CN104219953A - 包含hcv ns5a的抑制剂的固体形式、其组合物及其用途 - Google Patents

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CN104219953A CN201380019234.4A CN201380019234A CN104219953A CN 104219953 A CN104219953 A CN 104219953A CN 201380019234 A CN201380019234 A CN 201380019234A CN 104219953 A CN104219953 A CN 104219953A
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M·钟
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Abstract

本发明涉及：(a)尤其抑制HCV的化合物及其盐；(b)用于制备这类化合物和盐的中间体；(c)包含这类化合物和盐的组合物；(d)制备这类中间体、化合物、盐和组合物的方法；(e)使用这类化合物、盐和组合物的方法；和(f)包含这类化合物、盐和组合物的试剂盒。

Description

包含HCV NS5A的抑制剂的固体形式、其组合物及其用途
发明领域
本文提供包含式(I)和(II)的化合物的固体形式、包含该固体形式的组合物、制备该固体形式的方法，及使用其抑制丙型肝炎病毒(“HCV”)复制，包括例如抑制HCV的非结构性5A(“NS5A”)蛋白质的功能的方法。 
式(I)： 
式(II)： 
背景技术
HCV是一种单链RNA病毒，为黄病毒科家族的成员。该病毒显示广泛遗传异质性，因为目前存在七种已鉴别的基因型及超过50种已鉴别的亚 型。在HCV感染的细胞中，病毒RNA被翻译成裂解成10种蛋白质的聚蛋白。在氨基端为结构蛋白：核心(C)蛋白和包膜糖蛋白El和E2。在El和E2之后是p7，其是一种膜整合蛋白。另外，存在六种非结构蛋白：NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B，其在HCV生活周期中起功能性作用(参见例如，Lindenbach,B.D.和C.M.Rice,Nature,(2005)436:933-938)。 
HCV感染是一种严重的健康问题。据估计全球1.7亿人慢性感染HCV。HCV感染可导致慢性肝炎、肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌。因此，慢性HCV感染是肝相关的过早死亡的主要全球性原因。 
HCV感染的护理治疗方案的现有标准包括单独的干扰素-α或其与利巴韦林(ribavirin)组合。该治疗麻烦，有时具有使人虚弱和严重的副作用，许多患者对治疗的反应不能持久。迫切需要治疗HCV感染的新的有效的方法。 
发明概述
本文的实施方案提供式(I)的化合物("化合物(I)")和式(II)的化合物("化合物(II)")的固体形式。 
在第一个方面，提供具有式(I)的化合物的固体形式∶ 
在第一个方面的第一个实施方案中，固体形式为晶状。 
在第二个实施方案中，结晶形式为式I的化合物的形式A晶型。 
在第一个方面的第三个实施方案中，固体形式具有包含下述的XRPD图∶ 
a)位于表1中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28个或所有接近位置的峰； 
b)位于图6中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26个或所有接近位置的峰； 
c)位于图8中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44个或所有接近位置的峰；或 
d)位于图19中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18个或所有接近位置的峰。 
在第一个方面的第四个实施方案中，固体形式具有包含位于表2中鉴别的1、2、3、4个或所有接近位置的峰的XRPD图。 
在第一个方面的第五个实施方案中，固体形式具有包含下述峰的XRPD图：基于用衍射计(CuKα)以用NIST或其它合适的标准校准的2θ所收集的高质量图，在环境温度下位于2θ值为14.7±0.2、17.4±0.2，及10.6±0.2、12.7±0.2和13.6±0.1中的一个或多个的峰。 
在第一个方面的第六个实施方案中，提供包含形式A的药物组合物。 
在第一个方面的第七个方面，提供包含任一项前述权利要求的固体形式的凝胶胶囊。 
在第二个方面，提供具有式(II)的化合物的固体形式∶ 
其中该固体形式为晶状。 
在第二个方面的第一个实施方案中，固体形式为式II的化合物的形式I晶型。 
在第二个方面的第二个实施方案中，固体具有包含如下的XRPD图：位于表8中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16个或所有接近位置的峰；或位于表9中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或所有接近位置的峰。 
在第二个方面的第三个实施方案中，固体具有包含表8中编号1、3、13和17的峰和表8中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个剩余峰的XRPD图案。 
在第二个方面的第四个实施方案中，提供包含形式I的药物组合物。 
不意欲受任何特定理论的限制，本文所述化合物I的形式A和化合物II的形式I的储存稳定性、压缩性、堆积密度或溶解性质被认为对于制备、配制和生物利用度是有益的。 
本文提供的固体形式作为活性药物成分用于制备用于动物或人类的制剂。因此，本文的实施方案涵盖了这些固体形式作为最终药品的用途。某些实施方案提供用于制备具有改善性质的最终剂型的固体形式，所述性质尤其是制备、加工、配制和/或储存最终药品所需的例如粉末流动性质、压缩性质、压片性质、稳定性性质和赋形剂相容性性质。本文的某些实施方案提供药物组合物，其包含构成式(I)的化合物的单组分晶型、多组分晶型、单组分非晶型和/或多组分非晶型，及可药用稀释剂、赋形剂或载体。本文所述固体形式可用于例如抑制HCV复制、抑制NS5A和治疗、预防或控制HCV感染。 
附图简述
图1为化合物I形式A的代表性的1H NMR光谱。 
图2为化合物I形式A的代表性的13C NMR光谱。 
图3为化合物I形式A的代表性的FT-IR光谱。 
图4为化合物I形式A的代表性的DSC差示热分析图。 
图5为化合物I形式A的代表性的X射线粉末衍射(XRPD)图。 
图6为图5中呈现的峰的表。 
图7为化合物I形式A的代表性的XRPD图。 
图8为图7中呈现的峰的表。 
图9为化合物I形式A的代表性的XRPD图。 
图10为化合物I形式A的代表性的XRPD图。 
图11为化合物I形式A的代表性的1H NMR光谱。 
图12为化合物I形式A的代表性的XRPD图。 
图13为化合物I形式A的代表性的1H NMR光谱。 
图14为化合物I形式A的代表性的DSC曲线和差示热分析图。 
图15图解了化合物I形式A的重量％相对于相对湿度的图。 
图16为化合物I形式A的代表性的XRPD图。 
图17为化合物I形式A的代表性的差示热分析图。 
图18为化合物I形式A的代表性的XRPD图。 
图19为图18中呈现的峰的表。 
图20为化合物I形式A的代表性的XRPD图。 
图21为化合物I形式A的代表性的DSC曲线和差示热分析图。 
图22为化合物I形式A在材料受应力(stressed)之前和之后的代表性的XRPD图。 
图23为化合物I形式A在材料受到应力之后的代表性的DSC曲线和差示热分析图。 
图24图解化合物II形式I的代表性的XRPD图。 
图25为化合物II形式I的代表性的XRPD图。 
图26图解化合物II形式I的晶体。 
图27为化合物II形式I的代表性的差示热分析图。 
图28为化合物II形式I的代表性DSC曲线。 
图29为化合物II形式I的DVS等温曲线。 
图30为非晶形化合物II的DVS等温曲线。 
图31为化合物II形式I的代表性的XRPD图。 
图32为化合物I FB的各种盐的偏光显微镜图像(polarized light microscope image)。 
发明详述
(a)定义 
如本文使用的且除非另有说明，否则术语“固体形式”和相关术语指并非主要呈液态或气态的物理形式。如本文使用的且除非另有说明，否则术语“固体形式”和相关术语当在本文中用于指化合物(I)时，是指并非主要呈液态或气态的包含化合物(I)的物理形式。固体形式可以是晶状、非晶形或其混合形式。在特定实施方案中，固体形式可以是液晶。包含化合物(I)的“单组分”固体形式基本上由化合物(I)组成。包含化合物(I)的“多组分”固体形式在该固体形式之内包含大量的一种或多种其它种类，比如离子和/或分子。例如，在特定实施方案中，包含化合物(I)的晶状多组分固体形式 进一步包含一种或多种非共价键合于晶格中规则位置的种类。 
如本文使用的，且除非另有说明，本文使用的术语“晶状”和相关术语当用于描述物质、变体(modification)、材料、组分或产品时，除非另有说明，否则指该物质、变体、材料、组分或产品实质上为如X射线衍射测定的晶状。参见，例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第21版，Lippincott,Williams和Wilkins,Baltimore,MD(2005)；The United States Pharmacopeia，第23版，1843-1844(1995)。 
如本文使用的且除非另有说明，否则本文中的术语“晶型”和相关术语指晶状固体形式。晶型包括单组分晶型和多组分晶型，并且包括但不限于多晶型物、溶剂合物、水合物及其它分子复合物，以及盐、盐的溶剂合物、盐的水合物、盐的其它分子复合物、及其多晶型物。在某些实施方案中，物质的晶型可以实质上不含非晶型和/或其它晶型。在某些实施方案中，物质的晶型可以含有以重量计少于约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％的一种或多种非晶型和/或其它晶型。在某些实施方案中，物质的晶型可以是物理纯和/或化学纯的。在某些实施方案中，物质的晶型可以是约99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％或90％物理纯和/或化学纯的。 
如本文使用的且除非另有说明，否则本文中的术语“多晶型物”、“多晶型形式”和相关术语指基本上由同一种分子、多种分子或离子组成的两种或多种晶型。类似于不同晶型，不同的多晶型物由于晶格中分子和/或离子的排列或构象而可以具有不同的物理性质，比如例如熔解温度、熔化热、溶解度、溶解速率和/或振动光谱。物理性质的差异可影响药学参数，比如储存稳定性、压缩性和密度(在配制和产品制备方面重要)，及溶解速率(生物利用度中的一个重要因素)。稳定性的差异可源于化学反应性的变化(例如差异氧化，使得由一种多晶型物组成的剂型比由另一种多晶型物组成的剂型褪色更快)或机械变化(例如，片剂在贮存时随着动力学有利的多晶型物转变成热力学更稳定的多晶型物而破裂)或两者(例如，具有一种多晶型物的片剂更易于在高湿度下破裂)。由于溶解度/溶解作用差异，在极端情况下，一些固态的转变可能导致效力丧失，或在另一极端情况下，产生毒性。另外，物理性质在加工中可能很重要(例如，一种多晶型物更可能形成溶剂合物，或者可能难于过滤和洗涤除去杂质，并且多晶型物之间的颗粒形状和尺寸分布可能不同)。 
如本文使用的，且除非另有说明，否则术语“溶剂合物”和“溶剂化的”指含有溶剂的物质的晶型。术语“水合物”和“水合的”指其中溶剂包含水的溶剂合物。“溶剂合物的多晶型物”指对于特定的溶剂合物组合物，存在超过一种晶型。类似地，“水合物的多晶型物”指对于特定的水合物组合物，存在超过一种晶型。如本文使用的术语“去溶剂化的溶剂合物”指可以通过从溶剂合物中除去溶剂制备的物质的晶型。 
如本文使用的，且除非另有说明，否则本文使用的术语“非晶形”、“非晶型”和相关术语指如通过X射线衍射测定的，所述物质、组分或产品基本上不是晶状的。特别地，术语“非晶型”描述无序固体形式，即缺乏长程晶序的固体形式。在某些实施方案中，物质的非晶型可以基本上不含其它非晶型和/或晶型。在其它实施方案中，物质的非晶型可以含有以重量计少于约1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％的一种或多种其它非晶型和/或晶型。在某些实施方案中，物质的非晶型可以是物理纯和/或化学纯的。在某些实施方案中，物质的非晶型可以是约99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％或90％物理纯和/或化学纯的。 
