CN104232513A - 一种动胶菌样申氏菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种动胶菌样申氏菌，其分类命名为动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No.9280，保藏日期为2014年06月09日。本发明还提供了该菌种的应用。本发明动胶菌样申氏菌B230对铁皮石斛白绢病菌、铁皮石斛根腐病、铁皮石斛灰霉病、杨树大斑溃疡病等多种病原真菌具有很好的抑制作用，该拮抗细菌对其他植物病害也有很好的防治效果；具有繁殖速度快；能够人工培养，易于操作，便于生产应用；抗逆能力强等优点，尤其是对真菌引起的铁皮石斛白绢病的防治具有重要意义；培养条件简单、容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明属于植物保护领域，尤其涉及一种动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230及其在防治铁皮石斛白绢病中的应用。
背景技术
近年来，随着公众对食品和环境中化学农药安全性的普遍关注，以及一些危险性化学农药的禁用，促使人们寻求安全有效的植物病害控制新途径，利用有益微生物防治植物病害日趋受到重视。它是向被打破了的植物自然生态系中引入对植物有益的外源拮抗菌、或通过调节环境促使自然的有益微生物群体增长，并表现出生防活性，通过微生物之间的相互作用达到防病目的。目前，植物病害的生防已成为各国研究重点。
自然界潜在的微生物资源种类丰富，在微生物农药的产品开发方面有明显优势，因此世界各国都投入大量的人力和财力，研究、开发具有自主知识产权的新型微生物农药，并以此带动其他高科技产业的全面发展。我国也把微生物农药的研制和开发列为国家重点科技攻关和高新技术发展计划。
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)属国家二级保护植物，是中药石斛中珍贵品种之一，因表皮呈铁绿色而得名；其主要成分具有独特的保健与药用价值，被道家养生经典著作《道臧》誉为“中华九大仙草之首”。在我国，自然分布于浙江、安徽、福建、湖南、广西、四川和云南等地人迹稀少的、悬崖峭壁背阴处的石缝里，终年饱受云雾雨露滋润，生长期为3-5年，自然产量极少。
但是，尽十多年来，随着铁皮石斛人工栽培面积不断扩大，铁皮石斛白绢病(Sclerotium delfphninii)发生较普遍，造成根部腐烂，叶片变黄、脱落，最后导致全株死亡，经济损失巨大，为此，铁皮石斛白绢病的防治具有现实意义。
从保护生态环境和食品安全的角度出发，铁皮石斛需要有机栽培；因此研制对人体安全的微生物制剂来控制铁皮石斛病害，达到安全食用的目的，也符合生物农药产业的发展。
发明内容
发明目的：为了克服现有技术的不足，本发明的第一目的在于提供一种对铁皮石斛白绢病菌具有拮抗作用的动胶菌样申氏菌。
本发明的第二目的在于提供动胶菌样申氏菌在防治铁皮石斛白绢病中的应用。
技术方案：为了解决上述第一目的，本发明所采用的技术方案为：一种动胶菌样申氏菌，其分类命名为动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)保藏，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码为100101，其保藏编号为：CGMCC No.9280，保藏日期为2014年06月09日。
为了解决上述的第二目的，本发明所采用的技术方案为：所述的动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230在防治铁皮石斛白绢病中的应用。
具体应用为：将动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230接种于液体发酵培养基中，在28℃-35℃下发酵培养48-72小时，得到的发酵液作为防治铁皮石斛白绢病菌的菌剂。
本发明中所述发酵培养基的配方为：1000mL蒸馏水，牛肉膏2-5g，蛋白胨5-10g，氯化钠4-5g，pH6.5-7.5。
本发明中所述的动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230的形态学和生理活性特征如下：
所述动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230在牛肉膏蛋白胨培养基平板上菌落较大，浅黄色，表面隆起，菌落有波纹，边缘较规则，菌体杆状，两端钝圆，大小为1.90-5.11×0.49-0.71μm，平均3.32×0.58μm；芽孢两端生，椭圆形，大小为0.64-0.92×0.51-0.66μm，平均0.70×0.55μm。
革兰氏阴性杆菌，好氧；在固体培养基中呈黄褐色、表面光滑的圆形小菌落；在液体培养基中有自絮凝现象；对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素有抗性，对氯霉素、四环素、头孢敏感。
动胶菌样申氏菌的16SrDNA序列如SEQ ID No.1所示。将所测16SrDNA序列通过BLAST比对，鉴定为动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点是：
(1)动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对多种植物病原菌具有抑制作用，在拮抗细菌对植物病害生物防治中起到非常重要的作用，例如种类和数量众多；对病原菌的作用方式多样化；繁殖速度快；能够人工培养，易于操作，便于生产应用；抗逆能力强等优点，尤其是对真菌引起的铁皮石斛白绢病、铁皮石斛根腐病Fusarium proliferatum)、铁皮石斛灰霉病的防治效果佳。
(2)动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230培养条件简单、容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
附图说明
图1a为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230的形态图；
图1b为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230芽孢形态图(在两端折光体)；
