CN104225386B

CN104225386B - 一种高效低毒的复方雷公藤凝胶膏及其制备方法

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Publication number: CN104225386B
Application number: CN201410436168.7A
Authority: CN
Inventors: 方剑乔; 马凤森; 陈海波; 方多凤; 方芳; 梁宜; 刘丹
Original assignee: Hangzhou Haihang Biological Medicine Science & Technology Co ltd; Zhejiang University of Technology ZJUT; Third Affiliated Hospital of ZCMU
Current assignee: Hangzhou Haihang Biological Medicine Science & Technology Co ltd; Zhejiang University of Technology ZJUT; Third Affiliated Hospital of ZCMU
Priority date: 2014-08-29
Filing date: 2014-08-29
Publication date: 2018-03-20
Anticipated expiration: 2034-08-29
Also published as: CN104225386A

Abstract

本发明公开了复方雷公藤凝胶膏及其制备方法。本发明复方雷公藤凝胶膏由如下重量份原料辅以基质配制而成：雷公藤提取物0.175～0.7份，雷公藤提取物份数以去甲泽拉木醛的含量计；马钱子提取物1.75～7份，马钱子提取物份数以马钱子碱的含量计；白芍60～70份；土茯苓60～70份；忍冬藤60～70份；甘草20～30份；如下两种原料选其中之一：不大于50份的没药、不大于50份的乳香；如下四种原料选其中一种或多种：不大于60份的桑枝、不大于50份的丹皮、不大于50份的姜黄、不大于50份的豨莶草。本发明提供了一种组方合理、高效低毒的治疗风湿痹证的复方中药凝胶膏，为广大风湿痹证患者提供新的用药选择。

Description

一种高效低毒的复方雷公藤凝胶膏及其制备方法

技术领域

本发明属于中药生产技术领域，具体涉及一种具有祛风除湿、除痹止痛、主要用于类风湿性关节炎、由风湿热和风寒湿引起的关节红肿热痛或关节肿胀疼痛、僵硬、变形、活动受限等症的复方雷公藤凝胶膏。本发明还提供了一种该凝胶膏的制备方法。

背景技术

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以慢性进行性关节滑膜病变为特征的全身性自身免疫性疾病，可发生于任何年龄段，发病高峰在30～50岁之间，其中，女性患者约为男性2.5倍。RA病程迁延，持久反复发作，可导致关节内软骨和骨的破坏，致使受累关节强直、畸形和功能丧失，严重影响生活质量。根据2012年中国卫生统计提要显示我国居民的RA患病率为10.2‰，位居中国居民前十种慢性病患病率的第四位，仅次于高血压、胃肠炎和糖尿病之后，由此可知防治RA的迫切性和重要性。

早在两千多年前的《黄帝内经》书中，已有某些与风湿病相同或相似病症的记载，并将其归于“痹症”范畴。肝肾亏虚，正气不足时，外来风寒湿热之邪，乘虚侵袭肢体关节肌肉，使经脉闭阻不通，而发痹病。《灵枢·百病始生》指出“风雨寒热不得虚，邪不能独伤人，卒然逢疾风暴雨而不病者，盖元虚。故邪不能独伤人。”

目前，常见的雷公藤、马钱子为主要药材的中药凝胶膏，药材提取采用混合提取方法，如中国发明专利申请号为200410022409.X，申请日为2004.4.27，发明名称为一种预防和治疗风湿性关节炎类风湿和坐骨神经痛的药物及其制备方法，公开的药物提取方法为马钱子等原料粗碎，乙醇渗漉或回流浓缩得到浸膏，之后与辅料制成凝胶膏。又如，中国发明专利申请号为201310451434.9，申请日为2013.9.29，发明名称为青蒿雷公藤药对组合药物、制备方法及应用，公开的方法也是将青蒿和雷公藤两味药材混合后再进行提取制的混合提取物。这不仅不利于马钱子毒性中药材中有效组分的提取，而且也不能很好地控制其毒性。

发明内容

雷公藤和马钱子临床用于预防和治疗风湿痹证具有显著的疗效，但由于配方中雷公藤和马钱子均为大毒中药，且比重很高，能够引起严重的毒副反应。本发明的发明人长期致力于雷公藤、马钱子等毒性中药材的“增效减毒”研究，本发明所要解决的技术问题是提供了一种组方合理、“高效低毒”的治疗风湿痹证的复方中药凝胶膏，目的在于为广大风湿痹证患者提供新的用药选择。

本发明的另一目的是提供一种高效低毒的复方雷公藤凝胶膏的制备方法。

本发明采取以下技术方案：

复方雷公藤凝胶膏，其由如下重量份原料药辅以基质配制而成：

雷公藤提取物(以去甲泽拉木醛计)0.175～0.7份

马钱子提取物(以马钱子碱计)1.75～7份

白芍60～70份

土茯苓60～70份

忍冬藤60～70份

甘草20～30份

如下原料选其中之一：不大于50份的没药、不大于50份的乳香

如下原料选其中一种或多种：不大于60份的桑枝、不大于50份的丹皮、不大于50份的姜黄、不大于50份的豨莶草。

优选的，马钱子提取物的制备方法是：取马钱子粗粉170份，加pH5.0的50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次1700份，第二次1020份。合并提取液，浓缩。加40％氢氧化钠溶液调节pH至12.0，用乙酸乙酯萃取3次，每次加100份，回收乙酸乙酯，加40份的乙醇复溶，过滤。滤液浓缩干燥得到马钱子提取物。

优选的，雷公藤提取物的制备方法是：雷公藤全根饮片100份，乙酸乙酯加热提取两次，每次1小时，第一次1000份，第二次600份。合并提取液。回收乙酸乙酯，减压干燥得到雷公藤提取物。