用于表征晶型和非晶型的技术包括，但不限于热重分析(TGA)、差示扫描量热法(DSC)、X射线粉末衍射法(XRPD)、单晶X射线衍射法、振动光谱学例如红外线(IR)和拉曼光谱学、固态和溶液核磁共振(NMR)光谱学、光学显微镜法、热台光学显微镜法(hot stage optical microscopy)、扫描电子显微术(SEM)、电子晶体学和定量分析、粒度分析(PSA)、表面积分析、溶解度测量法、溶解测量法、元素分析和Karl Fischer分析。特征晶胞参数可以使用一种或多种技术测定，所述技术比如，但不限于X射线衍射和中子衍射，包括单晶衍射和粉末衍射。用于分析粉末衍射数据的技术包括轮廓精修(profile refinement)，比如Rietveld精修，其可以用于例如分析与包含多于一个固相的样品中的单相相关的衍射峰。用于分析粉末衍射数据的其它方法包括晶胞索引，其允许本领域技术人员从包含晶状粉末的样品确定晶胞参数。如本文使用的，且除非另有说明，否则术语"约"和"近似"在结合被提供来表征特定固体形式的数值或值范围(例如，比如例如描述熔化、脱水、去溶剂化或玻璃化转变温度的具体温度或温度范围，；质量变化，比如例如随温度或湿度变化的质量变化；以例如质量或百分比表示的溶剂或水含量；或者峰位置，比如例如在通过在IR或拉曼光谱学或XRPD进行的分析中的 峰位置)使用时，表示该值或值范围可以偏离一定程度，该程度在本领域普通技术人员看来是合理的同时仍然表征特定固体形式。例如，在特定实施方案中，术语“约”和“近似”当在该上下文中使用时，指数值或值范围可以在所列举值或值范围的25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1.5％、1％、0.5％或0.25％之内变化。如本文使用的，在数值或值范围之前的波浪线(即，"～")表示“约”或“近似”。如本文使用的且除非另有说明，否则包含“基本上纯的”(例如基本上不含其他固体形式和/或其他化合物)或被注为“基本上”晶型或非晶型的特定晶型或非晶型的样品在特定实施方案中含有少于约25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％(重量百分比)的一种或多种其他固体形式和/或其他化合物。如本文使用的且除非另有说明，否则“基本上不含”一种或多种其他固体形式和/或其他化合物的样品或组合物指该组合物在特定实施方案中包含少于约25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.75％、0.5％、0.25％或0.1％(重量百分比)的一种或多种其他固体形式和/或其他化合物。 
如本文使用的且除非另有说明，否则术语“治疗(treat,treating,treatment)”指根除或改善疾病或病症或与疾病或病症相关的一种或多种症状。在某些实施方案中，该术语指由于将一种或多种预防剂或治疗剂施用给患有这样的疾病或病症的受试者而引起的疾病或病症的扩散或恶化最小化。在某些实施方案中，该术语指在特定疾病的症状发作之后，与或不与其它另外的活性剂一起施用本文提供的化合物。 
如本文使用的且除非另有说明，否则术语“预防(prevent,preventing,prevention)”指预防发病或病症或其一种或多种症状的发作、复发或扩散。在某些实施方案中，该术语指在症状发作之前，与或不与其他另外的活性化合物一起施用本文提供的化合物，尤其施用给处于患有本文提及的疾病或病症的风险中的患者。该术语涵盖抑制或减少特定疾病的症状。在某些实施方案中，具有疾病家族史的患者特别地是预防性方案的候选人。另外，具有复发症状史的患者也是预防的潜在候选人。在这方面，术语“预防”可以与术语“预防性治疗”互换地使用。如本文使用的且除非另有说明，否则术语“控制(manage,managing,management)”指预防或减缓疾病或病症或其一种或多种症状的进展、扩散或恶化。通常，受试者由预防剂和/或治疗剂得到的有益效果不会引起疾病或病症的痊愈。在这方面，术语"控制" 涵盖治疗患有特定疾病的患者，以试图预防或使疾病的复发降至最低。固体形式的药物化合物的制备和选择是复杂的，因为固体形式的变化可以影响多种物理性质和化学性质，其除了其它重要药物特征以外在加工、配制、稳定性和生物利用度中可以提供益处或不利。可能的药物固体包括晶状固体和非晶形固体。非晶形固体的特征为缺少长范围的结构顺序，而晶状固体的特征为结构周期性。期望的药物固体类型取决于特定的应用；有时基于例如增强溶解曲线(profile)选择非晶形固体，而对于性质比如例如物理或化学稳定性可能期望晶状固体(参见，例如S.R.Vippagunta等,Adv.Drug.Deliv.Rev.,(2001)48:3-26；L.Yu,Adv.Drug.Deliv.Rev.,(2001)48:27-42)。无论是晶状的还是非晶形的，药物化合物的潜在固体形式均可以包括单组分或多组分固体。单组分固体基本上由药物化合物组成而不存在其它化合物。单组分晶状材料间的多样性可能是由于多晶现象引起的，其中对于特定药物化合物存在多个三维排列(参见，例如S.R.Byrn等,Solid State Chemistry of Drugs,(1999)SSCI,West Lafayette)。 
药物化合物的潜在固体形式间另外的多样性可能源于多组分固体的可能性。包含两种或多种离子种类的晶状固体称为盐(参见，例如Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use,P.H.Stahl和C.G.Wermuth,Eds.,(2002),Wiley,Weinheim)。可以为药物化合物或其盐潜在地提供其它性质改善的多组分固体的另外的类型尤其包括，例如水合物、溶剂合物、共晶体(co-crystals)和包合物等(参见，例如S.R.Byrn等,Solid State Chemistry of Drugs,(1999)SSCI,West Lafayette)。而且，多组分晶型可潜在地易发生多晶现象，其中给定多组分组合物可以以超过一个三维晶状排列存在。在开发安全、有效、稳定和可销售的药物化合物过程中，固体形式的发现极其重要。 
固体形式可以显示出对特定固体形式(比如本文所述晶型)而言是唯一的独特物理表征数据。这些表征数据可以通过本领域技术人员已知的各种技术获得，所述技术包括例如X射线粉末衍射、差示扫描量热法、热重分析和核磁共振光谱学。这些技术提供的数据可用于鉴别特定固体形式。通过执行这些表征技术之一和确定所得到的数据是否“匹配”本文提供的参照数据(参照数据被鉴别为特定固体形式的特征)，本领域技术人员可以确定一种固体形式是否是本文所述形式之一。本领域技术人员应当理解，“匹配”参考固体形式的数据的表征数据对应于与参考固体形式相同的固体形 式。在分析数据是否“匹配”时，本领域普通技术人员理解由于例如常规样品与样品分析(sample-to-sample analysis)中的实验误差和预期变化，特定表征数据点可以合理的程度变化但仍然描述给定固体形式。除了包含化合物(I)或化合物(II)的固体形式之外，本文还提供包含化合物(I)或化合物(II)的前药的固体形式，本文还提供制备化合物(I)或化合物(II)和得到化合物(I)或化合物(II)的关键中间体的方法。 
需要具有期望的抗HCV治疗特性的化合物，所述抗HCV治疗特性包括高效力和对最常见的HCV基因型的广泛基因型覆盖、对其他目标的选择性或低毒性和口服生物利用度。该化合物需要具有适用于长期给药至多一年的安全特性。 
为了有效地使用这些化合物作为治疗剂，期望获得可以容易地制备且具有可接受的化学和物理稳定性的固体形式。非晶形固体形式具有吸水且方式不可预测的缺点。非晶型在制备中不提供作为药物的足够的纯度、稳定性或可预测性。 
所提供的固体形式(化合物I的形式A和化合物II的形式I)在水溶液中充分溶解，允许在给人投药时充分暴露于血液中。进一步，发现化合物I的形式A和化合物II的形式I对于可再现制备而言是充分稳定的。发现化合物I的形式A和化合物II的形式I的药代动力学性质使这些形式适用作药物。 
本文提供化合物I的形式A。形式A的代表性的XRPD图提供于图5、7、9、10、12、16、18、20和22中。在某些实施方案中，化合物(I)的形式A的特征在于∶a)位于表1中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28个或所有接近位置的峰；b)位于图6中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26个或所有接近位置的峰；c)位于图8中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44个或所有接近位置的峰；或d)位于图19中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18个或所有接近位置的峰。在某些实施方案中，化合物(I)的形式A的特征在于表2中鉴别的1、2、3、4个或所有的接近位置。化合物I形式A的代表 性的1H NMR光谱提供于图11和13中。化合物I形式A的代表性的DSC数据和差示热分析图提供于图4、14、21和23中。 
在某些实施方案中，本文提供化合物(II)的晶型(形式I)，其更详细地描述在下文中。 
化合物II形式I的代表性的XRPD图提供于图24、25和31中。在某些实施方案中，化合物(II)的形式I的特征在于位于表8中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16个或所有接近位置的XRPD峰。化合物II形式I的代表性的DSC曲线提供于图28中。化合物II形式I的代表性的差示热分析图提供于图27中。化合物II形式I的代表性的DVS等温曲线提供于图29中。 
本文提供的固体形式在化合物(I)或化合物(II)中的一个或多个原子处也可包括非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以用放射性同位素比如例如氘(2H)、氚(3H)、碘-125(125I)、硫-35(35S)或碳-14(14C)进行放射性标记。放射性标记化合物用作治疗剂，例如癌症治疗剂、研究试剂例如结合分析试剂、和诊断剂例如体内显像剂。无论具有或不具有放射性，意图化合物(I)或化合物(II)的所有同位素变型均包含在本文提供的实施方案范围之内。 
(b)化合物(I)和(II)的合成和表征 
在整个本申请中使用下述缩写∶ 
ACN               乙腈 
AcOH              乙酸 
aq                水性 
Boc               叔丁氧基羰基 
DCE               二氯乙烷 
DCM               二氯甲烷 
DIEA(DIPEA)       二异丙基乙胺 
DMA               N,N-二甲基乙酰胺 
DME               1,2-二甲氧基乙烷 
DMF               N,N-二甲基甲酰胺 
DMSO              二甲亚砜 
dppf              1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁 
EDCI              l-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]碳二亚胺盐酸盐 
EDTA             乙二胺四乙酸 
EC50             产生50％最大作用的有效浓度 
ESI              电喷雾电离 
Et2O             乙醚 
Et3N,TEA         三乙胺 
EtOAc,EtAc       乙酸乙酯 
EtOH             乙醇 
g                克 
h或hr            小时 
HATU             2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲                        (tetramethyluronium)六氟磷酸酯 
HBTU              O-苯并三唑－1－基-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸                         酯 
Hex               己烷 
HOBt              1-羟基苯并三唑 
IC50              引起测量活性减少50％的抑制剂的浓度 
IPA               2-丙醇 
IPOAc             乙酸异丙酯 
LC-MS             液相色谱质谱法 
MEK               甲基乙基酮 
MeOH              甲醇 
min               分钟 
mmol              毫摩尔 
Moc               甲氧基羰基 
MTBE              甲基叔丁基醚 
N.A.              数值孔径(Numerical Aperture) 
PG                保护基 
1-PrOH            1-丙醇 
rt                室温 
TFA               三氟乙酸 
THF               四氢呋喃 
TLC               薄层色谱法 
使用各种技术和仪器来表征化合物I和化合物II的固体形式，所述技术和仪器的操作和原始数据的分析是本领域普通技术人员熟知的。表征方法的实例包括，但不限于X-射线粉末衍射、差示扫描量热法、热重分析和热台技术(Hot Stage technique)。 
本领域普通技术人员应当理解可以获得具有测量误差的任意这些测量(比如X-射线衍射图)，该测量误差取决于进行测量的条件、仪器型号的变化。基于从多种分析手段收集的数据确定固体形式的实质性身份(identity)的能力在本领域普通技术人员的技术(purview)范围之内。 