图2a为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛白绢病菌(Sclerotium delfphninii)的抑制作用；
图2b为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛根腐病菌(Fusarium proliferatum)的抑制作用；
图2c为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛灰霉病菌(Botrytis cinerea)的抑制作用；
图2d为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对草莓根腐病菌(Fusarium oxsporum)的抑制作用；
图2e为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对杨树大斑病菌(Dothichiza populea)的抑制作用；
图2f为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对小麦赤霉病菌(Fusarium asiaticum)的抑制作用；
图3a为本发明中采用动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛白绢病的防治试验。
图3b为本发明中未采用动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230菌液处理铁皮石斛(对照)。
具体实施方式
下面结合实验例详细阐述本发明动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230的应用。
实验例1：动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛白绢病菌(Sclerotium delfphninii)、铁皮石斛根腐病菌(Fusarium proliferatum)、铁皮石斛灰霉菌(Botrytis cinerea)、草莓根腐病(Fusarium oxsporum)、杨树大斑病菌(Dothichiza populea)、 小麦赤霉病菌(Fusarium asiaticum)的平板抑菌作用。
将用LB斜面活化的动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230菌株划线接种于90mm PDA平板一侧，再将铁皮石斛灰霉菌、铁皮石斛根腐病菌、铁皮石斛白绢病菌、草莓根腐病、小麦赤霉病菌和杨树大斑病菌的PDA平板培养物用直径5mm打孔器打取同质同量的菌块，接种于平板另一侧。30±1℃培养15天和30天，观察抑菌能力，并记录抑制带的宽度(如表1)，实验效果如图2a至图2f所示。试验结果表明，动胶菌样申氏菌B230对6种病原菌均有较好的拮抗作用，以占据培养皿的直径判断抑制效果，用B230细菌的PDA圆块作为对照(表2)。
表1 B230对铁皮石斛白绢病菌等6种其他病原菌15天和30天的抑制作用
注：表1中的数字是取5个PDA平板抑制带的平均值
实验例2：动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230代谢产物对铁皮石斛白绢病菌(Sclerotium delfphninii)、铁皮石斛根腐病菌(Fusarium proliferatum)、铁皮石斛灰霉菌(Botrytis cinerea)、草莓根腐病(Fusarium oxsporum)、杨树大斑病菌(Dothichiza populea)、小麦赤霉病菌(Fusarium asiaticum)的平板抑菌作用。
培养3天的动胶菌样申氏菌B230的发酵液用细菌滤器过滤，细菌滤器的滤膜孔径为0.25μm；将6种植物病原真菌的90mm的PDA平板培养物用直径5mm的打孔器打取同质同量的菌块，接种于PDA平板一侧；再将PDA平板另一侧用直径5mm的打孔器打取同质同量的圆块，并将圆块取出；再将过滤后的动胶菌样申氏菌B230的100μL无菌滤液接于 PDA平板另一侧空洞中，30±1℃培养15天和30天，观察B230的抑菌效果。以不接种B230的为对照，待对照菌丝长满平板后，观察拮抗活性(见表2)。试验结果表明，动胶菌样申氏菌B230代谢产物对6种病原菌均有强拮抗作用。
表2 B230发酵液对铁皮石斛白绢病菌等6种其他病原菌15天和30天的抑制作用
注：表1中的数字是取5个PDA平板抑制带的平均值
图2a动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛白绢病菌(Sclerotium delfphninii)的抑制作用；
图2b动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛根腐病菌(Fusarium proliferatum)的抑制作用；
图2c为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛灰霉菌(Botrytis cinerea)的抑制作用；
图2d为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对草莓根腐病(Fusarium oxsporum)的抑制作用；
图2e为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对杨树大斑病菌(Dothichiza populea)的抑制作用；
图2f为本发明中动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对小麦赤霉病菌(Fusarium asiaticum)的抑制作用。
实验例3：验证动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛灰霉病菌 是否有抑制作用的试验。
1、实验设备
超净工作台、PRX-250A型智能人工气候箱、培英牌DHZ-DA TCYQ恒温振荡器。
2、实验原理
铁皮石斛白绢病主要为害根，造成植株枯黄，严重时会死亡。在铁皮石斛栽培前和栽培后(生长期间)使用，使B230黏附在根上继续生长繁殖，产生代谢产物，从而抑制铁皮石斛白绢病菌的生长。
