发明内容
针对现有技术存在的上述问题,本发明提供了一种土壤改良剂及其使用方法,该土壤改良剂制作简单,土壤改进效果明显,可有效改善土壤受污染状况。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种土壤改良剂,所述土壤改良剂的制作原料包括竹子干细胞、竹子精华溶液、莫兰或印茄干细胞、莫兰或印茄精华溶液、布袋莲或浮萍干细胞、布袋莲或浮萍精华溶液、攀藤寄生植物干细胞、攀藤寄生植物精华溶液、棕榈树种子精华溶液以及发酵后的牛奶,所述制作原料按照如下步骤进行加工:
(1)将质量含量为5-10%的棕榈树种子精华溶液200份、质量含量为5-10%的竹子精华溶液250份以及竹子干细胞50份混合后,然后加入适量蒸馏水并搅拌均匀,35-40℃下发酵7-8天;
(2)在步骤(1)得到发酵混合物中再次混合质量含量为5-10%的莫兰或印茄精华溶液200份以及莫兰或印茄干细胞50份,加入适量蒸馏水并搅拌均匀,35-40℃下发酵7-9天;
(3)将质量含量为5-10%的布袋莲或浮萍精华溶液90份以及布袋莲或浮萍干细胞50份加入步骤(2)得到的混合物中,再次加入适量蒸馏水并搅拌均匀,35-40℃下发酵7-9天;
(4)将质量含量为5-10%的攀藤寄生植物精华溶液50份以及攀藤寄生植物干细胞10份加入步骤(3)得到的混合物中,再次加入适量蒸馏水并搅拌均匀,30-35℃下发酵6-8天;
(5)将已制得的发酵后的牛奶50份加入步骤(4)得到的混合物中,加入适量蒸馏水并搅拌均匀,30-35℃下发酵7天,最终得到的发酵产物即所述土壤改良剂。
在一种优选实施方式中,所述竹子干细胞的提取方法包括如下步骤:
(1)提取竹子干细胞:选择生长状况良好的竹子的树干、枝干,用无菌蒸馏水冲洗10分钟,洗净后,将竹子的树干、枝干首先切割成长度10-20厘米的小块,然后将整理后的竹子原料放入在搅拌设备中粉碎成细末;
(2)将步骤(1)中粉碎制得的竹子细末原料,放入多个盛有固态培养基的培养器皿中,在受控暗室内培养,培养温度25±1度;
(3)形成层细胞的诱导:在整个培养过程中保持25±1摄氏度的恒温,培养器皿外空间湿度保持在86±1左右,培养20-30天后,竹子内部组织的细胞系增量放大,形成层细胞系与韧皮组织分离,细胞系组织有大量的液泡存在,并且接触后易碎;
(4)将步骤(3)中形成层细胞群体用接种铲轻轻将其移入盛有液态培养基的培养器皿中,在暗室中,用旋转摇床,以100rpm、25±1度下培养,培养时间设定为20天,使液态培养基中的干细胞充分生长,在生长期内始终保持极高的活力;
(5)竹子干细胞的提取:首先,将培养液细胞系通过分子质量截留值4万的中空纤维超滤柱进行超滤,然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌3小时,再进行经旋转式真空蒸发器,间接加热80度进行旋转吸空蒸发,浓缩至小于原体液5分之1时取出,在放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥,30小时后,在含水分小于3%以下时取出,粉碎100目,装袋收藏备用。
在一种优选实施方式中,所述莫兰或印茄干细胞的提取方法包括如下步骤:
(1)提取莫兰或印茄树木枝干的干细胞:选择生长状况良好的莫兰或印茄的树干,用无菌蒸馏水冲洗10分钟,洗净后,将其切割成边长小于20厘米的方块,然后将所述方块放入在搅拌设备中粉碎成细末;
(2)将步骤(1)中粉碎制得的树干细末原料,放入多个盛有固态培养基的培养器皿中,在受控暗室内培养,培养温度25±1度;
(3)形成层细胞的诱导:在整个培养过程中保持35±1度的恒温,培养器皿外空间湿度保持在90±1左右,培养15-25天后,树干内部组织的细胞系增量放大,形成层细胞系与韧皮组织分离,细胞系组织有大量的液泡存在,并且接触后易碎;