优选的，复方雷公藤凝胶膏由以下重量份原料药配制而成：雷公藤提取物(以去甲泽拉木醛计)0.25～0.55份，马钱子提取物(以马钱子碱计)2.5～5.5份，白芍62～68份，土茯苓62～68份，忍冬藤62～68份，甘草22～28份，不大于40份的乳香，桑枝52～58份。

更进一步地，所述复方雷公藤凝胶膏由下列重量的原料药制成：雷公藤提取物(以去甲泽拉木醛计)0.35份，马钱子提取物(以马钱子碱计)3.5份，白芍65份，土茯苓65份，忍冬藤65份，桑枝55份，甘草25份，乳香30份。

本发明凝胶膏的基质由骨架材料、增粘剂、填充剂、保湿剂、透皮促渗透剂和交联调节剂等组成。

骨架材料和增粘剂优选明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚丙烯酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆等。

填充剂优选高岭土、硅藻土、白陶土、滑石粉、立德粉、微粉硅胶等。

保湿剂优选丙三醇、丙二醇、聚乙二醇等。

透皮促渗透剂优选氮酮、丙二醇、油酸、薄荷醇等。

本发明优选基质是有含有下述高分子聚合物按重量比混合制成的：聚丙烯酸钠50～60份、卡波姆3～5份、明胶30～45份、丙三醇250～400份、高岭土12.5～16.5份、氮酮40～48份、丙二醇12.5～16.5份、柠檬酸2～4份、水770份。

本发明基质的进一步优化组合(按重量比)是：聚丙烯酸钠57份、卡波姆3.5、明胶40份、丙三醇400份、高岭土13.5份、氮酮40份、丙二醇13.5份、柠檬酸3.5份、水770份。

本发明的另一个目的在于提供上述复方雷公藤凝胶膏的制备方法，其包括下列步骤：

1)雷公藤提取物的制备方法是：雷公藤全根饮片，乙酸乙酯加热提取两次，每次1小时，第一次10倍量，第二次6倍量。合并提取液。回收乙酸乙酯，减压干燥得到雷公藤提取物。备用。

2)马钱子提取物的制备方法是：取马钱子粗粉，加pH5.0的50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次10倍量，第二次6倍量。合并提取液，浓缩。加40％氢氧化钠溶液调节pH至12.0，用乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯，加乙醇复溶，过滤。滤液浓缩干燥得到马钱子提取物。备用。

3)其他味药材浸膏的制备方法：取白芍、土茯苓、忍冬藤、桑枝、甘草、姜黄、豨莶草、丹皮，50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次10倍量，第二次6倍量，过滤，合并滤液，浓缩得到相对密度为1.15～1.25的药材浸膏；没药或乳香粗粉加90％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次10倍量，第二次6倍量，合并提取液，浓缩得到相对密度为1.05～1.15的药材浸膏。备用。

4)将明胶加入200份水，水浴50～80℃使溶解；将卡波姆加入400份水中，水浴60℃～70℃加热，使卡波姆充分溶胀、溶解；明胶和卡波姆均40℃保温。

5)将聚丙烯酸钠、丙三醇、丙二醇、氮酮，搅拌混匀，加入高岭土搅拌，混匀；再加入步骤1)、2)和3)所得雷公藤、马钱子提取物和其他味药材浸膏，搅拌混匀。

6)将柠檬酸溶解于170份水中，待用。

7)将步骤4)所得组分加入步骤5)中搅拌混匀，再加入步骤6)所得溶液，搅拌均匀，涂布，裁切，包装，即得复方雷公藤凝胶膏。

上述步骤中，步骤1)、2)、3)可任意调换顺序，也可以同步进行。

本发明方法将雷公藤和马钱子两味毒性中药材单独提取，不仅能够控制药材的有效成分，保证其有效性，同时也解决了毒性中药材的安全性问题；再与其他药材浸膏和辅料混合制备复方雷公藤凝胶膏。