方法有2种，在铁皮石斛栽培前用胶菌样申氏菌B230菌剂蘸根，使B230菌体粘附在根上；2种使用方法最终的目的都是让
3、实验方法：
1)动胶菌样申氏菌B230菌液的培养：将动胶菌样申氏菌B230接种到含有500mL的LB培养基的三角瓶中，120转，35℃培养60小时。
2)菌剂使用：①在铁皮石斛栽培前用胶菌样申氏菌B230菌剂蘸根，使B230菌体粘附在根上。②栽培后(生长期间)，如果发生白绢病用B230菌剂浇灌根部，使B230菌体到达根部，并附着在根上。
3)对照：用无菌水对铁皮石斛蘸根作为对照。
4)拮抗实验：将步骤2)与步骤3)中用B230处理和对照铁皮石斛植株进行观察，10周的观察结果如图3a至图3b所示
4.实验结果
结果证明，与对照相比，用动胶菌样申氏菌B230菌液处理的铁皮石斛植株发病率低，防治效果可达75％以上。
下面是本发明的具体实施例
实施例1：动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230菌剂的制备方法：将动胶菌样申氏菌B230接种于发酵培养基中，pH6.5，500mL三角瓶中装液量为300mL，35℃，摇床转速120转/分，48小时，得到的发酵液即为防治铁皮石斛白绢病的原菌液。
其中发酵培养基的配方为：1000mL蒸馏水，牛肉膏2g，蛋白胨5g，氯化钠4g，pH6.5。
实施例2：动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230菌剂的制备方法：将动胶 菌样申氏菌B230接种于发酵培养基中，pH7.5，500mL三角瓶中装液量为300mL，28℃，摇床转速160转/分，72小时，得到的发酵液即为防治铁皮石斛白绢病的原菌液。
其中发酵培养基的配方为：1000mL蒸馏水，牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，pH7.5。
实施例3：动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)B230菌剂的制备方法：将动胶菌样申氏菌B230接种于发酵培养基中，pH7，500mL三角瓶中装液量为300mL，30℃，摇床转速150转/分，55小时，得到的发酵液即为防治铁皮石斛白绢病的原菌液。
其中发酵培养基的配方为：1000mL蒸馏水，牛肉膏3g，蛋白胨8g，氯化钠5g，pH 7.0。
Claims (9)
1.一种动胶菌样申氏菌，其分类命名为动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.9280，保藏日期为2014年06月09日。
2.权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治铁皮石斛白绢病中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)接种于发酵培养基中，在28℃-35℃下发酵培养48-72小时，得到的发酵液作为防治铁皮石斛白绢病菌的菌剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述发酵培养基的配方为：1000mL蒸馏水，牛肉膏2-5g，蛋白胨5-10g，氯化钠4-5g，pH6.5-7.5。
5.权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治铁皮石斛根腐病中的应用。
6.权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治铁皮石斛灰霉病中的应用。
7.权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治草莓根腐病中的应用。
8.权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治杨树大斑病中的应用。
9.权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治小麦赤霉病中的应用。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5091376A (en) * | 1986-07-28 | 1992-02-25 | Massachusetts Institute Of Technology | Non-capsule exopolysaccharide from Zoogloea ramigera |
| CN101255403A (zh) * | 2007-12-26 | 2008-09-03 | 北京大学 | 一株吡啶降解菌及其应用 |
| CN103087958A (zh) * | 2013-01-28 | 2013-05-08 | 郑州大学 | 一株吡啶降解菌及其应用 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5091376A (en) * | 1986-07-28 | 1992-02-25 | Massachusetts Institute Of Technology | Non-capsule exopolysaccharide from Zoogloea ramigera |
| CN101255403A (zh) * | 2007-12-26 | 2008-09-03 | 北京大学 | 一株吡啶降解菌及其应用 |
| CN103087958A (zh) * | 2013-01-28 | 2013-05-08 | 郑州大学 | 一株吡啶降解菌及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BYUNG-HYUK KIM 等: "Role of Rhizobium, a plant growth promoting bacterium, in enhancing algal biomass through mutualistic interaction", 《BIOMASS AND BIOENERGY》 * |
| 孙庆华, 等: "Shinella zoogloeoides BC026对吡啶的降解特性研究", 《环境科学》 * |
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