(4)将形成层细胞群体用接种铲轻轻将其移入盛有液态培养基的培养器皿中,在暗室中,用旋转摇床,以100rpm、35±1度下培养,培养时间设定为16天,使液态培养基中的干细胞充分生长,在生长期内始终保持极高的活力;
(5)莫兰或印茄干细胞的提取:首先,将培养液细胞系通过分子质量截留值4万的中空纤维超滤柱进行超滤,然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌3小时,再进行经旋转式真空蒸发器,间接加热80度进行旋转吸空蒸发,浓缩至小于原体液5分之1时取出,再放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥,25-30小时后,在含水分小于3%以下时取出,粉碎100目,装袋收藏备用。
在一种优选实施方式中,所述固态培养基成分的组成为:硝酸钾1010mg/L,硫酸镁120mg/L,硫酸锰9.5mg/L,硫酸锌2mg/L,氯化钙113mg/L,硫酸铜0.023mg/L,碘化钾0.72mg/L,磷酸二氢钠130mg/L,氯化钴0.023mg/L,硼酸3.1mg/L,钼酸钠0.24mg/L,乙二胺四乙酸铁钠盐37mg/L;肌醇452mg/L,盐酸噻胺(VB1)21mg/L,吡哆醇(VB6)1.9mg/L,尼克酸1.9mg/L,L-抗坏血酸110mg/L,柠檬酸114mg/L;光氨酸170mg/L,酪蛋白水解物510mg/L;蔗糖30.100mg/L;2,4-D2.5mg/L,赤霉素0.6mg/L;琼脂39.000mg/L;活性碳3000mg/L;磁化水1升。
在一种优选实施方式中,硝酸钾1010mg/L,硫酸镁120mg/L,硫酸锰9.5mg/L,硫酸锌2mg/L,氯化钙113mg/L,硫酸铜0.023mg/L,碘化钾0.72mg/L,磷酸二氢钠130mg/L,氯化钴0.023mg/L,硼酸3mg/L,钼酸钠0.24mg/L,乙二胺四乙酸铁钠盐37mg/L,肌醇200mg/L,盐酸噻胺(VB1)21mg/L,吡哆醇(VB6)1.9mg/L,尼克酸1.9mg/L,L-抗坏血酸110mg/L,柠檬酸148mg/L,2,4-D2.5mg/L,赤霉素0.1mg/L,天冬氨酸134mg/L,精氨酸180mg/L,脯氨酸118mg/L,甘氨酸60mg/L,色氨酸80mg/L,蔗糖21.000mg/L,麦饭石2000mg/L,锗石2000mg/L,磁化水1升。
在一种优选实施方式中,布袋莲或浮萍干细胞的提取方法包括如下步骤:
(1)将布袋莲或浮萍用无菌水冲洗10分钟,洗净;
(2)制备固态培养基:硝酸钾2500mg/L,硫酸镁122mg/L,硫酸锰11mg/L,硫酸锌2.5mg/L,硫酸铜0.025mg/L,硫酸胺135mg/L;氯化钙112mg/L,碘化钾0.7mg/L,氯化钴0.025mg/L,磷酸二氢钠132mg/L,硼酸2.6mg/L,钼酸钠0.23mg/L,烟酸2.0mg/L,吡哆醇2.1mg/L,L-抗坏血酸53mg/L,柠檬酸78mg/L,L-天冬氨酸140mg/L,L-精氨酸180mg/L,甘氨酸75mg/L,脯氨酸120mg/L;a-萘乙酸2.2mg;蔗糖10.200mg/L;活性炭500mg/;琼脂3800mg/L;磁化水0.7升;
(3)形成层分离培养:将水生植物用小刀切碎后放进固态培养基中,在受控暗室内培养15天,培养温度25±1℃;随后将形成层细胞系用接种铲轻轻将其移入另一同样培养基培养器皿内,在放大培养20天,最后将其放大培养的细胞系群体移入液态培养基中,在暗室内用摇床旋转培养,在160rpm、25±1℃环境中培养,培养时间设定为20天;