本发明源于浙江省名中医的临床经验方(口服汤剂)，多年的临床应用表明其在治疗风湿痹证方面具有显著功效。处方包括雷公藤、马钱子，还包括白芍、土茯苓、忍冬藤、桑枝、甘草、乳香、没药、丹皮、豨莶草、姜黄中的一种或几种。其中，雷公藤属卫矛科植物，味苦、辛，性凉，有大毒，归肝、肾经。具有祛风除湿、通络止痛、消肿止痛、解毒杀虫等功效。雷公藤的主要化学成分包括二萜类、三萜类、倍半萜类、生物碱类、鞣质、有机酸及多糖等。二萜类化合物雷公藤甲素小鼠腹腔给药LD₅₀为0.725mg/kg，经口给药的LD₅₀为0.788mg/kg；而三萜类化合物去甲泽拉木醛口服LD₅₀为1295mg/kg，毒性显著低于甲素。雷公藤具有强大的免疫抑制与抗炎作用，被认为是目前治疗RA的最佳单味中药，但由于该药对生殖、消化、血液等系统均有不同程度的损害，不能长期服用。马钱子属马钱科植物，始载于《本草纲目》，味苦，寒，大毒。归肝、脾二经。具有通络止痛、消散趋于功能，用于治疗风湿痹症，麻木瘫痪，跌打扭伤等。近十年的中医学研究表明，马钱子总生物碱中至少含有16种生物碱成分，其中主要成分为番木鳖碱(士的宁，strychnine)和马钱子碱(布鲁生，brucine)，约占总生物碱总量的70～80％。马钱子碱作为药效成分，具有很强的镇痛抗炎等药理活性，士的宁有强烈的中枢神经毒性。马钱子碱的小鼠腹腔给药LD₅₀为69mg/kg，经口给药的LD₅₀为233mg/kg；而士的宁口服腹腔给药LD₅₀为1.53，经口给药LD₅₀为3.27mg/kg。马钱子对RA的炎症疼痛有较好的抑制作用，但因其含有大量的马钱子碱、士的宁等生物碱而毒性很强，中毒剂量与有效剂量接近，临床内服应用受到很大限制。白芍性凉，味苦酸，微寒，入肝、脾经，具有补血柔肝、平肝止痛，敛阴收汗等功效。《别录》："通顺血脉，缓中，散恶血，逐贼血，去水气，利膀胱、大小肠，消痈肿，(治)时行寒热，中恶腹痛，腰痛。"土茯苓味甘、淡、平，归肝、脾、胃经，具有祛湿、解毒、利关节，疗筋骨疼痛之功效。忍冬藤味甘、寒，归肺、胃经，清热解毒，疏风通络，用于治疗温病发热，热毒血痢，痈肿疮疡，风湿热痹，关节红肿热痛等。桑枝味清苦，微寒，无毒，入肝经，具有祛风湿、通经络、行水气等功效，用于治疗风湿痹痛、中风半身不遂等。甘草味甘甜，性平和，入心、脾、肺胃四经。生用偏凉，可泻火解毒、缓急止痛；炙用偏温，能散表寒、补中益气。用于温病发热，热毒血痢，痈肿疮疡，风湿热痹，关节红肿热痛。姜黄味苦辛温，归脾、肝经。具有破血行气，通经止痛等功效，用于胸胁剌痛、闭经、症瘕、风湿肩臂疼痛、跌扑肿痛。豨莶草有祛风湿，利关节，解毒等功效，用于治疗风湿痹痛、筋骨无力、腰膝酸软、四肢麻痹、半身不遂、风疹湿疮等。丹皮味苦、辛，微寒。归心、肝、肾经，可用于痈肿疮毒、跌扑伤痛、风湿热痹等治疗。乳香味辛苦、温，入心、肝、脾经。有调气活血，定痛，追毒等功效。用于治疗气血凝滞、心腹疼痛，痈疮肿毒，跌打损伤，痛经，产后瘀血刺痛等。没药味苦、辛、平，入脾、肾二经。用于治疗跌打损伤、金疮、筋骨、心腹诸痛、经闭、痈疽肿痛、目障等。

原临床经验方，疗效肯定，但同时仍有一定的毒性。因此，为了更好的发挥其治疗风湿痹证的疗效，同时降低毒性，本发明选用新的经皮给药制剂——凝胶膏，与原口服制剂比较，避免可能发生的肝脏首过效应，降低对肝、肾等毒副反应，具有载药量大，保湿性强，与皮肤的相容性好；给药剂量可控、可反复揭贴，延长药物的作用时间，并可以随时中断给药，生产中无有机溶媒污染等优点。

本发明具有如下优点：本发明提供了一种复方雷公藤凝胶膏的制备方法，工艺简单、安全可控，具有规模工业化生产的应用前景。由于雷公藤、马钱子均为毒性药材，常见的应用方法为毒性药材与其他药材一起提取、浓缩，本发明通过雷公藤、马钱子毒性药材的单独提取，大大增加了药材的利用率，且能够准确地控制其含量，降低它们的毒性；并且根据中医配伍理论，本发明将毒性中药材(马钱子、雷公藤)与其他具有祛风除湿的中药材混合使用，进一步提高了其疗效的同时降低了其毒性；同时本发明通过采用透皮给药制剂(凝胶膏)的方式更进一步降低了毒性中药材的毒性，有效保证治疗风湿痹证的功效。利用本发明方法制得的复方雷公藤凝胶膏，与原口服汤剂比较，提高了用药的安全性，降低了药物的毒副作用；动物皮肤毒性实验和药效试验表明了其安全性和治疗风湿痹症效果的显著性。

附图说明

图1是复方雷公藤凝胶膏中马钱子碱累积透过量-时间曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明，但本发明的保护范围不囿于如下实施例公开的范围。

实施例1：

处方组成

雷公藤提取物(以去甲泽拉木醛计)0.175g 马钱子提取物(以马钱子碱计)1.75g

白芍65g 土茯苓60g 忍冬藤70g 桑枝58g 甘草20g 丹皮50g 没药50g

制备方法：

1)雷公藤全根饮片55g，乙酸乙酯加热回流提取两次，每次1小时，第一次550mL，第二次330mL。合并提取液。回收乙酸乙酯，减压干燥得到雷公藤提取物2.75g(含去甲泽拉木醛6.83％)。

2)马钱子粗粉250g，pH5.0的50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次2500mL，第二次1500mL。合并提取液，浓缩。加40％氢氧化钠溶液调节pH至12.0，用乙酸乙酯萃取3次，每次加2倍量，回收乙酸乙酯，加60mL乙醇复溶，过滤。滤液浓缩干燥得到马钱子提取物3.33g(含马钱子碱60.0％)。

3)按处方称取白芍、土茯苓、忍冬藤、桑枝、甘草、丹皮，加50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次3230mL，第二次1938mL，过滤，合并滤液，浓缩得到相对密度为1.15的药材浸膏；没药粗粉加90％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次500mL，第二次300mL，合并提取液，浓缩得到相对密度为1.15的药材浸膏。