仪器技术 
差示扫描量热法(DSC) 
使用装有冷冻冷却系统(RCS)的TA Instruments 2920(或其他型号比如Q2000)差示扫描量热计进行DSC分析。使用NIST可追踪铟金属进行温度校准。将样品放入铝DSC盘中，精确地记录重量。用盖子盖住该盘，并使盖子卷曲。将称重的、卷曲的铝盘放在池(cell)的参考面上。在-30℃下，使样品池平衡，并在氮气吹扫下以2-10℃/分钟的速率加热，上至最终温度为250℃。所报道温度处于转变最大值(transition maxima)。使用±0.8℃的调制幅度和60秒的时间，以从-50至200℃的2℃/分钟的根本加热速率，获得调制DSC(“MDSC”)数据。 
对于循环DSC分析，在环境温度下平衡样品池，然后在氮气下以20℃/min的速率冷却至-60℃。将样品池保持在该温度，然后使其加热并在125℃下平衡。以20℃/min的速率再次将其冷却至-60℃。将样品池保持在该温度，且以20℃/min的速率再次加热至250℃的最终温度。 
动态蒸汽吸附/脱附(DVS) 
在VTI SGA-100蒸汽吸附分析器上收集动态蒸汽吸附/脱附(DVS)数据。使用NaCl和PVP作为校准标准品。在分析之前没有干燥样品。在氮气吹扫下，以10％RH增量在5至95％RH范围内收集吸附和脱附数据。用于分析的平衡标准为在5分钟内重量变化小于0.0100％，最大平衡时间为3小时。没有针对样品的初始含水量校正数据。 
热台显微镜法 
使用固定在装有SPOT Insight TM彩色数码相机的Leica DM LP显微镜上的Linkam热台(型号FTIR 600)进行热台显微镜法。使用USP熔点标准品 进行温度校准。将样品置于盖玻片上，并将第二盖玻片置于样品的上部。当加热台时，使用具有正交偏振光镜和第一级红色补偿器(compensator)的20×0.40N.A.长工作距物镜目测观察每一样品。使用SPOT软件(v.4.5.9)获取图像。 
热重量分析法(TGA) 
使用TA Instruments 2950热重分析仪进行TGA分析。使用镍和AlumelTM进行温度校准。将各种样品置于铝盘中且插入TGA炉中。在氮气下，以10℃/分钟的速率将该炉加热至350℃的最终温度。 
X-射线粉末衍射(XRPD) 
Inel XRG-3000衍射计
使用装有2θ范围为120°的弯曲位置灵敏检测器的Inel XRG-3000衍射计收集XRPD图。使用Cu Kα辐射(40kV，30mA)的入射光束以0.03°2θ的分辨率实时收集数据。在分析之前，分析硅标准品(NIST SRM 640c)以验证Si 111峰位置。通过将样品装到薄壁玻璃毛细管中制备用于分析的样品。将各个毛细管固定到测角计头上，并在数据采集期间旋转。一般而言，设定单色仪狭缝为5mm×160μm，并分析样品5分钟。Bruker D-8Discover衍射仪
也使用Bruker D-8Discover衍射仪和Bruker的通用检测器系统(GADDS,v.4.1.20)收集XRPD图。使用准确对焦管(40kV,40mA)、镜和0.5mm双-针孔准直仪产生Cu Kα辐射的入射微光束。在分析之前，分析硅标准品(NIST SRM 640c)以验证Si 111峰位置。将样品装在3μm厚的膜之间以形成便携式圆盘形样本。将制备的样本装载到固定于平移平台的储器中。使用摄像机和激光器定位感兴趣的区域以以传输几何形状(transmission geometry)与入射光束交叉。扫描入射光束，并将其光栅扫描(rastered)以最优化定向统计学。使用光束截捕器(beam-stop)使入射光束的空气散射量最小。使用位于距样品15cm的Hi-Star区域检测器收集衍射图，并使用GADDS处理。衍射图谱的GADDS图像的强度是使用0.04°2θ的步长整合的(integrated)。整合的图显示随2θ变化的衍射强度。PANalyticalEXPERT Pro MPD衍射仪
使用PANalytical X'Pert Pro衍射仪收集XRPD图。使用Optix长的准确对焦源产生Cu Kα辐射的入射光束。使用椭圆梯度(graded)多层镜使所述源 的Cu KαX-射线聚焦通过样本并到达检测器上。使用X'Pert Pro Data Collector软件(v.2.2b)收集和分析数据。在分析之前，分析硅样本(NIST SRM 640c)以验证Si 111峰位置。将样本夹在3μm厚的膜之间，以传输几何形状进行分析，并旋转以最优化定向统计学。使用光束截捕器、短反散射延伸部分(anti scatter extension)和反散射刀刃(anti scatter knife edge)使空气散射所产生的背景最小化。入射和衍射光束的Soller狭缝被用于入射光束和衍射光束，以使轴向发散最小化。使用位于距样本240mm的扫描位置敏感检测器(X'Celerator)和数据收集器软件v.2.2b收集衍射图。 
Shimadzu XRPD-6000衍射仪
使用Shimadzu XRPD-6000X-射线粉末衍射仪收集XRPD图。使用长准确对焦X-射线管(40kV,40mA)和弯曲石墨单色器产生Cu Kα辐射的入射光束。发散和散射狭缝设定为1°，接受狭缝设定为0.15mm。由Nal闪烁检测器检测衍射辐射。使用XRPD-6100/7000软件(v.5.0)收集和分析数据。在分析之前，分析硅标准品(NIST SRM 640c)以验证Si 111峰位置。通过将样品放置到具有硅零背景插入(silicon zero-background insert)的铝储器中制备用于分析的样品。通常以3°/min.(0.4秒/0.02°步长)从2.5至40°2θ使用θ-2θ连续扫描收集图。质子核磁共振(NMR) 
主要在环境温度下使用约400MHz的1H拉莫尔频率的Varian  UNITYINOVA-400光谱仪获得溶液1H NMR光谱。通常将样品溶于含有四甲基硅烷(TMS)作为参考的d6-DMSO或CD3OD中。实施例-化合物I与化合物I游离碱(“化合物I FB”)的其他盐形式的比较
化合物I FB的若干盐∶ 
被制备，以获得化合物I。 
基于化合物I FB的溶解度筛选，选择四种混合溶剂作为制备储备溶液的溶剂且将其用于盐筛选：乙醇/庚烷(1/0.5(v/v))、EtOAc/MTBE(1/0.5(v/v))、ACN/水(1/0.5(v/v))和丙酮/甲苯(1/16(v/v))。将约25mg的化合物I FB 称重到32个小瓶的每个中，然后，使用各种混合溶剂溶解8个小瓶中的样品。以与测试抗衡离子(HC1、2HCl、磷酸盐、HBr、2HBr、磺酸、苯磺酸和甲磺酸)的当量摩尔比加入抗衡离子。对于2HCl和2HBr，将比例设定为2：1。各个样品的物理观察结果显示在下表16中： 
表16.加入抗衡离子之后，不同盐的物理观察结果 
对于硫酸盐，乙醇/庚烷＝1/0.5(v/v)和EtOAc/MTBE＝1/0.5(v/v)可产生固体。对于2HBr盐、硫酸盐、苯磺酸盐和甲磺酸盐，丙酮/甲苯＝1/16(v/v)可产生固体。所得的固体在缓慢蒸发之后进一步通过显微镜观察表征。使用装有2.5x、l0x、和20x物镜和数码相机的Leica DMLP偏光显微镜执行显微镜法，所述数码相机用于获取显示颗粒形状、尺寸和结晶度的图像。使用正交偏光镜(crossed polar)显示分散在浸油中的样品的双折射率和晶癖。如图26中可以看到的，仅可观察到非双折射固体。选择化合物I FB的2HCl盐(即化合物I)用于进一步评价结晶形成或多晶型物筛选。 
实施例-化合物I(也称为化合物3-3的2HCl盐)的合成
方案1 
步骤1.参照方案1。在氮气气氛下，向100L QVF反应器中装入DCM(35.0L,10.0体积)。在将反应物质冷却至10-15℃之后，在90-120分钟期间内分批加入无水AlC13(2.65kg,1.1eq.)。接着，将反应混合物冷却至0℃，并且在90-120分钟期间内慢慢地加入ClCH2COCl(1.51L,1.05eq.)，同时进行搅拌以完全溶解。在氮气气氛下，将DCM(35.0L,10.0体积)和2-溴萘(3.50kg，1.0eq.)分别装入200L搪玻璃反应器(GLR)中，并将得到的物质冷却至0-5℃。接着，在2-3小时期间，将在100L QVF中的最初制备的溶液通过滴液漏斗慢慢地加入到200L GLR中，同时保持内部温度在0-5℃之间。在该温度下，搅拌反应物质＞60分钟，并通过HPLC分析监测。如通过HPLC分析测定的，在消耗＞95％的2-溴萘之后，在搅拌下将冷水(70.0L，2.0体积)小心地加入到200L GLR反应器中以淬灭反应。分离CH2Cl2层，用纯化水(50L×3，14.0体积)洗涤3次，并用饱和盐水(50L×1，14.0体积)洗涤1次，经无水Na2SO4干燥。在减压(600mmHg)下除去溶剂，并在60-65℃下，将残余物溶于EtOAc(17.5L)中。然后，在65-70℃下，向澄清溶液中加入己烷(35.0L,10.0体积)。搅拌该混合物1小时，并逐渐冷却至25-30℃。过滤得到的混合物；用己烷(1.75L×2)洗涤固体，并在真空盘式干燥器中于40-45℃下干燥12小时，得到呈灰白色固体的化合物1-2(1.88kg，产率40％)，通过HPLC测定纯度＞95％。LC-MS(ESI):m/z 283.9[M+H]+.1HNMR(500MHz,CDC13):δ8.44(s,1H),8.07(s,1H),8.04(d,J＝11.0Hz,1H),7.84(d,J＝8.5Hz,2H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),4.81(s,2H)ppm。步骤2.在氮气气氛下，将化合物1-2(3.7kg，1.0eq.)和CH3CN(74.0L,20.0体积)装入200L不锈钢反应器(SSR)中。在25-30℃下，在30-45分钟期间，向该溶液中慢慢地加入Et3N(9.10L,5.0eq.)，接着在90分钟期间，分批加入 N-Boc-L-脯氨酸(3.23kg，1.15eq.)。在25-30℃下搅拌得到的反应物质，并通过HPLC监测。在搅拌12小时之后，HPLC分析表明消耗了＞97％的化合物1-2。接着，在40-45℃下，于真空(600mmHg)下，浓缩反应物质以除去CH3CN；向得到的浆中加入纯化水(50.0L)，并用EtOAc(25L×2)萃取两次。将有机萃取物用纯化水(25L×2)洗涤两次，并用饱和盐水(25.0L)洗涤一次。接着，经无水Na2SO4干燥有机层，并最初在低真空(house vacuum)(600mmHg)下浓缩，最后在高真空下浓缩，得到呈棕色半固体的化合物1-3(5.50kg，产率91％)，通过HPLC分析测定纯度＞92.0％。LC-MS(ESI):m/z463.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ8.74(s,1H),8.30(s,1H),7.91-8.07(m,3H),7.75(d,J＝8.4Hz,1H),5.54-5.73(m,2H),4.34(m,1H),3.30-3.37(m,3H),2.23-2.29(m,1H),2.12-2.15(m,1H),1.81-1.95(m,2H),1.30(m,9H)ppm。 
步骤3.在氮气气氛下，将化合物1-3(5.50kg，1.0eq.)和甲苯(55L,10.0体积)装入200L SSR中。在25-30℃下，于氮气气氛下，向得到的反应物质中加入NH4OAc(9.20kg,10.0eq.)。接着，在110-115℃下加热反应物质，并且共沸除去反应中产生的水。在如通过HPLC分析测定消耗＞97％的化合物1-3之后，在真空(600mmHg)下浓缩反应物质，以完全除去甲苯，并冷却至～25-30℃。将残余物用EtOAc(55.0L,10.0体积)和纯化水(55.0L,10.0体积)稀释，同时搅拌。分离有机层，用纯化水(25L×2)洗涤两次，用饱和盐水(25L×1)洗涤1次，并经无水Na2SO4干燥。在除去干燥剂之后，在40-45℃下于真空(600mmHg)下除去溶剂，得到粗产物，将其与MTBE(2.0体积)搅拌1小时，并过滤。用冷MTBE(2.75L,0.5体积)洗涤固体，并在40-45℃下于真空盘式干燥器中干燥12小时，得到呈浅黄色固体的化合物1-4a(3.85kg，产率73％)，通过HPLC分析测定纯度＞99.0％，并通过手性HPLC分析(Chiralpak AD-H(250×4.6mm)，洗脱液∶己烷/EtOH＝80/20(v/v)，流速∶0.7mL/min)测定对映异构体纯度＞99.7％。LC-MS(ESI):m/z443.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ8.23(s,1H),8.10(s,1H),7.93(m,1H),7.84(m,2H),7.54-7.56(m,2H),4.77-4.85(,1H),3.53(m,1H),3.36(m,1H),2.16-2.24(m,1H),1.84-1.99(m,3H),1.39和1.10(s,s,9H)ppm。 