所述液态培养基的成分为:硫酸钾995mg/L,磷酸氢钾160mg/L,硫酸镁185mg/L,硫酸锌9mg/L,硫酸锰22mg/L,硫酸铜0.25mg/L,氯化钙70mg/L,硝酸钙480mg/L,钼酸钠0.26mg/L,硼酸6.5mg/L,硝酸胺420mg/L,乙二胺四乙酸铁钠盐38mg/L,肌醇230mg/L,硫胺素22mg/L,烟酸2mg/L,吡哆醇2.5mg/L,L-抗坏血酸65mg/L,柠檬酸72mg/L,L-天冬氨酸140mg/L,L-精氨酸180mg/L,甘氨酸80mg/L,脯氨酸120mg/L,a-萘乙酸2.2mg/L;蔗糖31000mg/L;麦饭石颗粒60000mg/L,锗石颗粒60000mg/L,硒矿石颗粒主90000mg/L;磁化水0.7升;
(4)布袋莲或浮萍干细胞的分离:将液态培养基用1um过滤器过滤,然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌2-3小时,在进行经旋转式真空蒸发器,间接加热60度进行旋转吸空蒸发,浓缩至小于原体液5分之1时取出,再放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥,20-22小时后,在含水分小于3%以下时取出,粉碎100目,装袋收藏备用。
在一种优选实施方式中,攀藤寄生植物干细胞的提取方法包括如下步骤:
(1)将攀藤寄生植物用无菌蒸馏水冲洗15分钟,洗净;
(2)固态培养基的制备:
固态培养基原料为:硝酸钾2510mg,硫酸胺136mg,硫酸镁123mg,硫酸锰10mg,硫酸锌2.5mg,硫酸铜0.026mg,氯化钙114mg,碘化钾0.7mg,氯化钴0.026mg,磷酸二氢钠131mg,硼酸2.8mg,钼酸钠0.26mg,乙二胺四乙酸铁钠盐37mg;肌醇210mg,硫胺素21mg,烟酸2.2mg,吡哆醇2.2mg,L-抗坏血酸52mg,柠檬酸74mg;L-天冬氨酸135mg,L-精氨酸176mg,甘氨酸76mg,脯氨酸116mg,α-萘乙酸2.2mg,蔗糖10.100mg,活性炭200mg,琼脂3.100mg,磁化水0.63升;
所述固态培养基的制备过程:将无机盐类各养分分别用20mL磁化水稀释,将维生素类合并放入50mL无菌磁化水中稀释,将氨基酸类合并放入50mL无菌磁化水中稀释,将生长素放入10mL无菌磁化水中稀释;然后将稀释后的无机盐类分别注入烧瓶磁化水中,边注入边搅拌,在将糖类、固化剂、活性炭放入,全部溶解后,封口,进行高压灭菌30分钟,降温取出后,在将稀释的维生素和氨基酸溶液、生长素溶液分别放入搅匀后,冷凝;
(3)形成层分离培养:将攀藤寄生植物的主干或叶子用刀切成1-2cm长的小段,移入固态培养基中,在受控的暗室内避光培养28天,培养温度25±1℃;培养28天后,将形成层细胞群体用接种勺或接种铲轻轻将其移入另一同样培养基器皿内在放大培养23天;
(4)将其放大培养的细胞系群体移入液态培养基中,在暗室中,用旋转摇床以100rpm,25±1℃培养,培养时间为20天;
其中,液态培养基的组成为:硫酸镁181mg,硫酸锰23mg,硫酸锌8.9mg,硫酸铜0.23mg,硝酸钙473mg,硝酸胺400mg,氯化钙60mg,碘化钾995mg,钼酸钠0.24mg,硼酸6mg,磷酸氢钠170mg,乙二胺四乙酸铁钠盐37mg,肌醇210mg,硫胺素21mg,烟酸2.2mg,吡哆醇2.2mg,L-抗坏血酸60mg,柠檬酸75mg;L-天冬氨酸135mg,L-精氨酸178mg,甘氨酸75mg,脯氨酸116mg,α-萘乙酸2mg,蔗糖30.100mg,麦饭石颗粒50000mg,锗石50000mg,磁化水1升;
