b。试验样本14b可用于后续的分析程序(T1)中。
在纯化程序(Y1)的第三种方式中,请参阅图3所示,若上述的组织样本是从体液取得,则将该组织样本以红血球分解液16培养或作用一段时间(例如10分钟左右、8分钟以上、12分钟以上、8至15分钟或是9至20分钟),以消除组织样本中所有的红血球细胞。接着,将含有组织样本与红血球分解液16的混合液倒入试管12c中。然后,利用离心机13以低转速产生的离心力(例如大约100g、介于50g至450g之间或是介于80g至250g之间)将试管12c离心一段时间(例如10分钟左右、8分钟以上、12分钟以上、8至15分钟或是9至20分钟),然后再以高转速产生的离心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、介于500g至2,500g之间或是介于800g至1,600g之间)将试管12c离心一段时间(例如18分钟左右、12分钟以上、16分钟以上、10至30分钟或是15至22分钟)。待试管12c完成离心后,可从含有组织样本与红血球分解液16的混合液中分离出小细胞。这些分离出来的小细胞的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或是介于1微米至4微米之间。最后,将这些小细胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS与BSA),并使这些小细胞重新悬浮于此溶液中,以获得含有这些小细胞和此溶液的试验样本14c。试验样本14c可用于后续的分析程序(T1)中。
在利用纯化程序(Y1)获得试验样本14a、14b或14c之后,以分析程序(T1)对试验样本14a、14b或14c进行分析,进而获得上述组织样本中有关一种或多种小尺寸干细胞的一组结果或数据。该组结果或数据可透过量化、质化或描述等方式呈现。另外,图1、图2或图3所示的分析仪器15a(例如逆转录聚合酶连锁反应(reverse transcription polymerase chain reaction;RT-PCR)仪或是流式细胞仪)可用于进行分析程序(T1)。上述有关一种或多种小尺寸干细胞的该组结果或数据可以包括小尺寸干细胞的种类以及上述一种或多种小尺寸干细胞的相关数值(例如数量、百分比以及/或是尺寸大小)。此处所述的一种或多种小尺寸干细胞可以包括下列一种或多种干细胞:至少一种多功能干细胞(例如SB-1细胞、SB-2细胞、类卵裂球干细胞、极小类胚胎干细胞、其它种类的多功能干细胞以及/或是一群选定的两种或两种以上的多功能干细胞)、至少一种多潜能干细胞(例如间质干细胞、其它种类的多潜能干细胞以及/或是一群选定的两种或两种以上的多潜能干细胞)、造血干细胞以及至少一种先驱干细胞。这些小尺寸干细胞的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或是介于1微米至4微米之间。
分析程序(T1)可以透过以下两种方式达成:流式细胞技术或是逆转录聚合酶连锁反应(RT-PCR)分析法(例如实时逆转录聚合酶连锁反应分析法(real-time RT-PCR analysis))。流式细胞技术可以透过流式细胞仪(此仪器为一种分析仪器15a)执行细胞计数、细胞分类以及生物标记侦测等步骤来分析一样本的参数。流式细胞仪15a可以用来分析样本中特定的细胞(表面)标记是否呈现阳性表达。逆转录聚合酶连锁反应分析法可以透过(实时)逆转录聚合酶连锁反应仪(此仪器为一种分析仪器15a)来侦测与量化一样本中干细胞的基因表达。透过逆转录聚合酶连锁反应分析法获得的结果可以得知干细胞表达的各种基因,而这些基因可以是Oct4、Nanog、Nestin以及甲种胚胎蛋白(alpha-feto protein)。
检测或测量方法(M2):
检测或测量方法(M2)可以透过执行纯化程序(Y2)然后再执行分析程序(T2)的方式来完成。纯化程序(Y2)可以透过下列三种方式中的任何一种方式来处理取自一个体(其可参阅个体(S)的叙述)的一组织样本。有关该组织样本的说明可参阅组织样本(P)的叙述。例如,当该组织样本是从上述个体的体液(例如人体血液、周边血液或是骨髓)取得时,该组织样本为一体液样本(例如周边血液样本、全血样本或是骨髓样本)。当该组织样本是从上述个体的固体组织(例如肌肉或脂肪细胞)取得时,该组织样本为一固体组织样本(例如肌肉样本或脂肪细胞样本)。另外,若该组织样本是从上述个体的固体组织取得,在进行纯化程序(Y2)之前,会在该组织样本中加入胶原蛋白酶,并且让该组织样本与胶原蛋白酶在适当的温度下(此温度可以是37℃左右、30℃以上、介于35℃至39℃之间或是介于30℃至40℃之间)作用至少6或8小时。
在纯化程序(Y2)的第一种方式中,请参阅图4所示,首先将上述的组织样本移到含有抗凝血剂(例如二价阳离子螯合剂)的收集袋或贮存器19里,以获得含有组织样本与抗凝血剂的混合液。上述的二价阳离子螯合剂可以是乙二胺四乙酸(EDTA)。接着,将混合液倒入到试管20a中。然后,利用离心机13将试管20a以适当的离心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、介于500g至2,500g之间或是介于800g至1,600g之间)离心一段时间(例如18分钟左右、12分钟以上、16分钟以上、10至30分钟或是15至22分钟)。待试管20a完成离心后,分离出包含大细胞与小细胞在内的所有细胞。这些小细胞的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)可以是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0.1微米至6微米之间、介于0.5微米至6微米之间、介于1微米至6微米之间、介于0.1微米至5微米之间、介于0.5微米至5微米之间、介于1微米至5微米之间、介于0.1微米至4微米之间、介于0.5微米至4微米之间或是介于1微米至4微米之间。这些大细胞的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)可以是大于6微米。最后,将上述含有大细胞与小细胞在内的所有细胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS与BSA),并使这些细胞重新悬浮于此溶液中,以获得含有这些细胞及此溶液的试验样本21a。试验样本21a可用于后续的分析程序(T2)中。
在纯化程序(Y2)的第二种方式中,请参阅图5所示,若上述的组织样本是从固体组织取得,则将经过胶原蛋白酶处理的组织样本(如前所述)放入到试管20b中。接着,利用离心机13以高转速产生的离心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、介于500g至2,500g之间或是介于800g至1,600g之间)将试管20b离心一段时间(例如18分钟左右、12分钟以上、16分钟以上、10至30分钟或是15至22分钟)。待试管20a完成离心后,分离出包含大细胞与小细胞在内的所有细胞。此处有关大细胞与小细胞的叙述,请参阅上述纯化程序(Y2)的第一种方式中的相关叙述。最后,将上述含有大细胞与小细胞在内的所有细胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS与BSA),并使这些细胞重新悬浮于此溶液中,以获得含有这些细胞及此溶液的试验样本21b。试验样本21b可用于后续的分析程序(T2)中。
在纯化程序(Y2)的第三种方式中,请参阅图6所示,若上述的组织样本是从体液取得,则将该组织样本以红血球分解液22培养或作用一段时间(例如10分钟左右、8分钟以上、12分钟以上、8至15分钟或是9至20分钟),以消除组织样本中所有的红血球细胞。接着,将含有组织样本与红血球分解液22的混合液倒入试管20c中。然后,利用离心机13以高转速产生的离心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、介于500g至2,500g之间或是介于800g至1,600g之间)将试管20c离心一段时间(例如18分钟左右、12分钟以上、16分钟以上、10至30分钟或是15至22分钟)。待试管20c完成离心后,从含有组织样本与红血球分解液22的混合液中分离出包含大细胞与小细胞在内的所有细胞。此处有关大细胞与小细胞的叙述,请参阅上述纯化程序(Y2)的第一种方式中的相关叙述。最后,将上述含有大细胞与小细胞在内的所有细胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS与BSA),并使这些细胞重新悬浮于此溶液中,以获得含有这些细胞及此溶液的试验样本21c。试验样本21c可用于后续的分析程序(T2)中。
在利用纯化程序(Y2)获得试验样本21a、21b或21c之后,以分析程序(T2)对试验样本21a、21b或21c进行分析,进而获得上述组织样本中有关一种或多种干细胞的一组结果或数据。该组结果或数据可透过量化、质化或描述等方式呈现。另外,图4、图5或图6所示的分析仪器15b(例如逆转录聚合酶连锁反应(RT-PCR)仪或是流式细胞仪)可用于进行分析程序(T2)。上述有关一种或多种干细胞的结果或数据可以包括干细胞的种类以及上述一种或多种干细胞的相关数值(例如数量、百分比以及/或是尺寸大小)。此处所述的一种或多种干细胞可以包括一种或多种小尺寸干细胞(相关内容请参阅分析程序(T1)中的叙述)以及/或是一种或数种大尺寸干细胞(例如至少一种多潜能干细胞(如某些种类的间质干细胞))。这些大尺寸干细胞的尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)可以是大于6微米。
分析程序(T2)可以透过以下两种方式达成:流式细胞技术或是逆转录聚合酶连锁反应(RT-PCR)分析法(例如实时逆转录聚合酶连锁反应分析法)。流式细胞技术可以透过流式细胞仪(此仪器为一种分析仪器15b)执行细胞计数、细胞分类以及生物标记侦测等步骤来分析一样本的参数。流式细胞仪15b可以用来分析样本中特定的细胞(表面)标记是否呈现阳性表达。逆转录聚合酶连锁反应分析法可以透过(实时)逆转录聚合酶连锁反应仪(此仪器为一种分析仪器15b)来侦测与量化一样本中干细胞的基因表达。透过逆转录聚合酶连锁反应分析法获得的结果可以得知干细胞表达的基因,而这些基因可以是Oct4、Nanog、Nestin以及甲种胚胎蛋白。
前面段落所描述或提及的项目、规格、定义、方法、材料、制程、设备、步骤等都可以用在以下所提及的所有实施例中。例如,在以下段落中,「尺寸」一词的定义可以参考上述有关尺寸(Z)的叙述,「个体」一词的定义可以参考上述有关个体(S)的叙述,「组织样本」一词的定义可以参考上述有关组织样本(P)的叙述。
实施方式
实施例1:
以下将叙述从一生物(例如人体或动物体)获取、收集或收获大量干细胞的方法。图7A为根据本发明中的一个实施例所绘示的流程图,其是提供一种从取自一个体的一组织样本中获取、收集或收获大量干细胞的方法。所述的干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种干细胞。请参阅图7A所示,在步骤51中,一个体进行或接受一种或多种的行为或刺激(X),例如服用或摄取一营养品或膳食补充品(如含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶或小分子褐藻糖胶的褐藻补充品或是一颗或多颗在以下第一实验和图11所提及的褐藻糖胶补充品)、服用经过政府部门(如美国食品药物管理局)核准的一种或多种药物以及/或是服用一草药或一中药。有关此个体(也就是前述的生物)的说明可以参阅个体(S)的叙述。例如,此个体可以是一人类或是一动物(如狗、猫、猪、鸡、鸭或牛)。另外,在进行步骤51所述的一种或多种行为或刺激时,可以将剂量、强度、持续时间、施行频率(例如以每次间隔一小时的方式服用一颗营养品或膳食补充品共三次)以及/或是施行时间(例如一天的时段(如早晨、中午、下午、傍晚、晚上)、用餐之前、用餐当中、用餐之后、季节(如春天、夏天、秋天、冬天)等)等因素纳入考虑。例如,当个体服用药物或补充品(如褐藻糖胶补充品)的时候,可将剂量(例如克数)以及施行时间(例如早餐前、早餐后或是睡觉前)等因素纳入考虑。步骤51所述的一种或多种行为或刺激可以让个体在进行或接受步骤51所述的一种或多种行为或刺激一段时间之后,增加个体的周边血液中特定一种或多种干细胞(其可是本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种干细胞)的数量。
在步骤52中,在个体进行或接受上述的一种或多种的行为或刺激(X)之后,让个体等待一段(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时。透过步骤51和步骤52,可以增加或扩增活体内的干细胞数量。接着,在步骤53中,从个体获得一组织样本(如周边血液样本)。有关组织样本的说明可参阅组织样本(P)的叙述。接着,在步骤54中,对组织样本进行一种干细胞获取、收集或收获程序或方法,进而从组织样本大量地获取、收集到或收获上述的特定一种或多种的干细胞(其可是本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种干细胞)。例如,透过对组织样本进行上述的干细胞获取、收集或收获程序或方法,可以从组织样本中大量地获取、收集到或收获SB-1细胞以及/或是SB-2细胞。
接着,在步骤55中,经由上述干细胞获取、收集或收获程序或方法而从组织样本中获得的一种或多种的干细胞可以为了以后的用途(PS)(其叙述在下一段段落中)而被存放(或储存)在温度低于摄氏0度(例如摄氏负30度或摄氏负80度)的一设施(如冰箱)中一段时间(例如1个月以上或一年以上)。此设施可以由一机构(如细胞银行)所提供。这些被储存的干细胞可以在获取、收集到或收获这些干细胞后的一段时间(如一个月、三个月、六个月、一年、两年、五年或十年)之后因为用途(PS)而被用在上述同一个体或另一个体上。此处所述的另一个体可以是与上述个体相同生物分类的物种,而且可以与上述个体有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。
这些被储存的干细胞可以被用在以下的用途(PS)上,此用途(PS)可以是:干细胞治疗、抗衰老治疗或产品、逆转老化(reverseageing)治疗或产品、创伤治疗或产品、脸部整容治疗或产品、整形手术、侵入式医学美容治疗、非侵入式医学美容治疗或产品、重建整形外科手术、癌症治疗、退化性疾病治疗、自体免疫疾病治疗、牙齿治疗、植牙手术、烧烫伤治疗、膝半月板损伤治疗、关节炎治疗、膝关节炎治疗、骨损伤治疗、骨折治疗、组织修复治疗、组织或器官复制、再生性复制(reproductive cloning)、治疗性复制(therapeutic cloning)、化妆品、皮肤护理产品、面膜、饲料添加物、营养品、补充品。在一范例中,这些被储存的干细胞可以透过一个适当的方法(如注射或涂抹)而被用在上述个体或上述另一个体的一组织或器官(如皮肤、骨头、关节、牙齿、肝脏或肾脏)上。在另一范例中,这些被储存的干细胞可以与某些缓冲液(如盐)混合,然后透过一个适当的方法(如注射或涂抹)将混合缓冲液的干细胞用在上述个体或上述另一个体的一组织或器官(如皮肤、骨头、关节、牙齿、肝脏或肾脏)上。
实施例2:
经由上述干细胞获取、收集或收获程序或方法而从上述组织样本中获得的一种或多种的干细胞可以不用存放在上述温度低于摄氏0度的设施中而被用在上述的用途(PS)中。或者,经由上述干细胞获取、收集或收获程序或方法而从上述组织样本中获得的一种或多种的干细胞可以不用存放在上述温度低于摄氏0度的设施中,而是透过适当的方法(如注射或涂抹)用在上述个体或另一个体的一组织或器官(如皮肤、骨头、关节、牙齿、肝脏或肾脏)上。此处所述的另一个体可以是与上述个体相同生物分类的物种,而且可以与上述个体有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。
实施例3:
从步骤53获得的组织样本可以被存放在一细胞银行或一冷藏设备(如冰箱或冷冻库)之温度低于摄氏0度(例如摄氏负30度或摄氏负80度)的环境中。在组织样本存放一段时间(如一个月、三个月、六个月、一年、两年、五年或十年)之后,从冷藏设备取出组织样本,然后对组织样本进行一种干细胞获取、收集或收获方法,进而从组织样本中获取、收集到或收获上述的特定一种或多种的干细胞(其可是本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种干细胞)。例如,透过对组织样本进行上述的干细胞获取、收集或收获方法,可以从组织样本中获取、收集到或收获SB-1细胞以及/或是SB-2细胞。经由上述干细胞获取、收集或收获程序或方法而从组织样本中获得的一种或多种的干细胞可以被用在上述的用途(PS)中或是透过适当的方法(如注射或涂抹)用在上述个体或另一个体的一组织或器官(如皮肤、骨头、关节、牙齿、肝脏或肾脏)上。此处所述的另一个体可以是与上述个体相同生物分类的物种,而且可以与上述个体有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。
实施例4:
从步骤53获得的组织样本可以被存放在一细胞银行或一冷藏设备(如冰箱或冷冻库)之温度低于摄氏0度(例如摄氏负30度或摄氏负80度)的环境中。此组织样本含有上述的特定一种或多种的干细胞(其可是本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种干细胞),例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞。在组织样本存放一段时间(如一个月、三个月、六个月、一年、两年、五年或十年)之后,从冷藏设备取出组织样本,然后将组织样本用在上述的用途(PS)中或是透过适当的方法(如注射或涂抹)用在上述个体或另一个体的一组织或器官(如皮肤、骨头、关节、牙齿、肝脏或肾脏)上。此处所述的另一个体可以是与上述个体相同生物分类的物种,而且可以与上述个体有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。
实施例5:
从步骤53获得的组织样本可以不用被存放在一细胞银行或一冷藏设备(如冰箱或冷冻库)的(非常)低温环境中一段时间(如一个月、三个月、六个月、一年、两年、五年或十年),而是直接用在上述的用途(PS)中或是透过适当的方法(如注射或涂抹)用在上述个体或另一个体的一组织或器官(如皮肤、骨头、关节、牙齿、肝脏或肾脏)上。此处所述的另一个体可以是与上述个体相同生物分类的物种,而且可以与上述个体有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。另外,上述的组织样本含有上述的特定一种或多种的干细胞(其可是本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种干细胞),例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞。
实施例6:
从步骤53获得的组织样本可以用来发现或侦测尚未被识别或发现的一种或多种的新种类干细胞。以下在本实施例的叙述是以组织样本是从个体的周边血液获得作为范例来进行说明。在个体进行或接受步骤51所述的一种或多种的行为或刺激(X)之前,个体的周边血液可以没有上述一种或多种的新种类干细胞或是仅有相当稀少(也就是指数量非常的低或是无法侦测)的上述一种或多种的新种类干细胞,所以无法使用或是非常难以使用一流式细胞仪或是其它测量工具发现上述一种或多种的新种类干细胞。在个体进行步骤51和步骤52之后,上述一种或多种的新种类干细胞会在个体的周边血液内增加、进行活化反应、流动、生成或进行刺激反应。因此,透过一流式细胞仪或是其它测量工具,可以轻易地发现上述一种或多种的新种类干细胞,相关内容可参阅下面步骤59的叙述。
透过发现或侦测新种类干细胞的方法,可以发现或侦测到上述一种或多种的新种类干细胞。图7B揭示一种发现或侦测一种或多种新种类干细胞的方法的流程图。请参阅图7B所示,在依序进行步骤51至步骤53之后,接着进行步骤59。在步骤59中,利用一种可以侦测上述一种或多种的新种类干细胞的分析方法(如前面所述的检测或测量方法(M0)、(M1)或(M2))来处理步骤53所获得的组织样本(例如周边血液样本)。上述的分析方法包括侦测组织样本中的细胞是否含有细胞核的步骤以及组织样本中的细胞是否可以表达以及/或是无法表达一种或多种选定的细胞(表面)标记的步骤。
实施例7:
利用前面所述的检测或测量方法(M0)、(M1)或(M2)、图9中的步骤61至步骤70、图14A-图14C中的步骤1至步骤20、之后所述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或是之后所述的单一系统、仪器、工具或装置(TD),可以从图7A步骤53所获得的组织样本中获得有关上述个体在进行或接受步骤51所述的一种或多种的行为或刺激(X)之后的干细胞数据(以下称“数据A”)。数据A可以包括各种干细胞的数量、各种干细胞所占的百分比以及/或是一种或多种干细胞在步骤53所获得的组织样本中每毫升的数量(也就是一种或多种干细胞在步骤53所获得的组织样本中每单位体积的数量)。此处所述的一种或多种干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种干细胞。例如,数据A可以包括SB-1细胞的数量或百分比、SB-2细胞的数量或百分比、类卵裂球干细胞的数量或百分比、极小类胚胎干细胞的数量或百分比、间质干细胞的数量或百分比、造血干细胞的数量或百分比、一种或多种的多功能干细胞、多潜能干细胞以及/或是先驱干细胞的数量或百分比、以及/或是一种或多种的多功能干细胞、多潜能干细胞和/或先驱干细胞在步骤53所获得的组织样本中每单位体积的数量。数据A可以用于临床诊断或是用于监测、决定、确认或评估个体的病程阶段(disease stage)、治疗进展(treatmentprogress)、健康状况以及/或是生理情况。
或者,数据A可以用来评估或确认步骤51所述的一种或多种的行为或刺激(X)对于治疗或治愈患有一种特定疾病的个体的功效(或效用)。在此范例中,可以透过控制步骤51所述的一种或多种的行为或刺激(X)的剂量、强度、持续时间、施行频率以及/或是施行时间来治疗或治愈患有上述特定疾病的个体。上述的特定疾病可以是前列腺癌、肝癌、胃癌、口腔癌、大肠癌、乳癌、肺癌、鼻咽癌、子宫颈癌、皮肤癌、食道癌、膀胱癌、胰脏癌、子宫内膜癌、卵巢癌、胆囊癌、甲状腺癌、白血病、淋巴癌、非何杰金氏淋巴瘤、黑色素瘤、帕金森氏症(parkinsonism)、阿兹海默病(Alzheimer's disease)、痴呆症(dementia)、糖尿病、过敏性鼻炎、脑瘤、后天免疫缺乏症候群(acquired immunodeficiencysyndrome)。在本范例中,也可以获得有关上述个体在进行或接受步骤51所述的一种或多种的行为或刺激(X)之前的干细胞数据(以下称“数据B”)。然后,透过比较数据A与数据B,可以确认、决定或评估步骤51所述的一种或多种的行为或刺激(X)对于治疗或治愈患有上述特定疾病的个体的功效(或效用)。图7C根据本范例绘出一种确认、决定或评估步骤51所述的一种或多种的行为或刺激(X)对于治愈或治疗患有上述特定疾病的个体的功效(或效用)的方法的流程图。
请参阅图7C所示,在步骤49中,从上述个体取出、获得、得到或取得一组织样本(以下称”第一组织样本”)。有关第一组组织样本的说明可参阅前面所述的组织样本(P)。接着,在步骤50中,以第一检测或测量方法分析或检测第一组织样本,进而获得与第一组织样本中一种或多种干细胞有关的第一干细胞数据(也就是数据B)。第一干细胞数据可藉由量化或描述等方式呈现。第一检测或测量方法可以包括取得和/或测量干细胞的步骤。有关第一检测或测量方法的说明可参阅检测或测量方法(M0)、(M1)或(M2)的叙述、图9中步骤61至步骤70的叙述或是图14A-图14C中步骤1至步骤20的叙述。除了透过第一检测或测量方法,第一干细胞数据也可以透过之后所述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或是之后所述的单一系统、仪器、工具或装置(TD)来获得。
第一干细胞数据报括数个结果或数据R1,1-Ra,b,其中a为正整数(例如是2到100中的任何一个数字),b也是正整数(例如是1或2)。R的第一个下标数字(也就是跟随在字母R之后的数字—1到a)是代表某一种选定的干细胞。R的第二个下标数字(也就是跟随在第一个下标数字之后的数字—1到b)是代表某一种数据型态。
以下将对R的第一个下标数字进行叙述。在R的第一个下标数字为1的时候,结果或数据R1,1-R1,b可以是与“SB-1细胞”有关的结果或数据。在R的第一个下标数字为2的时候,结果或数据R2,1-R2,b可以是与“SB-2细胞”有关的结果或数据。在R的第一个下标数字为3的时候,结果或数据R3,1-R3,b可以是与“类卵裂球干细胞(BLSC)”有关的结果或数据。在R的第一个下标数字为4的时候,结果或数据R4,1-R4,b可以是与“极小类胚胎干细胞(VSEL)”有关的结果或数据。在R的第一个下标数字为5的时候,结果或数据R5,1-R5,b可以是与“某一种多潜能干细胞(如间质干细胞或多潜能成体先驱细胞)”有关的结果或数据。在R的第一个下标数字为6的时候,结果或数据R6,1-R6,b可以是与“另一种多潜能干细胞(如造血干细胞、骨髓多潜能干细胞或多潜能成体干细胞)”有关的结果或数据。在R的第一个下标数字为7的时候,结果或数据R7,1-R7,b可以是与“某一种先驱干细胞(如前间质干细胞、多潜能先驱干细胞、谱系限制先驱干细胞、共同髓原先驱细胞、共同淋巴球先驱细胞或造血先驱细胞)”有关的结果或数据。在R的第一个下标数字为8的时候,结果或数据R8,1-R8,b可以是与“另一种先驱干细胞(如成体骨髓多元性诱导细胞或间质先驱细胞)”有关的结果或数据。
以下将对R的第二个下标数字进行叙述。在R的第二个下标数字为1的时候,结果或数据R1,1-Ra,1可以是与“干细胞的数量”有关的结果或数据。在R的第二个下标数字为2的时候,结果或数据R1,2-Ra,2可以是与“干细胞的百分比”有关的结果或数据。在R的第二个下标数字为3的时候,结果或数据R1,3-Ra,3可以是与“干细胞在一组织样本(如上述的第一组织样本)中每单位体积(如每毫升)的数量”有关的结果或数据。
因此,结果或数据R1,1可代表或显示出SB-1细胞的数量。结果或数据R1,2可代表或显示出SB-1细胞的百分比。结果或数据R1,3可代表或显示出SB-1细胞在一组织样本(如上述的第一组织样本)中每单位体积(如每毫升)的数量。结果或数据R2,1可代表或显示出SB-2细胞的数量。结果或数据R2,2可代表或显示出SB-2细胞的百分比。结果或数据R2,3可代表或显示出SB-2细胞在一组织样本(如上述的第一组织样本)中每单位体积(如每毫升)的数量。其它的结果或数据则以此类推,在此就不加以论述。
请参阅图7C所示,在进行完(或完成)步骤49或步骤50之后,依序进行前面所述的步骤51至步骤53,因而从进行或接受步骤51所述之一种或多种行为或刺激(X)之后的个体取出、获得、得到或取得一组织样本(以下称“第二组织样本”)。有关第二组组织样本的说明可参阅前面所述的组织样本(P)。第一与第二组织样本可以是从个体的同一种组织所获得的两个样本。例如,第一与第二组织样本可以从个体的周边血液、骨骼、肌肉、脂肪细胞或是脂肪组织获得。在一范例中,第一与第二组织样本都可以是周边血液样本。
接着,在步骤56中,以第二检测或测量方法分析或检测第二组织样本,进而获得与第二组织样本中一种或多种干细胞有关的第二干细胞数据(也就是数据A)。第二干细胞数据可藉由量化或描述等方式呈现。第二检测或测量方法可以包括取得和/或测量干细胞的步骤。有关第二检测或测量方法的说明可参阅检测或测量方法(M0)、(M1)或(M2)的叙述、图9中步骤61至步骤70的叙述或是图14A-图14C中步骤1至步骤20的叙述。除了透过第二检测或测量方法,第二干细胞数据也可以透过之后所述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或是之后所述的单一系统、仪器、工具或装置(TD)来获得。
第二干细胞数据含有与步骤50所提及的第一干细胞数据相同类型的信息内容,也就是说第二干细胞数据含有对应的结果或数据R1,1-Ra,b,其中有关R的第一个与第二个下标数字是定义在、描述在或是说明在步骤50所提及的第一干细胞数据的R1,1-Ra,b中。为了获得相同类型的信息内容以及减少实验误差,本发明透过相同的方式(例如检测或测量方法(M0)、(M1)或(M2)、图9的步骤61至步骤70或是图14A-图14C的步骤1至步骤20)或是相同的仪器(例如整合系统、装置、仪器或工具(AD)或是单一系统、仪器、工具或装置(TD))来进行获得第一干细胞数据与第二干细胞数据的第一与第二检测或测量方法。
接着,在步骤57中,根据对第一干细胞数据与第二干细胞数据所做的分析(其可包括比较第一干细胞数据与第二干细胞数据),可以确认、决定或评估步骤51所述的一种或多种的行为或刺激(X)对于治愈或治疗患有上述特定疾病的个体的功效(或效用)。第一干细胞数据与第二干细胞数据可以做成一份评估或检查报告。另外,图7C的步骤49、步骤50、步骤51、步骤52、步骤53、步骤56和步骤57也可以用来确认、决定、评估或测试步骤51所述之一种或多种的行为或刺激(如服用或摄取一颗或多颗以下第一实验和图11所提及的褐藻补充品)的效果或功效(或效用)。
请参阅图7C所示,在进行完(或完成)步骤56或步骤57之后,如果需要可以进行步骤58,也就是让相同个体依序进行步骤51、步骤52、步骤53、步骤56和步骤57一次或多次。在步骤58中,每次进行步骤53的时候,都会在进行完(或完成)步骤52之后,从相同个体获得或得到一组织样本。在步骤58中,每次以一检测或测量方法(如步骤56所提及的检测或测量方法)分析或检测从相同个体获得的组织样本都可以获得与组织样本中一种或多种干细胞有关的干细胞数据(其说明可参阅步骤50所述的第一干细胞数据)。在步骤58中,每次将当前的干细胞数据和前一次的干细胞数据进行比较(如步骤57所述的比较第一干细胞数据与第二干细胞数据)都可以确认、决定或评估步骤51所述的一种或多种的行为或刺激(X)对于治愈或治疗患有上述特定疾病的个体的功效(或效用)。步骤58所获得的每一组干细胞数据可以含有与步骤50所述的第一干细胞数据相同类型的信息内容,也就是说步骤58所获得的每一组干细胞数据含有对应的结果或数据R1,1-Ra,b,其中有关R的第一个与第二个下标数字是定义在、描述在或是说明在步骤50所提及的第一干细胞数据的R1,1-Ra,b中。另外,图7C的步骤58也可以用来确认、决定、评估或测试步骤51所述的一种或多种的行为或刺激(如服用或摄取一颗或多颗以下第一实验和图11所提及的褐藻补充品)的效果或功效(或效用)。
在接下来的内容中,将以一种增加人体周边血液干细胞数量的方法作为范例,叙述第一实验并显示相关的实验结果。图8A-图8F显示出三位人类受试者在口服30颗褐藻糖胶补充品之前与之后的干细胞数据。透过步骤49至步骤53和步骤56至步骤58的这个方法,可以从三位人类受试者获得图8A-图8F的干细胞数据。在第一实验中,每一位人类受试者在步骤51中是口服30颗褐藻糖胶补充品。每一颗褐藻糖胶补充品的重量为151.3毫克(mg),并且含有0.1克的褐藻糖胶(其是透过萃取的方式从生长在日本冲绳县周围海域的褐藻中获得)和0.04克的膳食纤维。此褐藻糖胶补充品可以在日本冲绳县生产。褐藻是海藻的一种。褐藻有各式各样的种类,例如水云、昆布、裙带菜、羊栖菜等。绿藻、蓝藻或蓝绿藻是生长在靠近海岸的地方或是在浅海里,而且依赖光合作用生长。红藻是生长在深海里,而且倚赖微光进行光合作用。褐藻是生长在介于绿/蓝藻和红藻之间的海洋中,换句话说,褐藻是生长在海洋深度中间的地方。
图11显示用在第一实验之褐藻糖胶补充品的内容/成分信息。如图11所示,一颗褐藻糖胶补充品含有重量百分比为80%的水云粉(mozuku powder)、重量百分比为15%的结晶纤维素(crystalline cellulose)、重量百分比为3%的蔗糖脂肪酸酯(sucrosefatty acid esters)以及重量百分比为2%的精细二氧化硅。水云粉是萃取自(或是提取自)生长在日本冲绳县周围海域中的水云褐藻(为一种海藻)。然后,将水云粉混合结晶纤维素、蔗糖脂肪酸酯以及精细二氧化硅,就可以获得这颗褐藻糖胶补充品。在第一实验中,每一位受试者口服30颗冲绳褐藻糖胶补充品,也就是说每一位受试者服用4.5克(或超过3.5克)的冲绳褐藻补充品,此冲绳褐藻补充品包括重量百分比为80%(或是超过70%)的水云粉。这30颗的冲绳褐藻糖胶补充品(也就是约4.5克左右的冲绳褐藻补充品)含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶。因此,每一位受试者服用3克(或是超过2克)的褐藻糖胶。
在第一实验中,这三位受试者每一位的体重大约是75公斤。这意味着褐藻糖胶的剂量是每公斤体重约40毫克。或者,褐藻糖胶的剂量也可以是每公斤体重超过20毫克、30毫克、40毫克或是50毫克。图12揭示褐藻糖胶的部分分子结构,其包含多个环形结构,每一个环形结构含有5个碳原子(C)和1个氧原子(O)。另外,此分子结构也包含数个基团(radical)R,其可是SO3或H。SO3基团在褐藻糖胶中扮演着非常重要的角色。在冲绳褐藻糖胶补充品中,硫(S)在褐藻糖胶分子中的重量百分比大约是12%。对本发明的实施例而言,在这个褐藻糖胶补充品中,硫(S)在褐藻糖胶分子中的重量百分比也可以大于6%、8%或10%。或者,在这个褐藻糖胶补充品中,硫(S)在褐藻糖胶分子中的重量百分比也可以大于12%、16%或20%。
在第一实验中,这三位受试者是:(1)受试者A:一位近三十岁的女性,其实验数据显示在图8A和图8B;(2)受试者B:一位五十五岁左右的男性,其实验数据显示在图8C和图8D;以及(3)受试者C:一位五十岁出头的男性,其实验数据显示在图8E和图8F。图8A和图8B的干细胞数据显示受试者A在食用或摄取褐藻糖胶补充品之前、之后第1.5小时、之后第24小时以及之后第48小时的每一种干细胞(共有27种干细胞)的百分比。图8C和图8D的干细胞数据显示受试者B在食用或摄取褐藻糖胶补充品之前、之后第1.5小时、之后第24小时以及之后第48小时的每一种干细胞(共有27种干细胞)的百分比。图8E和第8图8F的干细胞数据显示受试者C在食用或摄取褐藻糖胶补充品之前、之后第1.5小时、之后第24小时以及之后第48小时的每一种干细胞(共有27种干细胞)的百分比。
用于干细胞研究的实验方法、程序和规范(其包括使用流式细胞仪)已叙述在前面的段落中。图9的步骤61至步骤70也可以用来获得每一位受试者在食用或摄取褐藻糖胶补充品之前、之后第1.5小时、之后第24小时以及之后第48小时的每一种干细胞(共有27种干细胞)的百分比。请参阅图9所示,在步骤61中,从一个体(如上述三位人类受试者的任何一位)获得或收集5毫升的周边血液,然后将5毫升的周边血液放进第一试管中,并使其混合二价阳离子螯合剂(例如乙二胺四乙酸)。接着,在步骤62中,将1毫升的6%羟乙基淀粉加到第一试管内的5毫升周边血液中,以形成一个第一中间样本。6%羟乙基淀粉是一种磷酸盐缓冲液内含有6%的羟乙基淀粉的溶液,也就是每100毫升的磷酸盐缓冲液含有6克的羟乙基淀粉。接着,在步骤63中,让第一中间样本在室温(如约27℃)静置或培育一段时间(例如至少30分钟)。待第一中间样本形成上下两个分层后,在不扰动下分层(其为红血球层)的情况下,将上分层(其为细胞层)以吸取器移出并放置到第二试管中。然后,在步骤64中,将放到第二试管内的上分层以适当的转速(例如每分钟3,000转)离心一段时间(例如15分钟),并在离心完成后,获得离心样本。接着,在步骤65中,移除离心样本的上清液。接下来,在步骤66中,以适当的盐溶液(如PBS)冲洗离心样本的颗粒,然后使颗粒重新悬浮于3毫升的第一溶液(例如含有1%或2%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液)中,以获得3毫升样本。
接着,在步骤67中,将3毫升样本分到多个样本容器(如试管)中。每个样本容器含有来自3毫升样本的100微升(microliter)溶液(以下称“100微升样本”)。然后,每个样本容器可以加入特定一种的染色剂(其可含有特定一种的抗体或是多种特定的抗体)。加到每个样本容器里的染色剂可以是彼此不同的,所以每个样本容器中的染色剂所含有的一种或多种抗体也可以是彼此不同的。因此,加到这些样本容器里的染色剂是彼此含有不同种类的抗体。在每个样本容器中加入一种特定染色剂的目的在于识别一种特定的细胞(表面)标记、多种选定的细胞(表面)标记或是特定种类的干细胞。在染色剂里的每一种抗体可以用来识别一种特定的细胞(表面)标记、一种特定的干细胞或是多种特定的干细胞或细胞(表面)标记。这些染色剂里的每一种抗体是不同于这些染色剂里的其它种抗体。因此,每一个样本容器里含有一个第二中间样本,而且每一个第二中间样本都是由经过上述对应的染色剂(其含有一种或多种特定的抗体)染色的100微升样本所构成。
接着,在步骤68中,让这些样本容器里的第二中间样本在室温(如约27℃)静置或培育一段时间(例如至少30分钟)。接着,在步骤69中,将每一个第二中间样本和大约400微升的第二溶液(如含有1%或2%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液)进行混合,以形成体积为500微升的样本(以下称“500微升样本”)。每一个500微升样本都是100微升样本(其是经过相对应的一种染色剂(此染色剂含有一种或多种抗体)染色)和第二溶液的混合物。接着,在步骤70中,利用一流式细胞仪分析这些样本容器里的500微升样本,进而获得干细胞数据。在第一实验中,流式细胞仪会去计数和分析每个500微升样本里的其中一百万个颗粒(其是含有干细胞、其它的细胞以及来自加入的染色剂或第二溶液的颗粒)。
在图9的步骤70中,透过流式细胞仪测量到的前向散射系数(forward scattering coefficient,简称FSC)和侧向散射系数(sidescattering coefficient,简称SSC),可以将上述提及的每个500微升样本里的其中一百万个颗粒(其是含有干细胞、其它的细胞以及来自加入的染色剂或第二溶液的颗粒)区分成对应的多个细胞群或颗粒群。图10是用在上述流式细胞仪的前向散射系数/侧向散射系数图,并且显示某个500微升样本里的一百万个颗粒(其系含有干细胞、其它的细胞以及来自加入的染色剂或第二溶液的颗粒)的多个细胞群或颗粒群。请参阅图10所示,横轴代表范围从103到107.2的前向散射系数,纵轴代表范围从101到107.2的侧向散射系数。在本发明中,前向散射系数与一个细胞或颗粒的表面积或尺寸有关或是成比例,侧向散射系数与一个细胞或颗粒的粒性(granularity)或内部复杂度有关或是成比例。位在图10所示的垂直虚线81右侧区域的点状物可以代表尺寸大于1微米的颗粒或细胞。位在图10所示的水平虚线82上方区域的点状物可以代表侧向散射系数大于102的颗粒或细胞。
图10所示的细胞群或颗粒群包括:(1)微颗粒(microparticles),如区域P1所示;(2)尺寸大于1微米且侧向散射系数大于102的细胞,如区域P3所示;(3)未知的微颗粒,如区域P4所示;(4)染色缓冲溶液(staining buffer),如区域P5所示;(5)淋巴球(lymphocyte),如区域P6所示;(6)红血球,如区域P7所示;(7)粒细胞(granulocyte),如区域P8所示;以及(8)血小板,如区域P9所示。区域P3包括区域P1、区域P6、区域P7、区域P8和区域P9。感兴趣的细胞或颗粒(以下称“全部细胞或颗粒TS”)是位在区域P3里,但是没有位在区域P1、区域P6、区域P7、区域P8和区域P9这些区域里。全部细胞或颗粒TS包含有一种或多种上述的27种干细胞(例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞)。在本发明中,其它500微升样本含有与图10所提及的细胞群或颗粒群相同的细胞群或颗粒群。
透过流式细胞仪,可以测得(或获得)每个500微升样本里的全部细胞或颗粒TS的数量以及在全部细胞或颗粒TS中选定种类干细胞的数量。然后,使用上述的数据或资料,可以得到图8A-图8F所示的“上述27种干细胞中每一种干细胞的数量或总数占全部细胞或颗粒TS的数量或总数的百分比”。图8A-图8F所示的每一种干细胞的百分比可以透过下列的计算方式来获得:将每一种干细胞的数量或总数除以对应的全部细胞或颗粒TS的数量或总数,然后将每一个相除的结果乘以100%(其是为了将相除的结果转换成百分比数字)。在步骤70中,透过上述流式细胞仪获得的干细胞数据报括“每一种干细胞(共有27种干细胞)的数量或总数占对应的全部细胞或颗粒TS的数量或总数的百分比”。
因此,对上述三位人类受试者进行步骤61至步骤70所述的方法,可以获得图8A-图8F所示的每位人类受试者在食用或摄取上述褐藻糖胶补充品之前、之后第1.5小时、之后第24小时以及之后第48小时的“每一种干细胞(共有27种干细胞)的数量或总数占对应的全部细胞或颗粒TS的数量或总数的百分比”。利用获得的百分比数据,则可获得每位人类受试者在食用或摄取褐藻糖胶补充品之前和之后第1.5小时每一种干细胞(共有27种干细胞)的百分比变化(percentage change)、在食用或摄取褐藻糖胶补充品之前和之后第24小时每一种干细胞(共有27种干细胞)的百分比变化或是在食用或摄取褐藻糖胶补充品之前和之后第48小时每一种干细胞(共有27种干细胞)的百分比变化。这些百分比变化的数据可以用来建立或得到干细胞在体内培养或培育的最佳收获(或获取)时间点(例如在食用或摄取褐藻糖胶补充品之后的第24小时)。