步骤4.在氮气气氛下，将化合物1-4a(3.85kg，1.0eq.)和1,4-二噁烷(58.0L,15.0体积)装入200L SSR中。接着，在25-30℃下，在氮气气氛下，将联硼酸频那醇酯(bis(pinacalato)diboron)(2.43kg，1.1eq.)、KOAc(2.56kg,3.0 eq.)和Pd(dppf)Cl2(285.0g,0.04eq.)装入SSR中。在25-30℃下，用氮气使得到的反应物质脱气3045分钟。接着，在75-80℃下，搅拌该反应物质4-5小时，并通过HPLC分析监测。在消耗＞97％的化合物l-4a之后，最初在真空(600mmHg)下且最后在45-50℃下于高真空下浓缩反应物质以除去二噁烷。加入水(35.0L)和EtOAc，同时搅拌。分离各层，并用饱和盐水溶液(25.0L)洗涤有机层，用活性碳处理且用CeliteTM 545垫过滤。浓缩滤液；然后通过从MTBE(5.0L,10.0体积)沉淀来纯化残余物，得到呈浅黄色固体的化合物1-5a(3.10kg,产率73％)，通过HPLC分析测定纯度＞96.0％。LC-MS(ESI):m/z 490.3[M+H]+。化合物1-4b的合成。向化合物1-4a(2.0g,4.5mmol)在二噁烷(25mL)中的溶液中加入在二噁烷(25mL)中的4.0N HC1。在室温下搅拌4小时之后，浓缩反应混合物，并在真空中干燥残余物，得到呈黄色固体的化合物1-4b(2.1g)，其被直接使用而无需进一步纯化。LC-MS(ESI):m/z 342.1[M+H]+。化合物1-4c的合成。向化合物1-4b(2HC1盐；1.87g，4.5mmol)在DMF(25mL)中的混合物中加入HATU(2.1g，5.4mmol)、DIPEA(3.7mL，22.5mmol)和N-Moc-L-缬氨酸(945mg,5.4mmol)。在室温下搅拌15分钟之后，将该反应混合物慢慢地加入到冷水(400mL)中。过滤得到的悬浮液；用冷水洗涤固体，并在真空中干燥，得到呈白色固体的化合物1-4c(2.2g，产率98％)。LC-MS(ESI):m/z 500.1[M+H]+。化合物1-4d的合成。按照针对化合物1-4c的合成所描述的方法，用N-Moc-O-Me-L-苏氨酸替代N-Moc-L-缬氨酸，得到化合物1-4d。LC-MS(ESI):m/z 516.1[M+H]+。 
化合物1-5b的合成。按照针对化合物1-5a的合成所描述的方法，用化合物1-4c替代1-4a，得到化合物1-5b。LC-MS(ESI):m/z 547.3[M+H]+。 
化合物1-5c的合成。按照针对化合物1-5a的合成所描述的方法，用化合物1-4d替代1-4a，得到化合物1-5c。LC-MS(ESI):m/z 563.3[M+H]+。 
方案2 
步骤1.参照方案2，在氮气气氛下，将N-Boc-L-脯氨酸(4.02kg，1.0eq.)和THF(52.5L,15.0体积)加入200L反应器中。将该混合物冷却至20-25℃，并在60分钟期间加入N,N-二异丙基乙胺(4.8L,1.5eq.)。接着，在20-25℃下，于氮气气氛下，在90-120分钟期间，慢慢地分批加入HATU(7.11kg，1.0eq.)。在相同温度下搅拌15分钟之后，在90-120分钟期间，将4-溴-1,2-二氨基苯(3.50kg，1.0eq.)分批加入到反应器中。在相同温度下，搅拌得到的反应物质。在搅拌4-5小时之后，HPLC分析表明消耗了＞97％的4-溴-1,2-二氨基苯。在＜40℃下，在真空(600mmHg)下浓缩反应物质以除去THF，并用乙酸乙酯(40.0L,10.0体积)和纯化水(25.0L,7.0体积)稀释残余物。充分搅拌得到的混合物，并分离有机层。接着，用纯化水(25L×3，7.0体积)和饱和盐水溶液(25L×1，7.0体积)洗涤有机层，并经无水Na2SO4干燥。在＜40℃下，于高真空下除去溶剂，得到中间体，将其溶于冰AcOH(24.5L,7.0体积)中。在40-42℃下搅拌得到的混合物，并通过HPLC监测。在搅拌10-12小时之后，HPLC分析显示消耗了＞97％的中间体。在40-45℃下，于高真空下完全蒸馏去除AcOH。将得到的浆状物质用EtOAc(50.0L,14.0体积)稀释，并通过在搅拌下用水(25.0L,7.0体积)洗涤来纯化。分离有机层，用5.0％(w/w)NaHCO3水溶液(25.0L×2，7.0体积)洗涤两次，用纯化水(25.0L×2)洗涤两次，用饱和盐水(25L×1，7.0体积)洗涤一次，并经无水Na2SO4干燥。用活性炭处理该溶液，之后将其过滤并在40-45℃下于真空(600mmHg)下浓缩，得到呈泡沫状固体的粗产物(5.20kg)。在搅拌下，将残余物悬浮在MTBE(5.2L，1.5体积)中，通过过滤收集固体，用MTBE(1.75L,0.5体积)洗涤，并在40-45℃下于真空盘式干燥器中干燥12小时，得到呈浅棕色固体的化合物2-2a(4.20kg，产率63％)，通过HPLC分析测定纯度＞98.0％。LC-MS(ESI):m/z 366.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ12.40(m,1H),7.58-7.70(m,1H),7.37-7.46(m,1H),7.24(m,1H),4.85-4.94(m,1H),3.54(,1H),3.35-3.53(m,1H),2.20-2.32(m,1H),1.88-1.96(m,3H),1.38和 0.98(s,s,9H)ppm。 
步骤2.在氮气气氛下，向化合物2-2a(5.05g，13.8mmol)、联硼酸频那醇酯(7.1g，27.9mmol)、和KOAc(3.2g,32.5mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的混合物中加入Pd(dppf)Cl2(400mg,0.5mmol)。在氮气气氛下，在80℃下搅拌3小时之后，浓缩反应混合物。通过硅胶柱色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1(v/v))纯化残余物，得到呈灰色固体的化合物2-3a(3.0g，产率53％)。LC-MS(ESI):m/z 414.2[M+H]+。 
化合物2-2b的合成。向化合物2-2a(4.0g，10.9mmol)在二噁烷(40mL)中的溶液中加入在二噁烷(40mL)中的4N HC1。在室温下搅拌过夜之后，浓缩该反应混合物。用DCM洗涤残余物，过滤，并在真空中干燥，以定量产率得到盐酸盐。接着，将该盐(10.9mmol)溶于DMF(30mL)中，向得到的溶液中加入DIPEA(5.8mL,33.0mmol)，接着加入N-Moc-L-缬氨酸(2.1g,12.1mmol)和HATU(4.6g,12.1mmol)。在室温下搅拌1小时之后，反应混合物分布到H2O和DCM之间。随后，用H2O和盐水洗涤有机相，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法(DCM/石油醚＝4/1(v/v))纯化残余物，得到化合物2-2b(3.0，产率65％)。LC-MS(ESI):m/z 424.1[M+H]+。化合物2-c的合成。按照制备化合物2-2b的相同方法，用N-Moc-L-异亮氨酸替代N-Moc-L-缬氨酸，得到化合物2-2c。LC-MS(ESI):m/z 438.1[M+H]+。 
化合物2-3b的合成。按照针对化合物2-3a的合成所描述的方法，用化合物2-2b替代2-2a，得到化合物2-3b。LC-MS(ESI):m/z 471.3[M+H]+。 
化合物2-3c的合成。按照针对化合物2-3a的合成所描述的方法，用化合物2-2c替代2-2a，得到化合物2-3c。LC-MS(ESI):m/z 485.3[M+H]+。 
方案3 
步骤1.参照方案3，在氩气气氛下，将化合物1-5a(1.3kg,1.0eq.)、2-2a(975.0g,1.0eq.)、NaHCO3(860.0g,3.80eq.)、Pd(dppf)Cl2(121.7g,0.05eq.)、纯化水(5.2L,4.0体积)和1,2-二甲氧基乙烷(DME)(24.7L,19.0体积)装入50.0L 4-颈圆底烧瓶中。在使用氩气脱气30分钟时间之后，将反应物质慢慢地加热到～80℃，并在该温度搅拌12-14小时。HPLC分析表明消耗了＞97％的化合物2-2a。接着，在40-45℃下，在真空(600mmHg)下浓缩反应物质以完全除去DME，并在搅拌下，用在DCM(13.0L,10体积)中的20％(v/v)MeOH和纯化水(13.0L,10.0体积)稀释残余物。分离有机层，并用在DCM(6.5L×2，10.0体积)中的20％(v/v)MeOH萃取含水层。将合并的有机萃取物用水(6.5L×210.0体积)洗涤两次，用饱和盐水(6.5L,5.0体积)洗涤1次，并经无水Na2SO4干燥。在真空(600mmHg)下除去溶剂，并通过利用硅胶的快速柱色谱法，使用己烷/EtOAc作为洗脱液纯化残余物，得到呈灰白色固体的化合物3-1(1.0kg，产率63％)，通过HPLC分析测定纯度＞98.0％。LC-MS(ESI):m/z 649.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ12.26-12.36(m,1H),11.88-11.95(m,1H),8.23(s,1H),8.11(s,1H),7.91(m,3H),7.85-7.87(m,2H),7.51-7.81(m,3H),4.78-4.99(m,2H),3.55-3.59(m,2H),3.35-3.44(m,2H),2.30-2.47(m,2H),1.85-2.01(m,6H),1.39,1.14,1.04(s,s,s,18H)ppm。可选地，按照相同的方法使用化合物1-4a和2-3a代替化合物1-5a和2-2a作为Suzuki偶联组分，也可得到化合物3-1。步骤2.在氮气气氛下，将化合物3-1(1.0kg,1.0eq.)和IPA(7.0L,7.0体积)装入20.0L四颈圆底烧瓶中。将反应物质冷却至18-20℃，并在氮气气氛下，在90-120 分钟期间加入在异丙醇(7.0L,7.0体积)中的3.0N HCl。在25-30℃下于氮气气氛下搅拌10-12小时之后，HPLC分析表明消耗了＞98％的化合物3-1。接着，在40-45℃下于真空下浓缩反应物质以除去IPA。在搅拌下，将得到的半固体加入到丙酮(2.0L,2.0体积)中，并在氮气气氛下过滤得到的悬浮液。将固体用丙酮(2.0L,2.0体积)洗涤，并在40-45℃下于真空盘式干燥器中干燥10小时，得到呈浅黄色固体的化合物3-2(860g，产率94％)，通过HPLC分析测定的纯度＞98.0％。LC-MS(ESI):m/z 449.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ10.49-10.59(m,2H),10.10and 9.75(m,m,2H),8.60(s,1H),8.31(s,2H),8.15(m,1H),8.13-8.15(m,2H),7.96-8.09(m,2H),7.82(s,2H),5.08(m,2H),3.39-3.53(m,4H),2.47-2.54(m,3H),2.37(m,1H),2.14-2.21(m,2H),2.08(m,2H)ppm。 
步骤3.在氮气气氛下，将化合物3-2(2.2kg，1.0eq.)加入到装有DMF(4.4L,20.0体积)的四颈圆底烧瓶中。在搅拌15分之后，在25-30℃下，向该混合物中一批加入N-Moc-L-缬氨酸(226.2g，3.52eq.)。接着，将该混合物冷却至-20至-15℃，接着在30分钟内分批加入HATU(372.9g，2.0eq.)。在搅拌10分钟之后，在45分钟内加入DIPEA(238.9g，5.0eq.)在DMF(1.1L,5.0体积)中的溶液。接着，在搅拌下将反应物质温热至25-30℃。在搅拌1小时之后，HPLC分析表明消耗了＞99％的化合物3-2。将反应混合物倾倒入水(38.0L)中，并用DCM(10.0L×3，45.0体积)萃取该混合物。将合并的有机萃取物用水(10.0L×3，45.0体积)和饱和盐水(10L，45.0体积)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。在40-45℃下于真空(600mmHg)下除去溶剂，并通过柱色谱法在硅胶上使用DCM和MeOH作为洗脱液纯化残余物，得到呈灰白色固体的化合物3-3(1.52kg，产率47％)，通过HPLC分析测定纯度＞97.0％。LC-MS(ESI):m/z 763.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ8.60(s,1H),8.29(s,1H),8.20(s,1H),8.09-8.14(m,2H),7.99-8.05(m,2H),7.86-7.95(m,3H),7.20-7.21(m,2H),5.24-5.33(m,2H),4.06-4.18(m,4H),3.83(m,2H),3.53(m,6H),2.26-2.55(m,10H),0.85(m,6H),0.78(m,6H)ppm。可以经由一系列条件实现3-2向3-3(化合物I)的转化。这些条件之一描述如下。 
