CN104225577B - 一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶及制备方法及与应用 - Google Patents

一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶及制备方法及与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种含有人成纤维细胞生长因子hFGF‑21及人表皮细胞生长因子hEGF组分的水凝胶，其针对真皮层和基底层进行修复愈合；本发明还公开一种含有人角质细胞生长因子hKGF‑2、人表皮细胞生长因子hEGF组分的水凝胶，其针对表皮层和角质层进行修复愈合。本发明还公开所述两种水凝胶的制备方法及应用。本发明针对皮肤不同层创面组织愈合机理进行优化，使配方修复成分对皮肤无刺激，无毒副作用，易于吸收，缩短愈合时间，安全见效快。

Description

一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶及制备方法及与应用
技术领域
本发明涉及生物制品技术领域，尤其是指一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶及制备方法及与应用。
背景技术
皮肤细胞生长因子，包括人成纤维细胞生长因子hFGF-21、人表皮细胞生长因子hEGF、人角质细胞生长因子hKGF-2等，是人体正常分泌的多肽，在皮肤组织细胞的生长、分化、再生和迁移中起作重要的生理作用，并已被广泛应用于皮肤损伤修复，如申请号200510036465.3公开一种重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法、200510009218.4公开重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法、200610112958.5公开重组人酸性成纤维细胞生长因子温敏型凝胶剂及其制备方法、201310020814.7公开胶原/纳米纤维素皮肤再生材料及其制备方法与应用，公开号为WO2007073704公开“USE OF A TOPICAL COMPOSITION CONTAINING EPIDERMAL GROWTHFACTOR(EGF)FOR DIABETIC FOOT AMPUTATION PREVENTION”等。
大量研究和临床试验证实，皮肤细胞生长因子对烧伤、外伤及各种慢性难愈合创面具有显著的促修复作用，并且安全、有效、无不良反应。人体的皮肤由真皮层、基底层、表皮层以及角质层四个部分构成。不同的皮肤细胞生长因子主要作用于皮肤的不同分层，例如人成纤维细胞生长因子hFGF-21主要作用于皮下组织与真皮层。
当皮肤受损时，利用伤口敷料来代替皮肤原有的功能，使其避免受到感染、脱水现象，能够较快促进伤口愈合、减少疼痛感，并能减少愈合后疤痕的形成。有别于传统辅料易与伤口产生结痂沾黏，水凝胶(Hydrogel)材料具有极佳的可载药性及缓释性，同时可降低温度、吸收渗液、避免细菌侵入引起感染并可防止与伤口的沾黏，因此非常适合作为烧烫伤、手术伤口、创伤敷料。将复合皮肤生长因子添加到水凝胶中，可更新受损皮肤并改善组织代谢，促进皮肤细胞的生长，使皮肤恢复到健康的结构和生理状态。
然而，目前市面上全都是单一配方的水凝胶产品，现有产品往往添加多种对皮肤有刺激性的辅料，而且，这类产品并未针对不同层皮肤修复机理进行优化，对于皮肤修复的时间较长，有鉴于此，本案由此产生。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶，针对皮肤不同层创面组织愈合机理进行优化，使配方修复成分对皮肤无刺激，无毒副作用，易于吸收，缩短愈合时间，安全见效快。
本发明的目的之二在于提供一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶制备方法。
本发明的目的之三在于提供一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶应用。
为达成上述目的，本发明的解决方案为：
一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶，由以下组分组成：人成纤维细胞生长因子hFGF-21 5000-10000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF20000-40000IU/g、尿囊素质量百分比0.2％-2.0％、保湿剂质量百分比1.0％-3.5％、稳定剂质量百分比1％-3.0％、透皮吸收剂质量百分比0.5％-3.0％、水凝基质胶质量百分比15％-25％、无菌缓冲液补足至1000ml。