请再次参阅图8A-图8F,将三位人类受试者在食用或摄取褐藻糖胶补充品之前的数据和三位人类受试者在食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第24小时的数据进行比较,得知大部分种类的干细胞在百分比上显示出有增加的情况。特别是可以发现下列的干细胞在百分比上有两倍或是更多的增加:SB-1细胞、CD44(+)多潜能干细胞、CD13(+)多潜能干细胞、CD73(+)多潜能干细胞、CD90(+)多潜能干细胞、CD34(+)造血干细胞、CD48(+)先驱干细胞、CD244(+)先驱干细胞、CD140b(+)先驱干细胞、CD117(+)先驱干细胞、CD10(+)先驱干细胞以及CD33(+)先驱干细胞。上述12种干细胞在百分比上有两倍或是更多的增加是透过下列的方式得知:将三位人类受试者在食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第24小时有关上述12种干细胞的“干细胞的数量或总数占对应的全部细胞或颗粒TS的数量或总数的百分比”和三位人类受试者在食用或摄取褐藻糖胶补充品之前有关上述12种干细胞的“干细胞的数量或总数占对应的全部细胞或颗粒TS的数量或总数的百分比”进行比较。
根据图8A-图8F的干细胞数据显示,服用上述的褐藻糖胶补充品可以导致、引起或造成某些种类干细胞的百分比在三位人类受试者食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第24小时的周边血液中至少有两倍的增加。此处所述的“两倍增加”是指「某些特定种类的干细胞在食用或摄取褐藻糖胶补充品之前的百分比」和「这些特定种类的干细胞在食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第24小时(也可以是其它特定时间,例如第1.5小时、第3小时、第6小时、第9小时、第12小时、第18小时、第30小时或第36小时)的百分比」的比例。另外,图8A-图8F的干细胞数据也显示,其它种类的干细胞也有1.5倍、3倍或4倍的增加。因此,口服褐藻糖胶(一种褐藻的主要成分)可以是一种使人类或动物的周边血液增加干细胞的有效方法。综上所述,一种行为,例如口服3克(也就是超过2克)的褐藻糖胶(其可来自上述的褐藻糖胶补充品)或是一种或多种的行为或刺激(X),可以导致、引起、活化或催化人类或动物周边血液中的干细胞至少有1.5倍(或以上)、2倍(或以上)、3倍(或以上)或4倍(或以上)的增加。
某些准则(或标准)可以设定用来决定步骤53获得的组织样本(其在进行或接受步骤51的一种或多种的行为或刺激(X)之后取得)是否可以用于收获、获得或是收集图7A步骤54的干细胞。例如,请参阅图7A所示,当测量结果或数据显示SB-1细胞的数量或总数占全部细胞或颗粒TS的数量或总数的百分比是大于20%、25%或30%、SB-2细胞的数量或总数占全部细胞或颗粒TS的数量或总数的百分比是大于20%、25%或30%以及/或是类卵裂球干细胞的数量或总数占全部细胞或颗粒TS的数量或总数的百分比是大于5%或10%的时候,从步骤53获得的组织样本(其在进行或接受步骤51的一种或多种的行为或刺激(X)之后取得)才可以用来收获、获得或是收集干细胞。或者,请参阅图7A所示,当测量结果或数据显示SB-1细胞、SB-2细胞以及/或是类卵裂球干细胞至少有1.5倍(或以上)增加、2倍(或以上)增加或是3倍(或以上)增加的时候,从步骤53获得的组织样本(其在进行或接受步骤51的一种或多种的行为或刺激(X)之后取得)才可以用来收获、获得或是收集干细胞。此处所述的x倍(如1.5倍、2倍或3倍)增加已定义在前面的段落中。
根据图8A-图8F所示的结果,证实口服褐藻糖胶可以增加人类或动物的周边血液中干细胞的数量。因此,用来表示(或指出)口服褐藻糖胶(其为一种行为或刺激(X))有益于增加人体某些种类干细胞数量的标志、记号、陈述或符号就可以被允许贴在或是印在一种产品(如上述的褐藻糖胶补充品)的包装、容器或是包装纸上。在另外一个范例中,图8A-图8F所示的结果也可以用来判断使用在口服褐藻糖胶补充品这种行为的剂量、强度、持续时间、施行频率以及/或是施行时间是否有益于增加人体某些种类干细胞的数量。根据图8A-图8F所示的结果,每天或是一次服用30颗的褐藻糖胶补充品(这30颗褐藻糖胶补充品含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶)可以用来治疗某些疾病或是伤害或是用来维持健康。
一般情况下,图8A-图8F所述的27种干细胞在组织中可以认为是静止或休眠的(quiescent),但是在食用或摄取褐藻糖胶补充品之后,可以让这27种干细胞移动或调动到周边血液中,并且活化或分化这27种干细胞来修补受损伤的组织。因此,褐藻的褐藻糖胶成分可以在干细胞从一适当位置(如肌肉或骨髓)移动或调动到血流的机制中或是在活化或生成干细胞的机制中扮演一个关键性的角色。换句话说,褐藻的主要成分—褐藻糖胶,可以是干细胞的一种调动(或移动)器、产生器或是活化(或催化)器。前面叙述的实施例可以用来调动、产生或是活化(或催化)一种或多种的干细胞(例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞)。
图13所示为一种获得有关一个体的干细胞数据(或资料)的方法。请参阅图13所示,在步骤101中,一实验对象(如前面所述的个体(S))进行或接受一种或多种的行为或刺激(X)。例如,实验对象(或称实验组参与者)可以在步骤101中口服30颗褐藻糖胶补充品(其可是图11和图12所提及的褐藻糖胶补充品),所以实验对象在步骤101中服用了3克(也就是超过2克)的褐藻糖胶。或者,实验对象也可以在步骤101中接受注射一种含有褐藻糖胶或小分子褐藻糖胶的营养品或补充品。接着,在步骤102中,在实验对象进行或接受步骤101所述的一种或多种的行为或刺激(X)之后,让实验对象等待一段(预定的)时间,例如1.5小时、12小时、24小时、48小时、0.5小时至3小时或是1小时至2小时。接下来,在步骤103中,将实验对象在一特定时间点的周边血液取出,并放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)试管)中,以获得一血液样本(也就是一组织样本)。所述的特定时间点为该段(预定的)时间结束的时间点。血液样本的体积可以是大于或等于5毫升或10毫升。接着,在步骤104中,对血液样本进行一测量或分析方法(以下称“测量方法MT”),进而获得实验对象在所述的特定时间点的干细胞数据。该干细胞数据可包括实验对象在所述的特定时间点的周边血液中,每单位体积(如每毫升)的每一种干细胞(其可是本发明在“干细胞定义”里所提及的多种干细胞)的数量。在对血液样本进行步骤104中的测量方法MT之前,血液样本可以存放在温度介于1℃至30℃之间(例如介于1℃至10℃之间、介于10℃至20℃之间或是介于20℃至30℃之间)的环境中。从步骤103获得血液样本到步骤104对血液样本进行测量方法MT的时间间隔可以是等于或小于30分钟、60分钟、12小时、24小时、48小时、72小时或是1星期,例如是介于10分钟到30分钟之间、介于30分钟到60分钟之间、介于0.5小时到2小时之间、介于2小时到12小时之间、介于12小时到24小时之间、介于24小时到48小时之间或是介于48小时到72小时之间。
图13步骤104所提及的测量方法MT可以包括图14A的步骤1至步骤8、图14B的步骤9至步骤14以及图14C的步骤15至步骤20。请参阅图14A所示,在步骤1中,将含有6%羟乙基淀粉的红血球凝集剂(erythrocyte aggregation agent)加到装有一血液样本(如周边血液)的一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)试管)中,以形成第一中间样本。含有6%羟乙基淀粉的红血球凝集剂可以是HetaSepTM溶液。装有血液样本的采血管例如可以在图13的步骤103中获得。血液样本可以透过以下方式获得:取出一个体(如前面所述的个体(S))的周边血液,并将取出的周边血液放到上述的采血管中。在对血液样本进行步骤1之前,可以将血液样本存放在温度介于1℃至30℃之间(例如介于1℃至10℃之间、介于10℃至20℃之间或是介于20℃至30℃之间)的环境中。从获得血液样本到对血液样本进行步骤1的时间间隔可以是等于或小于30分钟、60分钟、12小时、24小时、48小时、72小时或是1星期,例如介于10分钟到30分钟之间、介于30分钟到60分钟之间、介于0.5小时到2小时之间、介于2小时到12小时之间、介于12小时到24小时之间、介于24小时到48小时之间或是介于48小时到72小时之间。血液样本的体积可以是大于或等于5毫升或10毫升。血液样本与含有6%羟乙基淀粉的红血球凝集剂的体积比可以是5:1。6%羟乙基淀粉是一种磷酸盐缓冲液(PBS)内含有6%的羟乙基淀粉的溶液,也就是每100毫升(mL)的磷酸盐缓冲液含有6克的羟乙基淀粉。
接着,在步骤2中,将第一中间样本放到第一试管(如falcon试管)中,然后让第一中间样本在室温(如27℃左右)培养一段时间(例如30分钟至90分钟)。待第一试管中的第一中间样本形成上下两个分层后,在不扰动下分层(其为红血球层)的情况下,将上分层(其为细胞层)以吸取器移出并放置到第二试管中。接下来,在步骤3中,将移到第二试管内的上分层以适当的转速(例如每分钟1,800转或是每分钟3,000转)离心一段时间(例如10分钟至20分钟),并在离心完成后获得第一离心样本。接着,在步骤4中,将第一离心样本的上清液移除,并使第一离心样本里的颗粒重新悬浮于不含有钙与镁的第一含盐溶液(例如不含有钙与镁的杜尔贝科(Dulbecco)磷酸盐缓冲液)中,以形成第二中间样本。第一离心样本里的颗粒有部分来自于血液样本。接下来,在步骤5中,将第二中间样本以适当的转速(例如每分钟1,800转或是每分钟3,000转)离心一段时间(例如10分钟至20分钟),并在离心完成后获得第二离心样本。
接着,在步骤6中,将第二离心样本的上清液移除,并使第二离心样本里的颗粒重新悬浮于不含有钙与镁的第二含盐溶液(例如不含有钙与镁的杜尔贝科(Dulbecco)磷酸盐缓冲液)中,以形成第三中间样本。第二离心样本里的颗粒有部分来自于血液样本。接下来,在步骤7中,将第三中间样本以适当的转速(例如每分钟1,800转或是每分钟3,000转)离心一段时间(例如10分钟至20分钟),并在离心完成后获得第三离心样本。接着,在步骤8中,将第三离心样本的上清液移除,并使第三离心样本里的颗粒重新悬浮于第一培养液(例如含有1%牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液)中,以获得一个经过处里的样本(以下称“处理过样本”)。在本发明中,让0.1克的牛血清白蛋白溶解在10毫升的磷酸盐缓冲液中,可以获得含有1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。第三离心样本里的颗粒有部分来自于血液样本。处理过样本的体积可以大于或等于0.8毫升或3毫升,而且也可以小于步骤1所述的血液样本的体积。第一培养液的体积可以大致等于处理过样本的体积。
请参阅图14B所示,在透过步骤8获得处理过样本之后,依序进行步骤9至步骤14。在步骤9中,从处理过样本中取出一部分(以下称“第一部分样本”),然后将第一部分样本分到第三试管中。接着,在步骤10中,将染色剂(例如台盼蓝(trypan blue))加到装有第一部分样本的第三试管中,让染色剂和第一部分样本混合,以形成第一测试样本。第一部分样本的体积可以是介于5微升(microliter)至50微升之间(例如10微升),而且可以等于染色剂的体积。接下来,在步骤11中,将部分的第一测试样本(此部分的体积可以是介于10微升至20微升之间(例如10微升))放入到一个血球计数器(hemocytometer)的一个空室(chamber)中。此血球计数器具有位在上述空室下方的一微小方格图案(microscopicgrid),如图15所示。此微小方格图案包括4个宽度为1毫米(mm)的正方形(也可以称为1毫米宽正方形)100a-100d,而且这4个正方形100a-100d中的每一个又再分成16个宽度为0.25毫米的正方形(也可以称为0.25毫米宽正方形)。另外,一玻璃盖玻片覆盖在上述空室的上面。位在玻璃盖玻片底部表面与上述空室地面之间的空间,其深度为0.1毫米。因此,4个1毫米宽正方形100a-100d中的每一个都代表0.1立方毫米(mm3)或是10-4毫升。
请参阅图14B所示,在进行完(或完成)步骤11之后,如步骤12所述,将血球计数器放到显微镜的载物台(stage)上。此显微镜的总放大倍率可以是大于或等于200倍。另外,此显微镜可以包括放大倍率大于或等于10倍的接目镜(ocular lens)以及放大倍率大于或等于20倍的接物镜(objective lens)。接着,在步骤13中,透过显微镜的视野范围,计数(或计算)位在1毫米宽正方形100a里其中一个0.25毫米宽正方形内尺寸大于或等于1微米的细胞(也可以称为≥1微米细胞),进而获得≥1微米细胞在1毫米宽正方形100a之上述0.25毫米宽正方形内的数量(或总数)。因此,将≥1微米细胞在1毫米宽正方形100a之上述0.25毫米宽正方形内的数量(或总数)乘以16(其为1毫米宽正方形100a所具有0.25毫米宽正方形的数量),可估算出≥1微米细胞在1毫米宽正方形100a里的数量(或总数)。接下来,在步骤14中,将≥1微米细胞在1毫米宽正方形100a里的数量(或总数)乘以一个稀释系数(例如等于或大于1.5、2或3),然后将相乘的结果除以1毫米宽正方形100a的体积(也就是10-4毫升),因而估算出≥1微米细胞在处理过样本中每毫升的数量(也就是≥1微米细胞在处理过样本中每单位体积的数量)。例如,当第一部分样本用体积和第一部分样本相同的染色剂稀释的时候,上述的稀释系数可以是2。步骤13和步骤14所提及的≥1微米细胞可以包括微颗粒、粒细胞、红血球、血小板、白血球(包含淋巴球)以及各种的干细胞,其中微颗粒可以没有细胞核或细胞质。
此外,在步骤14中,≥1微米细胞在处理过样本中每毫升的数量也可以透过以下的方式来估算:首先将≥1微米细胞在血球计数器之每个1毫米宽正方形里的平均计数(或数量)乘以上述的稀释系数,然后将相乘的结果除以血球计数器里每个1毫米宽正方形的平均体积(也就是10-4毫升)。在这种情况下,步骤13包括:(1)透过显微镜的视野范围,算出每一个1毫米宽正方形(共有4个,也就是1毫米宽正方形100a-100d)中某个0.25毫米宽正方形里尺寸大于或等于1微米之细胞(也可以称为≥1微米细胞)的数量,以获得4个≥1微米细胞的原始数量(或总数),以及(2)将每一个≥1微米细胞的原始数量(或总数)乘以16(其为4个1毫米宽正方形100a-100d中,每一个1毫米宽正方形里所具有0.25毫米宽正方形的数量),因而估算出(或获得)≥1微米细胞在每一个1毫米宽正方形(共有4个,也就是1毫米宽正方形100a-100d)里的数量(或总数)。因此,≥1微米细胞在血球计数器的每个1毫米宽正方形里的平均计数(或数量)可以透过以下方式获得:将≥1微米细胞在每一个1毫米宽正方形(共有4个,也就是1毫米宽正方形100a-100d)里的数量(或总数)相加起来,然后将相加的结果除以4(其为血球计数器中1毫米宽正方形的数量,也就是4个1毫米宽正方形100a-100d)。
请参阅图14C所示,在透过步骤8获得处理过样本之后,依序进行步骤15至步骤20。在步骤15中,从处理过样本中取出另一部分(以下称“第二部分样本”),然后将第二部分样本分到多个样本容器(如试管)中。因此,每个样本容器中含有L微升的第二部分样本(L微升的第二部分样本以下称为“小部分样本”),其中L可以是50到250中的任何一个数字(例如100)。在处理过样本是均匀且含有大致相同之内容物的情况下,第二部分样本可以假定含有与步骤9所述的第一部分样本大致上相同的内容物。第二部分样本的总体积可以是介于0.5毫升至18微升之间(例如2微升)。样本容器的数量可以是2个至50个之间。接着,在步骤16中,在每一个样本容器中加入一种特定的染色剂(其可含有一种或多种的抗体)。加到每一个样本容器中的染色剂可以是彼此不同的,而且可以含有特定一种的抗体或是多种特定的抗体。每一个样本容器中的染色剂所含有的一种或多种抗体可以是彼此不同的。在每个样本容器中加入一种或多种染色剂的目的在于识别一种或多种特定的细胞(表面)标记或是一种或多种的干细胞(每一种干细胞可以用本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种细胞(表面)标记描述其特征)。这些染色剂中的每一种抗体可以用来识别一种特定的细胞(表面)标记、一种特定的干细胞或是多种选定的干细胞或细胞(表面)标记,而且与这些染色剂中的其它种抗体所识别的干细胞或细胞(表面)标记有所不同。因此,每一个样本容器中含有一个第四中间样本,而且每一个第四中间样本都是由经过上述对应的染色剂(其含有一种或多种特定的抗体)染色的小部分样本所构成。
接着,在步骤17中,将这些样本容器中的第四中间样本在室温(如27℃左右)培养一段时间(例如至少30分钟)。接下来,在步骤18中,将在这些样本容器中的每一个第四中间样本和第二培养液(例如含有1%牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液)混合,以形成多个第二测试样本(也可以称为“流式细胞仪样本”)。每个第二测试样本都是小部分样本(其经过相对应的一种染色剂(此染色剂含有一种或多种抗体)染色)和第二培养液的混合物。每个第二测试样本的体积可以是介于250微升至1,250微升之间,例如500微升。用来和每个第四中间样本混合的第二培养液的体积可以是介于200微升至1,000微升之间(例如400微升),而且大于对应的小部分样本的体积。
接着,在步骤19中,利用流式细胞仪分析这些样本容器中的第二测试样本,进而获得多组数据(或资料)。每一组数据(其从对应的第二测试样本中获得)包含有:尺寸大于或等于1微米之细胞的数量(以下称“细胞数C1”)、细胞核/细胞质之比为较高的区域中的细胞数量(以下称“细胞数C2”)以及一种特定的(或选定的)干细胞在细胞核/细胞质之比为较高的区域中的数量占细胞数C2的百分比(以下称“干细胞百分比SP”)。上述的一种特定的(或选定的)干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的任何一种干细胞,或是以本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种细胞(表面)标记(例如CD349(+)、Lgr5(+)或CD66e(+))描述其特征的干细胞。在细胞核/细胞质之比为较高的区域中的细胞,其尺寸(关于尺寸的描述可参阅上述尺寸(Z)的定义)可以是大于或等于1微米、1.1微米、1.5微米、2微米、2.1微米或3微米,或是介于1微米至15微米之间(例如介于2微米至6微米之间)。另外,在细胞核/细胞质之比为较高的区域中的细胞,其具有细胞核以及/或是细胞质,而且含有各种在“干细胞定义”里所提及的干细胞(例如上述的一种特定的(或选定的)干细胞),但却几乎不含有微颗粒、粒细胞、红血球、血小板和白血球(包含淋巴球)。在步骤13、步骤14和步骤19里所提及的尺寸大于或等于1微米(其为一门坎尺寸(threshold size))的细胞大致上具有相同的性质或特性。步骤19所提及的尺寸大于或等于1微米的细胞可以包括微颗粒、粒细胞、红血球、血小板、白血球(其包含淋巴球)以及在细胞核/细胞质之比为较高的区域中的细胞,其中微颗粒可以没有细胞核或细胞质。
在上述的每一组数据中,细胞数C1包括:(1)细胞数C2;(2)粒细胞的数量;(3)血小板的数量;(4)红血球的数量;(5)白血球的数量;以及(6)微颗粒的数量。图16是用在上述流式细胞仪的前向散射系数/侧向散射系数图。请参阅图16所示,横轴代表前向散射系数,纵轴代表侧向散射系数。在使用流式细胞仪分析每一个第二测试样本之前,图16的前向散射系数/侧向散射系数图可以事先设定在流式细胞仪分析中。图16的前向散射系数/侧向散射系数图包含有:(1)血小板的区域P1;(2)微颗粒的区域P2;(3)红血球与白血球的区域P3;(4)细胞核/细胞质之比为较高的区域,如区域P4所示;以及(5)粒细胞的区域(图中未示)。在用流式细胞仪分析每一个第二测试样本之前,可以使用微粒(microbeads)或聚合物颗粒,将流式细胞仪的前向散射系数设定在1微米尺寸所对应的(近似)数值。这个(近似)数值可以用来定义出(或建立出)细胞尺寸大于或等于1微米的特定区域(thresholdregion),并透过这个特定区域确定或测定尺寸大于或等于1微米的细胞,因而获得这个特定区域中的细胞数C1。上述的区域P1至P4和上述的粒细胞的区域都是位在这个特定区域中。在步骤19中,流式细胞仪会不断地分析每个第二测试样本,直到(1)对应的细胞数C1达到一个特定数目(其可是大于或等于五十万、八十万或一百万)或是(2)对应的细胞数C2达到一个特定数目(其可是大于或等于1000、1500、2000、2500、3000或3500)为止。因此,在完成每个第二测试样本的分析之后,可以获得与该些第二测试样本有关的上述多组数据(一个第二测试样本可以获得一组数据)。