向反应器中装入N-Moc-缬氨酸(37.15g,0.211mol)、乙腈(750mL)和DIPEA(22.5g)。搅拌反应混合物10分钟，并加入HOBT(35.3g 0.361mole)和EDCI(42.4g,0.221mole)，同时保持温度＜2℃。搅拌反应混合物30分 钟，在30分钟内将DIPEA(22.5g)和化合物3-2(48.0g，0.092mole)慢慢地加入反应器中，以保持温度＜3℃。在20-25℃下，搅拌反应混合物4小时，并使样品通过HPLC进行反应完成分析(IPC规格：剩余区域3-2＜1.0％)。在如通过HPLC分析表明反应完成时，将乙酸异丙酯(750mL)加入到反应器中，并搅拌10分钟。用盐水(300mL×2)和2％NaOH(200mL)洗涤有机层(产物层)。将有机溶液过滤通过硅胶垫以除去不溶性物质。用乙酸异丙酯洗涤硅胶垫，并在真空(400mm/Hg)下浓缩至最小体积。通过柱色谱法在硅胶上使用乙酸乙酯和甲醇作为洗脱液纯化粗产物，得到化合物3-3(38.0g，产率65％)，纯度＞95％。LC-MS(ESI):m/z 763.4[M+H]+。步骤4.在氮气气氛下，将化合物3-3(132.0g，1.0eq.)和乙醇(324.0mL,2.0体积)装入10L四颈圆底烧瓶中。在搅拌15分钟之后，将悬浮液冷却至5-10℃，在30分钟内，向其中加入在乙醇(190mL,1.5体积)中的2.0N HC1。使得到的溶液温热至25-30℃。在90分钟内加入丙酮(3.96L,30.0体积)，以产生缓慢沉淀。接着，将悬浮液温热至60℃，并在90分钟内加入另一批丙酮(3.96L,30.0体积)。将温度保持在55-60℃1小时，然后使其冷却至25-30℃。在25-30℃下搅拌8-10小时之后，过滤混合物。用丙酮(660.0mL,5.0体积)洗涤固体，并在50-55℃下于真空盘式干燥器中干燥16小时，得到呈浅黄色固体的化合物3-3(化合物I)的2HCl盐(101g，产率71％)，通过HPLC分析测定纯度＞96.6％。 
N-Moc-L-缬氨酸的制备
N-Moc-L-缬氨酸可购买获得，但是也可以制备。通过将1.0eq的L-缬氨酸盐酸盐溶解在含有氢氧化钠和碳酸钠的2-甲基四氢呋喃(2-MeTHF)/水中，然后在0-5℃下，用1.0eq的氯甲酸甲酯处理6小时，制备Moc-L-缬氨酸。反应混合物经2-MeTHF稀释，经HCl酸化，并用水洗涤有机层。浓缩2-MeTHF溶液，并用正庚烷沉淀化合物。用2-MeTHF/正庚烷冲洗固体，并在真空中干燥，得到N-Moc-L-缬氨酸，产率68％。 
结晶化合物I以得到形式A
化合物I盐的形成和结晶，实施例1 
在氮气气氛下，将乙醇(3.19L,1.0体积，200标准强度(proof))装入230-L搪玻璃反应器中。在搅拌下，将化合物3-3(3.19kg，4.18mol)的游离碱形 式加入到烧瓶中，再继续搅拌20至30分钟。在20-25℃下于氮气气氛下，向上述物料中，向3-3在乙醇中的浓溶液中慢慢地加入在乙醇(3.19L,1.0体积)中的2.6N HC1。在室温下，搅拌整个物料20分钟，然后加热至45-50℃。在45-50℃下，在3-4小时期间向上述反应物质中加入丙酮(128.0L,40.0体积)，之后将其冷却至～25℃，并搅拌～15小时。通过过滤收集沉淀的固体，并用丙酮(6.4L×2，4.0体积)洗涤，吸干1小时，并在40-45℃下于真空盘式干燥器中进一步干燥12小时。产率：2.5kg(产率71.0％)，根据HPLC的纯度∶97.70％，XRPD∶非晶形。将异丙醇(7.5L,3.0体积)装入氮气气氛下保护的50.0L的玻璃反应器中。在搅拌下，向上述反应器中加入3-3的非晶形的2HCl盐(2.5kg)。将整个物料加热至60-65℃，得到澄清溶液。在65±2℃下继续搅拌～15小时，在此期间开始形成固体。在3小时期间，使加热温度降低至～50℃，在轻轻搅拌下，在～3小时期间向上述物料中慢慢地加入甲基叔丁基醚(12.5L,5.0体积)。经2-3小时，将上述反应物质进一步冷却至25-30℃。通过过滤收集固体，用在甲基叔丁基醚(6.25L,2.5体积)中的10.0％异丙醇洗涤，吸干1小时，并在45-50℃下于真空(600mm/Hg)下在盘式干燥器中进一步干燥70-80小时。产率∶2.13kg(基于化合物游离碱3-3的进料计，回收率85.0％，产率61.0％)，根据HPLC的纯度∶97.9％。 
图1：1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ15.6(bs,2H),14.7(bs,2H),8.58(s,1H),8.35(s,1H),8.25(s,1H),8.18(d,J＝8.7Hz,1H),8.13(s,1H),8.06(d,J＝8.6Hz,1H),8.04(s,1H),8.00(s,1H),7.98(d,J＝8.7Hz,1H),7.91(d,J＝8.6Hz,1H),7.36(d,J＝8.6Hz,1H),7.33(d,J＝8.6Hz,2H),5.31(m,1H),5.26(m,1H),4.16(d,J＝7.7Hz,1H),4.04(m,2H),3.87(m,2H),3.55(s,6H),2.42(m,2H),2.22-2.26(m,4H),2.07-2.14(m,4H),0.86(d,J＝2.6Hz,3H),0.84(d,J＝2.6Hz,3H),0.78(d,J＝2.2Hz,3H),0.77(d,J＝2.2Hz,3H),3.06(s,MTBE的OMe),1.09(s,MTBE的t-Bu),1.03(d,IPA的2Me)ppm。 
图2：13C NMR(500MHz,d6-DMSO):δ171.6,171.5,157.4,156.1,150.0,138.2,138.0,133.5,132.5,131.3,129.8,129.4,128.0,127.0,126.4,125.6,125.3,124.4,124.2,115.8,115.0,112.5,58.37,58.26,54.03,53.34,52.00(2个碳),47.71(2个碳),31.52,31.47,29.42(2个碳),25.94,25.44,20.13,20.07,18.37,18.36ppm。 
图3:FT-IR(KBr颗粒):3379.0,2963.4,2602.1,1728.4,1600.0,1523.4, 1439.7,1420.6,1233.2,1193.4,1100.9,1027.3cm-1
元素分析∶C42H52C12N8O6的理论计算值：C,60.35；H,6.27；N,13.41；CI,8.48。实测值：C,58.63；H,6.42；N,12.65,Cl,8.2。 
图4:DSC∶峰值256.48℃，根据Karl Fischer的含水量＝1.0％。 
图5∶XRPD：结晶。图5的峰列在图6中。XRPD的方法提供在化合物I的实施例2中。 
化合物I结晶条件，实施例2 
在搅拌下，将化合物3-3的非晶形的2HCl盐样品(2.0g)溶于6.0mL的异丙醇(3.0体积)中，并在65℃加热。在该温度下，搅拌该溶液20小时，在此期间开始结晶。将物料冷却至～50℃，并保持在该温度3小时，之后在1小时期间加入6.0mL的IPA(3.0体积)。使温度在50℃再保持1小时，之后将其过滤，用冷的IPA 6.0mL(3.0体积)洗涤固体，并在40-45℃下于真空盘式干燥器中干燥10小时。产率∶1.0g，50.0％。通过XRPD，以Bruker D-8Discover衍射仪和Bruker的通用检测器系统(GADDS,v.4.1.20)，使用Cu Kα辐射的入射微光束分析样品的结晶度，该入射微光束是使用准确对焦管(40kV,40mA)、镜和0.5mm双针孔准直仪产生的。使用位于距样品15cm的Hi-Star区域检测器收集衍射图，并使用GADDS处理。使用0.04°2θ的步长对衍射图谱的GADDS图像的强度进行整合。整合的图显示随2θ变化的衍射强度。数据采集参数显示在图7的所得光谱中，图7的峰提供于图8中。 
化合物I结晶条件，实施例3 
在真空下，将约2g的非晶形化合物I干燥过夜，然后加入到在50mL圆底烧瓶中的6mL的IPA(～344mg/mL)中。将烧瓶连接至冷水冷凝器，并在～60℃的油浴中加热溶液，同时在氮气下搅拌20小时。灰白色固体沉淀过夜。将溶液从～60℃冷却至环境温度，速率为：以～6℃/hr的速率冷却至45℃；以～12℃/hr的速率从45℃冷却至32.5℃，并以～24℃/hr的速率从32.5℃冷却至室温。在环境温度下，移除冷水冷凝器和氮气流，并逐滴加入MTBE～30分钟，总共10mL(IPA/MTBE＝3/5(v/v))。搅拌该溶液过夜，通过真空过滤收集固体，并用～5mL的IPA洗涤50mL烧瓶。在环境温度下于真空中干燥固体～2.5小时，并通过XRPD分析(见PANalytical X'PERT Pro MPD衍射仪的程序)。形式A的产率为～88％。数据采集参数显示在图9中的所得光谱中，包括镜前(before the mirror)发散狭缝(DS)和入射光束反散射狭缝(SS)。形式A。 
化合物I结晶，实施例4 
也通过在高温(～60℃)下将化合物3-3的非晶形的2HCl盐样品在甲醇和乙醚(比例1:4)的混合物中浆化(slurring)2天获得形式A。 
用PANalytical X'PERT Pro MPD衍射仪(见上述程序)获得XRPD。各个图的数据采集参数显示在图10所得光谱中，包括发散狭缝(DS)和入射光束的反散射狭缝(SS)。图10的观察峰提供于附录A的表1中，且图10的主峰提供于附录A的表2中。使用PATTERNMATCHTM软件v.3.0.4自动测定图和表中沿x-轴的峰位置(°2θ)，并基于上述标准四舍五入至小数点后1或2位有效数字。基于美国药典，USP 33重印版本，NF 28，<941>，R-93，10/1/2010中关于X-射线粉末衍射变化性的论述中提出的建议，指定峰位置变化在±0.2°2θ之内。 
也通过鉴别API和痕量Et2O的质子NMR分析样品。在环境温度下，以1H拉莫尔频率为约400MHz使用Varian UNITYINOVA-400光谱仪获取溶液 1H NMR光谱。将样品溶于含有TMS的d6-DMSO中。将结果和样品采集参数显示在图11中。 
化合物I结晶，实施例5 
也通过下述方法获得形式A。在加热下，将2.0g的非晶形的2HCl盐样品溶于6.0mL的IPA中。在轻轻搅拌下，使该混合物保持65℃～20小时。固体析出，过滤，同时热和真空干燥，得到形式A，回收率～25％。使用PANalytical X'Pert PRO MPD衍射仪(见上述程序)收集XRPD图。数据采集参数显示在图12中的所得光谱中，包括镜前发散狭缝(DS)和入射光束反散射狭缝(SS)。 
也通过质子NMR分析样品，所述质子NMR按照上面给出的NMR程序鉴别API、IPA(0.2摩尔，1.3％重量)和水。结果和样品采集参数显示在图13中。 
也按照上述程序，通过调制差示扫描量热法和热重量分析法分析样品。将得到的DSC曲线和差示热分析图显示在图14中。 
在VTI SGA-IOO蒸汽吸附分析仪上收集样品的水分吸附/脱附数据。使用NaCl和PVP作为校准标准品。在分析之前真空干燥样品。在氮气吹扫下，以10％RH增量在5至95％RH范围内收集吸附和脱附数据。用于分析的平衡标准为在5分钟内重量变化小于0.0100％，最大平衡时间为3小时。没有针对样品的初始含水量校正数据。图15图解了重量％相对于相对湿度的图。附录A中的表3显示收集的数据。 
化合物I结晶，实施例6 
也由IPA/MTBE(1/1(v/v))结晶形式A，并风干。使用上述方法，用InelXRG-3000衍射仪收集XRPD图。数据采集参数显示在图16的光谱上面。 
也通过热重量分析法分析样品。得到的差示热分析图为图17。 
样品也经受Karl Fischer分析。使用Mettler Toledo DL39KF滴定器进行库仑卡尔费歇尔(Coulometric Karl Fischer，KF)分析，用于进行水测定。在分析之前，进行空白滴定。在干燥氮气气氛下制备样品，其中将90-100mg的样品溶于在预干燥小瓶中的约1mL的干燥Hydranal-Coulomat AD中。将整个溶液穿过隔片(septum)加入到KF库仑计中，并混合10秒。然后，利用发生器电极滴定样品，其通过电化学氧化产生碘∶2I-→I2+2e-。获得两个重复(replicate)。得到的数据显示在下述附录A中所附的表4和5中。 
从IPA/MTBE结晶的另一个样品提供图18中所示的XRPD图。XRPD程序与化合物I实施例2的相同。峰的清单清单提供于图19中。 
化合物I结晶，实施例7 
将化合物3-3(游离碱，1.71kg)和乙醇(8.90kg)装入装有冷凝器和蒸馏装置的反应器容器中。在搅拌下，向其中加入足量体积的在乙醇(1.25M，～3.5kg)中的HC1溶液，且直到测量的pH＜3，再继续搅拌30分钟。在＜40±5℃下，在真空中蒸馏除去溶剂。将甲醇(20kg)装入反应器中，在混合之后，再次在＜40℃下于真空中蒸馏除去溶剂(～18kg)。用甲醇再重复一次该溶剂驱除过程，且用IPA(15kg)重复一次。将新鲜IPA(14kg)再次装入反应器中，并在＜40±5℃下于真空中部分地蒸馏除去(～7kg)。将反应器的内容物加热至65±5℃，并维持在该温度47小时以发生结晶。经6小时时期将物料逐渐冷却至25±5℃，在该温度下再继续搅拌20小时。通过过滤分离固态产物，得到第一批料(crop)。 
在IPA(2.5kg×2)的辅助下，将滤液转移回反应器中。在＜40±5℃下， 于真空中部分地蒸馏去除IPA(～6kg)。在轻轻搅拌(90RPM)下，将混合物加热至65±5℃达60小时，经6小时冷却至25±5℃，并再进行20小时。通过过滤收集另外的固态产物，并用冷IPA冲洗，得到第二批料。将两批料合并，并在真空下和在40±5℃下干燥以除去IPA，得到总共1.294kg的产物。并通过XRPD证实为结晶形式A(图20)。热重量分析提供于图21中。 
为了提高HPLC纯度，使用类似的方法使该物质重结晶。 
将来自上述的盐产物(559g)和甲醇(3.0kg)装入装有蒸馏装置的反应器中。在＜40℃下于真空中蒸馏除去甲醇(～2.8kg)。加入IPA(2.86kg)，并在＜40±5℃下于真空中蒸馏除去(～2.46kg)。加入新鲜IPA(3.58kg)，并在40±5℃下于真空中部分蒸馏除去(2.43kg)。在轻轻搅拌(90RPM)下，在65±5℃下加热内含物达45小时，经9小时冷却至25±5℃，并再进行32小时。过滤收集固体，并在温度为40±5℃的真空箱中干燥2天至恒重。得到493g的化合物I，并对其进一步表征。 
