CN104212916B - 一种检测口蹄疫a型病毒的试剂盒及制备和使用方法 - Google Patents

一种检测口蹄疫a型病毒的试剂盒及制备和使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104212916B
CN104212916B CN201410465735.1A CN201410465735A CN104212916B CN 104212916 B CN104212916 B CN 104212916B CN 201410465735 A CN201410465735 A CN 201410465735A CN 104212916 B CN104212916 B CN 104212916B
Authority
CN
China
Prior art keywords
foot
mouth disease
virus
type virus
type
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410465735.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104212916A (zh
Inventor
张强
卢昌
赵志荀
吴国华
颜新敏
李应国
岳华
周晓黎
李健
朱海霞
代雪玲
田波
芦晓立
高顺平
王曼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Original Assignee
Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS filed Critical Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Priority to CN201410465735.1A priority Critical patent/CN104212916B/zh
Publication of CN104212916A publication Critical patent/CN104212916A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104212916B publication Critical patent/CN104212916B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开一种用于检测口蹄疫A型病毒的试剂盒，及试剂盒制备方法和这种试剂盒的非疾病诊断目的的使用方法。本发明的扩增口蹄疫A型病毒的引物的基因序列有四条；本发明的检测口蹄疫A型病毒的试剂盒内包括有前述基因序列的四条引物。相关的实验表明，本发明的可特异性快速扩增口蹄疫A型病毒的核酸，通过核酸电泳检测到特异性条带，同时具有特异性。相关的实验提示本发明的序列可在制备快速鉴别口蹄疫A型病毒的GeXP诊断试剂盒中的应用，并在口蹄疫病毒流行病学研究中应用。