请参阅图14C所示,在进行完(或完成)步骤14和步骤19之后,接着进行图14C的步骤20,以获得干细胞数据(或资料)。在步骤20中,根据≥1微米细胞在处理过样本中每毫升的数量(其可从步骤14获得)以及上述含有细胞数C1、细胞数C2与干细胞百分比SP的多组数据(其可从步骤19获得),可以计算出(或获得)该干细胞数据。该干细胞数据可以包括每一种特定的干细胞(其可是本发明在“干细胞定义”里所提及的干细胞)在血液样本中每毫升的数量(也可以称为上述每一种特定的干细胞在血液样本中每单位体积的数量)。透过以下的计算,可获得上述每一种特定的干细胞在血液样本中每毫升的数量:(1)将细胞核/细胞质之比为较高的区域P4中获得的细胞数C2除以上述细胞尺寸大于或等于1微米的特定区域中获得的细胞数C1,然后将相除的结果乘以100%(其为了将相除的结果转换成百分比数字),因而获得细胞数C2占细胞数C1的百分比(其是一种与细胞数C1和细胞数C2之间的关系有关的数据或资料);(2)将细胞数C2占细胞数C1的百分比乘以与一种选定之干细胞有关的干细胞百分比SP,然后将相乘的结果乘以100%(其为了将相乘的结果转换成百分比数字),因而获得该种选定的干细胞的数量占细胞数C1的百分比(其是一种与处理过样本有关以及与该种选定的干细胞和细胞数C1之间的关系有关的数据或资料);(3)将该种选定的干细胞占细胞数C1的百分比乘以≥1微米细胞在处理过样本中每毫升的数量(其从步骤14中获得),因而获得该种选定的干细胞在处理过样本中每毫升的数量(也就是该种选定的干细胞在处理过样本中每单位体积的数量),其是一种与该种选定的干细胞和处理过样本之间的关系有关的数据;(4)将处理过样本的体积(单位为毫升)除以血液样本的体积(单位为毫升),因而获得一个体积改变系数(或称样本准备系数),其可是处理过样本的体积与血液样本的体积的比率;以及(5)将该种选定的干细胞在处理过样本中每毫升的数量乘以体积改变系数,因而获得该种选定的干细胞在血液样本中每毫升的数量(也就是该种选定的干细胞在血液样本中每单位体积的数量),其是一种与该种选定的干细胞和血液过样本之间的关系有关的数据或资料,而且可以用来代表该种选定的干细胞在一个体(如图13所述的实验对象)的周边血液中每毫升的数量。该种选定的干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的任何一种干细胞,或是以本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种细胞(表面)标记(其可包括CD349(+)、Lgr5(+)或CD66e(+))描述其特征的干细胞。为了能更准确地获得上述的干细胞数据,与该种选定的干细胞有关的细胞数C2可以是大于或等于1,000颗细胞、1,500颗细胞、2,000颗细胞或2,500颗细胞。
更详细地说,图14B所提及的细胞数量可以透过计算尺寸大于或等于一给定门坎尺寸(在≥1微米细胞的数量或4个≥1微米细胞的原始数量的范例中,该给定门坎尺寸等于1微米)的细胞的数量来获得,图14C所提及的细胞数C1可以透过计算(或计数)尺寸大于或等于该给定门坎尺寸(在本范例中,该给定门坎尺寸等于1微米)的细胞的数量来获得。该给定门坎尺寸除了可以是本范例所述的1微米之外,也可以是0.5微米、0.8微米、1.5微米、2微米或3微米。在细胞数C1是透过计算尺寸大于或等于该给定门坎尺寸(在本范例中,该给定门坎尺寸等于1微米)之细胞的数量而获得的情形下,用于分析每个第二测试样本的流式细胞仪可以透过尺寸为该给定门坎尺寸(在本范例中,该给定门坎尺寸等于1微米)的微粒或聚合物颗粒来设定前向散射系数/侧向散射系数图中前向散射系数的(近似)数值,以定义出(或建立出)细胞尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的特定区域(threshold region),并透过这个特定区域确定或测定尺寸大于或等于该给定门坎尺寸(在本范例中,该给定门坎尺寸等于1微米)的细胞。
根据图13、图14A、图14B和图14C所述的方法,本发明可以使用一个整合系统、装置、仪器或工具(AD)来获得步骤20所提及的干细胞数据(其与图13所述之实验对象的血液样本有关)。这个整合系统、装置、仪器或工具(AD)可包括:(1)一个第一装置、仪器或工具,其可从实验对象(或个体)获得或取得血液样本,如图13的步骤103所述;(2)一个第二装置、仪器或工具(其可包括一离心机),其可处理血液样本,以获得或制备出处理过样本(其为一测试样本),如图14A的步骤1至步骤8所述;(3)一个第三装置、仪器或工具(其可以包括一血球计数器、一显微镜和由一软件编译的一处理器/计算机),其可透过第一方法从处理过样本的第一部分获得第一数据(例如图14B步骤14所获得的≥1微米细胞在处理过样本中每毫升的数量),该第一方法可以包括使用血球计数器(和显微镜)计算处理过样本的第一部分的颗粒或细胞的数量,如图14B的步骤9至步骤14所述;(4)一个第四装置、仪器或工具(其可包括一流式细胞仪和一处理器/计算机),其可透过第二方法从处理过样本的第二部分获得第二数据(例如与一种选定的干细胞有关的干细胞百分比SP)和第三数据(例如与该种选定的干细胞有关的细胞数C2占与该种选定的干细胞有关的细胞数C1的百分比),该第二方法可以包括使用流式细胞仪计算处理过样本的第二部分的颗粒或细胞的数量,如图14C的步骤15至步骤20所述;以及(5)一个第五装置、仪器或工具(例如一计算机或一处理器),其可:(a)对第二数据和第三数据进行第一运算或计算(例如将第二数据乘以第三数据(譬如将干细胞百分比SP乘以细胞数C2占细胞数C1的百分比),然后将相乘的结果乘以100%),以获得与处理过样本有关的第四数据(例如该种选定的干细胞的数量占细胞数C1的百分比);(b)对第一数据和第四数据进行第二运算或计算(例如将第一数据乘以第四数据(譬如将≥1微米细胞在处理过样本中每毫升的数量乘以该种选定的干细胞的数量占细胞数C1的百分比)),以获得与处理过样本有关的第五数据(例如该种选定的干细胞在处理过样本中每毫升的数量);(c)对处理过样本的体积和血液样本的体积进行第三运算或计算(例如将处理过样本的体积除以血液样本的体积),以获得上述的体积改变(或样本准备)系数(例如处理过样本的体积与血液样本的体积的比率);以及(d)对第五数据和体积改变(或样本准备)系数进行第四运算或计算(例如将第五数据乘以体积改变(或样本准备)系数(譬如将该种选定的干细胞在处理过样本中每毫升的数量乘以处理过样本的体积与血液样本的体积的比率)),以获得与血液样本有关的第六数据(例如该种选定的干细胞在血液样本中每毫升的数量)。
另外,亦可将上述的第一、第二、第三、第四和第五装置、仪器或工具中的任两个或以上的装置、仪器或工具合并组成一个可以进行上述任两个或以上的装置、仪器或工具之功能的整合装置、仪器或工具或是单一装置、仪器或工具。例如,第一和第二装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行第一和第二装置、仪器或工具的功能的第一整合装置、仪器或工具或是第一单一装置、仪器或工具,以及第三、第四和第五装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行第三、第四和第五装置、仪器或工具的功能的第二整合装置、仪器或工具或是第二单一装置、仪器或工具。或者,第二、第三、第四和第五装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行第二、第三、第四和第五装置、仪器或工具的功能的整合装置、仪器或工具或是单一装置、仪器或工具。或者,第二、第三和第四装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行第二、第三和第四装置、仪器或工具的功能的整合装置、仪器或工具或是单一装置、仪器或工具。或者,第三和第四装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行第三和第四装置、仪器或工具的功能的整合装置、仪器或工具或是单一装置、仪器或工具。或者,第四和第五装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行第四和第五装置、仪器或工具的功能的整合装置、仪器或工具或是单一装置、仪器或工具。
在本发明中,第三装置、仪器或工具可以用来获得尺寸大于或等于该给定门坎尺寸(在本范例中,该给定门坎尺寸等于1微米)的细胞在处理过样本中每单位体积的数量,第四和第五装置、仪器或工具可以用来获得该种选定的干细胞在尺寸大于或等于该给定门坎尺寸(在本范例中,该给定门坎尺寸等于1微米)的细胞中的百分比(其与处理过样本有关)。将上述获得的细胞在处理过样本中每毫升的数量乘以上述获得之该种选定的干细胞的百分比,可以获得该种选定的干细胞在处理过样本中每单位体积的数量。将该种选定的干细胞在处理过样本中每单位体积的数量乘以上述的体积改变(或样本准备)系数,可以获得该种选定的干细胞在血液样本中每单位体积的数量。透过将第三装置、仪器或工具所获得的细胞数量数据结合第四和第五装置、仪器或工具所获得的该种选定的干细胞的百分比的方式,可以更准确地获得该种选定的干细胞在周边血液中的数量。
根据图13、图14A、图14B和图14C所述的方法,本发明可以使用一个单一系统、装置、仪器或工具(TD)来获得步骤20所提及的干细胞数据(其与图13所述之实验对象的血液样本有关)。这个单一系统、装置、仪器或工具(TD)可以提供或执行:(1)第一功能,其可从实验对象(或个体)获得或取得血液样本,如图13的步骤103所述;(2)第二功能,其可处理血液样本,以获得或制备出处理过样本(其为一测试样本),如图14A的步骤1至步骤8所述;(3)第三功能,其可透过第一方法(其可是图14B的步骤9至步骤14所描述的方法)从处理过样本的第一部分获得第一数据(例如图14B步骤14所获得的≥1微米细胞在处理过样本中每毫升的数量);(4)第四功能,其可透过第二方法(其可是图14C的步骤15至步骤20所描述的方法)从处理过样本的第二部分获得第二数据(例如与一种选定的干细胞有关的干细胞百分比SP)和第三数据(例如与该种选定的干细胞有关的细胞数C2占与该种选定的干细胞有关的细胞数C1的百分比);(5)第五功能,其可对第二数据和第三数据进行第一运算或计算(例如将第二数据乘以第三数据(譬如将干细胞百分比SP乘以细胞数C2占细胞数C1的百分比),然后将相乘的结果乘以100%),以获得与处理过样本有关的第四数据(例如该种选定的干细胞的数量占细胞数C1的百分比);(6)第六功能,其可对第一数据和第四数据进行第二运算或计算(例如将第一数据乘以第四数据(譬如将≥1微米细胞在处理过样本中每毫升的数量乘以该种选定的干细胞的数量占细胞数C1的百分比)),以获得与处理过样本有关的第五数据(例如该种选定的干细胞在处理过样本中每毫升的数量);(7)第七功能,其可对处理过样本的体积和血液样本的体积进行第三运算或计算(例如将处理过样本的体积除以血液样本的体积),以获得上述的体积改变(或样本准备)系数(例如处理过样本的体积与血液样本的体积的比率);以及(8)第八功能,其可对第五数据和体积改变(或样本准备)系数进行第四运算或计算(例如将第五数据乘以体积改变(或样本准备)系数(譬如将该种选定的干细胞在处理过样本中每毫升的数量乘以处理过样本的体积与血液样本的体积的比率)),以获得与血液样本有关的第六数据(例如该种选定的干细胞在血液样本中每毫升的数量)。
由单一系统、装置、仪器或工具(TD)所提供的第三功能可以用来获得尺寸大于或等于该给定门坎尺寸(在本范例中,该给定门坎尺寸等于1微米)之细胞在处理过样本中每单位体积的数量。由单一系统、装置、仪器或工具(TD)所提供的第四和第五功能可以用来获得该种选定的干细胞在尺寸大于或等于该给定门坎尺寸(在本范例中,该给定门坎尺寸等于1微米)的细胞中的百分比(其与处理过样本有关)。将上述获得的细胞在处理过样本中每毫升的数量乘以上述获得的该种选定的干细胞的百分比,可以获得该种选定的干细胞在处理过样本中每单位体积的数量。将该种选定的干细胞在处理过样本中每单位体积的数量乘以上述的体积改变(或样本准备)系数,可以获得该种选定的干细胞在血液样本中每单位体积的数量。透过将单一系统、装置、仪器或工具(TD)的第三功能所获得的细胞数量数据结合单一系统、装置、仪器或工具(TD)的第四与第五功能所获得的该种选定的干细胞的百分比的方式,可以更准确地获得该种选定的干细胞在周边血液中的数量。
在某些应用上,本发明也可以透过一单一系统、装置、仪器或工具来提供或执行上述的第一至第八功能中任两个(或以上)的功能可由。例如,这个单一系统、装置、仪器或工具可以提供或执行上述的第三和第四功能、上述的第二、第三和第四功能、上述的第三、第四、第五、第六和第八功能或是上述的第三至第八功能。
图17A显示一位五十五岁左右的男性(其是作为一实验对象)在食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第1.5小时的干细胞数据。本发明透过对此位男性进行图13所述的方法获得图17A所示的干细胞数据。在这个范例中,此位男性在步骤101中是口服30颗褐藻糖胶补充品,而此褐藻糖胶补充品可以与图11和图12所提及的褐藻糖胶补充品相同。因此,此位男性在步骤101中是服用3克(也就是大于2克)的褐藻糖胶。在步骤102中,让此位男性在服用30颗褐藻糖胶补充品之后等待1.5小时。在步骤103中,取出此位男性的周边血液,并将取出的周边血液放到一采血管中,因而获得一个10毫升血液样本。接着,透过图14A的步骤1至步骤8,将10毫升血液样本处理成一个3毫升处理过样本。3毫升处理过样本会被分成两部分,一部分(以下称“第一部分”)用在图14B的步骤9至步骤14中,另一部分(以下称“第二部分”)用在图14C的步骤15至步骤19中。在对3毫升处理过样本的第一部分进行图14B的步骤9至步骤14之后,可以获得≥1微米细胞在3毫升处理过样本中每毫升的数量,如图17A中的第(A)栏所示。在对3毫升处理过样本的第二部分进行图14C的步骤15至步骤19之后,可以获得与每一种干细胞(如图17A所示,共有5种干细胞)有关的细胞数C1、细胞数C2和干细胞百分比SP,其分别显示在图17A中的第(B)栏、第(C)栏和第(E)栏。透过对3毫升处理过样本的第二部分进行步骤15至步骤18,可以获得多个第二测试样本(或称“流式细胞仪样本”)。在本范例中,步骤19中的流式细胞仪会不断分析每一个第二测试样本,直到对应的细胞数C1达到一百万或是对应的细胞数C2达到2500为止。在完成每个第二测试样本的分析之后,可以获得与该些第二测试样本(其是透过对3毫升处理过样本的第二部分进行步骤15至步骤18而获得)有关的多组数据(一个第二测试样本可以获得一组数据)。
在从步骤14获得≥1微米细胞在3毫升处理过样本中每毫升的数量以及从步骤19获得与上述每一种干细胞有关的细胞数C1、细胞数C2和干细胞百分比SP之后,接着在步骤20中获得有关此位男性在食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第1.5小时的干细胞数据。该干细胞数据包括每一种干细胞(如图17A所示,共有5种干细胞)在此位男性食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第1.5小时的周边血液中每毫升的数量。以下将以CD24(+)先驱干细胞为范例进行说明,请参阅图17A所示,CD24(+)先驱干细胞在此位男性食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第1.5小时的周边血液中每毫升的数量可以透过下列的计算获得:(1)将第(1)列第(C)栏所示的2,500(其为细胞核/细胞质之比为较高的区域P4中的细胞数C2)除以第(1)列第(B)栏所示的995,918(其为细胞尺寸大于或等于1微米的特定区域中的细胞数C1),然后将相除的结果(也就是0.0025)乘以100%(其为了将相除的结果转换成百分比数字),因而获得第(1)列第(D)栏所示的0.25%(其为细胞数C2占细胞数C1的百分比);(2)将第(1)列第(D)栏所示的0.25%乘以第(1)列第(E)栏所示的46%(其为CD24(+)先驱干细胞的数量占细胞数C2的百分比),然后将相乘的结果(也就是0.00115)乘以100%(其为了将相乘的结果转换成百分比数字),因而获得第(1)列第(F)栏所示的0.1150%(其为CD24(+)先驱干细胞的数量占细胞数C1的百分比);(3)将第(1)列第(F)栏所示的0.1150%乘以第(1)列第(A)栏所示的1.77E+08(其为≥1微米细胞在3毫升处理过样本中每毫升的数量),因而获得第(1)列第(G)栏所示的203,550(其为CD24(+)先驱干细胞在3毫升处理过样本中每毫升的数量);(4)将3毫升(其为处理过样本的体积)除以10毫升(其为血液样本的体积),因而获得0.3这个数值(其为上述的体积改变(或样本准备)系数);以及(5)将第(1)列第(G)栏所示的203,550(其为CD24(+)先驱干细胞在3毫升处理过样本中每毫升的数量)乘以0.3(其为上述的体积改变(或样本准备)系数),因而获得第(1)列第(H)栏所示的61,065(其为CD24(+)先驱干细胞在10毫升血液样本中每毫升的数量),其可代表CD24(+)先驱干细胞在此位男性食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第1.5小时的周边血液中每毫升的数量。另外,用上述的计算方式,也可以从相关的数值计算出其它种干细胞在此位男性食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第1.5小时的周边血液中每毫升的数量,在此不再详加叙述。
图17B为流式细胞仪的一荧光分布图,其显示出在细胞核/细胞质之比为较高的区域中细胞的荧光光强度分布。在荧光分布图中的细胞被一条垂直线77分成左右两部分。在垂直线77右边的细胞会对CD24表现出阳性反应,所以属于CD24(+)先驱干细胞。在垂直线77左边的细胞则对CD24表现出阴性反应。因此,流式细胞仪可以透过垂直线77识别CD24(+)先驱干细胞,进而获得图17A中第(1)列第(E)栏所提及的CD24(+)先驱干细胞的数量。
图18描述一种获得一实验对象(例如前面所述的个体(S))在四个特定时间点的干细胞数据的方法,藉以确认实验对象在进行或接受一种或多种的行为或刺激(X)(其可包括一系列选自行为或刺激(X)的行为)之后的一理想(或最佳)干细胞收获时间,所收获的一种或多种干细胞是从实验对象或是与实验对象相同生物分类的一个体的一组织样本(其可是本发明在“个体(S)以及组织样本(P)”的描述里所提及的组织样本)获得。请参阅图18所示,在步骤21中,将实验对象在第一特定时间点的周边血液取出,并放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)试管)中,以获得第一血液样本。第一血液样本的体积可以是大于或等于5毫升或10毫升。接着,在步骤22中,对第一血液样本进行前面所述的测量方法MT,进而获得实验对象在第一特定时间点的第一干细胞数据。此第一干细胞数据可包括一种特定干细胞在第一特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量,也就是与该种特定干细胞在实验对象的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量有关的第一获取数据。该种特定干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的任何一种干细胞,或是以本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种细胞(表面)标记(例如CD349(+)、Lgr5(+)或CD66e(+))描述其特征的干细胞。图14A-图14C所述的方法可以用来处理和估算第一血液样本。在对第一血液样本进行步骤22中的测量方法MT之前,第一血液样本可以存放在温度介于1℃至30℃之间(例如介于1℃至10℃之间、介于10℃至20℃之间或是介于20℃至30℃之间)的环境中。从步骤21获得第一血液样本到步骤22对第一血液样本进行测量方法MT的时间间隔可以是等于或小于30分钟、60分钟、12小时、24小时、48小时、72小时或是1星期,例如是介于10分钟到30分钟之间、介于30分钟到60分钟之间、介于0.5小时到2小时之间、介于2小时到12小时之间、介于12小时到24小时之间、介于24小时到48小时之间或是介于48小时到72小时之间。此外,本实施例也可以透过上述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或上述的单一系统、仪器、工具或装置(TD)来获得第一干细胞数据。
在获得步骤21所述的第一血液样本之后,接着进行步骤23。在步骤23中,实验对象进行或接受一种或多种的行为或刺激(X),其可包括一系列选自行为或刺激(X)的行为。例如,实验对象可以口服30颗褐藻糖胶补充品(其可是前面第一实验和图11所述的褐藻糖胶补充品),所以实验对象在步骤23中服用了3克(也就是超过2克)的褐藻糖胶。或者,实验对象也可以注射一种含有褐藻糖胶或小分子褐藻糖胶的物质或物品(如营养品或补充品)。步骤21所述的第一特定时间点可以在步骤23之前的一时间点。在实验对象进行或接受一种或多种的行为或刺激(X)之后,将进行含有下列步骤24至步骤26的第一方法、含有下列步骤27至步骤29的第二方法以及含有下列步骤30至步骤32的第三方法。
