CN104230405A - 一种活性海藻提取液叶面肥制备方法 - Google Patents

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朱晶婷
姜华帅
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Abstract

本发明公开了一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,以天然海藻为原料在PH2-4的稀酸的溶液中磨碎匀浆;再加入纤维素酶和果胶酶进行酶解,收集滤液通过离心去除不容杂质,再进行超声波降解成小分子物质,之后浓缩调整PH值为5.0-7.0,再接种预先培养好的益生菌菌种常规发酵,发酵后的浆液即可作为活性海藻生物叶面肥产品,该叶面肥具内源植物生长物质如植物生长素、细胞分裂素、赤霉素,及植物可直接吸收用作养分的蛋白质氨基酸和其它一些游离氨基酸、肽类、核苷酸等;还有海藻多酚、黄酮类化合物、萜类化合物等,提高作为产量的同时,能增强植物的抗旱、抗寒、抗病虫害等抗逆能力。

Description

一种活性海藻提取液叶面肥制备方法
技术领域
本发明涉及一种肥料的制备方法,具体为一种活性海藻提取液叶面肥制备方法。
背景技术  
随着现代农业的发展,各种优质、高效新型肥料不断涌现,海藻肥料作为新型肥料的新秀,一经出现很快成为市场的新宠,海藻肥料以其营养全面、功效独特、天然无公害的特性和极高的性价比得以快速发展,被誉为继有机肥、化肥、生物肥之后的第4代肥料,而海藻液体叶面肥最大优点是产品有效成分的多样性,且均能被植物吸收利用。
目前世界上绝大部分厂家主要采用化学水解法生产海藻肥,该方法最大的劣势在于强碱高温会破坏海藻内源物质的活性,使诸多营养成分受到破坏,使用效果欠佳。因此,本专利用生物发酵法将构成海藻的大分子初步酶解,再结合超声降解将酶解后的大物质降解成小分子、水溶性的物质,最后添加益生菌发酵制得一种活性海藻提取液叶面肥,该叶面肥所含有效成分具多样性,且均能被植物吸收利用。
发明内容
针对现有技术中存在的问题,本发明目的在于在提供一种活性海藻提取液叶面肥制备方法。
本发明通过以下技术方案加以实现:
    所述一种活性海藻提取液叶面肥制备方法方法包括下述步骤:
   所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于由以下步骤组成:
    1)挑选剔除杂藻及异物的海藻,清洗,并在PH2-4的稀酸溶液中磨碎匀浆,得海藻匀浆原料;
    2)将海藻匀浆原料与蒸馏水、纤维素酶和果胶酶按质量比1:5-8:0.01-0.03:0.01-0.03混合搅拌均匀后,于40-50℃的水浴中加热2-4h;再升温至80℃持续30-60min,得酶解混合液;
    3)将步骤2)制得的酶解混合液冷却后过滤,滤渣水洗两次,合并滤液,在5000r/min的条件下离心15-20min,取上清液;
    4)将上清液在功率为150-250w的条件下进行超声波降解,超声时间为15-20min;
    5)将步骤4)处理过的上清液经减压蒸馏浓缩至原体的1/4-1/5,加碱调节PH值至5.0-7.0;
    6)向步骤5)处理过的上清液中接种预先培养好的益生菌菌种常规发酵,接种量为5%-7%,发酵后的发酵液即可作为活性海藻提取液叶面肥产品。
所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于步骤1)中所述海藻为巨藻、马尾藻、泡叶藻或红藻中的任一种。
所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于步骤1)中所述烯酸为硫酸、硝酸或醋酸中的任一种,海藻与烯酸的重量比为1:8-10。
   所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于步骤4)所述的超声波降解为间歇式工作,按工作1s间歇1s的方式循环进行。
   所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于步骤5)所述的碱为氨水、氢氧化钾、碳酸钾、氢氧化钙中的一种或几种。