所述保湿剂为质量百分比为1.0％-3.0％的有机植物甘油，或者质量百分比为0.05％-0.2％透明质酸。
所述稳定剂为质量百分比为1.0％-3.0％甘露醇。
所述透皮吸收剂为质量百分比为0.5％-2.5％薄荷醇，或者为质量百分比为0.05％-0.2％癸基甲基亚砜DCMS。
所述水凝胶基质为质量百分比为15％-25％的医药级泊洛沙姆407。
所述无菌缓冲液为pH6.2-pH6.8浓度为5mmol/L-20mmol/L的磷酸盐缓冲液。
所述双疗程复合细胞生长因子水凝胶制备方法，包括以下步骤：
一，将保湿剂质量百分比1.0％-3.5％、稳定剂质量百分比1.0％-3.0％、透皮吸收剂质量百分比0.5％-3.0％、水凝基质胶质量百分比15％-25％于4℃温度下用无菌缓冲液溶胀搅拌，之后在121℃高压灭菌20分钟，冷却；
二，将人成纤维细胞生长因子hFGF-21 5000-10000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF 20000-40000IU/g、尿囊素质量百分比0.2％-2.0％溶于无菌缓冲液中，用0.22um滤膜过滤除菌；
三，在无菌条件下，当步骤一得到的水凝胶冷却至4℃时，将步骤二得到的溶液与之加以混合搅拌均匀，分装于经过环氧乙烷消毒的软管即得。
所述双疗程复合细胞生长因子水凝胶应用于真皮层和基底层修复。
一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶，由以下组分组成：人角质细胞生长因子：hKGF-2 10000-20000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF20000-40000IU/g、尿囊素质量百分比0.5％-2.0％、保湿剂质量百分比1.0％-3.5％、稳定剂质量百分比0.5％-3.0％、水凝基质胶质量百分比15％-25％、无菌缓冲液补足至1000ml。
所述保湿剂为质量百分比为1.0％-3.0％的有机植物甘油，或者质量百分比为0.05％-0.2％透明质酸。
所述稳定剂为质量百分比为1.0％-3.0％甘露醇。
所述水凝胶基质为质量百分比为15％-25％的医药级泊洛沙姆407。
所述无菌缓冲液为pH6.2-pH6.8浓度为5mmol/L-20mmol/L的磷酸盐缓冲液。
所述双疗程复合细胞生长因子水凝胶制备方法，包括以下步骤；
一，将保湿剂质量百分比1.0％-3.5％、稳定剂质量百分比0.5％-3.0％、水凝基质胶质量百分比15％-25％于4℃温度下用无菌缓冲液溶胀搅拌，之后在121℃高压灭菌20分钟，冷却；
二，将人角质细胞生长因子hKGF-2 10000-20000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF20000-40000IU/g、尿囊素质量百分比0.5％-2.0％溶于无菌缓冲液中，用0.22um滤膜过滤除菌；
三，在无菌条件下，当步骤一得到的水凝胶冷却至4℃时，将步骤二得到的溶液与之加以混合搅拌均匀，分装于经过环氧乙烷消毒的软管即得。
所述双疗程复合细胞生长因子水凝胶应用于表皮层和角质层修复。
采用上述方案后，本发明可以采用含有人成纤维细胞生长因子hFGF-21及人表皮细胞生长因子hEGF组分的水凝胶针对真皮层和基底层进行修复愈合；随后，可以采用含有人角质细胞生长因子hKGF-2、人表皮细胞生长因子hEGF组分的水凝胶针对表皮层和角质层进行修复愈合。本发明将修复分为两个阶段，依据皮肤不同层创面组织愈合机理，使用相应的优化配方，无刺激，无毒副作用，易吸收且可缩短愈合时间，安全见效快。
具体实施方式
为描述方便，以下将含有人成纤维细胞生长因子hFGF-21及人表皮细胞生长因子hEGF组分的水凝胶定义为一号水凝胶，而将含有人角质细胞生长因子hKGF-2、人表皮细胞生长因子hEGF组分的水凝胶定义为二号水凝胶。
所述的一号水凝胶与二号水凝胶可分疗程应用于创伤、烧伤等深度皮肤缺损和慢性皮肤溃疡的治疗；下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例一
一号水凝胶组分 用量(质量百分比％)
人碱性成纤维细胞生长因子hFGF-21 5000IU/g
人表皮细胞生长因子hEGF 40000IU/g
尿囊素 2.0％
有机植物甘油 1.0％
透明质酸 0.05％
甘露醇 3.0％
薄荷醇 1.0％
癸基甲基亚砜 0.2％
泊洛沙姆407(poloxmer) 20％
10mmol/L pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 补足至1000ml
一号水凝胶制备方法：一，将有机植物甘油质量百分比1.0％、透明质酸质量百分比0.05％、甘露醇质量百分比3.0％、薄荷醇质量百分比1.0％、癸基甲基亚砜质量百分比0.2％、泊洛沙姆407质量百分比20％于4℃温度下用10mmol/L pH6.8无菌磷酸盐缓冲液溶胀搅拌，之后在121℃高压灭菌20分钟，冷却；