关于第一方法,在步骤24中,在实验对象进行或接受步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)之后,让实验对象等待第一段时间(也就是一段第一预定时间),例如1.5小时、30分钟至3小时、1小时至2小时或是45分钟至12小时。接着,在步骤25中,取出实验对象在第二特定时间点的周边血液,并将取出的周边血液放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)试管)中,以获得第二血液样本。第二血液样本的体积可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以与第一血液样本的体积相同。第二特定时间点为第一段时间结束的时间点。接着,在步骤26中,对第二血液样本进行前面所述的测量方法MT,进而获得实验对象在第二特定时间点的第二干细胞数据。此第二干细胞数据可包括该种特定干细胞在第二特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量,也就是与该种特定干细胞在实验对象的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量有关的第二获取数据。图14A-图14C所述的方法可以用来处理和估算第二血液样本。在对第二血液样本进行步骤26中的测量方法MT之前,第二血液样本可以存放在一受控制的环境中,此环境的温度与用来存放进行步骤22之测量方法MT前的第一血液样本的温度相同。从步骤25获得第二血液样本到步骤26对第二血液样本进行测量方法MT的时间间隔可以等于从步骤21获得第一血液样本到步骤22对第一血液样本进行测量方法MT的时间间隔。此外,本实施例也可以透过上述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或上述的单一系统、仪器、工具或装置(TD)来获得第二干细胞数据。
关于第二方法,在步骤27中,在实验对象进行或接受步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)之后,让实验对象等待第二段时间(也就是一段第二预定时间),例如24小时、12小时至36小时或是3小时至36小时。接着,在步骤28中,取出实验对象在第三特定时间点的周边血液,并将取出的周边血液放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)试管)中,以获得第三血液样本。第三血液样本的体积可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以与第一血液样本的体积和第二血液样本的体积相同。第三特定时间点为第二段时间结束的时间点。接着,在步骤29中,对第三血液样本进行前面所述的测量方法MT,进而获得实验对象在第三特定时间点的第三干细胞数据。此第三干细胞数据可包括该种特定干细胞在第三特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量,也就是与该种特定干细胞在实验对象的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量有关的第三获取数据。图14A-图14C所述的方法可以用来处理和估算第三血液样本。在对第三血液样本进行步骤29中的测量方法MT之前,第三血液样本可以存放在一受控制的环境中,此环境的温度与用来存放进行步骤22之测量方法MT前的第一血液样本的温度相同。从步骤28获得第三血液样本到步骤29对第三血液样本进行测量方法MT的时间间隔可以等于从步骤21获得第一血液样本到步骤22对第一血液样本进行测量方法MT的时间间隔。此外,本实施例也可以透过上述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或上述的单一系统、仪器、工具或装置(TD)来获得第三干细胞数据。
关于第三方法,在步骤30中,在实验对象进行或接受步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)之后,让实验对象等待第三段时间(也就是一段第三预定时间),例如48小时、36小时至60小时、60小时至84小时或是超过84小时。接着,在步骤31中,取出实验对象在第四特定时间点的周边血液,并将取出的周边血液放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)试管)中,以获得第四血液样本。第四血液样本的体积可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以与第一血液样本的体积、第二血液样本的体积和第三血液样本的体积相同。第四特定时间点为第三段时间结束的时间点。接着,在步骤32中,对第四血液样本进行前面所述的测量方法MT,进而获得实验对象在第四特定时间点的第四干细胞数据。此第四干细胞数据可包括该种特定干细胞在第四特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量,也就是与该种特定干细胞在实验对象的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量有关的第四获取数据。图14A-图14C所述的方法可以用来处理和估算第四血液样本。在对第四血液样本进行步骤32中的测量方法MT之前,第四血液样本可以存放在一受控制的环境中,此环境的温度与用来存放进行步骤22之测量方法MT前的第一血液样本的温度相同。从步骤31获得第四血液样本到步骤32对第四血液样本进行测量方法MT的时间间隔可以等于从步骤21获得第一血液样本到步骤22对第一血液样本进行测量方法MT的时间间隔。此外,本实施例也可以透过上述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或上述的单一系统、仪器、工具或装置(TD)来获得第四干细胞数据。
利用步骤22、26、29和32所获得的第一至第四干细胞数据可得到与每单位体积的该种特定干细胞的数量有关的变化量,其包括:(1)第二干细胞数据中该种特定干细胞在第二特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量相对于第一干细胞数据中该种特定干细胞在第一特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量的变化量Δ1;(2)第三干细胞数据中该种特定干细胞在第三特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量相对于第一干细胞数据中该种特定干细胞在第一特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量的变化量Δ2;以及(3)第四干细胞数据中该种特定干细胞在第四特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量相对于第一干细胞数据中该种特定干细胞在第一特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量的变化量Δ3。也就是说,对步骤22所获得的第一获取数据和步骤26所获得的第二获取数据进行第一分析运算可以获得变化量Δ1,此第一分析运算包括对第一获取数据和第二获取数据进行比较;对步骤22所获得的第一获取数据和步骤29所获得的第三获取数据进行第二分析运算可以获得变化量Δ2,此第二分析运算包括对第一获取数据和第三获取数据进行比较;对步骤22所获得的第一获取数据和步骤32所获得的第四获取数据进行第三分析运算可以获得变化量Δ3,此第三分析运算包括对第一获取数据和第四获取数据进行比较。
对变化量Δ1、Δ2和Δ3中的每两个变化量进行比较(例如对变化量Δ1和变化量Δ2进行比较),可以获知或找出与该种特定干细胞有关的变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量,进而确定、找出或得到适合用在实验对象的该种特定干细胞的最佳收获时间(例如第一段时间、第二段时间或第三段时间)以及/或是最佳收获时间点(例如第二至第四特定时间点的其中一个)。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ1的时候,最佳收获时间为第一段时间,最佳收获时间点为第二特定时间点。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ2的时候,最佳收获时间为第二段时间,最佳收获时间点为第三特定时间点。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ3的时候,最佳收获时间为第三段时间,最佳收获时间点为第四特定时间点。因此,欲从某一个体(其可是实验对象或是与实验对象相同生物分类的一个体)取得该种特定干细胞的时候,可以在该个体进行或接受步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)后的最佳收获时间点从该个体取得一组织样本(其可是本发明在“个体(S)以及组织样本(P)”的描述里所提及的组织样本),然后再从取得的组织样本中取得该种特定干细胞。另外,在实验对象进行或接受步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)(藉以在体内培养或培育该种特定干细胞)之后,图18所述的方法(其包括步骤21至步骤32)可以用来监测该种特定干细胞在实验对象的周边血液中的增加数量。
此外,本发明也可以分别对复数个相同生物分类的实验对象进行图18所述的方法,进而获得与每一个实验对象有关的第一至第四干细胞数据(详细说明可参阅图18所述的第一至第四干细胞数据)。利用从这些实验对象获得的第一至第四干细胞数据可得到与每单位体积的该种特定干细胞的数量有关的变化量,其包括:(1)关于每一位实验对象的该种特定干细胞在第二特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第二干细胞数据)相对于该种特定干细胞在第一特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第一干细胞数据)的变化量Δ1;(2)关于每一位实验对象的该种特定干细胞在第三特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第三干细胞数据)相对于该种特定干细胞在第一特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第一干细胞数据)的变化量Δ2;以及(3)关于每一位实验对象的该种特定干细胞在第四特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第四干细胞数据)相对于该种特定干细胞在第一特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第一干细胞数据)的变化量Δ3。
对从这些实验对象获得且与该种特定干细胞有关的变化量Δ1、Δ2和Δ3的分布中的每两个变化量分布进行比较(例如对与SB-1细胞有关的变化量Δ1的分布和与SB-1细胞有关的变化量Δ2的分布进行比较),可以得知或找出与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布,进而确定、找出或得到适合用在这些实验对象的该种特定干细胞的最佳收获时间(例如第一段时间、第二段时间或第三段时间)以及/或是最佳收获时间点(例如第二至第四特定时间点的其中一个)。
当与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布是与该种特定干细胞有关的变化量Δ1的分布的时候,最佳收获时间为第一段时间,最佳收获时间点为第二特定时间点。当与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布是与该种特定干细胞有关的变化量Δ2的分布的时候,最佳收获时间为第二段时间,最佳收获时间点为第三特定时间点。当与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布是与该种特定干细胞有关的变化量Δ3的分布的时候,最佳收获时间为第三段时间,最佳收获时间点为第四特定时间点。因此,欲从某一个体(其可是与这些实验对象相同生物分类的一个体或是这些实验对象的其中一个)取得该种特定干细胞的时候,可以在该个体进行或接受步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)后的最佳收获时间点从该个体取得一组织样本(其可是本发明在“个体(S)以及组织样本(P)”的描述里所提及的组织样本),然后再从取得的组织样本中取得该种特定干细胞。
图19描述一种获得一对照者(例如前面所述的个体(S))在四个特定时间点的干细胞数据的方法。利用此方法所获得的干细胞数据可以用来与图18所述的实验对象所获得的干细胞数据(也就是利用图18所述的方法而获得的干细胞数据)进行比较,藉以确认与实验对象在两个不同时间点(其为实验对象在进行或接受步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)之后的两个不同时间点)有关的两组干细胞数据之间的变化是来自步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)。除了对照者没有进行或者接受实验对象在图18步骤23所进行或接受的一种或多种的行为或刺激(X)之外,图19所述的用于对照者的方法是与图18所述的用于实验对象的方法相同。从图19所述的用于对照者的方法所获得的干细胞数据,可以作为评估图18所述的变化量(其与“从图18所述的用于实验对象的方法所获得的干细胞数据”有关)的标准。
请参阅图19所示,在步骤33中,将对照者(或称对照组参与者)在第五特定时间点的周边血液取出,并放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)试管)中,以获得第五血液样本。第五血液样本的体积可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以与图18步骤21所述的第一血液样本的体积相同。第五特定时间点为开始进行图19所述的用于对照者的方法的时间点。接着,在步骤34中,对第五血液样本进行前面所述的测量方法MT,进而获得对照者在第五特定时间点的第五干细胞数据。此第五干细胞数据可包括一种特定干细胞在第五特定时间点的对照者的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量,也就是与该种特定干细胞在对照者的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量有关的第五获取数据。图14A-图14C所述的方法可以用来处理和估算第五血液样本。叙述在图19的该种特定干细胞可以与叙述在图18的该种特定干细胞相同。在对第五血液样本进行步骤34中的测量方法MT之前,第五血液样本可以存放在一受控制的环境中,此环境的温度与用来存放进行步骤22的测量方法MT前的第一血液样本的温度相同。从步骤33获得第五血液样本到步骤34对第五血液样本进行测量方法MT的时间间隔可以等于从步骤21获得第一血液样本到步骤22对第一血液样本进行测量方法MT的时间间隔。在取得步骤33所述的第五血液样本之后,将会进行含有下列步骤35至步骤37的第四方法、含有下列步骤38至步骤40的第五方法以及含有下列步骤41至步骤43的第六方法。
关于第四方法,在步骤35中,在取得步骤33所述的第五血液样本之后,让对照者等待第四段时间(也就是一段第四预定时间),例如1.5小时、30分钟至3小时、1小时至2小时或是45分钟至12小时。在时间长度上,第四段时间可以等于图18步骤24所述的第一段时间。接着,在步骤36中,取出对照者在第六特定时间点的周边血液,并将取出的周边血液放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)试管)中,以获得第六血液样本。第六血液样本的体积可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以与第五血液样本的体积相同。第六特定时间点为第四段时间结束的时间点。接着,在步骤37中,对第六血液样本进行前面所述的测量方法MT,进而获得对照者在第六特定时间点的第六干细胞数据。此第六干细胞数据可包括该种特定干细胞在第六特定时间点的对照者的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量,也就是与该种特定干细胞在对照者的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量有关的第六获取数据。图14A-图14C所述的方法可以用来处理和估算第六血液样本。在对第六血液样本进行步骤37中的测量方法MT之前,第六血液样本可以存放在一受控制的环境中,此环境的温度与用来存放进行步骤22的测量方法MT前的第一血液样本的温度相同。从步骤36获得第六血液样本到步骤37对第六血液样本进行测量方法MT的时间间隔可以等于从步骤21获得第一血液样本到步骤22对第一血液样本进行测量方法MT的时间间隔。
关于第五方法,在步骤38中,在取得步骤33所述的第五血液样本之后,让对照者等待第五段时间(也就是一段第五预定时间),例如24小时、12小时至36小时或是3小时至36小时。在时间长度上,第五段时间可以等于图18步骤27所述的第二段时间。接着,在步骤39中,取出对照者在第七特定时间点的周边血液,并将取出的周边血液放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)试管)中,以获得第七血液样本。第七血液样本的体积可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以与第五血液样本的体积和第六血液样本的体积相同。第七特定时间点为第五段时间结束的时间点。接着,在步骤40中,对第七血液样本进行前面所述的测量方法MT,进而获得对照者在第七特定时间点的第七干细胞数据。此第七干细胞数据可包括该种特定干细胞在第七特定时间点的对照者的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量,也就是与该种特定干细胞在对照者的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量有关的第七获取数据。图14A-图14C所述的方法可以用来处理和估算第七血液样本。在对第七血液样本进行步骤40中的测量方法MT之前,第七血液样本可以存放在一受控制的环境中,此环境的温度与用来存放进行步骤22的测量方法MT前的第一血液样本的温度相同。从步骤39获得第七血液样本到步骤40对第七血液样本进行测量方法MT的时间间隔可以等于从步骤21获得第一血液样本到步骤22对第一血液样本进行测量方法MT的时间间隔。
关于第六方法,在步骤41中,在取得步骤33所述的第五血液样本之后,让对照者等待第六段时间(也就是一段第六预定时间),例如48小时、36小时至60小时、60小时至84小时或是超过84小时。在时间长度上,第六段时间可以等于图18步骤30所述的第三段时间。接着,在步骤42中,取出对照者在第八特定时间点的周边血液,并将取出的周边血液放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)试管)中,以获得第八血液样本。第八血液样本的体积可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以与第五血液样本的体积、第六血液样本的体积和第七血液样本的体积相同。第八特定时间点为第六段时间结束的时间点。接着,在步骤43中,对第八血液样本进行前面所述的测量方法MT,进而获得对照者在第八特定时间点的第八干细胞数据。此第八干细胞数据可包括该种特定干细胞在第八特定时间点的对照者的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量,也就是与该种特定干细胞在对照者的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量有关的第八获取数据。图14A-图14C所述的方法可以用来处理和估算第八血液样本。在对第八血液样本进行步骤43中的测量方法MT之前,第八血液样本可以存放在一受控制的环境中,此环境的温度与用来存放进行步骤22的测量方法MT前的第一血液样本的温度相同。从步骤42获得第八血液样本到步骤43对第八血液样本进行测量方法MT的时间间隔可以等于从步骤21获得第一血液样本到步骤22对第一血液样本进行测量方法MT的时间间隔。