4)将明胶30g加入200mL水，水浴50℃使溶解；将卡波姆4g加入400mL水中，水浴60℃加热，使卡波姆充分溶胀、溶解；明胶和卡波姆均40℃保温。

5)将聚丙烯酸钠50g、丙三醇370g、丙二醇15.5g、氮酮48g，搅拌混匀，加入高岭土15.5g搅拌，混匀；再按处方加入雷公藤、马钱子提取物和步骤3)所得的其他味药材浸膏，搅拌混匀。

6)将柠檬酸4g溶解于170mL水，待用。

7)将步骤4)所得组分加入步骤5)中搅拌混匀，再加入步骤6)所得的溶液，搅拌均匀，涂布，裁切，包装，即得复方雷公藤凝胶膏。

实施例2：

处方组成

雷公藤提取物(以去甲泽拉木醛计)0.25g 马钱子提取物(以马钱子碱计)5.5g

白芍67g 土茯苓63g 忍冬藤65g 姜黄50g 甘草27g 豨莶草50g 乳香50g

制备方法：

1)雷公藤全根饮片80g，乙酸乙酯加热提取两次，每次1小时，第一次800mL，第二次480mL。合并提取液。回收乙酸乙酯，减压干燥得到雷公藤提取物4.02g(含去甲泽拉木醛6.73％)。

2)马钱子粗粉700g，pH5.0的50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次7000mL，第二次4200mL。合并提取液，浓缩。加40％氢氧化钠溶液调节pH至12.0，用乙酸乙酯萃取3次，每次加2倍量，回收乙酸乙酯，加165mL乙醇复溶，过滤。滤液浓缩干燥得到马钱子提取物8.89g(含马钱子碱63.2％)。

3)按处方称取白芍、土茯苓、忍冬藤、姜黄、甘草、豨莶草，加50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次3220mL，第二次1932mL，过滤，合并滤液，浓缩得到相对密度为1.21的药材浸膏。乳香粗粉加90％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次500mL，第二次300mL，合并提取液，浓缩得到相对密度为1.05的药材浸膏。

4)将明胶40g加入200mL水，水浴70℃使溶解；将卡波姆3.5g加入400mL水中，水浴65℃加热，使卡波姆充分溶胀、溶解；明胶和卡波姆均40℃保温。

5)将聚丙烯酸钠57g、丙三醇400g、丙二醇13.5g、氮酮40g，搅拌混匀，加入高岭土13.5g搅拌，混匀；再按处方加入雷公藤、马钱子提取物和步骤3)所得的其他味药材浸膏，搅拌混匀。

6)将柠檬酸3.5g溶解于270mL水，待用。

实施例3：

处方组成

雷公藤提取物(以去甲泽拉木醛计)0.35g 马钱子提取物(以马钱子碱计)3.5g

白芍70g 土茯苓65g 忍冬藤60g 桑枝50g 甘草23g 乳香40g 丹皮40g

制备方法：

1)雷公藤全根饮片110g，乙酸乙酯加热回流提取两次，每次1小时，第一次1100mL，第二次660mL。合并提取液。回收乙酸乙酯，减压干燥得到雷公藤提取物5.5g(含去甲泽拉木醛6.66％)。

2)马钱子粗粉450，pH5.0的50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次4500mL，第二次2700mL。合并提取液，浓缩。加40％氢氧化钠溶液调节pH至12.0，用乙酸乙酯萃取3次，每次加2倍量，回收乙酸乙酯，加105mL乙醇复溶，过滤。滤液浓缩干燥得到马钱子提取物5.54g(含马钱子碱65.1％)。

3)按处方称取白芍、土茯苓、忍冬藤、桑枝、甘草、丹皮，加50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次3080mL，第二次1848mL，过滤，合并滤液，浓缩得到相对密度为1.25的药材浸膏；乳香粗粉加90％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次400mL，第二次240mL，合并提取液，浓缩得到相对密度为1.15的药材浸膏。

4)将明胶45g加入200g水，水浴80℃使溶解；将卡波姆3g加入400g水中，水浴70℃加热，使卡波姆充分溶胀、溶解；明胶和卡波姆均40℃保温。

5)将聚丙烯酸钠60g、丙三醇290g、丙二醇12.5g、氮酮42g，搅拌混匀，加入高岭土12.5g搅拌，混匀；再按处方加入雷公藤、马钱子提取物和步骤3)所得的其他味药材浸膏，搅拌混匀。

6)将柠檬酸2g溶解于270g水，待用。

实施例4：

处方组成

雷公藤提取物(以去甲泽拉木醛计)0.55g 马钱子提取物(以马钱子碱计)2.5g

白芍60g 土茯苓67g 忍冬藤67g 桑枝60g 甘草25g 豨莶草40g 没药40g

制备方法：

1)雷公藤全根饮片180g，乙酸乙酯加热回流提取两次，每次1小时，第一次1800mL，第二次1080mL。合并提取液。回收乙酸乙酯，减压干燥得到雷公藤提取物9.0(含去甲泽拉木醛6.84％)。

2)马钱子粗粉350g，pH5.0的50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次3500mL，第二次2100mL。合并提取液，浓缩。加40％氢氧化钠溶液调节pH至12.0，用乙酸乙酯萃取3次，每次加2倍量，回收乙酸乙酯，加80mL乙醇复溶，过滤。滤液浓缩干燥得到马钱子提取物4.59g(含马钱子碱60.9％)。

3)按处方称取白芍、土茯苓、忍冬藤、桑枝、甘草、豨莶草，加50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次3190mL，第二次1914mL，过滤，合并滤液，浓缩得到相对密度为1.2的药材浸膏；没药粗粉加90％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次400mL，第二次240mL，合并提取液，浓缩得到相对密度为1.05的药材浸膏。