向形式A施加应力
在～40℃/～75％相对湿度(RH)下使形式A样品承受应力25-27天。将样品加入到玻璃小瓶中，然后将其开盖置于含有饱和的盐溶液的罐中。将该罐密封，并置于烘箱中。在25天之后，XRPD分析(图22中所示)表明该物质保持形式A。图22显示形式A在受应力之前(上方(i))和受应力之后(下方(ii))的光谱。使用PANalytical X'Pert Pro MPD衍射仪利用Cu Kα辐射的入射光束收集该样品的XRPD图，该入射光束是使用长准确对焦源和镍过滤器产生的。使用对称Bragg-Brentano对衍射仪进行设置。在分析之前，分析硅样本(NIST SRM 640d)以验证Si 111峰位置。将样品的样本装到涂覆镍的铜孔中。使用反散射狭缝(SS)使空气产生的背景降至最低。使用入射光束和衍射光束的Soller狭缝使轴向发散扩大减至最小。使用位于距样品240mm的扫描位置敏感检测器(X'Celerator)和数据收集器软件v.2.2b.收集衍射图。两个光谱的数据采集参数显示在图22上方。 
在27天之后，热重量分析(图23中所示)显示从25-225℃重量损失～10％(相当于5摩尔的水)。与未受应力的物质相比，该增加表明形式A在高RH下是吸湿性的。使用TA Instruments Q5000IR和2950热重分析仪进行TG分析。使用镍和AlumelTM进行温度校准。将每个样品置于铝盘中。在TA Instruments 2950上运行的样品保持开盖，在Q5000上运行的样品是 密封的，刺穿盖子，然后插入TG炉中。在氮气下加热该炉。将样品以10℃/分钟从0℃加热至350℃。 
形式A的溶解度
在环境温度或高温下，在搅拌(通常是声处理)下，将各种溶剂的等分试样加入到测量量的形式A中，直到根据目测观察判断达到完全溶解。通过等分试样加入进行的溶解度估计表明形式A在环境温度和高温下难溶于IPA和IPA/MTBE(2/1(v/v))混合物中。使样品置于环境温度和高温下浆化数天；然而，没有观察到进一步溶解。此外，形式A在环境温度下在IPA/水(95/5(v/v))中比在纯IPA中显著地更易溶(33mg/mL相比小于3mg/mL)。结果显示在附录A的表7中。 
实施例-化合物II(也称为化合物4-3的2HCl盐)的合成
方案4 
步骤1.参照方案4，按照之前方案3(合成化合物I)中合成化合物3-1所述的方法，并用2-2c代替2-2a，得到呈灰白色固体的化合物4-1(3.4kg，产率54％)，通过HPLC分析测定的纯度＞94.0％。LC-MS(ESI)m/z 720.4 [M+H]+。可选地，可以通过按照相同的Suzuki偶联条件且用化合物1-4a和2-3c代替化合物1-5a和2-2c，得到化合物4-1。 
步骤2.按照之前方案3中合成化合物3-2所述的方法且用化合物4-1代替3-1，得到呈黄色固体的化合物4-2(2.2kg，产率85％)，通过HPLC分析测定纯度＞95.0％。LC-MS(ESI)m/z 620.3[M+H]+。 
步骤3.按照之前方案3中合成化合物3-3所述的方法且用化合物4-2代替3-2，得到呈浅黄固体的化合物4-3(65g，产率57％)，通过HPLC分析测定纯度＞92％。LC-MS(ESI)m/z 793.4[M+H]+。 
步骤4.HCl盐的形成和结晶。在65℃下，在搅拌下，将化合物4-3(游离碱，5.0g)溶于15.0mL的MeOH中。在加入在EtOH(6.3mL)中2.5N的HCl之后，在65℃下搅拌得到的澄清溶液15分钟。接着，在1.5小时期间，滴加丙酮(150mL)，直到达到浊点。在65℃下保持搅拌悬浮液1小时，然后慢慢地冷却(～5℃/30分钟)至室温(～30℃)。在室温下搅拌过夜之后，通过过滤收集固体，用丙酮(3×5mL)洗涤，并在真空中干燥，得到呈浅黄色固体的化合物4-3的2HCl盐(化合物II)(4.4g，产率80％)。对该固体进行进一步表征，显示为结晶。1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ15.5(bs,2H),15.0(bs,2H),8.63(s,1H),8.35(s,1H),8.25(s,1H),8.17(d,J＝7.8Hz,1H),8.12(s,1H),8.08(d,J＝1.5Hz,1H),8.04(s,1H),7.99(s,1H),7.98(d,J＝8.5Hz,1H),7.92(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.6Hz,1H),7.11(d,J＝8.6Hz,2H),5.31(m,1H),5.25(m,1H),4.31(m,lH),4.19(m,1H),4.07(m,2H),3.93(m,2H),3.87(m,2H),3.55(s,6H),3.209s,3H),2.42(m,2H),2.22-2.26(m,4H),2.07-2.14(m,4),1.81(m,1H0,1.33(m,1H),1.05(d,J＝2.6Hz,3H),0.80(m,6H)ppm。 
方案5 
步骤1.参照方案5，按照方案3中合成化合物3-1所述的方法且用化合物1-5c代替1-5a，得到化合物5-1。LC-MS(ESI):m/z 722.4[M+H]+。可选地，可以通过使用相同的Suzuki偶联条件且用化合物1-4d和2-3a代替化合物1-5c和2-2a，得到化合物5-1。 
步骤2.按照如方案3中合成化合物3-2所述的相同方法且用化合物5-1代替3-1，得到化合物5-2。LC-MS(ESI):m/z 622.3[M+H]+。 
步骤3.按照如方案3中合成化合物3-3所述的相同方法且用化合物5-2代替3-2，得到化合物4-3。LC-MS(ESI):m/z 793.4[M+H]+。 
方案6 
可以通过如方案6、7和8中所述的可选途径制备化合物4-3。 
参照方案6，按照方案3中针对化合物1-5a和2-2a所述的Suzuki偶联条件，通过偶联化合物1-5c和2-2c或1-4d和2-3c，得到化合物4-3。 
化合物3-3的另外合成
按照如方案4中所述对于化合物4-3的方法，可以通过用化合物2-2b替代2-2c或用化合物2-3b替代化合物2-3c且用N-Moc-L-Val-OH替代N-Moc-O-Me-L-Thr-OH，得到化合物3-3。 
按照如方案5中所述对于化合物4-3的方法，可以通过用化合物1-5b替代1-5c或用化合物1-4c替代化合物1-4d且用N-Moc-L-Val-OH替代N-Moc-L-Ile-OH，得到化合物3-3。 
按照如方案6中所述对于化合物4-3的方法，可以通过用化合物2-2b替代化合物2-2c且用化合物1-5b替代化合物1-5c或用化合物2-3b代替化合物2-3c且用化合物1-4c代替化合物1-4d，得到化合物3-3。 
方案7 
步骤1.参照方案7，按照如方案3中所述用于偶联化合物1-5a和2-2a的Suzuki偶联条件，通过分别偶联化合物7-1与化合物1-5a、1-5b和1-5c，分别得到化合物7-2a、7-2b和7-2c。 
步骤2.通过典型的氢化(由Pd/C、Pd(OH)2、PtO2或阮内镍等介导)或其他-NO2还原条件(比如SnCl2/DCM或Zn/AcOH等)分别还原化合物7-2a、7-2b和7-2c中的-NO2基团，然后如方案2中由化合物2-1合成化合物2-2a所述地进行两步转化，分别得到化合物3-1、5-1和7-1。 
方案8 
步骤1.参照方案8。按照如方案3中所述用于偶联化合物1-5a和2-2a的Suzuki偶联条件，分别通过偶联化合物8-1与化合物2-3a、2-3b和2-3c，分别得到化合物8-2a、8-2b和8-2c。 
步骤2.按照如方案1所述用于将化合物1-4a转化为1-5a的条件，通过分别用化合物8-2a、8-2b和8-2c替代化合物1-4a，分别得到化合物8-3a、8-3b和8-3c。 
步骤3.按照如方案3所述用于偶联化合物1-5a和2-2a的Suzuki偶联条件，通过分别用化合物8-3a和8-4a(WO2010065668)、化合物8-3b和8-4a、化合物8-3c和8-4a、化合物8-3c和8-4b、化合物8-3a和8-4c及化合物8-3a和8-4b代替化合物1-5a和2-2a，分别得到化合物3-1、3-3、4-1、4-3、5-1和7-3。 
(f).结晶化合物II以得到形式I
化合物II结晶，实施例1 
将113.1mg的化合物4-3(化合物II的游离碱形式)称重到小瓶中，并且用1mL的甲醇溶解。在60℃下于搅拌下加入47.6μl的6M HCl。然后，在氮气流下蒸发溶液。 
在60℃下，向小瓶中加入1mL的甲醇，同时进行搅拌。加入8mL的丙酮。形成澄清溶液。加入1.9mL的MTBE至浊点。将样品慢慢地冷却至室温。沉淀出许多颗粒。通过真空过滤收集固体，在减压下干燥。产率为88.2％。通过XRPD分析得到的固体。在Bruker D8Advance上获得XRPD 图。最低限度在40kV和40mA下操作的CuKα源(＝1.54056埃)在4至40度2θ之间扫描各种样品。光谱在图24中以线A显示。 
化合物II结晶，实施例2 
将106.0mg的化合物4-3(化合物II的游离碱形式)称重到小瓶中，并且用1mL的甲醇溶解。在60℃下于搅拌下加入44.6μl的6M HCl。然后，在氮气流下蒸发溶液。 
在60℃下，向小瓶中加入1mL的甲醇，同时进行搅拌。加入8mL的丙酮。形成澄清溶液。加入2.2mL的MTBE至浊点。将样品慢慢地冷却至室温。沉淀出许多颗粒。通过真空过滤收集固体，在减压下干燥。产率为80.3％。根据在化合物II结晶实施例1中的方法，通过XRPD分析所得固体，光谱在图24中以线B显示。 
化合物II结晶，实施例3 
将303.5mg的化合物4-3(化合物II的游离碱形式)称重到小瓶中，并且在60℃下于搅拌下用1mL的MeOH溶解。加入153μl的5M HCl(在EtOH中)。向小瓶中慢慢地加入10mL的丙酮。以3℃/h的速率将该样品缓慢地冷却至室温。通过真空过滤收集固体，在减压下干燥过夜。产率为69.5％。根据化合物II结晶实施例1中的方法，通过XRPD分析所得的固体，且光谱在图24中以线C显示。 
化合物II结晶，实施例4 
将311.2mg的化合物4-3(化合物II的游离碱形式)称重到小瓶中，并且在60℃下于搅拌下用1mL的MeOH溶解。加入157μl的5M HCl(在EtOH中)。向小瓶中慢慢地加入10mL的丙酮。以3℃/h的速率将该样品缓慢地冷却至室温。通过真空过滤收集固体，在减压下干燥过夜。产率为59.4％。根据化合物II结晶实施例1中的方法，通过XRPD分析所得的固体，且光谱在图24中以线D显示。 
化合物II结晶，实施例5 
将333.5mg的化合物II称重到小瓶中，并且在55℃下于搅拌下通过加入1mL的MeOH进行溶解。加入168μl的5M HCl(在EtOH中)。向小瓶 中慢慢地加入8mL的丙酮和0.5mL的MTBE。以3℃/h的速率将样品慢慢地冷却至室温。形成凝胶。在氮气流下干燥样品。 
在50℃下于搅拌下，向小瓶中加入1mL的MeOH。形成澄清溶液。在搅拌下加入10mL的丙酮至浊点。将样品慢慢地冷却至室温。沉淀出许多颗粒。通过真空过滤收集固体，在减压下干燥过夜。产率为73.9％。根据在化合物II结晶实施例1中的方法，通过XRPD分析所得固体，光谱在图24中以线E显示。 
化合物II结晶，实施例6 
将121.2mg的化合物4-3(化合物II的游离碱形式)称重到小瓶中，并用1mL的IPA溶解。在65℃下于搅拌下加入51μl的6M HC1。形成澄清溶液。在搅拌下加入3.6mL的丙酮至浊点。以3℃/h将样品慢慢地冷却至室温。没有观察到显著变化。在氮气流下干燥样品。 
在60℃下于搅拌下，向小瓶中加入0.5mL的EtOH。形成澄清溶液。加入4mL的丙酮至浊点。以3℃/h的速率将样品慢慢地冷却至室温。没有观察到显著的变化。在氮气流下干燥样品。在65℃下，向小瓶中加入1mL的MeOH。形成澄清溶液，在搅拌下加入8mL的丙酮、1.0mL的MTBE至浊点。使样品慢慢地冷却至室温。没有观察到显著的变化。在60℃下，向小瓶中加入1mL的MeOH。形成澄清溶液。加入作为抗溶剂的8mL的丙酮。以3℃/h的速率将样品慢慢地冷却至室温。没有观察到显著的变化。加入1.2mL的MTBE至浊点，同时在搅拌下使系统温热回升至60℃。以3℃/h的速率将样品慢慢地冷却至室温。沉淀出许多颗粒。通过真空过滤收集固体，在减压下干燥3天。产率为78.7％。根据化合物II结晶实施例1中的方法，通过XRPD分析得到的固体，光谱在图24中以线F显示。另外，该样品的光谱更详细地显示在图25中。图25中的编号峰的数据显示在表8中。 
化合物II结晶，实施例7 
将101.0mg的化合物4-3(化合物II的游离碱形式)称重到小瓶中，并用1mL的乙醇/IPA(11/4(v/v))溶解。在50℃下于搅拌下，加入42.5μl的6M HCl。然后，在氮气流下蒸发溶液。形成凝胶状固体。 
在50℃下于搅拌下，向小瓶中加入2mL的EtOH/IPA(11/4(v/v))。形 成澄清溶液。在搅拌下加入5mL的MTBE，在接触时产生少量沉淀。将该样品缓慢地冷却至室温。沉淀出许多颗粒。通过真空过滤收集固体，在减压下干燥2天。产率为46.2％。根据化合物II结晶实施例1中的方法，通过XRPD分析所得的固体，且光谱在图24中以线G显示。 
化合物II结晶，实施例8 
将100.9mg的化合物4-3称重到小瓶中，并在65℃下于搅拌下，用1.0mL的EtOH溶解。在60℃下于搅拌下，加入43μl的6M HCl。加入2mL的MTBE至浊点。将样品慢慢地冷却至室温。形成凝胶。在氮气流下干燥样品。 