利用步骤22、26、29和32所获得的第一至第四干细胞数据以及步骤34、37、40和43所获得的第五至第八干细胞数据可得到与该种特定干细胞的数量有关的变化量,其包括:(1)第二干细胞数据中该种特定干细胞在第二特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量相对于第一干细胞数据中该种特定干细胞在第一特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量的变化量Δ1;(2)第三干细胞数据中该种特定干细胞在第三特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量相对于第一干细胞数据中该种特定干细胞在第一特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量的变化量Δ2;(3)第四干细胞数据中该种特定干细胞在第四特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量相对于第一干细胞数据中该种特定干细胞在第一特定时间点的实验对象的周边血液中每单位体积的数量的变化量Δ3;(4)第六干细胞数据中该种特定干细胞在第六特定时间点的对照者的周边血液中每单位体积的数量相对于第五干细胞数据中该种特定干细胞在第五特定时间点的对照者的周边血液中每单位体积的数量的变化量δ1;(5)第七干细胞数据中该种特定干细胞在第七特定时间点的对照者的周边血液中每单位体积的数量相对于第五干细胞数据中该种特定干细胞在第五特定时间点的对照者的周边血液中每单位体积的数量的变化量δ2;以及(6)第八干细胞数据中该种特定干细胞在第八特定时间点的对照者的周边血液中每单位体积的数量相对于第五干细胞数据中该种特定干细胞在第五特定时间点的对照者的周边血液中每单位体积的数量的变化量δ3。
对步骤22所获得的第一获取数据和步骤26所获得的第二获取数据进行第一分析运算可以获得变化量Δ1,此第一分析运算包括对第一获取数据和第二获取数据进行比较。对步骤22所获得的第一获取数据和步骤29所获得的第三获取数据进行第二分析运算可以获得变化量Δ2,此第二分析运算包括对第一获取数据和第三获取数据进行比较。对步骤22所获得的第一获取数据和步骤32所获得的第四获取数据进行第三分析运算可以获得变化量Δ3,此第三分析运算包括对第一获取数据和第四获取数据进行比较。对步骤34所获得的第五获取数据和步骤37所获得的第六获取数据进行第四分析运算可以获得变化量δ1,此第四分析运算包括对第五获取数据和第六获取数据进行比较。对步骤34所获得的第五获取数据和步骤40所获得的第七获取数据进行第五分析运算可以获得变化量δ2,此第五分析运算包括对第五获取数据和第七获取数据进行比较。对步骤34所获得的第五获取数据和步骤43所获得的第八获取数据进行第六分析运算可以获得变化量δ3,此第六分析运算包括对第五获取数据和第八获取数据进行比较。
对变化量Δ1、Δ2和Δ3中的每两个变化量进行比较,可以获知或找出与该种特定干细胞有关的变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量,然后将变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量和变化量δ1、δ2和δ3中对应的变化量进行比较,以判断变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是否由步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)所引起。如果变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量(在统计上)明显优于变化量δ1、δ2和δ3中对应的变化量,则可以确认(或确定)变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是由步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)所引起的。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ1的时候,变化量δ1、δ2和δ3中对应的变化量为变化量δ1。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ2的时候,变化量δ1、δ2和δ3中对应的变化量为变化量δ2。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ3的时候,变化量δ1、δ2和δ3中对应的变化量为变化量δ3。因此,透过上述的方法,可以获得适合用在该种特定干细胞的最佳收获时间。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ1,而且变化量Δ1(在统计上)明显优于变化量δ1的时候,适合用在该种特定干细胞的最佳收获时间为步骤24所述的第一段时间。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ2,而且变化量Δ2(在统计上)明显优于变化量δ2的时候,适合用在该种特定干细胞的最佳收获时间为步骤27所述的第二段时间。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ3,而且变化量Δ3(在统计上)明显优于变化量δ3的时候,适合用在该种特定干细胞的最佳收获时间为步骤30所述的第三段时间。另外,透过上述的方法,也可以获得适合用在该种特定干细胞的最佳收获时间点。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ1,而且变化量Δ1(在统计上)明显优于变化量δ1的时候,适合用在该种特定干细胞的最佳收获时间点为步骤25所述的第二特定时间点。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ2,而且变化量Δ2(在统计上)明显优于变化量δ2的时候,适合用在该种特定干细胞的最佳收获时间点为步骤28所述的第三特定时间点。当变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是变化量Δ3,而且变化量Δ3(在统计上)明显优于变化量δ3的时候,适合用在该种特定干细胞的最佳收获时间点为步骤31所述的第四特定时间点。如果变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量(在统计上)没有明显优于变化量δ1、δ2和δ3中对应的变化量,则无法确认(或确定)变化量Δ1、Δ2和Δ3中的最大变化量是由步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)所引起的。
因此,欲从某一个体(其可是实验对象或是与实验对象相同生物分类的一个体)取得该种特定干细胞的时候,可以在该个体进行或接受步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)后的最佳收获时间点从该个体取得一组织样本(其可是本发明在“个体(S)以及组织样本(P)”的描述里所提及的组织样本),然后再从取得的组织样本中取得该种特定干细胞。
此外,本发明也可以分别对复数个相同生物分类的对照者进行图19所述的方法,进而获得与每一个对照者有关的第五至第八干细胞数据(详细说明可参阅图19所述的第五至第八干细胞数据),以及分别对复数个相同生物分类的实验对象进行图18所述的方法,进而获得与每一个实验对象有关的第一至第四干细胞数据(详细说明可参阅图18所述的第一至第四干细胞数据)。利用从这些实验对象获得的第一至第四干细胞数据以及从这些对照者获得的第五至第八干细胞数据可得到与该种特定干细胞的数量有关的变化量,其包括:(1)关于每一位实验对象的该种特定干细胞在第二特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第二干细胞数据)相对于该种特定干细胞在第一特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第一干细胞数据)的变化量Δ1;(2)关于每一位实验对象的该种特定干细胞在第三特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第三干细胞数据)相对于该种特定干细胞在第一特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其在第一干细胞数据中)的变化量Δ2;(3)关于每一位实验对象的该种特定干细胞在第四特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第四干细胞数据)相对于该种特定干细胞在第一特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第一干细胞数据)的变化量Δ3;(4)关于每一位对照者的该种特定干细胞在第六特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第六干细胞数据)相对于该种特定干细胞在第五特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第五干细胞数据)的变化量δ1;(5)关于每一位对照者的该种特定干细胞在第七特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第七干细胞数据)相对于该种特定干细胞在第五特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其在第五干细胞数据中)的变化量δ2;以及(6)关于每一位对照者的该种特定干细胞在第八特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第八干细胞数据)相对于该种特定干细胞在第五特定时间点的周边血液中每单位体积的数量(其属于第五干细胞数据)的变化量δ3。
对从这些实验对象获得且与该种特定干细胞有关的变化量Δ1、Δ2和Δ3的分布中的每两个变化量分布进行比较(例如对与SB-1细胞有关的变化量Δ1的分布和与SB-1细胞有关的变化量Δ2的分布进行比较),可以得知或找出与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布。然后,将与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布和与该种特定干细胞有关的变化量δ1、δ2和δ3的分布中对应的变化量分布进行比较(例如当与SB-1细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布是与SB-1细胞有关的变化量Δ1的分布的时候,将与SB-1细胞有关的变化量δ1的分布和与SB-1细胞有关的变化量Δ1的分布进行比较),以判断与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布(例如与SB-1细胞有关的变化量Δ1的分布)是否由步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)所引起。如果与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布(例如与SB-1细胞有关的变化量Δ1的分布)在统计上明显优于与该种特定干细胞有关的变化量δ1、δ2和δ3的分布中对应的变化量分布(例如与SB-1细胞有关的变化量δ1的分布),则可以确认(或确定)与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布(例如与SB-1细胞有关的变化量Δ1的分布)是由步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)所引起的。在与该种特定干细胞有关的变化量Δ1、Δ2和Δ3的分布中,如果变化量Δ1的分布是最具统计意义的变化量分布,则在与该种特定干细胞有关的变化量δ1、δ2和δ3的分布中,与其对应的变化量分布为与该种特定干细胞有关的变化量δ1的分布。在与该种特定干细胞有关的变化量Δ1、Δ2和Δ3的分布中,如果变化量Δ2的分布是最具统计意义的变化量分布,则在与该种特定干细胞有关的变化量δ1、δ2和δ3的分布中,与其对应的变化量分布为与该种特定干细胞有关的变化量δ2的分布。在与该种特定干细胞有关的变化量Δ1、Δ2和Δ3的分布中,如果变化量Δ3的分布是最具统计意义的变化量分布,则在与该种特定干细胞有关的变化量δ1、δ2和δ3的分布中,与其对应的变化量分布为与该种特定干细胞有关的变化量δ3的分布。如果与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布在统计上没有明显优于与该种特定干细胞有关的变化量δ1、δ2和δ3的分布中对应的变化量分布,则无法确认(或确定)与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布是由步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)所引起的。因此,透过上述的方法,可以获得适合用在这些实验对象的该种特定干细胞的最佳收获时间和最佳收获时间点。当与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布是与该种特定干细胞有关的变化量Δ1的分布,而且与该种特定干细胞有关的变化量Δ1的分布在统计上明显优于与该种特定干细胞有关的变化量δ1的分布的时候,适合用在这些实验对象的该种特定干细胞的最佳收获时间和最佳收获时间点分别是步骤24所述的第一段时间和步骤25所述的第二特定时间点。当与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布是与该种特定干细胞有关的变化量Δ2的分布,而且与该种特定干细胞有关的变化量Δ2的分布在统计上明显优于与该种特定干细胞有关的变化量δ2的分布的时候,适合用在这些实验对象的该种特定干细胞的最佳收获时间和最佳收获时间点分别是步骤27所述的第二段时间和步骤28所述的第三特定时间点。当与该种特定干细胞有关的变化量分布中最具统计意义的变化量分布是与该种特定干细胞有关的变化量Δ3的分布,而且与该种特定干细胞有关的变化量Δ3的分布在统计上明显优于与该种特定干细胞有关的变化量δ3的分布的时候,适合用在这些实验对象的该种特定干细胞的最佳收获时间和最佳收获时间点分别是步骤30所述的第三段时间和步骤31所述的第四特定时间点。因此,欲从某一个体(其可是与这些实验对象相同生物分类的一个体或是这些实验对象的其中一个)取得该种特定干细胞的时候,可以在该个体进行或接受步骤23所述的一种或多种的行为或刺激(X)后的最佳收获时间点从该个体取得一组织样本(其可是本发明在“个体(S)以及组织样本(P)”的描述里所提及的组织样本),然后再从取得的组织样本中取得该种特定干细胞。
在接下来的内容中,将以一种获得各个人体每毫升周边血液的干细胞数量的方法作为范例,叙述第二实验并显示相关的干细胞数据。在第二实验中,挑选五位人类受试者作为第二实验中的实验组,并让这五位人类受试者进行图18所述的方法。另外,还挑选一位人类受试者(以下称“受试者CP”)作为第二实验中的对照组,并让受试者CP进行图19所述的方法。实验组中的这五位人类受试者是:(1)受试者E1:一位五十五岁左右的男性,其干细胞数据显示在图20A和图20B;(2)受试者E2:一位四十岁出头的男性,其干细胞数据显示在图20C和图20D;(3)受试者E3:一位五十五岁左右的男性,其干细胞数据显示在图20E和图20F;(4)受试者E4:一位三十五岁左右的男性,其干细胞数据显示在图20G和图20H;以及(5)受试者E5:一位二十五岁左右的女性,其干细胞数据显示在图20I和图20J。受试者CP是一位二十五岁左右的女性,其干细胞数据显示在图20K和图20L。
受试者E1-E4中的每一位都会进行图18步骤21至步骤32所述的方法,藉以获得每一位受试者在四个特定时间点的干细胞数据。受试者E5则进行图18所述的步骤21至步骤29,因而获得受试者E5在三个特定时间点的干细胞数据。在每一位实验对象(也就是受试者E1-E5)所进行的方法中,受试者E1-E5中的每一位都会在图18的步骤23中口服30颗褐藻糖胶补充品(可与图11和图12所述的褐藻糖胶补充品相同)。也就是说,受试者E1-E5中的每一位都会在图18的步骤23中服用3克(也就是超过2克)的褐藻糖胶。另外,这五位受试者E1-E5每一位的体重大约是65公斤。这意味着褐藻糖胶的剂量是每公斤体重约46毫克。或者,褐藻糖胶的剂量也可以是每公斤体重超过20毫克、30毫克、40毫克或是50毫克。
图20A和图20B显示受试者E1在四个特定时间点的每一种干细胞(共有23种干细胞)在周边血液中每毫升的数量。图20C和图20D显示受试者E2在四个特定时间点的每一种干细胞(共有23种干细胞)在周边血液中每毫升的数量。图20E和图20F显示受试者E3在四个特定时间点的每一种干细胞(共有23种干细胞)在周边血液中每毫升的数量。图20G和图20H显示受试者E4在四个特定时间点的每一种干细胞(共有23种干细胞)在周边血液中每毫升的数量。上述用在这四位受试者E1-E4的四个特定时间点分别是:(1)第一时间点,其为食用或摄取褐藻糖胶补充品前的一个时间点,也就是图18步骤21所述的第一特定时间点;(2)第二时间点,其为食用或摄取褐藻糖胶补充品之后的第1.5小时,也就是图18步骤24所述的第一段时间结束的时间点;(3)第三时间点,其为食用或摄取褐藻糖胶补充品之后的第24小时,也就是图18步骤27所述的第二段时间结束的时间点;以及(4)第四时间点,其为食用或摄取褐藻糖胶补充品之后的第48小时,也就是图18步骤30所述的第三段时间结束的时间点。
图20I和图20J显示受试者E5在三个特定时间点的每一种干细胞(共有23种干细胞)在周边血液中每毫升的数量。用在受试者E5的三个特定时间点分别是:(1)第一时间点,其为食用或摄取褐藻糖胶补充品前的一个时间点,也就是图18步骤21所述的第一特定时间点;(2)第二时间点,其为食用或摄取褐藻糖胶补充品之后的第1.5小时,也就是图18步骤24所述的第一段时间结束的时间点;以及(3)第三时间点,其为食用或摄取褐藻糖胶补充品之后的第24小时,也就是图18步骤27所述的第二段时间结束的时间点。
另外,受试者CP是进行图19步骤33至步骤43所述的方法来获得受试者CP在四个特定时间点的干细胞数据。过程中,受试者CP没有服用任何的褐藻糖胶补充品。图20K和图20L显示受试者CP在四个特定时间点的每一种干细胞(共有23种干细胞)在周边血液中每毫升的数量。用在受试者CP的四个特定时间点分别是:(1)第五时间点,其为从受试者CP取得一个血液样本的时间点(也就是图19步骤33所述的第五特定时间点);(2)第六时间点,其为第五时间点之后的第1.5小时(也就是图19步骤35所述的第四段时间结束的第六特定时间点);(3)第七时间点,其为第五时间点之后的第24小时(也就是图19步骤38所述的第五段时间结束的第七特定时间点);以及(4)第八时间点,其为第五时间点之后的第48小时(也就是图19步骤41所述的第六段时间结束的第八特定时间点)。
根据图20A至图20L的干细胞数据显示,对某些特定种类的干细胞(如下面所列举的干细胞)而言,最佳的收获时间点是在体内培育干细胞之后的第1.5小时或是在食用(或摄取)褐藻糖胶补充品之后的第1.5小时。在受试者E1-E5食用(或摄取)褐藻糖胶补充品之后的第1.5小时取得的周边血液中,每毫升的数量有2倍以上增加的干细胞列举如下:SB-1细胞、SB-2细胞、类卵裂球干细胞、SSEA4(+)多功能干细胞、CD13(+)多潜能干细胞、CD90(+)多潜能干细胞、CD105(+)多潜能干细胞、CD34(+)造血干细胞、CD150(+)造血干细胞、CD24(+)先驱干细胞、SSEA1(+)先驱干细胞、CD45(+)先驱干细胞、CD33(+)先驱干细胞、CD10(+)先驱干细胞以及CXCR1(+)干细胞。
另外,根据图20A至图20L的干细胞数据显示,服用褐藻糖胶补充品(如第一实验和图11所述的褐藻糖胶补充品)可以导致、引起或造成某些种类的干细胞在人或动物食用(或摄取)褐藻糖胶补充品之后第24小时的周边血液中每毫升的数量至少有两倍的增加。此处所述的“两倍增加”是指「某种干细胞在一个体(如人体或动物体)食用或摄取褐藻糖胶补充品前的周边血液中每毫升的数量」和「该种干细胞在该个体食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第1.5小时的周边血液中每毫升的数量」的比例。除此之外,图20A至图20L的干细胞数据也显示,某些种类的干细胞在受试者E1、E2、E3、E4或E5食用或摄取褐藻糖胶补充品之后第1.5小时的周边血液中每毫升的数量有1.5倍、3倍或4倍的增加。因此,口服褐藻糖胶(一种褐藻的主要成分)可以是一种使人类或动物的周边血液增加干细胞的有效方法。综上所述,一种行为,例如口服3克(也就是超过2克)的褐藻糖胶(其可来自上述的褐藻糖胶补充品)或是一种或多种的行为或刺激(X),可以导致、引起、活化或催化人类或动物周边血液中的干细胞至少有1.5倍(或以上)、2倍(或以上)、3倍(或以上)或4倍(或以上)的增加。
归纳起来,本发明提供了许多种方法,分别简述如下。