   所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于步骤6)所述的益生菌为双歧杆菌和/ 或乳酸菌。
与现有技术相比,本发明具有以下优点:
1)本发明采用稀酸匀浆、离心处理,砷、铅、鉻等有害重金属离子得到祛除,产品里的有害金属元素的含量极低并符合欧盟标准;     2)经超声波降解,大分子物质降解成小分子、水溶性的物质,有利于植物吸收利用;
3)通过益生菌常规发酵,微生物菌体及其代谢物,能够刺激作物生长及代谢,降低病虫害的发生率;
4)原料来源稳定、价格低廉、生产工艺简单可行;
5)采用该方法制备的叶面肥可提供对植物生理过程有显著影响的内源植物生长物质,如植物生长素、细胞分裂素、赤霉素;还含有植物可直接吸收用利用的蛋白质氨基酸和其它一些游离氨基酸、肽类、核苷酸等;及海藻多酚、黄酮类化合物、萜类化合物等,该叶面肥在提高作物产量的同时,还能增强植物的抗旱、抗寒、抗病虫害等抗逆能力。
具体实施方式
 实施例1
    叶面肥的具体准备方法为:1)挑选剔除杂藻及异物的巨藻500g,清洗,并在PH4的4000g硫酸溶液中磨碎匀浆,得海藻匀浆原料;2)将海藻匀浆原料与蒸馏水、纤维素酶和果胶酶按质量比1:5:0.01:0.01的比例混合搅拌均匀后,于40℃的水浴中加热4h;再升温至80 ℃持续30min,得酶解混合液;3)待酶解混合液冷却后过滤,滤渣水洗两次,合并滤液,在5000r/min离心15min,取上清液;4)将将上清液在功率为150-250w的条件下超声降解15-20min,超声降解为间歇式工作,按工作1s间歇1s的方式循环进行;5)将超声处理过的上清液减压蒸馏浓缩至原体积的1/4,加氨水调节PH值为5.0;6)向调整PH值后的上清液中接种预先培养好的双歧杆菌常规发酵,接种量为5%,发酵后的发酵液即可作为活性海藻提取液叶面肥产品。
 实施例2
     叶面肥的具体准备方法为:1)挑选剔除杂藻及异物的马尾藻500g,清洗,并在PH2的4500g硝酸溶液中磨碎匀浆,得海藻匀浆原料;2)将海藻匀浆原料与蒸馏水、纤维素酶和果胶酶按质量比1:7:0.02:0.02的比例混合搅拌均匀后,于43℃的水浴中加热3h;再升温至80℃持续40min,得酶解混合液;3)待酶解混合液冷却后过滤,滤渣水洗两次,合并滤液,在5000r/min离心18min,取上清液;4)将将上清液在功率为150-250w的条件下超声降解15-20min,超声降解为间歇式工作,按工作1s间歇1s的方式循环进行;5)将超声处理过的上清液减压蒸馏浓缩至原体积的1/5,加氢氧化钾调节PH值为6.0;6)向调整PH值后的上清液中接种预先培养好的乳酸菌菌常规发酵,接种量为6%,发酵后的发酵液即可作为活性海藻提取液叶面肥产品。
 实施例3
      叶面肥的具体准备方法为:1)挑选剔除杂藻及异物的泡叶藻500g,清洗,并在PH3的5000g醋酸溶液中磨碎匀浆,得海藻匀浆原料;2)将海藻匀浆原料与蒸馏水、纤维素酶和果胶酶按质量比1:6.5:0.015:0.015的比例混合搅拌均匀后,于45℃的水浴中加热2.5h;再升温至80℃持续50min,得酶解混合液;3)待酶解混合液冷却后过滤,滤渣水洗两次,合并滤液,在5000r/min离心20min,取上清液;4)将将上清液在功率为150-250w的条件下超声降解15-20min,超声降解为间歇式工作,按工作1s间歇1s的方式循环进行;5)将超声处理过的上清液减压蒸馏浓缩至原体积的1/4,加碳酸钾调节PH值为7.0;6)向调整PH值后的上清液中接种预先培养好的乳酸菌菌和双歧杆菌常规发酵,接种量为6%,发酵后的发酵液即可作为活性海藻提取液叶面肥产品。
 实施例4
    叶面肥的具体准备方法为:1)挑选剔除杂藻及异物的红藻500g,清洗,并在PH3.5的4250g硝酸溶液中磨碎匀浆,得海藻匀浆原料;2)将海藻匀浆原料与蒸馏水、纤维素酶和果胶酶按质量比1:8:0.03:0.03的比例混合搅拌均匀后,于50℃的水浴中加热2h;再升温至80℃持续60min,得酶解混合液;3)待酶解混合液冷却后过滤,滤渣水洗两次,合并滤液,在5000r/min离心17min,取上清液;4)将将上清液在功率为150-250w的条件下超声降解15-20min,超声降解为间歇式工作,按工作1s间歇1s的方式循环进行;5)将超声处理过的上清液减压蒸馏浓缩至原体积的1/5,加氢氧化钙调节PH值为6.5;6)向调整PH值后的上清液中接种预先培养好的双歧杆菌常规发酵,接种量为6.5%,发酵后的发酵液即可作为活性海藻提取液叶面肥产品。