4)将明胶35g加入200g水，水浴80℃使溶解；将卡波姆5g加入400g水中，水浴70℃加热，使卡波姆充分溶胀、溶解；明胶和卡波姆均40℃保温。

5)将聚丙烯酸钠54g、丙三醇330g、丙二醇12.5g、氮酮44g，搅拌混匀，加入高岭土14.5g搅拌，混匀；再按处方加入雷公藤、马钱子提取物和步骤3)所得的其他味药材浸膏，搅拌混匀。

6)将柠檬酸3g溶解于270g水，待用。

实施例5：

处方组成

雷公藤提取物(以去甲泽拉木醛计)0.7g 马钱子提取物(以马钱子碱计)7g

白芍63g 土茯苓70g 忍冬藤63g 桑枝52g 甘草30g 乳香30g

制备方法：

1)雷公藤全根饮片250g，乙酸乙酯加热回流提取两次，每次1小时，第一次2500mL，第二次1500mL。合并提取液。回收乙酸乙酯，减压干燥得到雷公藤提取物12.5g(含去甲泽拉木醛7.07％)。

2)马钱子粗粉900g，pH5.0的50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次9000mL，第二次5400mL。合并提取液，浓缩。加40％氢氧化钠溶液调节pH至12.0，用乙酸乙酯萃取3次，每次加2倍量，回收乙酸乙酯，加200mL乙醇复溶，过滤。滤液浓缩干燥得到马钱子提取物10.9g(含马钱子碱66.1％)。

3)按处方称取白芍、土茯苓、忍冬藤、桑枝、甘草，加50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次2780mL，第二次1668mL，过滤，合并滤液，浓缩得到相对密度为1.21的药材浸膏；乳香粗粉加90％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次300mL，第二次180mL，合并提取液，浓缩得到相对密度为1.1的药材浸膏。

4)将明胶38g加入200g水，水浴80℃使溶解；将卡波姆4.5g加入400g水中，水浴70℃加热，使卡波姆充分溶胀、溶解；明胶和卡波姆均40℃保温。

5)将聚丙烯酸钠52g、丙三醇250g、丙二醇16.5g、氮酮46g，搅拌混匀，加入高岭土16.5g搅拌，混匀；再按处方加入雷公藤、马钱子提取物和步骤3)所得的其他味药材浸膏，搅拌混匀。

6)将柠檬酸2.5g溶解于270g水，待用。

实施例6:

取实施例3所得复方雷公藤凝胶膏进行体外透皮试验。

离体皮肤的制备：本试验采用健康雄性小鼠(20±2)g，用7％硫化钠溶液(含5％甘油)脱去背部鼠毛并用生理盐水清洗皮肤。饲养12h后，处死取背部皮肤，去除皮下脂肪和粘连物，生理盐水洗净，使用前接收液浸泡30min。

体外透皮试验：采用改良的Franz扩散池，接收室的容积为6.5mL。(37.0±1.0)℃恒温水浴加热，并以600rpm磁力恒速搅拌。试验时，按扩散池大小剪取适当面积的鼠皮，固定在两室之间，皮肤角质层朝向供药室。将复方雷公藤凝胶膏贴于皮肤。接收池中加入37℃预热的透皮接受液，皮肤与接受液间紧密贴合，排尽气泡。给药后2.0、4.0、6.0、8.0、10、12、24h取样5mL，并补加5mL 37℃预热的透皮接受液。样品溶液用0.45μm滤膜过滤。取续滤液，用HPLC测定透皮接受液中马钱子碱的含量，计算单位面积累积透过量。结果见表1、表2、图1。

表1 复方雷公藤凝胶膏中马钱子碱累积透过量

表2 复方雷公藤凝胶膏中马钱子碱累积渗透量-时间曲线拟合方程(n＝5)

释放模型	模型拟合方程	r
			零级方程	Q＝23.019t+25.492	0.9953
Higuchi方程	Q＝113.72t^1/2-103.73	0.9993
			Ritger-Peppas方程	ln Q＝0.8737ln t+3.5460	0.9984

试验结果表明：以马钱子碱的累积透量Q对时间t作图，分别比较零级、Higuchi、Ritger-Peppas模型并对数据进行动力学方程拟合。通过比较其拟合度r发现，12h内，透皮吸收过程符合Higuchi模型，曲线拟合方程为Q＝113.72t^1/2-103.73，(r＝0.9993，n＝5)，渗透速率(K)＝113.72μg/(cm².h^1/2)，这与凝胶膏这一骨架型经皮给药系统相一致。复方雷公藤凝胶膏在24h内马钱子碱透过量相近，而且随时间的推移透过量成稳定上升趋势，渗透速率基本一致，复方雷公藤凝胶膏的经皮吸收平行性良好。24h内，复方雷公藤凝胶膏中马钱子碱的透过率平均达到75％以上，说明本发明制备的复方雷公藤凝胶膏剂的透皮吸收较完全。

实施例7:

为了更好的说明本发明所具有的疗效，取实施例1、实施例3、实施例5所得复方雷公藤凝胶膏进行药效试验研究。

本试验采用健康雄性SD大鼠95只，随机分成正常对照组(12只)和模型组(83只)，模型组经牛Ⅱ型胶原诱发胶原性关节炎模型(CIA模型)。造模成功后随机分成6组：模型对照组(14只)，基质对照组(13只)，实施例1(14只)，实施例3(14只)，实施例5(14只)，阳性对照组(14只)。治疗组(除正常对照组与模型对照组外所有组别)敷贴背部脊柱两侧，每天1次，每次2贴，保持12小时，从造模后16天开始，连续治疗20天。以痛阈、炎症、血清抗体及病理变化等为指标进行治疗效果考察。结果如下。