二，将人成纤维细胞生长因子hFGF-21 5000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF40000IU/g、尿囊素质量百分比2.0％溶于10mmol/L pH6.8无菌磷酸盐缓冲液中，用0.22um滤膜过滤除菌；
三，在无菌条件下，当步骤一得到的水凝胶冷却至4℃时，将步骤二得到的溶液与之加以混合搅拌均匀，分装于经过环氧乙烷消毒的软管即得。
二号水凝胶组分 用量(质量百分比％)
人角质细胞生长因子hKGF-2 20000IU/g
人表皮细胞生长因子hEGF 20000IU/g
尿囊素 0.5％
有机植物甘油 3.0％
透明质酸 0.05％
甘露醇 1.0％
泊洛沙姆407(poloxmer) 20％
10mmol/L pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 补足至1000ml
二号水凝胶制备方法：一，将有机植物甘油质量百分比3.0％、透明质酸质量百分比0.05％、甘露醇质量百分比1.0％、泊洛沙姆407质量百分比20％于4℃温度下用10mmol/LpH6.8无菌磷酸盐缓冲液溶胀搅拌，之后在121℃高压灭菌20分钟，冷却；
二，将人角质细胞生长因子hKGF-2 20000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF20000IU/g、尿囊素质量百分比0.5％溶于无菌缓冲液中，用0.22um滤膜过滤除菌；
三，在无菌条件下，当步骤一得到的水凝胶冷却至4℃时，将步骤二得到的溶液与之加以混合搅拌均匀，分装于经过环氧乙烷消毒的软管即得。
实施例二
一号水凝胶组分 用量(质量百分比％)
人碱性成纤维细胞生长因子hFGF-21 10000IU/g
人表皮细胞生长因子hEGF 20000IU/g
尿囊素 2.0％
有机植物甘油 3.0％
透明质酸 0.05％
甘露醇 1.0％
薄荷醇 2.0％
癸基甲基亚砜 0.1％
泊洛沙姆407(poloxmer) 20％
10mmol/L pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 补足至1000ml
一号水凝胶制备方法：一，将有机植物甘油质量百分比3.0％、透明质酸质量百分比0.05％、甘露醇质量百分比1.0％、薄荷醇质量百分比2.0％、癸基甲基亚砜质量百分比0.1％、泊洛沙姆407质量百分比20％于4℃温度下用10mmol/L pH6.8无菌缓冲液溶胀搅拌，之后在121℃高压灭菌20分钟，冷却；
二，将人成纤维细胞生长因子hFGF-21 10000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF20000IU/g、尿囊素质量百分比2.0％溶于无菌缓冲液中，用0.22um滤膜过滤除菌；
三，在无菌条件下，当步骤一得到的水凝胶冷却至4℃时，将步骤二得到的溶液与之加以混合搅拌均匀，分装于经过环氧乙烷消毒的软管即得。
二号水凝胶组分 用量(质量百分比％)
人角质细胞生长因子hKGF-2 10000IU/g
人表皮细胞生长因子hEGF 20000IU/g
尿囊素 0.5％
有机植物甘油 2.0％
透明质酸 0.05％
甘露醇 2.0％
泊洛沙姆407(poloxmer) 20％
10mM pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 补足至1000ml
二号水凝胶制备方法：一，将有机植物甘油质量百分比2.0％、透明质酸质量百分比0.05％、甘露醇质量百分比2.0％、泊洛沙姆407质量百分比20％于4℃温度下用10mMpH6.8无菌缓冲液溶胀搅拌，之后在121℃高压灭菌20分钟，冷却；
二，将人角质细胞生长因子hKGF-2 10000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF20000IU/g、尿囊素质量百分比0.5％溶于无菌缓冲液中，用0.22um滤膜过滤除菌；
三，在无菌条件下，当步骤一得到的水凝胶冷却至4℃时，将步骤二得到的溶液与之加以混合搅拌均匀，分装于经过环氧乙烷消毒的软管即得。
将实施例一与实施例二中的一号凝胶，二号凝胶各取8支用于高温高湿加速稳定性测试，将10克装产品凝胶置于40摄氏度，相对湿度80％培养箱中，分别于7，14，21天取出检测凝胶外观，pH，涂展性，菌落数和离心试验。结果表明所有产品凝胶颜色透明外观不变，300rpm离心10分钟不分层，涂展性好，pH稳定，无菌检验合格。