试验效果
    供试作物西红柿,品种为浙粉201,试验设常规对照(CK)和本发明一种活性海藻提取液叶面肥(A-1、A-2、A-3、A-4)5 个处理,A-1、A-2、A-3、A-4 分别是实施例1、2、3、4 制备的一种活性海藻提取液叶面肥,以上处理3次重复,随机排列,小区面积为1.0m *1.2m,每区12株番茄,栽培方式为高畦地膜覆盖,每畦2行,试验区两边设有保护行,架式为立架,后期摘心留四穗果。从6月10日开始进行定期累积测产,每个处理于第四穗果成熟时采混合鲜样6个,分析果实的品质。
    试验结果见表1,从表1可看出,使用本发明叶面肥的各处理西红柿前期的生长、发育与对照组相比均有显著差异。在定植((5月9日)后30d(6月8日)进行调查(每小区调查5株,3次重复,共调查15株),结果是施用海藻叶面肥料的西红柿比对照组植株平均增高3 -8cm,直径增粗0. 07-0. 16cm,平均座果率提高7. 49-15.83%。同时番茄施用海藻提取液叶面肥后,可以防止叶霉病的发生,且采用实施例3叶面肥配方,其各项效果均优于其他实施例配方的施用效果。
表1西红柿生长发育情况
处理 节间长(cm) 株高(cm) 茎粗(cm) 叶片数(枚) 座果率(%) 病害情况
CK 6.91 139 1.37 17 43.43 叶霉病严重
A-1 6.41 146 1.44 18 50.92
A-2 6.12 142 1.46 18 51.51 叶霉病轻微
A-3 5.98 147 1.53 19 59.26
A-4 5.89 145 1.49 19 56.51

Claims (6)

1.一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于由以下步骤组成:
    1)挑选剔除杂藻及异物的海藻,清洗,并在PH2-4的稀酸溶液中磨碎匀浆,得海藻匀浆原料;
    2)将海藻匀浆原料与蒸馏水、纤维素酶和果胶酶按质量比1:5-8:0.01-0.03:0.01-0.03混合搅拌均匀后,于40-50℃的水浴中加热2-4h;再升温至80℃持续30-60min,得酶解混合液;
    3)将步骤2)制得的酶解混合液冷却后过滤,滤渣水洗两次,合并滤液,在5000r/min的条件下离心15-20min,取上清液;
    4)将上清液在功率为150-250w的条件下进行超声波降解,超声时间为15-20min;
    5)将步骤4)处理过的上清液经减压蒸馏浓缩至原体的1/4-1/5,加碱调节PH值至5.0-7.0;
    6)向步骤5)处理过的上清液中接种预先培养好的益生菌菌种常规发酵,接种量为5%-7%,发酵后的发酵液即可作为活性海藻提取液叶面肥产品。
2.根据权利要求1所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于步骤1)中所述海藻为巨藻、马尾藻、泡叶藻或红藻中的任一种。
3.根据权利要求1所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于步骤1)中所述烯酸为硫酸、硝酸或醋酸中的任一种,海藻与烯酸的重量比为1:8-10。
4.    根据权利要求1所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于步骤4)所述的超声波降解为间歇式工作,按工作1s间歇1s的方式循环进行。
5.  根据权利要求1所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于步骤5)所述的碱为氨水、氢氧化钾、碳酸钾、氢氧化钙中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的一种活性海藻提取液叶面肥制备方法,其特征在于步骤6)所述的益生菌为双歧杆菌和/ 或乳酸菌。
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Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105622293A (zh) * 2016-02-01 2016-06-01 青岛海大生物集团有限公司 一种酶解发酵法制备抗盐碱专用海藻生物水溶肥料的方法