一种从第一个体(例如一人体或一动物体)收获(或获取)和储存干细胞的方法,其包括下列步骤:(1)让该第一个体进行或接受一行为,例如服用4.5克(或超过3.5克)的一冲绳褐藻补充品,该冲绳褐藻补充品含有重量百分比为80%(或是超过70%)的水云粉,其中该4.5克的该冲绳褐藻补充品含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶,该行为可经过事先评估,以确认能有效增加该第一个体体内的一种或多种选定的干细胞(例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞)的数量;(2)在该第一个体进行或接受该行为之后,让该第一个体等待一段(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;(3)在该第一个体等待该段(预定的)时间之后,从该第一个体取得一组织样本(例如该人体或该动物体的周边血液);(4)从该组织样本收获、收集或取得该种或该些种选定的干细胞;以及(5)将该种或该些种选定的干细胞存放(或储存)在温度低于摄氏0度(例如低于摄氏负30度或低于摄氏负80度)的一设施(如冰箱)中一段时间(例如1个月以上或一年以上),其中该设施是由一机构(如细胞银行)所提供。在一范例中,在存放(或储存)该种或该些种选定的干细胞之后,该种或该些种选定的干细胞可以透过一个适当的方法(例如注射或涂抹)而被用在该第一个体上。在另一范例中,在存放(或储存)该种或该些种选定的干细胞之后,该种或该些种选定的干细胞可以透过一个适当的方法(例如注射或涂抹)而被用在第二个体(例如另一人体或另一动物体)上。
一种储存第一个体(例如人体或动物体)的干细胞的方法,其包括下列步骤:(1)让该第一个体进行或接受一行为,例如服用4.5克(或超过3.5克)的冲绳褐藻补充品,该冲绳褐藻补充品含有重量百分比为80%(或是超过70%)的水云粉,其中该4.5克的该冲绳褐藻补充品含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶,该行为可经过事先评估,以确认能有效增加该第一个体体内的一种或多种选定的干细胞(例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞)的数量;(2)在该第一个体进行或接受该行为之后,让该第一个体等待一段(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;(3)在该第一个体等待该段(预定的)时间之后,从该第一个体取得一组织样本(例如该人体或该动物体的周边血液);以及(4)将含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本存放(或储存)在温度低于摄氏0度(例如低于摄氏负30度或低于摄氏负80度)的一设施(如冰箱)中一段时间(例如1个月以上或一年以上),其中该设施是由一机构(如细胞银行)所提供。在一范例中,在存放(或储存)含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本之后,含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本可以透过一个适当的方法(例如注射或涂抹)而被用在该第一个体上。在另一范例中,在存放(或储存)含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本之后,含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本可以透过一个适当的方法(例如注射或涂抹)而被用在第二个体(例如另一人体或另一动物体)上。
一种从第一个体(例如一人体或一动物体)收获或获取干细胞的方法,其包括下列步骤:(1)让该第一个体进行或接受一行为,例如服用4.5克(或超过3.5克)的一冲绳褐藻补充品,该冲绳褐藻补充品含有重量百分比为80%(或是超过70%)的水云粉,其中该4.5克的该冲绳褐藻补充品含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶,该行为可经过事先评估,以确认能有效增加该第一个体体内的一种或多种选定的干细胞(例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞)的数量;(2)在该第一个体进行或接受该行为之后,让该第一个体等待一段(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;(3)在该第一个体等待该段(预定的)时间之后,从该第一个体取得一组织样本(例如该人体或该动物体的周边血液);以及(4)从该组织样本收获或取得该种或该些种选定的干细胞。在一范例中,在从该组织样本收获或取得该种或该些种选定的干细胞之后(在这之后没有或是略过下列步骤:将该种或该些种选定的干细胞存放(或储存)在温度低于摄氏0度(例如低于摄氏负30度或低于摄氏负80度)的一设施(如冰箱)中一段时间,例如1个月以上或一年以上),该种或该些种选定的干细胞可以透过一个适当的方法(例如注射或涂抹)而被用在该第一个体上。在另一范例中,在从该组织样本收获或取得该种或该些种选定的干细胞之后(在这之后没有或是略过下列步骤:将该种或该些种选定的干细胞存放(或储存)在温度低于摄氏0度(例如低于摄氏负30度或低于摄氏负80度)的一设施(如冰箱)中一段时间,例如1个月以上或一年以上),该种或该些种选定的干细胞可以透过一个适当的方法(例如注射或涂抹)而被用在第二个体(例如另一人体或另一动物体)上。
一种储存第一个体(例如一人体或一动物体)的干细胞的方法,其包括下列步骤:(1)让该第一个体进行或接受一行为,例如服用4.5克(或超过3.5克)的冲绳褐藻补充品,该冲绳褐藻补充品含有重量百分比为80%(或是超过70%)的水云粉,其中该4.5克的该冲绳褐藻补充品含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶,该行为可经过事先评估,以确认能有效增加该第一个体体内的一种或多种选定的干细胞(例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞)的数量;(2)在该第一个体进行或接受该行为之后,让该第一个体等待一段(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;以及(3)在该第一个体等待该段(预定的)时间之后,从该第一个体取得一组织样本(例如该人体或该动物体的周边血液),其中该组织样本含有该种或该些种选定的干细胞。在一范例中,在从该第一个体取得含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本之后(在这之后没有或是略过下列步骤:将含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本存放(或储存)在温度低于摄氏0度(例如低于摄氏负30度或低于摄氏负80度)的一设施(如冰箱)中一段时间,例如1个月以上或一年以上),含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本可以透过一个适当的方法(例如注射或涂抹)而被用在该第一个体上。在另一范例中,在从该第一个体取得含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本之后(在这之后没有或是略过下列步骤:将含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本存放(或储存)在温度低于摄氏0度(例如低于摄氏负30度或低于摄氏负80度)的一设施(如冰箱)中一段时间,例如1个月以上或一年以上),含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本可以透过一个适当的方法(例如注射或涂抹)而被用在第二个体(例如另一人体或另一动物体)上。
一种从第一个体(例如一人体或一动物体)储存和收获(或获取)干细胞的方法,其包括下列步骤:(1)让该第一个体进行或接受一行为,例如服用4.5克(或超过3.5克)的冲绳褐藻补充品,该冲绳褐藻补充品含有重量百分比为80%(或是超过70%)的水云粉,其中该4.5克的该冲绳褐藻补充品含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶,该行为可经过事先评估,以确认能有效增加该第一个体体内的一种或多种选定的干细胞(例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞)的数量;(2)在该第一个体进行或接受该行为之后,让该第一个体等待一段(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;(3)在该第一个体等待该段(预定的)时间之后,从该第一个体取得一组织样本(例如该人体或该动物体的周边血液),其中该组织样本含有该种或该些种选定的干细胞;(4)将含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本存放(或储存)在温度低于摄氏0度(例如低于摄氏负30度或低于摄氏负80度)的一设施(如冰箱)中一段时间(例如1个月以上或一年以上),其中该设施是由一机构(如细胞银行)所提供;以及(5)在存放(或储存)含有该种或该些种选定的干细胞的该组织样本之后,从该组织样本收获或取得该种或该些种选定的干细胞。在一范例中,在从该组织样本收获或取得该种或该些种选定的干细胞之后,该种或该些种选定的干细胞可以透过一个适当的方法(例如注射或涂抹)而被用在该第一个体上。在另一范例中,在从该组织样本收获或取得该种或该些种选定的干细胞之后,该种或该些种选定的干细胞可以透过一个适当的方法(例如注射或涂抹)而被用在第二个体(例如另一人体或另一动物体)上。
一种发现新种类干细胞(为一种尚未被发现的干细胞)的方法,其包括下列步骤:(1)让一个体(例如一人体或一动物体)进行或接受一行为,例如服用4.5克(或超过3.5克)的一冲绳褐藻补充品,该冲绳褐藻补充品含有重量百分比为80%(或是超过70%)的水云粉,其中该4.5克的该冲绳褐藻补充品含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶,该行为可经过事先评估,以确认能有效增加体内一种或多种干细胞的数量;(2)在该个体进行或接受该行为之后,让该个体等待一段(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;(3)在该个体等待该段(预定的)时间之后,从该个体取得一组织样本(例如该人体或该动物体的周边血液);以及(4)利用一种用于侦测新种类干细胞的分析方法来处理该组织样本,其中该种分析方法包括侦测该组织样本中的细胞是否含有细胞核的步骤以及该组织样本中的细胞是否可以表达以及/或是无法表达一种或多种选定的细胞(表面)标记的步骤,该种分析方法包括使用流式细胞仪。
一种评估一行为(例如服用4.5克(或超过3.5克)的冲绳褐藻补充品,该冲绳褐藻补充品含有重量百分比为80%(或是超过70%)的水云粉,其中该4.5克的该冲绳褐藻补充品含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶)对于治疗患有疾病(如癌症、帕金森氏症或阿兹海默病)的一个体(例如一人体或一动物体)的效果的方法,其包括下列步骤:(1)从该个体获得第一组织样本(例如周边血液样本);(2)利用一分析或测量方法(例如前面所述的测量方法MT)或是装置、仪器或设备(例如前面所述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或是前面所述的单一系统、仪器、工具或装置(TD))从该第一组织样本中获得与一种或多种选定的干细胞(例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞)之信息有关的第一干细胞数据;(3)在获得该第一组织样本或是该第一干细胞数据之后,让该个体进行或接受该行为;(4)在该个体进行或接受该行为之后,让该个体等待一段(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;(5)在该个体等待该段(预定的)时间之后,从该个体获得第二组织样本(例如周边血液样本);(6)利用该分析或测量方法或是该装置、仪器或设备从该第二组织样本中获得与该种或该些种选定的干细胞之信息有关的第二干细胞数据;以及(7)对该第一干细胞数据和该第二干细胞数据进行分析,其中该分析可以包括将该第一干细胞数据和该第二干细胞数据进行比较。该种或该些种选定的干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种干细胞。该第一干细胞数据可包括该种或该些种选定的干细胞在该第一组织样本中每单位体积(例如每毫升)的数量,也就是在该第一组织样本中该种或该些种选定的干细胞每单位体积(例如每毫升)的数量。该第二干细胞数据可包括该种或该些种选定的干细胞在该第二组织样本中每单位体积(例如每毫升)的数量,也就是在该第二组织样本中该种或该些种选定的干细胞每单位体积(例如每毫升)的数量。该第一干细胞数据可以更包括与该第一组织样本有关的第一百分比,该第一百分比为该种或该些种选定的干细胞的数量在颗粒尺寸大于或等于一门坎尺寸的一区域中的百分比。该第二干细胞数据可以更包括与该第二组织样本有关的第二百分比,该第二百分比为该种或该些种选定的干细胞的数量在颗粒尺寸大于或等于该门坎尺寸的一区域中的百分比。该门坎尺寸可以是0.5微米、0.8微米、1微米、1.5微米、2微米或3微米。
一种评估一行为(例如服用4.5克(或超过3.5克)的冲绳褐藻补充品,该冲绳褐藻补充品含有重量百分比为80%(或是超过70%)的水云粉,其中该4.5克的该冲绳褐藻补充品含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶)对于治疗患有疾病(如癌症、帕金森氏症或阿兹海默病)的一个体(例如一人体或一动物体)的效果的方法,其包括下列步骤:(1)从该个体获得第一组织样本(例如周边血液样本);(2)利用分析或测量方法(例如前面所述的测量方法MT)或是装置、仪器或设备(例如前面所述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或是前面所述的单一系统、仪器、工具或装置(TD))从该第一组织样本中获得与一种或多种选定的干细胞(例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞)有关的第一干细胞数据;(3)在获得该第一组织样本或是该第一干细胞数据之后,让该个体进行或接受该行为;(4)在该个体进行或接受该行为之后,让该个体等待一段第一(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;(5)在该个体等待该段第一(预定的)时间之后,从该个体获得第二组织样本(例如周边血液样本);(6)利用该分析或测量方法或是该装置、仪器或设备从该第二组织样本中获得与该种或该些种选定的干细胞有关的第二干细胞数据;(7)对该第二干细胞数据和该第一干细胞数据进行第一分析,其中该第一分析可包括将该第二干细胞数据和该第一干细胞数据进行比较;(8)在获得该第二组织样本或是该第二干细胞数据之后,让该个体再次进行或接受该行为;(9)在该个体再次进行或接受该行为之后,让该个体等待一段第二(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;(10)在该个体等待该段第二(预定的)时间之后,从该个体获得第三组织样本(例如周边血液样本);(11)利用该分析或测量方法或是该装置、仪器或设备从该第三组织样本中获得与该种或该些种选定的干细胞有关的第三干细胞数据;以及(12)对该第三干细胞数据和该第一或第二干细胞数据进行第二分析,其中该第二分析可包括将该第三干细胞数据和该第一或第二干细胞数据进行比较。该种或该些种选定的干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种干细胞。该第一干细胞数据可包括该种或该些种选定的干细胞在该第一组织样本中每单位体积(例如每毫升)的数量,也就是在该第一组织样本中该种或该些种选定的干细胞每单位体积(例如每毫升)的数量。该第二干细胞数据可包括该种或该些种选定的干细胞在该第二组织样本中每单位体积(例如每毫升)的数量,也就是在该第二组织样本中该种或该些种选定的干细胞每单位体积(例如每毫升)的数量。该第三干细胞数据可包括该种或该些种选定的干细胞在该第三组织样本中每单位体积(例如每毫升)的数量,也就是在该第三组织样本中该种或该些种选定的干细胞每单位体积(例如每毫升)的数量。该第一干细胞数据可以更包括与该第一组织样本有关的第一百分比,该第一百分比为该种或该些种选定的干细胞的数量在颗粒尺寸大于或等于一门坎尺寸的一区域中的百分比。该第二干细胞数据可以更包括与该第二组织样本有关的第二百分比,该第二百分比为该种或该些种选定的干细胞的数量在颗粒尺寸大于或等于该门坎尺寸的一区域中的百分比。该第三干细胞数据可以更包括与该第三组织样本有关的第三百分比,该第三百分比为该种或该些种选定的干细胞的数量在颗粒尺寸大于或等于该门坎尺寸的一区域中的百分比。该门坎尺寸可以是0.5微米、0.8微米、1微米、1.5微米、2微米或3微米。
一种评估或测试一种或多种的上述行为或刺激(X)(例如服用4.5克(或超过3.5克)的冲绳褐藻补充品,该冲绳褐藻补充品含有重量百分比为80%(或是超过70%)的水云粉,其中该4.5克的该冲绳褐藻补充品含有3克(或是超过2克)的褐藻糖胶或是含有重量百分比超过60%的褐藻糖胶)效果或效用的方法,其包括下列步骤:(1)从一个体(例如一人体或一动物体)获得第一组织样本(例如周边血液样本);(2)利用分析或测量方法(例如前面所述的测量方法MT)或是装置、仪器或设备(例如前面所述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或是前面所述的单一系统、仪器、工具或装置(TD))从该第一组织样本中获得与一种或多种选定的干细胞(例如SB-1细胞以及/或是SB-2细胞)的信息有关的第一干细胞数据;(3)在获得该第一组织样本或是该第一干细胞数据之后,让该个体进行或接受该种或该些种的上述行为或刺激(X);(4)在该个体进行或接受该种或该些种的上述行为或刺激(X)之后,让该个体等待一段(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;(5)在该个体等待该段(预定的)时间之后,从该个体获得第二组织样本(例如周边血液样本);(6)利用该分析或测量方法或是该装置、仪器或设备从该第二组织样本中获得与该种或该些种选定的干细胞有关的第二干细胞数据;以及(7)对该第一干细胞数据和该第二干细胞数据进行一分析,其中该分析可包括将该第一干细胞数据和该第二干细胞数据进行比较。该种或该些种选定的干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种干细胞。该第一干细胞数据可包括该种或该些种选定的干细胞在该第一组织样本中每单位体积(例如每毫升)的数量,也就是在该第一组织样本中该种或该些种选定的干细胞每单位体积(例如每毫升)的数量。该第二干细胞数据可包括该种或该些种选定的干细胞在该第二组织样本中每单位体积(例如每毫升)的数量,也就是在该第二组织样本中该种或该些种选定的干细胞每单位体积(例如每毫升)的数量。该第一干细胞数据可以更包括与该第一组织样本有关的第一百分比,该第一百分比为该种或该些种选定的干细胞的数量在颗粒尺寸大于或等于一门坎尺寸的一区域中的百分比。该第二干细胞数据可以更包括与该第二组织样本有关的第二百分比,该第二百分比为该种或该些种选定的干细胞的数量在颗粒尺寸大于或等于该门坎尺寸的一区域中的百分比。该门坎尺寸可以是0.5微米、0.8微米、1微米、1.5微米、2微米或3微米。