1)对关节炎指数的影响

表3 不同浓度复方雷公藤凝胶膏对关节炎指数的影响(score，)

组别

只数

治疗前

治疗5天

治疗10天

治疗15天

治疗20天

空白对照组

8

0.00±0.00^**

模型对照组

14

3.93±0.71

3.71±0.24

3.36±0.17

3.57±0.17

3.43±0.23

实施例1

13

4.62±0.62

2.77±0.30^*

3.00±0.16

2.69±0.13^*

3.15±0.22

实施例3

14

4.29±0.67

3.86±0.39

2.86±0.31

2.92±0.25

2.86±0.36

实施例5

14

4.29±0.71

3.64±0.44

2.50±0.20^**

2.07±0.37^**

2.14±0.33^**

基质对照组

14

4.83±0.51

3.71±0.37

3.79±0.26

3.86±0.29

3.79±0.26

阳性对照组

14

4.21±0.66

2.64±0.27^**

2.36±0.20^**

1.86±0.23^**

2.14±0.25^**

注：与模型对照组相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01

试验结果表明：与模型对照组比较，治疗前，空白对照组关节炎指数有显著差异(p<0.01)，其余各组无显著差异；给药5天，实施例1与阳性对照组大鼠关节炎指数明显升高，差异有统计学意义(p<0.05，p<0.01)；给药10天后，实施例5对关节炎的治疗有明显效果(p<0.01)，这一趋势一直持续到治疗结束。

2)对痛阈的影响

表4 不同浓度复方雷公藤凝胶膏对痛阈的影响(s，)

组别

只数

基础

治疗前

治疗5天

治疗10天

治疗15天

治疗20天

空白对照组

8

5.04±0.26

5.51±0.19^**

5.24±0.21^**

5.54±0.23^**

5.17±0.16^**

5.44±0.21^**

模型对照组

14

4.79±0.17

3.46±0.18

3.42±0.11

3.70±0.13

3.69±0.23

3.47±0.17

实施例1

13

5.32±0.25

3.49±0.14

3.78±0.14

4.31±0.29^*

4.06±0.28

3.99±0.46

实施例3

14

4.96±0.20

3.45±0.22

4.23±0.14^**

4.25±0.28

4.17±0.23

4.80±0.19^**

实施例5

14

5.29±0.21

3.48±0.17

3.95±0.10^*

4.50±0.19^**

4.33±0.20^*

4.53±0.22^**

基质对照组

14

4.95±0.22

3.49±0.21

3.15±0.19

3.75±0.19

3.67±0.18

3.92±0.16

阳性对照组

14

5.16±0.22

3.48±0.22

3.80±0.27

4.25±0.22

4.37±0.21^*

4.20±0.22^*

注：与模型对照组相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01

试验结果表明：与模型对照组比较，各组的基础痛阈无显著差异；治疗前，空白对照组痛阈显著高于模型对照组(p<0.01)，其余各组痛阈无显著差异；给药5天，实施例3与实施例5痛阈显著升高，差异有统计学意义(p<0.01，p<0.05)；给药10天，仅实施例5痛阈有显著差异(p<0.01)；给药15天，实施例5与阳性对照组均痛阈显著升高，差异有统计学意义(p<0.05，p<0.05)；给药20天，实施例3、实施例5均有显著镇痛疗效(p<0.01，p<0.01)。整个给药治疗期间，各组的痛阈均低于空白对照组。

3)对足跖肿胀度的影响

表5 不同浓度复方雷公藤凝胶膏对足跖肿胀度的影响(mL，)

组别

只数

治疗前

治疗5天

治疗10天

治疗15天

治疗20天

空白对照组

8

0.304±0.010^*

0.370±0.010

0.418±0.023

0.430±0.027

0.455±0.031

模型对照组

14

0.381±0.250

0.375±0.018

0.428±0.023

0.437±0.020

0.521±0.017

实施例1

13

0.389±0.025

0.366±0.020

0.434±0.028

0.379±0.023^**

0.419±0.028^*

实施例3

14

0.374±0.030

0.399±0.018

0.450±0.026

0.424±0.023

0.431±0.033^*

实施例5

14

0.379±0.021

0.395±0.020

0.412±0.022

0.398±0.026^*

0.406±0.032^**

基质对照组

14

0.389±0.021

0.382±0.024

0.471±0.031

0.506±0.026

0.509±0.030

阳性对照组

14

0.379±0.019

0.355±0.021

0.386±0.026

0.415±0.017

0.426±0.022^*

注：与模型对照组相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01

试验结果表明：与模型对照组比较，治疗前，空白对照组足跖肿胀度显著低于模型对照组(p<0.05)，其余各组无显著差异；给药20天，实施例1、实施例3、实施例5大鼠足跖肿胀度均显著降低(p<0.05，p<0.05，p<0.01)，对大鼠足跖肿胀均有明显抑制作用。

4)对双足膝关节滑膜PGE₂浓度的影响

表6 不同浓度复方雷公藤凝胶膏对滑膜PGE₂浓度的影响(ng/mg，)

组别	只数	治疗20天
			空白对照组	8	44.82±3.58^*
模型对照组	12	61.72±6.37
			实施例1	12	49.45±3.10
实施例3	11	44.80±3.70^*
			实施例5	14	46.35±5.26^*
基质对照组	12	60.40±5.58
			阳性对照组	11	48.24±5.60

注：与模型对照组相比，*表示p<0.05

试验结果表明：给药20天后，空白对照组双足踝部滑膜PGE₂浓度显著低于模型对照组(p<0.05)；基质对照组PGE₂浓度与模型对照组无差异；实施例3、实施例5PGE₂浓度均显著低于模型对照组(p<0.05，p<0.05)；阳性对照组PGE₂浓度下降，但与模型对照组相比，差异无统计学意义。表明实施例3、实施例5能抑制双足踝部滑膜PGE₂的产生，对大鼠踝关节病变有抑制作用。