CN106167422A (zh) * 2016-07-08 2016-11-30 山东洁晶集团股份有限公司 一种复合海藻肥料的制备方法及其复合海藻肥料
CN106316507A (zh) * 2016-08-08 2017-01-11 刘佳明 一种安祖花专用叶面肥料
CN106318883A (zh) * 2016-08-08 2017-01-11 刘洛贤 一种茶树专用生物肥及其制备方法
CN106337029A (zh) * 2016-08-08 2017-01-18 刘佳明 一种蝴蝶兰花卉的营养剂
CN106365702A (zh) * 2016-08-08 2017-02-01 刘洛贤 一种果树液体生物肥及其制备方法
CN106365765A (zh) * 2016-08-08 2017-02-01 刘佳明 一种有机水溶的凤梨营养剂
CN107628888A (zh) * 2017-11-13 2018-01-26 华南农业大学 一种具有抗旱功能的海藻液体肥料及其制备方法与应用
CN107827544A (zh) * 2017-10-26 2018-03-23 安徽华联肥业有限公司 一种营养全面的褐藻发酵液基生物有机液态肥料的生产方法
CN107973623A (zh) * 2017-11-22 2018-05-01 南昌大学 多形式微藻生物肥及其制备方法
CN110577437A (zh) * 2019-09-10 2019-12-17 青岛明月蓝海生物科技有限公司 一种液态海藻微生物菌肥及其制备方法
CN111165517A (zh) * 2019-12-29 2020-05-19 山东劲脉植物细胞信息技术有限公司 一种天然有机结合无机的抗冻制剂及其生产方法
CN112479782A (zh) * 2021-01-15 2021-03-12 晟丰(烟台)农业科技有限公司 一种海藻肥及其制备方法
CN112573973A (zh) * 2020-12-25 2021-03-30 海城市盛世鸿翔有机肥制造有限公司 一种海藻酶解育苗肥料、其制备方法及应用
CN112592943A (zh) * 2021-01-15 2021-04-02 晟丰(烟台)农业科技有限公司 一种海藻液的提取方法
CN112811966A (zh) * 2021-03-02 2021-05-18 潍坊市丰邦生物科技有限公司 碱解海藻液及其制备方法
CN113956094A (zh) * 2021-11-12 2022-01-21 曲阜师范大学 一种含大蒜提取物的缓释复合海藻肥
CN116874321A (zh) * 2023-07-14 2023-10-13 广州优卡思农业技术有限公司 一种利用海藻制备海藻液体肥的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101836663A (zh) * 2010-04-08 2010-09-22 河北大学 一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法
CN102488253A (zh) * 2011-12-28 2012-06-13 青岛明月海洋科技有限公司 一种活性海藻提取物的制备方法
CN102491798A (zh) * 2011-11-23 2012-06-13 中化(烟台)作物营养有限公司 一种海藻有机肥及其制备工艺
CN102765999A (zh) * 2012-07-25 2012-11-07 北京雷力农用化学有限公司 一种海藻多糖改性尿素及其制备方法
CN102775235A (zh) * 2012-08-16 2012-11-14 北京雷力农用化学有限公司 一种藻朊高塔复混肥及其制备方法
CN103193525A (zh) * 2013-04-17 2013-07-10 领先生物农业股份有限公司 一种海藻液肥的生产方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101836663A (zh) * 2010-04-08 2010-09-22 河北大学 一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法