一种监测一个体(例如前面所述的人体或是前面所述的非人体)周边血液中一种选定干细胞(例如SB-1细胞或SB-2细胞)数量的方法,其可用来监测该个体进行或接受一种或多种的上述行为或刺激(X)后该种选定干细胞增加的数量,该个体可透过该种或该些种的上述行为或刺激(X)在体内培养或培育该种选定干细胞,该种方法包括下列步骤:(1)从该个体获得第一组织样本(例如周边血液样本);(2)利用分析或测量方法(例如前面所述的测量方法MT)或是装置、仪器或设备(例如前面所述的整合系统、装置、仪器或工具(AD)或是前面所述的单一系统、仪器、工具或装置(TD))从该第一组织样本中获得与每单位体积(例如每毫升)的该种选定干细胞数量有关的第一数据;(3)在获得该第一组织样本之后,让该个体进行或接受该种或该些种的上述行为或刺激(X);(4)在该个体进行或接受该种或该些种的上述行为或刺激(X)之后,让该个体等待一段第一(预定的)时间,例如15分钟至60分钟、20分钟至100分钟、30分钟至2小时、0.5小时至3小时、1小时至12小时、12小时至36小时或是36小时至50小时;(5)在该个体等待该段第一(预定的)时间之后,从该个体获得第二组织样本(例如周边血液样本);(6)利用该分析或测量方法或是该装置、仪器或设备从该第二组织样本中获得与每单位体积(例如每毫升)的该种选定干细胞数量有关的第二数据;(7)对该第一数据和该第二数据进行第一分析,以获得与每单位体积(例如每毫升)的该种选定干细胞数量有关的第一变化量,其中该第一分析可包括将该第一数据和该第二数据进行比较;(8)在该个体进行或接受该种或该些种的上述行为或刺激(X)之后,让该个体等待一段第二(预定的)时间,例如12小时至36小时或是36小时至60小时,该段第二(预定的)时间与该段第一(预定的)时间不同;(9)在该个体等待该段第二(预定的)时间之后,从该个体获得第三组织样本(例如周边血液样本);(10)利用该分析或测量方法或是该装置、仪器或设备从该第三组织样本中获得与每单位体积(例如每毫升)的该种选定干细胞数量有关的第三数据;以及(11)对该第一数据和该第三数据进行第二分析,以获得与每单位体积(例如每毫升)的该种选定干细胞数量有关的第二变化量,其中该第二分析可包括将该第一数据和该第三数据进行比较。该第一、第二和第三组织样本可以由该个体的周边血液获得。该种选定干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的任何一种干细胞或是以本发明在“干细胞定义”里所提及的一种或多种细胞(表面)标记(例如CD349(+)、Lgr5(+)或CD66e(+))描述其特征的干细胞。
一种获得一组织样本(例如一周边血液)之一干细胞数据(例如每单位体积的干细胞数量)的方法,其包括下列步骤:(1)从一个体(例如一人体或一动物体)获得该组织样本(其体积可以是10毫升);(2)处理该组织样本,以获得或制备出一测试样本(其体积可以是3毫升);(3)利用第一方法从该测试样本的第一部分中获得第一数据(例如每单位体积(如每毫升)内第一群特定颗粒(其包含细胞)的数量),该第一方法包括使用一血球计数器(hemocytometer)计算该第一部分中的颗粒数量;(4)利用第二方法从该测试样本的第二部分中获得第二数据(例如一种特定干细胞的数量占第二群特定颗粒(其包含细胞)的数量的百分比)与第三数据(例如该第二群特定颗粒的数量占第三群特定颗粒(其包含细胞)的数量的百分比),该第二方法包括使用流式细胞仪(flowcytometer)计算该第二部分中的颗粒数量,其中在该测试样本是均匀且含有大致相同之内容物的情况下,该第二部分假定含有与该第一部分大致上相同的内容物,该第一群特定颗粒与该第三群特定颗粒大致上具有相同的性质或特性,该第一群特定颗粒的尺寸和该第三群特定颗粒的尺寸是大于或等于一给定门坎尺寸(例如0.5微米、0.8微米、1微米、1.5微米、2微米或3微米);(5)对该第二数据和该第三数据进行第一运算或计算(例如将该第二数据乘以该第三数据),以获得与该测试样本有关的第四数据(例如该种特定干细胞的数量占该第三群特定颗粒的数量的百分比);(6)对该第一数据和该第四数据进行第二运算或计算(例如将该第一数据乘以该第四数据),以获得与该测试样本有关的第五数据(例如该种特定干细胞在该测试样本中每单位体积(如每毫升)的数量);以及(7)对该第五数据和一体积改变(或样本准备)系数进行第三运算或计算(例如将该第五数据乘以该体积改变(或样本准备)系数),以获得与该组织样本(如该周边血液)有关的第六数据(例如该种特定干细胞在该组织样本中每单位体积(如每毫升)的数量)。该种获得该组织样本的干细胞数据的方法还可以包括下列步骤:对该测试样本的体积和该组织样本的体积进行第四运算或计算(例如将该测试样本的体积除以该组织样本的体积),以获得该体积改变(或样本准备)系数。
该干细胞数据可包括该种特定干细胞在该个体的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量。该第三群特定颗粒包括该第二群特定颗粒以及其它群的颗粒和/或细胞(其可包括微颗粒、粒细胞、红血球、血小板、白血球(包含淋巴球))。该第二群特定颗粒包括该种特定干细胞,但是几乎不含有微颗粒、粒细胞、红血球、血小板和白血球(包含淋巴球)。(该第一群特定颗粒和该第三群特定颗粒的)该给定门坎尺寸可以是0.5微米、0.8微米、1微米、1.5微米、2微米或3微米。在该第二群特定颗粒中,颗粒的尺寸可以是大于或实质上等于1微米、1.1微米、1.5微米、2微米、2.1微米或3微米。在该第一群特定颗粒、该第二群特定颗粒和该第三群特定颗粒中,每一群特定颗粒可以是或可以包括一群细胞。该种特定干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的任何一种多功能干细胞、任何一种多潜能干细胞或任何一种先驱干细胞。该组织样本可以是血液、周边血液或是其它组织。该个体可以是人类或是动物。步骤(2)中所述的处理该组织样本包括下列步骤:将红血球凝集剂和该组织样本进行混合,并在将该红血球凝集剂和该组织样本进行混合之后,使来自该组织样本的颗粒重新悬浮于溶液或培养液中。该溶液或培养液可以是不含有钙与镁的含盐溶液或是含有牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。根据该组织样本制备成该测试样本的方式,可计算出或是获得该体积改变(或样本准备)系数。例如,将10毫升的该组织样本处理成3毫升的该测试样本,则该体积改变(或样本准备)系数为3/10(其为该测试样本的体积与该组织样本的体积的比率)。
概括地说,血球计数器(连同显微镜)是用来获得尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒(其是包括细胞)在该测试样本(其由该组织样本(例如周边血液)经过处理而成)中每单位体积(如每毫升)的数量,而流式细胞仪则是用来获得该种特定干细胞在尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒(其包括细胞)中所占的百分比(其与该测试样本有关)。将上述获得的尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒在该测试样本中每单位体积的数量乘以上述获得的该种特定干细胞在尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒中所占的百分比,可以获得该种特定干细胞在该测试样本中每单位体积(如每毫升)的数量。将该种特定干细胞在该测试样本中每单位体积的数量乘以该体积改变(或样本准备)系数,可以获得该种特定干细胞在该组织样本(如上述的周边血液)中每单位体积(如每毫升)的数量。因此,结合上述的细胞计数数据(也就是上述利用血球计数器获得的数据)和上述的该种特定干细胞的百分比(也就是上述利用流式细胞仪测量出来的数据),可以更准确地获得该种特定干细胞在周边血液中的数量。
本发明揭露一整合系统、装置、仪器或工具,其可用来获得与一个体(例如一人体)的组织样本(例如周边血液)有关的干细胞数据(例如每单位体积的干细胞数量)。该整合系统、装置、仪器或工具包括:(1)第一装置、仪器或工具,其是用来从该个体获得或取得该组织样本(其体积可以是10毫升);(2)第二装置、仪器或工具(其可包括离心机),其是用来处理该组织样本,以获得或制备出一测试样本(其体积可以是3毫升);(3)第三装置、仪器或工具(其可包括血球计数器、显微镜以及含有软件的处理器或计算机),其是用来从该测试样本的第一部分获得第一数据(例如每单位体积(如每毫升)内第一群特定颗粒的数量);(4)第四装置、仪器或工具(其可包括流式细胞仪和处理器或计算机),其是用来从该测试样本的第二部分获得第二数据(例如一种特定干细胞的数量占第二群特定颗粒的数量的百分比)和第三数据(例如该第二群特定颗粒的数量占第三群特定颗粒的数量的百分比),其中在该测试样本是均匀且含有大致相同的内容物的情况下,该第一部分假定含有与该第二部分大致上相同的内容物,另外该第一群特定颗粒与该第三群特定颗粒大致上具有相同的性质或特性,该第一群特定颗粒的尺寸和该第三群特定颗粒的尺寸是大于或等于一给定门坎尺寸;以及(5)第五装置、仪器或工具(例如一计算机或处理器),其是用来进行下列的运算或计算:(a)对该第二数据和该第三数据进行第一运算或计算(例如将该第二数据乘以该第三数据),以获得与该测试样本有关的第四数据(例如该种特定干细胞的数量占该第三群特定颗粒的数量的百分比);(b)对该第一数据和该第四数据进行第二运算或计算(例如将该第一数据乘以该第四数据),以获得与该测试样本有关的第五数据(例如该种特定干细胞在该测试样本中每单位体积(如每毫升)的数量);以及(c)对该第五数据和一体积改变(或样本准备)系数进行第三运算或计算(例如将该第五数据乘以该体积改变(或样本准备)系数),以获得与该组织样本有关的第六数据(例如该种特定干细胞在该组织样本中每单位体积(如每毫升)的数量)。该第五装置、仪器或工具也可以用来进行下列的运算或计算:对该测试样本的体积和该组织样本的体积进行第四运算或计算(例如将该测试样本的体积除以该组织样本的体积),以获得该体积改变(或样本准备)系数。另外,也可以将该第一、第二、第三、第四和第五装置、仪器或工具中的任两个或以上的装置、仪器或工具合并组成一个可以进行所述的任两个或以上的装置、仪器或工具之功能的整合装置、仪器或工具或是单一装置、仪器或工具。例如,该第一和第二装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行该第一和第二装置、仪器或工具的功能的第一整合装置、仪器或工具或是第一单一装置、仪器或工具,而该第三、第四和第五装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行该第三、第四和第五装置、仪器或工具的功能的第二整合装置、仪器或工具或是第二单一装置、仪器或工具。或者,该第二、第三、第四和第五装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行该第二、第三、第四和第五装置、仪器或工具的功能的整合装置、仪器或工具或是单一装置、仪器或工具。或者,该第二、第三和第四装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行该第二、第三和第四装置、仪器或工具的功能的整合装置、仪器或工具或是单一装置、仪器或工具。或者,该第三和第四装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行该第三和第四装置、仪器或工具的功能的整合装置、仪器或工具或是单一装置、仪器或工具。或者,该第四和第五装置、仪器或工具可以合并组成一个可以进行该第四和第五装置、仪器或工具的功能的整合装置、仪器或工具或是单一装置、仪器或工具。该干细胞数据可包括该种特定干细胞在该个体的周边血液中每单位体积(如每毫升)的数量。该第三群特定颗粒包括该第二群特定颗粒以及其它群的颗粒和/或细胞(其可包括微颗粒、粒细胞、红血球、血小板、白血球(包含淋巴球))。该第二群特定颗粒包括该种特定干细胞,但是几乎不含有微颗粒、粒细胞、红血球、血小板和白血球(包含淋巴球)。(该第一群特定颗粒和该第三群特定颗粒的)该给定门坎尺寸可以是0.5微米、0.8微米、1微米、1.5微米、2微米或3微米。在该第二群特定颗粒中,颗粒的尺寸可以是大于或实质上等于1微米、1.1微米、1.5微米、2微米、2.1微米或3微米。在该第一群特定颗粒、该第二群特定颗粒和该第三群特定颗粒中,每一群特定颗粒可以是或可以包括一群细胞。该种特定干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的任何一种多功能干细胞、任何一种多潜能干细胞或任何一种先驱干细胞。该组织样本可以是一周边血液样本。该个体可以是一人类或是一动物。在该第二装置、仪器或工具处理该组织样本的时候,可包括下列步骤:将一红血球凝集剂和该组织样本进行混合,并在将该红血球凝集剂和该组织样本进行混合之后,使来自该组织样本的颗粒重新悬浮于一溶液或培养液中。该溶液或培养液可以是一不含有钙与镁的含盐溶液或是一含有牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。根据该组织样本制备成该测试样本的方式,可以计算出或是获得该体积改变(或样本准备)系数。例如,将10毫升的该组织样本处理成3毫升的该测试样本,则该体积改变(或样本准备)系数为3/10(其为该测试样本的体积与该组织样本的体积的比率)。
概括地说,该第三装置、仪器或工具是用来获得尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒(其包括细胞)在该测试样本(其由该组织样本(例如周边血液)经过处理而成)中每单位体积(如每毫升)的数量,而该第四和第五装置、仪器或工具则是用来获得该种特定干细胞在尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒(其包括细胞)中所占的百分比(其与该测试样本有关)。将上述获得的尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒在该测试样本中每单位体积的数量乘以上述获得的该种特定干细胞在尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒中所占的百分比,可以获得该种特定干细胞在该测试样本中每单位体积(如每毫升)的数量。将该种特定干细胞在该测试样本中每单位体积的数量乘以该体积改变(或样本准备)系数,可以获得该种特定干细胞在该组织样本(如上述的周边血液)中每单位体积(如每毫升)的数量。因此,结合上述的细胞计数数据(其是由该第三装置、仪器或工具提供)和上述的该种特定干细胞的百分比(其由该第四与第五装置、仪器或工具提供),可以更准确地获得该种特定干细胞在周边血液中的数量。
本发明还揭露单一系统、装置、仪器或工具,其可提供或执行下列八种功能中任两个(或以上)的功能:(1)第一功能,其是用来从一个体获得或取得一组织样本(其体积可以是10毫升);(2)第二功能,其是用来处理该组织样本,以获得或制备出一测试样本(其体积可以是3毫升);(3)第三功能,其是用来从该测试样本的第一部分获得第一数据(例如每单位体积(如每毫升)内第一群特定颗粒的数量);(4)第四功能,其是用来从该测试样本的第二部分获得第二数据(例如一种特定干细胞的数量占第二群特定颗粒的数量的百分比)和第三数据(例如该第二群特定颗粒的数量占第三群特定颗粒的数量的百分比),其中在该测试样本是均匀且含有大致相同之内容物的情况下,该第一部分假定含有与该第二部分大致上相同的内容物,另外该第一群特定颗粒与该第三群特定颗粒大致上具有相同的性质或特性,该第一群特定颗粒的尺寸和该第三群特定颗粒的尺寸是大于或等于一给定门坎尺寸;(5)第五功能,其是用来对该第二数据和该第三数据进行第一运算或计算(例如将该第二数据乘以该第三数据),以获得与该测试样本有关的第四数据(例如该种特定干细胞的数量占该第三群特定颗粒的数量的百分比);(6)第六功能,其是用来对该第一数据和该第四数据进行第二运算或计算(例如将该第一数据乘以该第四数据),以获得与该测试样本有关的第五数据(例如该种特定干细胞在该测试样本中每单位体积(如每毫升)的数量);(7)第七功能,其是用来对该测试样本的体积和该组织样本的体积进行第三运算或计算(例如将该测试样本的体积除以该组织样本的体积),以获得一体积改变(或样本准备)系数;以及(8)第八功能,其是用来对该第五数据和该体积改变(或样本准备)系数进行第四运算或计算(例如将该第五数据乘以该体积改变(或样本准备)系数),以获得与该组织样本有关的第六数据(例如该种特定干细胞在该组织样本中每单位体积(如每毫升)的数量)。该种特定干细胞在该组织样本中每单位体积的数量可以是该种特定干细胞在该个体的周边血液中每单位体积的数量。该第三群特定颗粒包括该第二群特定颗粒以及其它群的颗粒和/或细胞(其可包括微颗粒、粒细胞、红血球、血小板、白血球(包含淋巴球))。该第二群特定颗粒包括该种特定干细胞,但是几乎不含有微颗粒、粒细胞、红血球、血小板和白血球(包含淋巴球)。(该第一群特定颗粒和该第三群特定颗粒的)该给定门坎尺寸可以是0.5微米、0.8微米、1微米、1.5微米、2微米或3微米。在该第二群特定颗粒中,颗粒的尺寸可以是大于或实质上等于1微米、1.1微米、1.5微米、2微米、2.1微米或3微米。在该第一群特定颗粒、该第二群特定颗粒和该第三群特定颗粒中,每一群特定颗粒可以是或可以包括一群细胞。该种特定干细胞可以是本发明在“干细胞定义”里所提及的任何一种多功能干细胞、任何一种多潜能干细胞或任何一种先驱干细胞。该组织样本可以是一周边血液样本。该个体可以是一人类或是一动物。对于该第二功能而言,处理该组织样本可包括下列步骤:将一红血球凝集剂和该组织样本进行混合,并在将该红血球凝集剂和该组织样本进行混合之后,使来自该组织样本的颗粒重新悬浮于一溶液或培养液中。该溶液或培养液可以是不含有钙与镁的含盐溶液或是含有牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。根据该组织样本制备成该测试样本的方式,可以计算出或是获得该体积改变(或样本准备)系数。例如,将10毫升的该组织样本处理成3毫升的该测试样本,则该体积改变(或样本准备)系数为3/10(其为该测试样本的体积与该组织样本的体积的比率)。
在一范例中,该单一系统、装置、仪器或工具可以提供或执行该第三和第四功能。在另一范例中,该单一系统、装置、仪器或工具可以提供或执行该第二、第三和第四功能。在另一范例中,该单一系统、装置、仪器或工具可以提供或执行该第三、第四、第五、第六和第八功能。在另一范例中,该单一系统、装置、仪器或工具可以提供或执行该第三至第八功能。在另一范例中,该单一系统、装置、仪器或工具可以提供或执行该第一至第八功能。
概括地说,该单一系统、装置、仪器或工具所提供的该第三功能是用来获得尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒(其包括细胞)在该测试样本(其由该组织样本(例如周边血液)经过处理而成)中每单位体积(如每毫升)的数量,而该单一系统、装置、仪器或工具所提供的该第四和第五功能则是用来获得该种特定干细胞在尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒(其包括细胞)中所占的百分比(其与该测试样本有关)。将上述获得的尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒在该测试样本中每单位体积的数量乘以上述获得的该种特定干细胞在尺寸大于或等于该给定门坎尺寸的颗粒中所占的百分比,可以获得该种特定干细胞在该测试样本中每单位体积(如每毫升)的数量。将该种特定干细胞在该测试样本中每单位体积的数量乘以该体积改变(或样本准备)系数,可以获得该种特定干细胞在该组织样本(如上述的周边血液)中每单位体积(如每毫升)的数量。因此,结合上述的细胞计数数据(其由该单一系统、装置、仪器或工具的该第三功能提供)和上述的该种特定干细胞的百分比(其由该单一系统、装置、仪器或工具的该第四与第五功能提供),可以更准确地获得该种特定干细胞在周边血液中的数量。
以上所述是通过实施例说明本发明的特点,其目的在使本领域技术人员能了解本发明的内容并据以实施,而非限定本发明的专利范围,所以凡其他未脱离本发明所揭示的精神所完成的等效修饰或修改,仍应包含在以下所述的申请专利范围中。
Claims (12)
1.一种获得干细胞数据的方法,其包括下列步骤:
(a)处理从一个体获得的一组织样本,以获得一测试样本;
(b)计算该测试样本的第一部分中第一群颗粒的数量,进而获得第一数据;
(c)计算该测试样本的第二部分中第二群颗粒里的一种干细胞的数量,进而获得第二数据;以及
(d)根据该第一数据和该第二数据,获得第三数据。
2.如权利要求1所述的方法,其特征是步骤(b)包括利用一血球计数器计算该测试样本的该第一部分中该第一群颗粒的数量。
3.如权利要求1所述的方法,其特征是步骤(c)包括利用一流式细胞仪计算该测试样本的该第二部分中该第二群颗粒里的该种干细胞的数量。
4.如权利要求1所述的方法,其特征是该种干细胞包括一种多功能干细胞。
5.如权利要求1所述的方法,其特征是该种干细胞包括一种多潜能干细胞。
6.如权利要求1所述的方法,其特征是该组织样本包括该个体的一周边血液。
7.如权利要求1所述的方法,其特征是该第一群颗粒的尺寸和该第二群颗粒的尺寸是大于或实质上等于一门坎尺寸。
8.如权利要求7所述的方法,其特征是该门坎尺寸为1微米。
9.如权利要求1所述的方法,其特征是该第一数据包括该第一群颗粒在该测试样本中每单位体积的数量。
10.如权利要求1所述的方法,其特征是该第二数据包括该种干细胞的数量占该第二群颗粒的数量的百分比。
11.如权利要求1所述的方法,其特征是该第三数据包括该种干细胞在该组织样本中每单位体积的数量。
12.如权利要求1所述的方法,其特征是该第二群颗粒包括白血球、红血球、血小板以及粒细胞。
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Application publication date: 20141224 |
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