将实施例一与实施例二中的一号凝胶，二号凝胶各取8支用于低温加速稳定性测试，将10克装产品凝胶置于4摄氏度冷藏箱中，分别于30，60，90天取出检测凝胶外观，pH，涂展性，菌落数和离心试验。结果表明所有产品凝胶颜色透明外观不变，300rpm离心10分钟不分层，涂展性好，pH稳定，无菌检验合格。
将实施例一与实施例二中的一号凝胶，二号凝胶各取8支用于相变加速稳定性测试，将10克装产品凝胶每隔3天交替置于40摄氏度，相对湿度80％的培养箱与4摄氏度冷藏箱中，经过三次交替，取出检测凝胶外观，pH，涂展性，菌落数和离心试验。结果表明所有产品凝胶颜色透明外观不变，300rpm离心10分钟不分层，涂展性好，pH稳定，无菌检验合格。

Claims (8)

1.一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶，其特征在于，由以下组分组成：人成纤维细胞生长因子hFGF-21 5000-10000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF 20000-40000IU/g、尿囊素质量百分比0.2％-2.0％、保湿剂质量百分比1.0％-3.5％、稳定剂质量百分比1.0％-3.0％、透皮吸收剂质量百分比0.5％-3.0％、水凝基质胶质量百分比15％-25％、无菌缓冲液补足至1000ml。
2.一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶，其特征在于，由以下组分组成：人角质细胞生长因子hKGF-2 10000-20000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF 20000-40000IU/g、尿囊素质量百分比0.5％-2.0％、保湿剂质量百分比1.0％-3.5％、稳定剂质量百分比0.5％-3.0％、水凝基质胶质量百分比15％-25％、无菌缓冲液补足至1000ml。
3.如权利要求1所述的一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶，其特征在于，所述透皮吸收剂为质量百分比为0.5％-2.0％薄荷醇，或者为质量百分比为0.05％-0.2％癸基甲基亚砜DCMS。
4.如权利要求1或2所述的一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶，其特征在于，所述保湿剂为质量百分比为1.0％-3.0％的有机植物甘油，或者质量百分比为0.05％-0.2％透明质酸。
5.如权利要求1或2所述的一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶，其特征在于，所述稳定剂为质量百分比为1.0％-3.0％甘露醇；所述水凝胶基质为质量百分比为15％-25％的医药级泊洛沙姆407。
6.如权利要求1或2所述的一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶，其特征在于，所述无菌缓冲液为pH6.2-pH6.8浓度为5mmol/L-20mmol/L的磷酸盐缓冲液。
7.如权利要求1所述的一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶制备方法，其特征在于，包括以下步骤；
一，将保湿剂质量百分比1.0％-3.5％、稳定剂质量百分比1％-3.0％、透皮吸收剂质量百分比0.5％-3.0％、水凝基质胶质量百分比15％-25％于4℃温度下用无菌缓冲液溶胀搅拌，之后在121℃高压灭菌20分钟，冷却；
二，将人成纤维细胞生长因子hFGF-21 5000-10000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF20000-40000IU/g、尿囊素质量百分比0.2％-2.0％溶于无菌缓冲液中，用0.22um滤膜过滤除菌；
三，在无菌条件下，当步骤一得到的水凝胶冷却至4℃时，将步骤二得到的溶液与之加以混合搅拌均匀，分装于经过环氧乙烷消毒的软管即得。
8.如权利要求2所述的一种双疗程复合细胞生长因子水凝胶制备方法，其特征在于，包括以下步骤；
一，将保湿剂质量百分比1.0％-3.5％、稳定剂质量百分比0.5％-3.0％、水凝基质胶质量百分比15％-25％于4℃温度下用无菌缓冲液溶胀搅拌，之后在121℃高压灭菌20分钟，冷却；
二，将人角质细胞生长因子hKGF-2 10000-20000IU/g、人表皮细胞生长因子hEGF20000-40000IU/g、尿囊素质量百分比0.5％-2.0％溶于无菌缓冲液中，用0.22um滤膜过滤除菌；
三，在无菌条件下，当步骤一得到的水凝胶冷却至4℃时，将步骤二得到的溶液与之加以混合搅拌均匀，分装于经过环氧乙烷消毒的软管即得。
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