CN102491798A (zh) * 2011-11-23 2012-06-13 中化(烟台)作物营养有限公司 一种海藻有机肥及其制备工艺
CN102488253A (zh) * 2011-12-28 2012-06-13 青岛明月海洋科技有限公司 一种活性海藻提取物的制备方法
CN102765999A (zh) * 2012-07-25 2012-11-07 北京雷力农用化学有限公司 一种海藻多糖改性尿素及其制备方法
CN102775235A (zh) * 2012-08-16 2012-11-14 北京雷力农用化学有限公司 一种藻朊高塔复混肥及其制备方法
CN103193525A (zh) * 2013-04-17 2013-07-10 领先生物农业股份有限公司 一种海藻液肥的生产方法

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105622293A (zh) * 2016-02-01 2016-06-01 青岛海大生物集团有限公司 一种酶解发酵法制备抗盐碱专用海藻生物水溶肥料的方法
CN106167422A (zh) * 2016-07-08 2016-11-30 山东洁晶集团股份有限公司 一种复合海藻肥料的制备方法及其复合海藻肥料
CN106316507A (zh) * 2016-08-08 2017-01-11 刘佳明 一种安祖花专用叶面肥料
CN106318883A (zh) * 2016-08-08 2017-01-11 刘洛贤 一种茶树专用生物肥及其制备方法
CN106337029A (zh) * 2016-08-08 2017-01-18 刘佳明 一种蝴蝶兰花卉的营养剂
CN106365702A (zh) * 2016-08-08 2017-02-01 刘洛贤 一种果树液体生物肥及其制备方法
CN106365765A (zh) * 2016-08-08 2017-02-01 刘佳明 一种有机水溶的凤梨营养剂
CN107827544A (zh) * 2017-10-26 2018-03-23 安徽华联肥业有限公司 一种营养全面的褐藻发酵液基生物有机液态肥料的生产方法
CN107628888A (zh) * 2017-11-13 2018-01-26 华南农业大学 一种具有抗旱功能的海藻液体肥料及其制备方法与应用
CN107628888B (zh) * 2017-11-13 2021-03-16 华南农业大学 一种具有抗旱功能的海藻液体肥料及其制备方法与应用
CN107973623A (zh) * 2017-11-22 2018-05-01 南昌大学 多形式微藻生物肥及其制备方法
CN110577437A (zh) * 2019-09-10 2019-12-17 青岛明月蓝海生物科技有限公司 一种液态海藻微生物菌肥及其制备方法
CN111165517A (zh) * 2019-12-29 2020-05-19 山东劲脉植物细胞信息技术有限公司 一种天然有机结合无机的抗冻制剂及其生产方法
CN112573973A (zh) * 2020-12-25 2021-03-30 海城市盛世鸿翔有机肥制造有限公司 一种海藻酶解育苗肥料、其制备方法及应用
CN112479782A (zh) * 2021-01-15 2021-03-12 晟丰(烟台)农业科技有限公司 一种海藻肥及其制备方法
CN112592943A (zh) * 2021-01-15 2021-04-02 晟丰(烟台)农业科技有限公司 一种海藻液的提取方法
CN112811966A (zh) * 2021-03-02 2021-05-18 潍坊市丰邦生物科技有限公司 碱解海藻液及其制备方法
CN113956094A (zh) * 2021-11-12 2022-01-21 曲阜师范大学 一种含大蒜提取物的缓释复合海藻肥
CN116874321A (zh) * 2023-07-14 2023-10-13 广州优卡思农业技术有限公司 一种利用海藻制备海藻液体肥的方法

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