5)对血清牛二胶原抗体浓度的影响

表7 不同浓度复方雷公藤凝胶膏对血清牛二胶原抗体浓度的影响(ng*10⁴/mg，)

组别	只数	治疗前	治疗20天	P
					空白对照组	8	0.518±0.0039^▲▲	0.769±0.144^▲▲	0.124
模型对照组	10	12.051±1.560	25.335±3.752^**	0.007
					实施例1	10	11.062±2.000	20.176±3.313^*	0.030
实施例3	11	12.470±1.774	21.115±3.584^*	0.048
					实施例5	10	12.051±1.678	18.122±3.093	0.102
基质对照组	11	11.972±2.010	21.148±3.389^*	0.030
					阳性对照组	10	11.857±1.620	25.480±3.691^**	0.005

注：与模型对照组比较，▲▲表示p<0.01；组内治疗前后比较，*表示p<0.05,**表示p<0.01

试验结果表明：治疗前与给药20天后，空白对照组血清牛二胶原抗体浓度均显著低于模型对照组的浓度(p<0.01，p<0.01)，且治疗前后无显著改变。治疗前后比较，实施例5浓度无显著差异，其余各治疗组浓度均有显著的提高(p<0.01，p<0.05，p<0.05，p<0.05，p<0.01)，表明实施例5抑制了血清牛二胶原抗体的产生。

6)对踝关节组织病理学的影响

表8 不同浓度复方雷公藤凝胶膏对关节组织病理学的影响(例)

注：与同期模型对照组比较：^*P<0.05；与同期基质对照组比较：^▲P<0.05

试验结果表明：依据前述组织病理学分级标准，将各组大鼠的踝关节组织病理切片在光学显微镜(×10倍)下观察，未见到各组大鼠严重骨质破坏，但都出现不同程度的炎症细胞浸润，重者可以观察到滑膜炎并见有软骨的破坏。模型对照组及基质对照组多数见到重度滑膜炎并见有软骨的增生、纤维化和坏死；实施例3以炎症细胞浸润、轻度滑膜炎为主；实施例1、实施例3与阳性对照组以轻、重度滑膜炎为主。与模型对照组和基质对照组比较，空白对照组与实施例5大鼠足爪病理损伤显著降低(P<0.05)；其余组别无明显差异。表明实施例5中滑膜细胞增生减轻，浸润的炎性细胞显著减少，关节软骨损伤不明显。

由上述试验结果可知：本发明制得的复方雷公藤凝胶膏对CIA大鼠关节炎症有着良好的治疗效果。

实施例8:

取实施例3、实施例5所得贴膏进行大鼠急性毒性试验。

本试验采用健康SD大鼠80只，背部剃毛，随机分成8组，每组10只，雌雄各半，其中4组为完整皮肤组，另4组用消毒针头在脱毛部位划井字形伤口，以渗血为度，为破损皮肤组。第2天，取正常皮肤和破损皮肤大鼠各1组分别在脱毛部位贴敷复方雷公藤凝胶膏实施例3、实施例5、基质贴膏和浸润生理盐水的纱布(空白对照组)，给药面积均为8cm×5cm。贴敷24h后除去受试物并用50％乙醇清洁给药部位，观察大鼠的反应和14天内的死亡情况，并于给药后7天和14天称体重。

试验结果表明：对完整和破损皮肤均无显著的刺激反应，各组大鼠活动等均无明显异常现象，大便颜色和形状无异常，小便颜色正常。在14天的观察期内大鼠无死亡，摄食、活动、外观、毛色等均无异常，眼、口、鼻和泄殖区未见异常分泌物，雌、雄大鼠的体重均正常增长，也未见明显毒性反应，提示该药急性毒性低，临床用药安全。

实施例9:

取实施例5所得复方雷公藤凝胶膏考察家兔皮肤的刺激反应和豚鼠的过敏性反应。

本试验以家兔为对象，观察复方雷公藤凝胶膏对家兔完整皮肤和破损皮肤经单次和多次给药后的刺激性反应，结果贴敷6.25cm²/只给药，每天1次，连续7天，未见涂敷部位皮肤出现红斑、水肿等异常反应，结果显示复方雷公藤凝胶膏给家兔完整皮肤和破损皮肤贴敷无刺激性。以豚鼠为对象，观察复方雷公藤凝胶膏对豚鼠皮肤的过敏性反应，分别在第0d、7d和14d在豚鼠背部皮肤贴敷复方雷公藤凝胶膏6.25cm²/只致敏，末次给药后14天再次贴敷复方雷公藤凝胶膏相同剂量进行激发，未发现有红斑、水肿等皮肤过敏反应，结果显示复方雷公藤凝胶膏对豚鼠皮肤不产生过敏反应。提示该药临床给药方法安全。

实施例10:

取实施例1、3、5所得复方雷公藤凝胶膏考察家兔6个月长期毒性试验。

本试验采用健康新西兰大白兔80只，雌雄各半，体重1.5～1.8kg，随机分成5组，分别为实施例1、实施例3、实施例5及正常对照组、基质对照组。每组16只，雌雄各半，每天背部皮肤给药一次，保持6小时，连续6个月(26周)。试验期间观察动物的外观、一般行为、摄食、饮水量、体重变化。给药26周及停药4周后进行血常规(RBC、HB、HCT、RET等)、凝血时间(PT、APTT、TT、FIB等)、血清生化指标(T-Bil、ALT、AST、AKP、GGT、CK、CHOL、TG、BUN、Cr、Glu、TP、ALB等)、电解质(Na⁺、K⁺、Ca²⁺、Cl^—)、病理学组织学(心、肝、肾、脾、肺、大脑等)等指标检查。