(5)攀藤寄生植物干细胞的提取:将液态培养基用1.5um过滤器过滤,然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌2小时,再进行经旋转式真空蒸发器,间接加热65度进行旋转吸空蒸发,浓缩至小于原体液5分之1时取出,再放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥,20小时后,在含水分小于3%以下时取出,粉碎100目,装袋收藏备用。
在一种优选实施方式中,所述棕榈树种子精华溶液通过将颗粒饱满、质量良好的棕榈树种子在65-68℃的温度下蒸2-2.5个小时,然后用15000转/分的粉碎机粉碎,随后注入蒸馏水并发酵10-20天,发酵温度控制在35-40℃,然后经渣液分离器分离,随后经1um过滤器过滤,滤液间接加热65-85度进行旋转吸空蒸发,浓缩至矿物质含量为5-10%制得的溶液。
在一种优选实施方式中,所述竹子精华溶液是通过将竹子的主干、枝干和叶子燃烧后,注入蒸馏水并发酵14-16天,经1um过滤器过滤后间接加热65-85度进行旋转吸空蒸发,浓缩至矿物质含量为5-10%制得的溶液;所述莫兰、印茄精华溶液是通过将莫兰、印茄枝干用15000转/分的粉碎机将其粉碎后注入蒸馏水并发酵10-15天,然后经1um过滤器过滤后间接加热65-85度进行旋转吸空蒸发,浓缩至矿物质含量为5-10%制得的溶液;所述布袋莲或浮萍精华溶液是通过将布袋莲或浮萍用15000转/分的粉碎机将其粉碎后注入蒸馏水并发酵12-15天,然后经1um过滤器过滤后间接加热65-85度进行旋转吸空蒸发,浓缩至矿物质含量为5-10%制得的溶液;所述攀藤寄生植物精华溶液是通过将攀藤寄生植物用15000转/分的粉碎机将其粉碎后注入蒸馏水并发酵15-18天,然后经1um过滤器过滤,滤液间接加热65-85度进行旋转吸空蒸发,浓缩至矿物质含量为5-10%制得的溶液。
本发明还涉及一种所述的土壤改良剂的使用方法,包括如下步骤:
1.选择施用土壤并将土壤表面的杂草去除;
2.将土壤改良剂加水按照质量份数比1∶300进行稀释,然后均匀喷洒在土壤表面;
3.2-3天后翻土,然后隔7-8天后再次喷洒质量份数比1∶300加水稀释后的土壤改良剂溶液;
4.随后,每间隔7-8天后再次喷洒质量份数比1∶300加水稀释后的土壤改良剂溶液2-3次,土壤改良完成。
本发明的土壤改良剂制作简单,利用天然存在的竹子、热带雨林树木、水生植物和攀藤寄生植物等来进行制作,原料广泛而且天然无污染,避免对土壤的二次污染,制作过程简单,利于规模制作,降低成本,适于大规模应用。该土壤改良剂改进效果明显,可有效改善土壤受污染状况,对当前国内大量土地受污染的现状具有积极作用。
具体实施方式:
本发明中的土壤改良剂,制作原料包括竹子干细胞、竹子精华溶液、热带雨林树木如莫兰、印茄干细胞、热带雨林树木如莫兰、印茄精华溶液、水生植物如布袋莲或浮萍干细胞、水生植物如布袋莲或浮萍精华溶液、攀藤寄生植物干细胞、攀藤寄生植物精华溶液、棕榈树种子精华溶液以及牛奶等,该土壤改良剂的主要制作方法包括以下几个步骤:
(1)将质量含量为5-10%的棕榈树种子精华溶液200份、质量含量为5-10%的竹子精华溶液250份以及竹子干细胞50份混合后,然后加入适量蒸馏水并搅拌均匀,35-40℃下发酵7-8天。
(2)在步骤(1)得到发酵混合物中再次混合质量含量为5-10%的热带雨林树木如莫兰、印茄精华溶液200份以及热带雨林树木如莫兰、印茄干细胞50份,加入适量蒸馏水并搅拌均匀,35-40℃下发酵7-9天。
(3)将质量含量为5-10%的水生植物如布袋莲或浮萍精华溶液90份以及水生植物如布袋莲或浮萍干细胞50份加入步骤(2)得到的混合物中,再次加入适量蒸馏水并搅拌均匀,35-40℃下发酵7-9天。
(4)将质量含量为5-10%的攀藤寄生植物精华溶液50份以及攀藤寄生植物干细胞10份加入步骤(3)得到的混合物中,再次加入适量蒸馏水并搅拌均匀,30-35℃下发酵6-8天。