在65℃下于搅拌下，向小瓶中加入2.0mL的EtOH。形成澄清溶液。加入2.5mL的MTBE至浊点。将样品慢慢地冷却至室温。形成凝胶。在氮气流下干燥样品。 
在65℃下于搅拌下，向小瓶中加入2.0mL的MeOH。形成澄清溶液。加入3.0mL的二异丙醚至浊点。将样品慢慢地冷却至室温。形成凝胶。 
在60℃下于搅拌下，向小瓶中加入1.0mL的88％丙酮。形成澄清溶液。加入2.5mL的ACN至浊点。将样品慢慢地冷却至室温。形成凝胶。 
在60℃下于搅拌下，向小瓶中加入1.0mL的MeOH。形成澄清溶液。加入8.0mL的丙酮。将样品慢慢地冷却(3℃/h)至室温。形成大量细晶，在偏光显微镜下发现其是非常吸湿性的。通过真空过滤收集固体，并在45℃下于真空箱中经周末干燥，得到57.6％的回收率。 
根据在化合物II结晶实施例1中的方法，通过XRPD分析固体，光谱在图24中以线H显示。 
用显微镜法分析该样品。使用装有2.5x、l0x、和20x物镜和数码相机的Leica DMLP偏光显微镜执行显微镜法，所述数码相机用于获得显示颗粒形状、尺寸和结晶度的图像。使用正交偏振光镜显示分散在浸油中的样品的双折射率和晶癖。该样品具有如图26所示的不规则晶癖。 
以热重量分析法分析该样品。在TA Instrument TGA单元(型号，TGA500)上进行热重量分析。在50mL/min的氮气吹扫下，在铂盘中以10℃/min将样品从25℃加热至300℃。用镍标准品校准TGA温度，MP＝354.4℃。用制造商提供的标准品进行重量校准，并针对柠檬酸钠二水合物去溶剂化加以验证。得到的差示热分析图显示在图27中。该样品显示从25.0-120℃ 重量百分数损失为1.751％，且从25.0-210℃损失为3.485％。 
以热量测定法分析样品。在TA Instrument DSC单元(型号,DSC 1000)上进行差示扫描量热法分析。在50mL/min的氮气吹扫下，在非密封铝盘中以10℃/min将样品从25℃加热至300℃。用铟标准品校准DSC温度，起始温度为156-158℃，焓为25-29J/g。如图28所示，样品在37.63℃下由于挥发物损失而开始吸热的，接着在246.54℃下熔化分解。 
在25℃下，使用DVS水分平衡流动系统(Moisture Balance Flow System)(型号Advantage)以下列条件产生该样品以及非晶形的化合物II样品的水分吸附曲线：样本量约10mg；在25℃下干燥60分钟，吸附范围从0％至95％RH，脱附范围从95％至0％RH，及步间隔5％。平衡标准为在5分钟内重量变化＜0.01％，维持最长120分钟。如图29所示，样品为中等吸湿性的，从0-75％RH的重量百分比变化为4.34％。在～85％RH及以上，样品非常快地吸收水。相比之下，非晶形的化合物II从0-75％RH吸收13.57％的水，如图30所示。 
化合物II结晶，实施例9 
在65℃于搅拌下，将化合物4-3(游离碱，5.0g)溶于15.0mL的MeOH中。加入在EtOH(5M,3.75mL)中的HCl，并在65℃下搅拌得到的溶液15分钟，仍是澄清溶液。在1.5小时期间滴加丙酮(150mL)，直到达到浊点。在65℃下，保持搅拌样品1小时，然后逐渐冷却(～10℃/h)至室温(30℃)。在该温度下，搅拌该混合物过夜。通过过滤收集固体，用丙酮(5mL×3)洗涤，并在真空中干燥，得到4.4g呈浅黄色固体的产物，产率为80.4％。如在化合物II结晶实施例1中，通过XRPD分析得到的固体。光谱显示在图31中，并在附录A的表9中确定编号峰。 
形式I的溶解度
测试形式I以及游离碱化合物4-3的溶解度。通过将少量待分析化合物置于玻璃瓶中，给小瓶盖上盖子并在环境条件下使小瓶旋转过夜(24小时)，测量溶解度。目标浓度为2.0mg/mL。用0.45μm过滤器过滤样品。随后收集滤液进行HPLC分析。HPLC条件显示在附录A的表10中。形式I的溶解度显示在表11中，而游离碱化合物4-3的溶解度显示在附录A的表12中。 
生物活性实施例
可以在体分析定中证实所公开化合物抑制HCV复制的能力。使用HCV复制子分析来确定本发明的化合物的生物活性。持久表达Huh 7细胞中的双顺反基因型lb复制子的lb_Huh-Luc/Neo-ET细胞系得自ReBLikon GMBH。使用荧光素酶活性读出结果作为复制子水平的化合物抑制的量度，将该细胞系用于测试化合物抑制作用。 
在第1天(铺板次日)，将各种化合物以三份加入到细胞中。在进行荧光素酶分析之前，将培养板温育72小时。使用Promega Corporation制造的Bright-Glo试剂盒(目录号E2620)测量酶活性。使用以下方程式产生每种化合物的对照百分比值。对照％＝(平均化合物值/平均对照)*100 
使用GraphPad Prism及下述方程式确定EC50值∶ 
Y＝底部+(顶部-底部)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))在复制子分析中重复化合物的EC50值数次。 
所公开的化合物可以抑制HCV的多种基因型，包括但不限于la、lb、2a、3a、4a和5a。在类似于如上所述HCV lb复制子分析的相应复制子分析中，测量EC50。 
化合物I和化合物II在临床前种类中的药代动力学研究和数据 
在包括Sprague-Dawley大鼠、比格犬、食蟹猴的临床前种类中的一系列综合试验中测定化合物I的形式A和化合物II的形式I的药代动力学(PK)性质。 
在这些研究中，将化合物I的形式A结晶盐(和化合物II的形式I结晶盐)配制在盐水、盐水中的0.5％MC(0.5％MC in saline)或其他通常使用的适合的配制媒介物中，得到澄清溶液或呈悬浮液或糊状物，这取决于意图达到的浓度和对媒介物的选择。通过经口管饲进行给药。抽取血液样品并将其放置于含有K2EDTA的单独管中。将血液样品置于冰上并离心(2000g，在4℃下5分钟)，以在收集后15分钟内获得血浆。将血浆样品储存在约-80℃的冷冻机中直到分析。 
对于这些分析的大多数，通过蛋白质沉淀从大鼠、猴子或狗血浆中提取化合物I(和化合物II)和内标(IS)，并蒸发提取物，重构并使用HPLC与串联质谱检测(HPLC-MS/MS)进行分析，进一步的详细内容见实施例。通过对分析物的峰面积与所加入内标(IS)的峰面积的比例进行加权线性回归来完成校准。对于大鼠和猴EDTA血浆的有效分析，化合物1和2的定量下限(LLOQ)为5.00ng/mL，并且从5.00-1,000ng/mL的分析是线性的。使用WinNonlin(版本4.1至6.1)，通过非室分析，计算PK参数。 
实施例1.大鼠中化合物I的PK研究 
给药制剂的制备：1)将922.80mg的化合物I形式A(相当于824.603mg的游离碱)称重到干净管中。2)加入在盐水中的54.974mL的0.5％甲基纤维素至含有化合物I形式A的管中，涡旋3-5分钟并超声处理10-15分钟。给药溶液为浅黄色澄清溶液。 
以5mL/kg向～7-9周龄且重～210-270g的Sprague Dawley大鼠给予上述给药溶液。在如下时间点将血液样品收集到含有K2EDTA的单独的管中：给药前，给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、24小时。样品制备用于分析：将30μl的血浆样品等分试样与30μl的IS(200ng/mL)混合，然后与用于蛋白质沉淀的150μl的ACN混合。涡旋该混合物2分钟，并以12000rpm离心5分钟。如果不需要进一步稀释，将1μl的上清液的等分试样注射到HPLC-MS/MS上。为了制备10倍稀释的血浆样品，将10μl的血浆样品等分试样与90μl的对照血浆混合，得到稀释的血浆样品。用于稀释样品的萃取方法与用于非稀释的萃取方法相同。 
化合物浓度定量∶ 
使用WinNonlin软件(版本5.3，Pharsight Corporation,California,USA)进行药代动力学分析。估计非室模型药代动力学参数，并列在表中。用"BQL"替代低于LLOQ(在大鼠血浆中，LLOQ＝1.00ng/mL，在大鼠肝匀浆中，LLOQ＝3.00ng/mL)下的任何浓度数据。 
表13.雄性SD大鼠(N＝3)中单次PO给药75mg/kg之后化合物I形式A的单独和平均血浆浓度(ng/mL)-时间数据 
实施例2.狗中化合物I形式A的PK研究 
在该研究中使用8.0-9.5kg非-首次用于试验的(Non-naive)比格犬。通过如下手段制备给药溶液：将1.90g的化合物I形式A(等效于1.67g游离碱)溶于222.237mL的0.5％MC中，并涡旋20分钟，超声处理2分钟，得到无色澄清溶液。人工控制动物，在从头静脉或隐静脉中将约0.6-1mL血液/时间点收集到预冷却的EDTA管中。将血液样品置于冰上，并在4℃下 离心，从而在样品收集30分钟之内获得血浆。将血浆样品储存在约-70℃下直到分析。 
通过LC-MS/MS进行定量
表14.比格犬中PO给药75mg/kg之后化合物I形式A的单独和平均血浆浓度(ng/mL)-时间数据 
实施例3.猴子中化合物II形式I的PK研究 
非首次用于试验的食蟹猴，3.2-3.5kg，雄性 
通过如下手段制备给药溶液：将682.96mg的化合物II形式I溶解在盐水中的82.558mL的0.5％MC中，涡流5分钟，并超声处理18分钟，得到均质溶液。经由胃内给药，将上述溶液以10mL/kg给予动物。 
为了收集血液样品，人工控制动物，从头静脉或隐静脉中将约0.6-1mL血液/时间点收集到预冷却的EDTA管中。将血液样品置于冰上，并在4℃下离心，从而在样品收集30分钟之内获得血浆。将血浆样品储存在约-70℃下直到分析。 
表15.食蟹猴中PO给药75mg/kg之后化合物II形式I的单独和平均血浆浓度(ng/mL)-时间数据 
(c)药物组合物 
本文提供的某些实施方案为包含本文所述固体形式的药物组合物。在第一个实施方案中，药物组合物进一步包含一种或多种可药用赋形剂或媒介物，和任选地其他治疗剂和/或预防成分。这样的赋形剂是本领域技术人员已知的。 
根据预期的给药方式，药物组合物可以呈固体或半固体剂型的形式，比如例如片剂、栓剂、丸剂、胶囊、散剂、悬浮液、霜剂、软膏、洗剂等，并且在某些实施方案中，呈适用于单次施用精确剂量的单位剂型。组合物将包括有效量的所选药物与可药用载体的组合，以及另外可以包括其他药剂、佐剂、稀释剂、缓冲液等。 
本发明包括药物组合物，其包含本文所述固体形式和一种或多种可药用载体及任选的其他治疗成分和/或预防成分。 
对于固体组合物，常规无毒固体载体包括例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖碳酸镁等。对于口服给药，组合物通常采用片剂、胶囊或悬浮液的形式。片剂和胶囊是优选的口服给药形式。用于口服使用的片剂和胶囊通常包括一种或多种常用载体，比如乳糖和玉米淀粉。通常也可加入润滑剂比如硬脂酸镁。当使用液体悬浮液时，活性剂可以与乳化剂和悬浮剂组合。如果期望，也可以加入调味剂、着色剂和/或甜味剂。用于掺入本文口服制剂的其他任选的组分包括，但不限于防腐剂、悬浮剂、增稠剂等。 
在某些实施方案中，本文提供剂型，其由固体形式单独——即不含任何赋形剂的固体形式——组成。在某些实施方案中，本文提供包含本文所述固体形式的无菌剂型。 
在一个实施方案中，在没有任何赋形剂的情况下，以零号瑞典橙(Swedish Orange)不透明羟丙基甲基纤维素(HPMC)胶囊施用化合物I。将约 44mg的化合物I粉末填充到各个HPMC胶囊中。 
本文的某些实施方案提供本文所述固体形式在制备药物中的用途。在进一步的实施方案中，该药物用于治疗丙型肝炎。 
(d)使用方法 
本文的某些实施方案提供治疗丙型肝炎的方法，其包括向需要其的受试者施用治疗有效量的本文所述固体形式，所述固体形式任选地在药物组合物中。将药用有效量或治疗有效量的组合物递送给受试者。确切的有效量将因受试者而不同，并取决于物种、年龄、受试者的尺寸和健康状态、待治疗的病症的性质和程度、治疗医师的建议及选择用于施用的治疗方法或治疗方法的组合。因此，可以由常规实验确定指定情形的有效量。可以按照需要向受试者施用尽可能多的剂量，以减少和/或缓解所述病症的病征、症状或病因或使生物系统发生任何其他期望的改变。治疗这样的疾病的本领域普通技术人员将无需过度实验而根据个人知识和本申请公开内容能够确定本发明的化合物用于给定疾病的治疗有效量。 
(e)组合治疗 