结果表明：各实施例所得复方雷公藤凝胶膏对家兔毛色、活动、二便等外观状况无明显影响，给药部位及周围皮肤未见明显的红肿、水泡或溃烂等异常现象，对家兔进食量、体温等无明显不良影响。给药期间各组家兔体重均逐渐增长，但均无统计显著性。连续给药6个月和停药4周后，三个实施例组及对照组间进行比较：血常规、凝血时间、血清生化指标、电解质均在正常范围，组间无显著差异；各组主要脏器组织未见与药物相关的病理学变化。根据试验结果表明：给予家兔贴敷本发明的复方雷公藤凝胶膏连续6个月，未发现其对动物的外观、活动行为、体重、摄食量、饮水量、血液学、血生化学及病理组织学产生异常的影响，停药恢复期也未见延迟性毒性反应，提示本发明复方雷公藤凝胶膏安全性较高。

Claims

1.复方雷公藤凝胶膏，其特征是由如下重量份原料辅以基质配制而成：

雷公藤提取物0.25～0.55份，所述的雷公藤提取物份数以去甲泽拉木醛的含量计；

马钱子提取物2.5～5.5份，所述的马钱子提取物份数以马钱子碱的含量计；

白芍62～68份、土茯苓62～68份、忍冬藤62～68份、甘草22～28份、不大于40份的乳香、桑枝52～58份；

雷公藤提取物的制备方法是：雷公藤全根饮片，乙酸乙酯加热提取两次，每次1小时，第一次10倍量，第二次6倍量；合并提取液；回收乙酸乙酯，减压干燥得到雷公藤提取物；

马钱子提取物的制备方法是：取马钱子粗粉，加pH5.0的50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次10倍量，第二次6倍量；合并提取液，浓缩；加40％氢氧化钠溶液调节pH至12.0，用乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯，加乙醇复溶，过滤；滤液浓缩干燥得到马钱子提取物。

2.如权利要求1所述的复方雷公藤凝胶膏，其特征是：雷公藤提取物0.35份，马钱子提取物3.5份，白芍65份，土茯苓65份，忍冬藤65份，桑枝55份，甘草25份，乳香30份，所述的雷公藤提取物份数以去甲泽拉木醛的含量计；所述的马钱子提取物份数以马钱子碱的含量计。

3.如权利要求1所述的复方雷公藤凝胶膏，其特征是：所述的基质包括骨架材料、增粘剂、填充剂、保湿剂、透皮促渗透剂和交联调节剂。

4.如权利要求3所述的复方雷公藤凝胶膏，其特征是：所述的骨架材料选自明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚丙烯酸钠、聚乙烯吡咯烷酮或卡波姆；所述的增粘剂选自明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚丙烯酸钠、聚乙烯吡咯烷酮或卡波姆；所述的填充剂选自高岭土、硅藻土、白陶土、滑石粉、立德粉或微粉硅胶；所述的保湿剂选自丙三醇、丙二醇或聚乙二醇；所述的透皮促渗透剂选自氮酮、丙二醇、油酸或薄荷醇。

5.如权利要求1所述的复方雷公藤凝胶膏，其特征是：所述的基质由下述组分按重量比混合配制而成：聚丙烯酸钠50～60份、卡波姆3～5份、明胶30～45份、丙三醇250～400份、高岭土12.5～16.5份、氮酮40～48份、丙二醇12.5～16.5份、柠檬酸2～4份、水770份。

6.如权利要求5所述的复方雷公藤凝胶膏，其特征是：所述的基质由下述组分按重量比混合配制而成：聚丙烯酸钠57份、卡波姆3.5份、明胶40份、丙三醇400份、高岭土13.5份、氮酮40份、丙二醇13.5份、柠檬酸3.5份、水770份。

7.一种如权利要求1或2或5或6所述复方雷公藤凝胶膏的制备方法，其按如下步骤进行：

1)雷公藤提取物的制备方法是：雷公藤全根饮片，乙酸乙酯加热提取两次，每次1小时，第一次10倍量，第二次6倍量；合并提取液；回收乙酸乙酯，减压干燥得到雷公藤提取物；备用；

2)马钱子提取物的制备方法是：取马钱子粗粉，加pH5.0的50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次10倍量，第二次6倍量；合并提取液，浓缩；加40％氢氧化钠溶液调节pH至12.0，用乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯，加乙醇复溶，过滤；滤液浓缩干燥得到马钱子提取物；备用；

3)其他味药材浸膏的制备方法：取白芍、土茯苓、忍冬藤、桑枝、甘草，50％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次10倍量，第二次6倍量，过滤，合并滤液，浓缩得到相对密度为1.15～1.25的药材浸膏；乳香粗粉加90％乙醇加热回流提取两次，每次3小时，第一次10倍量，第二次6倍量，合并提取液，浓缩得到相对密度为1.05～1.15的药材浸膏；备用；

4)将明胶加入200份水，水浴50～80℃使溶解；将卡波姆加入400份水中，水浴60℃～70℃加热，使卡波姆充分溶胀、溶解；明胶和卡波姆均40℃保温；

5)将聚丙烯酸钠、丙三醇、丙二醇、氮酮，搅拌混匀，加入高岭土搅拌，混匀；再加入步骤1)所得雷公藤提取物、步骤2)所得马钱子提取物和步骤3)所得其他味药材浸膏，搅拌混匀；

6)将柠檬酸溶解于170份水中，待用；