(5)将已制得的发酵后的牛奶50份加入步骤(4)得到的混合物中,加入适量蒸馏水并搅拌均匀,30-35℃下发酵7天,最终得到的发酵产物即本发明的土壤改良剂。
其中所述竹子、热带雨林树木如莫兰、印茄、水生植物如布袋莲或浮萍、攀藤寄生植物干细胞的提取方法为:
竹子干细胞的提取:
(1)提取竹子干细胞:首先,选择收集生长状况良好的竹子的树干、枝干或竹叶,用无菌蒸馏水冲洗10分钟,洗净后,将竹子的树干或枝干首先切割成长度10-20厘米的小块,然后将整理后的竹子原料放入在搅拌设备中粉碎成细末。
(2)将步骤(1)中粉碎制得的竹子细末原料,放入多个盛有固态培养基的培养器皿中,在受控暗室内培养,培养温度25±1度。
其中,固态培养基成分的组成为:
硝酸钾1010mg/L,硫酸镁120mg/L,硫酸锰9.5mg/L,硫酸锌2mg/L,氯化钙113mg/L,硫酸铜0.023mg/L,碘化钾0.72mg/L,磷酸二氢钠130mg/L,氯化钴0.023mg/L,硼酸3.1mg/L,钼酸钠0.24mg/L,乙二胺四乙酸铁钠盐37mg/L;肌醇452mg/L,盐酸噻胺(VB1)21mg/L,吡哆醇(VB6)1.9mg/L,尼克酸1.9mg/L,L-抗坏血酸110mg/L,柠檬酸114mg/L;光氨酸170mg/L,酪蛋白水解物510mg/L;蔗糖30.100mg/L;2,4-D2.5mg/L,赤霉素0.6mg/L;琼脂39.000mg/L;活性碳3000mg/L;磁化水1升。
(3)形成层细胞的诱导:在初始培养的4-5天内,可直观的观察到来自形成层细胞系的出现,并在14天后,通过去分化形成的无定形愈伤组织已开始从从内皮上下组织构成的形成层中被诱导。在整个培养过程中必须保持25±1度的恒温,培养器皿外空间湿度保持在86±1左右。培养20-30天后,竹子内部组织的细胞系增量放大,形成层细胞系与韧皮组织分离,细胞系组织有大量的液泡存在,并且接触后易碎。
(4)将形成层细胞群体用接种铲轻轻将其移入盛有液态培养基的培养器皿中,在暗室中,用旋转摇床,以100rpm、25±1度下培养,培养时间设定为20天,使液态培养基中的干细胞充分生长,在生长期内始终保持极高的活力。
通过在液态培养基中培养20天后,可以看到悬浮液培养时细胞系超过94%的细胞是以单细胞形式存在,而细胞系的形态特征存在大量的液泡,处在未分化状态,竹子干细胞已经充分分裂生长。通过观察发现,在液态培养基中使用小分子磁化活性水、添加了具有内含几十种天然微量元素的麦饭石含有锗元素的矿石对竹子干细胞的分裂和生长极为有效,小分子活性水能增强细胞活力,麦饭石、锗石中固含几十种天然的微量元素,经液流不间断的冲击而冲刷下来溶于培养液中,使培养后期的细胞系细胞群得到天然、安全和足够利用的微量元素的补充。
其中,液态培养基成分的组成:
硝酸钾1010mg/L,硫酸镁120mg/L,硫酸锰9.5mg/L,硫酸锌2mg/L,氯化钙113mg/L,硫酸铜0.023mg/L,碘化钾0.72mg/L,磷酸二氢钠130mg/L,氯化钴0.023mg/L,硼酸3mg/L,钼酸钠0.24mg/L,乙二胺四乙酸铁钠盐37mg/L,肌醇200mg/L,盐酸噻胺(VB1)21mg/L,吡哆醇(VB6)1.9mg/L,尼克酸1.9mg/L,L-抗坏血酸110mg/L,柠檬酸148mg/L,2,4-D2.5mg/L,赤霉素0.1mg/L,天冬氨酸134mg/L,精氨酸180mg/L,脯氨酸118mg/L,甘氨酸60mg/L,色氨酸80mg/L,蔗糖21.000mg/L,麦饭石2000mg/L,锗石2000mg/L,磁化水1升。
(5)竹子干细胞的提取:
首先,将培养液细胞系通过分子质量截留值4万的中空纤维超滤柱进行超滤,然后将过滤后的全部细胞、乙醇混合液经另一容器内快速搅拌3小时,在进行经旋转式真空蒸发器,间接加热80度进行旋转吸空蒸发,浓缩至小于原体液5分之一时取出,在放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥,30小时后,在含水分小于3%以下时取出,粉碎100目,装袋收藏备用,即成为制作完成的竹子干细胞原料。
之所以采用植物干细胞来制作有机肥料,是因为植物干细胞是由多种植物及有机物营养,源经独特工艺超强发酵和长期熟化而成的,无毒、无害、无污染的活性微生物有机液体,不含任何化学物质,不含改造基因物质。含有效活菌富有益微生物菌群,活性有机物质及多种微量元素。而且竹子干细胞具有抗病、重生的功效,利于作物生长。
热带雨林树木如莫兰、印茄干细胞的提取:
(1)提取树木枝干的干细胞:首先,选择收集生长状况良好的热带雨林树木的树干,用无菌蒸馏水冲洗10分钟,洗净后,将其数目切割成变长小于20厘米的方块,然后将所述方块放入在搅拌设备中粉碎成细末。
(2)将步骤(1)中粉碎制得的树干细末原料,放入多个盛有固态培养基的培养器皿中,在受控暗室内培养,培养温度25±1度。
其中,为了节约成本,简化工艺,固态培养基采用竹子干细胞提取过程中同样的培养基。
(3)形成层细胞的诱导:在初始培养的3-5天内,可观察到来自形成层细胞系的出现,并在15天后,通过去分化形成的无定形愈伤组织已开始从从内皮上下组织构成的形成层中被诱导。在整个培养过程中必须保持35±1度的恒温,培养器皿外空间湿度保持在90±1左右。培养15-25天后,树干内部组织的细胞系增量放大,形成层细胞系与韧皮组织分离,细胞系组织有大量的液泡存在,并且接触后易碎。
(4)将形成层细胞群体用接种铲轻轻将其移入盛有液态培养基的培养器皿中,在暗室中,用旋转摇床,以100rpm、35±1度下培养,培养时间设定为16天,使液态培养基中的干细胞充分生长,在生长期内始终保持极高的活力。
通过在液态培养基中培养16天后,可以看到悬浮液培养时细胞系超过91%的细胞是以单细胞形式存在,而细胞系的形态特征存在大量的液泡,处在未分化状态,树干干细胞已经充分分裂生长。
其中,液态培养基成分同样适用竹子干细胞培养中使用的液态培养基。
(5)热带雨林树木干细胞的提取:
首先,将培养液细胞系通过分子质量截留值4万的中空纤维超滤柱进行超滤,然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌3小时,在进行经旋转式真空蒸发器,间接加热80度进行旋转吸空蒸发,浓缩至小于原体液5分之一时取出,再放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥,25-30小时后,在含水分小于3%以下时取出,粉碎100目,装袋收藏备用,即成为制作完成的热带雨林树干干细胞原料。
热带雨林干细胞具有增加免疫力和自然抵抗力的功效。
水生植物如布袋莲或浮萍干细胞的提取:
(1)将水生植物用无菌水冲洗10分钟,洗净。
(2)制备固态培养基:硝酸钾2500mg/L,硫酸镁122mg/L,硫酸锰11mg/L,硫酸锌2.5mg/L,硫酸铜0.025mg/L,硫酸胺135mg/L。氯化钙112mg/L,碘化钾0.7mg/L,氯化钴0.025mg/L,磷酸二氢钠132mg/L,硼酸2.6mg/L,钼酸钠0.23mg/L,烟酸2.0mg/L,吡哆醇2.1mg/L,L-抗坏血酸53mg/L,柠檬酸78mg/L,L-天冬氨酸140mg/L,L-精氨酸180mg/L,甘氨酸75mg/L,脯氨酸120mg/L。a-萘乙酸2.2mg。蔗糖10.200mg/L。活性炭500mg/L。琼脂3800mg/L。磁化水0.7升。
(3)形成层分离培养:
将水生植物用小刀切碎后放进固态培养基中,在受控暗室内培养15天,培养温度25±1℃,随后将形成层细胞系用接种铲轻轻将其移入另一同样培养基培养器皿内,在放大培养20天,最后将其放大培养的细胞系群体移入液态培养基中,在暗室内用摇床旋转培养,在160rpm、25±1℃环境中培养,培养时间设定为20天。
所述液态培养基的成分为:硫酸钾995mg/L,磷酸氢钾160mg/L,硫酸镁185mg/L,硫酸锌9mg/L,硫酸锰22mg/L,硫酸铜0.25mg/L,氯化钙70mg/L,硝酸钙480mg/L,钼酸钠0.26mg/L,硼酸6.5mg/L,硝酸胺420mg/L,乙二胺四乙酸铁钠盐38mg/L,肌醇230mg/L,硫胺素22mg/L,烟酸2mg/L,吡哆醇2.5mg/L,L-抗坏血酸65mg/L,柠檬酸72mg/L,L-天冬氨酸140mg/L,L-精氨酸180mg/L,甘氨酸80mg/L,脯氨酸120mg/L,a-萘乙酸2.2mg/L。蔗糖31000mg/L。麦饭石颗粒60000mg/L,锗石颗粒60000mg/L,硒矿石颗粒主90000mg/L。磁化水0.7升。
(4)水生植物干细胞的分离:将液态培养基用1um过滤器过滤,然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌2-3小时,在进行经旋转式真空蒸发器,间接加热60度进行旋转吸空蒸发,浓缩至小于原体液5分之一时取出,再放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥,20-22小时后,在含水分小于3%以下时取出,粉碎100目,装袋收藏备用,即成为制作完成的水生植物干细胞原料。
水生植物干细胞可促进植物的快速生长。
攀藤寄生植物干细胞的提取:
(1)将攀藤寄生植物用无菌蒸馏水冲洗10分钟,洗净。
(2)固态培养基的制备:
固态培养基原料为:硝酸钾2510mg,硫酸胺136mg,硫酸镁123mg,硫酸锰10mg,硫酸锌2.5mg,硫酸铜0.026mg,氯化钙114mg,碘化钾0.7mg,氯化钴0.026mg,磷酸二氢钠131mg,硼酸2.8mg,钼酸钠0.26mg,乙二胺四乙酸铁钠盐37mg。肌醇210mg,硫胺素21mg,烟酸2.2mg,吡哆醇2.2mg,L-抗坏血酸52mg,柠檬酸74mg。L-天冬氨酸135mg,L-精氨酸176mg,甘氨酸76mg,脯氨酸116mg,α-萘乙酸2.2mg,蔗糖10.100mg,活性炭200mg,琼脂3.100mg,磁化水0.63升。
固态培养基的制备过程:将无机盐类各养分分别用20mL磁化水稀释,将维生素类合并放入50mL无菌磁化水中稀释,将氨基酸类合并放入50mL无菌磁化水中稀释,将生长素放入10mL无菌磁化水中稀释。然后将稀释后的无机盐类分别注入烧瓶磁化水中,边注入边搅拌,在将糖类、固化剂、活性炭放入,全部溶解后,封口,进行高压灭菌30分钟,降温取出后,在将稀释的维生素和氨基酸溶液、生长素溶液分别放入搅匀后,冷凝。
(3)形成层分离培养:将攀藤寄生植物的主干或叶子用刀切成1-2cm长的小段,移入固态培养基中,在受控的暗室内避光培养28天,培养温度25±1℃。培养28天后,将形成层细胞群体用接种勺或接种铲轻轻将其移入另一同样培养基器皿内在放大培养23天。
(4)将其放大培养的细胞系群体移入液态培养基中,在暗室中,用旋转摇床以100rpm,25±1℃培养,传代时间为20天。
其中,液态培养基的组成为:硫酸镁181mg,硫酸锰23mg,硫酸锌8.9mg,硫酸铜0.23mg,硝酸钙473mg,硝酸胺400mg,氯化钙60mg,碘化钾995mg,钼酸钠0.24mg,硼酸6mg,磷酸氢钠170mg,乙二胺四乙酸铁钠盐37mg,肌醇210mg,硫胺素21mg,烟酸2.2mg,吡哆醇2.2mg,L-抗坏血酸60mg,柠檬酸75mg。L-天冬氨酸135mg,L-精氨酸178mg,甘氨酸75mg,脯氨酸116mg,α-萘乙酸2mg,蔗糖30.100mg,麦饭石颗粒50000mg,锗石50000mg,磁化水1升。