本文所述固体形式和药物组合物——单独或与靶向参与HCV生活周期的病毒或细胞元件或功能的其他化合物组合使用时——可用于治疗和预防HCV感染。在本发明中有用的化合物类型可以包括而不限于所有类型的HCV抗病毒剂。对于组合疗法，可在组合时有用的机制类药剂(mechanistic classes of agents)包括例如HCV聚合酶的核苷和非核苷抑制剂、蛋白酶抑制剂、解螺旋酶抑制剂、NS4B抑制剂和在功能上抑制内部核醣体进入位点(IRES)的药剂、及抑制HCV细胞附着或病毒进入、HCV RNA翻译、HCVRNA转录、复制或HCV成熟、组装或病毒释放的其他药物。这些类型中的具体化合物包括，但不限于大环、杂环和直链HCV蛋白酶抑制剂比如替拉瑞韦(Telaprevir)(VX-950)、波普瑞韦(boceprevir)(SCH-503034)、纳拉匹韦(Narlaprevir)(SCH-900518)、ITMN-191(R-7227)、TMC-435350(也称为TMC-435)、MK-7009、BI-201335、BI-2061(西鲁瑞韦(Ciluprevir))、BMS-650032(Asunaprevir)、ACH-1625、ACH-1095(HCV NS4A蛋白酶辅因子抑制剂)、VX-500、VX-813、PHX-176、PHX2054,、IDX-136、IDX-316、ABT-450、EP-013420(和同源物)和VBY-376；用于本发明的核苷HCV聚合 酶(复制酶)抑制剂包括，但不限于R7128、PSI-7851、IDX-184、IDX-102、R1479、UNX-08189、PSI-6130、PSI-938、PSI-879和PSI-7977(GS-7977，索非布韦(Sofosbuvir))及各种其他核苷和核苷酸类似物；和HCV抑制剂，包括(但不限于)衍生为2'-C-甲基修饰的核苷(酸)、4'-氮杂修饰的核苷(酸)和7'-脱氮修饰的核苷(酸)的那些抑制剂。用于本发明的非核苷HCV聚合酶(复制酶)抑制剂包括，但不限于PPI-383、HCV-796、HCV-371、VCH-759、VCH-916、VCH-222、ANA-598、MK-3281、ABT-333、ABT-072、PF-00868554、BI-207127、GS-9190、A-837093、JKT-109、GL-59728和GL-60667。另外，本文所述固体形式和组合物可以与以下物质组合：环菲林(cyclophyllin)和亲免素(immunophyllin)拮抗剂(例如，不限于DEBIO化合物、NM-811以及环胞菌素(cyclosporine)及其衍生物)、激酶抑制剂、热激蛋白抑制剂(例如，HSP90和HSP70)、其他免疫调节剂，所述免疫调节剂可以包括而不限于干扰素(-α、-β、-ω、-γ、-λ或合成的)比如Intron ATM、Roferon-ATM、Canferon-A300TM、AdvaferonTM、InfergenTM、HumoferonTM、Sumiferon MPTM、AlfaferoneTM、IFN-βTM、FeronTM等；聚乙二醇衍化(聚乙二醇化(pegylated))的干扰素化合物，比如PEG干扰素-α-2a(PegasysTM)、PEG干扰素-α-2b(PEGIntronTM)、聚乙二醇化IFN-α-conl等；干扰素化合物的长效制剂及衍生物，比如白蛋白融合干扰素、AlbuferonTM、LocteronTM等；具有各种类型的受控递送系统的干扰素(例如，ITCA-638、由DUROSTM皮下递送系统递送的ω-干扰素)；刺激细胞中干扰素合成的化合物，比如雷西莫特(resiquimod)等；白细胞介素；增强1型辅助T细胞应答的发展的化合物，比如SCV-07等；TOLL样受体激动剂，比如CpG-10101(actilon)、艾莎托立宾(isotorabine)、ANA773等；胸腺素α-1；ANA-245和ANA-246；组胺二盐酸盐；丙帕锗(propagermanium)；四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)；安普利近(ampligen)；IMP-321；KRN-7000；抗体，比如西发西尔(civacir)、XTL-6865等，及预防性和治疗性疫苗，比如InnoVac C、HCV E1E2/MF59等。另外，涉及施用NS5A抑制剂、I型干扰素受体激动剂(例如，IFN-α)和II型干扰素受体激动剂(例如，IFN-γ)的任一种上述方法均可以通过施用有效量的TNF-α拮抗剂来增强。适用于这样的组合疗法的示例性的非限制性TNF-α拮抗剂包括ENBRELTM、REMICADETM和HUMIRATM。另外，本文所述固体形式和组合物可以与抗原生动物药及据认为在治疗HCV感染中有效的其他抗病毒剂(比如而不限于前药硝唑尼特)组合使用。硝唑尼特可 以用作与本发明中公开的化合物组合以及与用于治疗HCV感染的其他药剂(比如聚乙二醇化干扰素α-2a和利巴韦林(ribavatin))组合的药剂(见例如Rossignol,JF和Keeffe,EB,Future Microbiol.3:539-545,2008)。 
本文所述固体形式和组合物也可以与下述物质的替代形式一起使用：干扰素和聚乙二醇化干扰素、利巴韦林或其类似物(例如，他立韦林(tarabavarin)、左旋韦林(levoviron))、微RNA、小干扰RNA化合物(例如，SIRPLEX-140-N等)、核苷酸或核苷类似物、免疫球蛋白、肝保护剂、抗炎剂及NS5A的其它抑制剂。HCV生活周期中其他目标的抑制剂包括NS3解螺旋酶抑制剂；NS4A辅因子抑制剂；反义寡核苷酸抑制剂，比如ISIS-14803、AVI-4065等；载体编码的短发夹RNA(shRNA)；HCV特异性核酶比如庚酶(heptazyme)、RPI、13919等；进入抑制剂比如HepeX-C、HuMax-HepC等；α葡糖苷酶抑制剂，比如西戈斯韦(celgosivir)、UT-231B等；KPE-02003002和BIVN 401和IMPDH抑制剂。其他示例性的HCV抑制剂化合物包括在下述出版物中公开的那些化合物：美国专利号5,807,876；美国专利号6,498,178；美国专利号6,344,465；美国专利号6,054,472；WO97/40028；WO98/40381；WO00/56331,WO02/04425；WO 03/007945；WO 03/010141；WO 03/000254；WO 01/32153；WO 00/06529；WO 00/18231；WO 00/10573；WO 00/13708；WO 01/85172；WO 03/037893；WO03/037894；WO 03/037895；WO 02/100851；WO 02/100846；EP 1256628；WO 99/01582；WO 00/09543；WO02/18369；W098/17679,WO00/056331；WO 98/22496；WO 99/07734；WO05/073216,WO 05/073195和WO 08/021927，其全部内容通过引用并入本文。 
另外，可以施用例如利巴韦林和干扰素的组合作为与本文所述固体形式或组合物的至少一种的多组合疗法。可组合药剂不限于前述种类或化合物，并且涵盖已知化合物和新化合物及生物活性剂的组合(见，Strader,D.B.,Wright,T.,Thomas,D.L.和Seeff,L.B.,AASLD Practice Guidelines.1-22,2009；和Manns,M.P.,Foster,G.R.,Rockstroh,J.K.,Zeuzem,S.,Zoulim,F.和Houghton,M.,Nature Reviews Drug Discovery.6:991-1000,2007,Pawlotsky,J-M.,Chevaliez,S.和McHutchinson,J.G.,Gastroenterology.132:179-1998,2007,Lindenbach,B.D.和Rice,CM.,Nature 436:933-938,2005,Klebl,B.M.,Kurtenbach,A.,Salassidis,K.,Daub,H.和Herget,T.,Antiviral Chemistry&Chemotherapy.16:69-90,2005,Beaulieu,P.L.,Current Opinion in  Investigational Drugs.8:614-634,2007,Kim,S-J.,Kim,J-H.,Kim,Y-G.,Lim,H-S.和Oh,W-J.,The Journal of Biological Chemistry.48:50031-50041,2004,Okamoto,T.,Nishimura,Y.,Ichimura,T.,Suzuki,K.,Miyamura,T.,Suzuki,T.,Moriishi,K.和Matsuura,Y.,The EMBO Journal.1-11,2006,Soriano,V.,Peters,M.G.和Zeuzem,S.Clinical Infectious Diseases.48:313-320,2009,Huang,Z.,Murray,M.G.和Secrist,J.A.,Antiviral Research.71:351-362,2006和Neyts,J.,Antiviral Research.71:363-371,2006，每篇参考文献的全部内容通过引用并入本文)。预期本文所述组合疗法包括本发明组的化合物与本发明组的其它化合物或本发明组之外的其他化合物的任何化学相容性组合，只要该组合不消除该本发明组化合物的抗病毒活性或药物组合物本身的抗病毒活性。 
组合疗法可以为顺序进行的，即首先用一种药剂治疗，然后用第二种药剂治疗，或者可以同时(并行地)用两种药剂治疗。顺序疗法可以包括在完成第一疗法之后与开始第二疗法之前的合理的时间。用两种药剂同时治疗可以以相同的日剂量或单独剂量进行。组合疗法不必限于两种药剂，可以包括三种或更多药剂。用于同时或顺序组合疗法的剂量应当取决于组合疗法的组分的吸收、分布、代谢和排泄率，以及本领域技术人员已知的其他因素。剂量值也应当随待缓解的病症的严重程度而变化。应当进一步理解，对于任何具体的受试者，可以根据个体的需要和施用或监督施用组合疗法的人员的专业判断而随时间调整具体的剂量方案和时间表。 
附录A 
表1.化合物(I)2HCl的观察峰 
表2.化合物(I)2HCl的主峰 
表3 
表4 
表5 
表6 
角度 d值 强度 强度％
2θ° 埃 计数 ％
10.251 8.62207 5679 17.5
10.677 8.27946 22190 68.5
12.389 7.13865 10907 33.6
12.778 6.92249 32413 100
13.679 6.46809 14147 43.6
14.763 5.99568 9432 29.1
16.308 5.43098 4690 14.5
17.49 5.06653 9393 29
19.341 4.58559 4811 14.8
20.516 4.32559 10629 32.8
21.13 4.20127 10305 31.8
22.143 4.01121 22923 70.7
22.79 3.89892 6354 19.6
23.491 3.78399 7151 22.1
24.562 3.62142 6842 21.1
25.662 3.46859 5930 18.3
26.03 3.42041 5139 15.9
27.113 3.28622 7384 22.8
27.556 3.23433 5077 15.7
28.345 3.14616 3847 11.9
[0345] 表7 
a.溶剂混合物的体积比在圆括号中提供 
b.RT＝室温 
c.溶解度是基于用于产生溶液的总溶剂计算的；由于所用的溶剂部分的体积或缓慢的溶解速率，实际溶解度可能更大。除非另有说明，否则溶解度以最接近的mg/mL报道。 
表8 
表9 
表10 
表11 
表12 

Claims (13)

1.具有式(I)的化合物的固体形式∶
其呈结晶形式。
2.权利要求1的固体形式，其中所述结晶形式为式I的化合物的形式A晶型。
3.权利要求1的固体形式，其中所述固体形式具有包含下述的XRPD图：a)位于表1中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28个或所有接近位置的峰；
b)位于图6中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26个或所有接近位置的峰；
c)位于图8中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44个或所有接近位置的峰；或
d)位于图19中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18个或所有接近位置的峰。
4.任一项前述权利要求的固体形式，其中所述固体形式具有包含位于表2中鉴别的1、2、3、4个或所有接近位置的峰的XRPD图。
5.任一项前述权利要求的固体形式，其中基于用衍射计(CuKα)——以NIST或其它合适的标准校准2θ——所收集的高质量图，所述固体形式的XRPD图包含在环境温度下位于2θ值为14.7±0.2、17.4±0.2，及2θ值为10.6±0.2、12.7±0.2和13.6±0.1中的一个或多个处的峰。
6.任一项前述权利要求的固体形式，其具有基本上如图4、14、21或23之一的差示扫描热量法差示热分析图。
7.药物组合物，其包含任一项前述权利要求的固体形式。
8.凝胶胶囊，其包含任一项前述权利要求的固体形式。
9.具有式(II)的化合物的固体形式∶
，具有结晶形式。
10.权利要求9的固体形式，其中所述结晶形式为式II的化合物的形式I晶型。
11.权利要求9的固体形式，其中所述固体形式具有包含下述的XRPD图：
位于表8中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16个或所有接近位置的峰，或
位于表9中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个或所有接近位置的峰。
12.权利要求9或10中任一项的固体形式，其中所述固体形式具有包含表8中编号1、3、13和17的峰和表8中鉴别的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个其余峰的XRPD图。
13.药物组合物，其包含如权利要求9-12中任一项的固体形式。
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