(5)攀藤寄生植物干细胞的提取:将液态培养基用1.5um过滤器过滤,然后将过滤后的全部细胞混合液经另一容器内快速搅拌2小时,在进行经旋转式真空蒸发器,间接加热65度进行旋转吸空蒸发,浓缩至小于原体液5分之一时取出,再放入真空冷冻干燥机内真空冷冻干燥,20小时后,在含水分小于3%以下时取出,粉碎100目,装袋收藏备用,即成为制作完成的攀藤寄生植物干细胞原料。
藤寄生植物干细胞具有强生和快速成长的作用效果。
所述竹子、热带雨林树木如莫兰、印茄、水生植物如布袋莲或浮萍、攀藤寄生植物、棕榈树种子精华溶液的提取方法为:
竹子精华溶液的制备:
将竹子的主干、枝干和叶子燃烧后产生活性炭,注入蒸馏水并发酵14-16天,发酵温度控制在35-45℃,然后用渣液分离器分离,随后经1um过滤器过滤,滤液间接加热65-85度进行旋转吸空蒸发,浓缩至矿物质含量为5-10%蒸发完成,即为竹子精华溶液。
热带雨林树木如莫兰、印茄精华溶液的制备:
将热带雨林树木如莫兰、印茄切割成变长小于20厘米的方块,随后用15000转/分的粉碎机将其粉碎,随后注入蒸馏水并发酵10-15天,发酵温度控制在40-45℃,然后经渣液分离器分离,随后经1um过滤器过滤,滤液间接加热65-85度进行旋转吸空蒸发,浓缩至矿物质含量为5-10%蒸发完成,即为热带雨林树木精华溶液。
水生植物如布袋莲或浮萍精华溶液的制备:
将布袋莲或浮萍用15000转/分的粉碎机将其粉碎,随后注入蒸馏水并发酵12-15天,发酵温度控制在26-33℃,然后经渣液分离器分离,随后经1um过滤器过滤,滤液间接加热65-85度进行旋转吸空蒸发,浓缩至矿物质含量为5-10%蒸发完成,即为水生植物精华溶液。
攀藤寄生植物精华溶液的制备:
将攀藤寄生植物用15000转/分的粉碎机将其粉碎,随后注入蒸馏水并发酵15-18天,发酵温度控制在30-35℃,然后经渣液分离器分离,随后经1um过滤器过滤,滤液间接加热65-85度进行旋转吸空蒸发,浓缩至矿物质含量为5-10%蒸发完成,即为攀藤寄生植物精华溶液。
棕榈树种子精华溶液的制备:
选择颗粒饱满、质量良好的棕榈树种子,将棕榈树的种子在65-68℃的温度下蒸2-2.5个小时,然后用15000转/分的粉碎机粉碎,随后注入蒸馏水并发酵10-20天,发酵温度控制在35-40℃,然后经渣液分离器分离,随后经1um过滤器过滤,滤液间接加热65-85度进行旋转吸空蒸发,浓缩至矿物质含量为5-10%蒸发完成,即为棕榈树精华溶液。
牛奶25-30℃条件下发酵7天。
上述土壤改良剂的使用方法如下:
(5)选择施用土壤并将土壤表面的杂草去除;
(6)将土壤改良剂加水按照质量份数比1∶300进行稀释,然后均匀喷洒在土壤表面;
(7)2-3天后翻土,然后隔7-8天后再次喷洒质量份数比1∶300加水稀释后的土壤改良剂溶液;
(8)每间隔7-8天后再次喷洒质量份数比1∶300加水稀释后的土壤改良剂溶液2-3次,土壤改良完成。
实践中,选取相邻两块土壤,一块按照上述方法喷洒本发明的土壤改良剂,另一块不喷洒,经过对比试验后发现,喷洒过本发明的土壤改良剂的土壤,土壤中微生物群的繁殖功能得到明显改善,土壤酸碱值得到调整和平衡,同时中和土壤的酸性,为土壤中的微生物提供必需营养素以帮助它们成长,提高土壤的耕性及持水性,激活生物以增多数量与修复土壤中因长期使用化肥所产生的毒性,进而调整土壤中的生态系统,同时土地板结、农药残留情况、透气性等土壤状况均得到明显改善,与未经本发明的土壤改良剂改良的土壤相比,其植物产量平均增加三成以上,有效改善了土壤状况,适于广泛推广应用。
最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。