Description

一种检测口蹄疫A型病毒的试剂盒及制备和使用方法
技术领域
本发明涉及一种用于检测口蹄疫A型病毒的试剂盒，及试剂盒制备方法和这种试剂盒的非疾病诊断目的的使用方法。
背景技术
口蹄疫（Foot-and-mouthdisease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV）引起的动物急性、烈性传染病，主要危害猪、牛、羊痘偶蹄动物，发病率极高，造成了巨大的政治、经济损失，因此被世界卫生组织（OIE）列为A类传染病的首位。FMDV可以分为7个血清型，即A型、O型、C型、Asia1型、SAT1型、SAT2型和SAT3型，每个血清又有许多不同的亚型，且各血清型之间没有交叉性免疫，同一血清型的各亚型之间仅有部分交叉免疫。
口蹄疫（Foot-and-mouthdisease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV）引起的动物急性、烈性传染病，主要危害猪、牛、羊痘偶蹄动物，发病率极高，造成了巨大的政治、经济损失，因此被世界卫生组织（OIE）列为A类传染病的首位。FMDV可以分为7个血清型，即A型、O型、C型、Asia1型、SAT1型、SAT2型和SAT3型，每个血清又有许多不同的亚型，且各血清型之间没有交叉性免疫，同一血清型的各亚型之间仅有部分交叉免疫。
口蹄疫病毒的分型鉴别诊断一直是研究的热点。研究表明，口蹄疫病毒的A、O、Asia1三种血清型的RNA序列同源性约为70%左右，然而其编码结构蛋白的P1区域的差异比较好，该区域的核苷酸序列也常常被用来进行口蹄疫病毒的分型及进化分析。在病毒的这些基因中，VP1蛋白参与病毒的吸附、入侵、免疫反应，并且与病毒的血清型特异性有关。因此VP1的基因序列通常被用来进行FMDV不同毒株之间的亲缘关系分析，从而研究口蹄疫的分子流行病学规律。准确鉴定分离株种属和弄清其来源将有助于口蹄疫的流行病学分析,具有重要意义。
由于RT-PCR快速，灵敏和可靠性的优点，该方法已被广泛地用于口蹄疫诊断。近年来各种RT-PCR检测方法已用于早期上皮细胞，细胞培养分离和其组织中口蹄疫病毒RNA的检测(MeyerRF,etal.,1991)。Rodriguez等首次可通过RT-PCR对口蹄疫病毒O型、A型和C型进行分型检测(RodríguezA,etal.,1992)。自此以后不同血清型特异性引物RT-PCR方法已被用于口蹄疫病毒7个血清型份分型检测(Callens,etal.,1997;Vangrysperre,etal.,1996)。这些检测引物位于口蹄疫病毒基因组的不同位置，包括5'非编码区、开放阅读框和3'端非编码区。为了提高RT-PCR诊断灵敏度，多组引物结合的多重检测也被用于口蹄疫的检测(GiridharanP,etal.,2005;BaoH,etal.,2008)，但是这些RT-PCR方法的灵敏度依然有限，若前期再结合ELISA方法一起使用必然会使该过程更加耗时费力。
最近，实时荧光定量RT-PCR方法已被用于口蹄疫病毒的检测，该方法不需要PCR后期处理（例如凝胶分析）且通过应信号来直接监视目标cDNA的扩增。TaqMan实验的检测效果同抗原结合ELISA的病毒分离实验一样(ReidSM,etal.,2003)。目前，两种不同的实时荧光定量RT-PCRTaqMan实验已普遍使用，一种针对5'非编码区的内部核糖体进入位点（IRES）(ReidSM,etal.,2002)和第二种针对3D（RNA聚合酶）的编码序列。实时荧光定量RT-PCR方法的速度和准确性可以从样品核酸提取到实验建立的计算机操作的偶联进一步提高。这使得该检测适合于主要指示病例诊断和在持续疫情中的检测。实时/定量RT-PCR试验目前在许多发达国家作为一种口蹄疫病毒诊断和定量的常规测试。但是，这些实验不是专门设计用于的区分口蹄疫病毒血清型。已经证明5'端非编码区检测在A血清型病毒的检测中更敏感，而在3D检测试验对检测SAT病毒具有更高的灵敏度(KingDP,etal.,2006)。另外，由于探针靶向区域的核苷酸错配，这些检测方法不能检测少量的FMDVs。因此，任何一种单独的检测方法不能100％的检测FMDV。最近，Tam等报道了用于口蹄疫病毒检测和病毒分型荧光多重rRT-PCR检测方法，该方法具有更高的检测灵敏度，但却不能区分某些血清型之间的交叉反应性(TamS,etal.,2009)。
rRT-PCR便携式设备使得FMDV野外样品的检测成为可能，然而这种设备比较昂贵、比较脆弱且精密度要求比较高。因此，其他的方法，如环介导扩增的方法被用来进行野外样品的检测。LAMP在一个恒定的温度扩增特异性核苷酸序列，因此不需要热循环仪。该方法基于DNA序列通过一自动循环链置换反应扩增的原理，使用一组两个特别设计的内引物和两个外引物和具有链置换高活性的DNA聚合酶进行该测定法(etal.,2000)。引物在初始阶段识别6个独立的靶序列和在LAMP反应的后期阶段识别4个独立的序列，使用标准的水浴或加热块进行该反应少于一个小时，然后对结果用肉眼进行可视化观察。其优点为其简单操作，反应快速且结果直观，这使得该方法已被许多疾病流行国家进行野外样品检测。已有口蹄疫病毒高通量的RT-LAMP的建立，然而该方法由于容易污染造成假阳性，就尚未得广范的认可(DukesJP,etal.,2006)。
ELISA和RT-PCR结合的口蹄疫检测方法具有很高的可靠性和准确性，但样品从采样点到实验室的运输问题成为口蹄疫病毒早期诊断的最大障碍。因此，在疑似疫情点急需一种可以用于疾病快速诊断和特异性检测的方法。由Reid等人建立一种基于单克隆抗体的口蹄疫层析试纸条技术(ReidSM,etal.,2001)。该试纸条检测上皮悬浮液测试中的口蹄疫病毒抗原灵敏性与常规抗原ELISA灵敏性一样，且对口蹄疫病毒血清型O，A，C和Asia1在细胞培养上清有着100％等效的敏感性，但是却不能够对这些血清型进行区分。因此，急需一种灵敏度高的能够特异性区分不同FMDV型别的高通量的检测方法。
研究表明，口蹄疫病毒的A、O、Asia1三种血清型的RNA序列同源性约为70%左右，然而其编码结构蛋白的P1区域的差异比较好，该区域的核苷酸序列也常常被用来进行口蹄疫病毒的分型及进化分析。在病毒的这些基因中，VP1蛋白参与病毒的吸附、入侵、免疫反应，并且与病毒的血清型特异性有关。因此VP1的基因序列通常被用来进行FMDV不同毒株之间的亲缘关系分析，从而研究口蹄疫的分子流行病学规律。准确鉴定分离株种属和弄清其来源将有助于口蹄疫的流行病学分析，具有重要意义。根据口蹄疫病毒VP1基因组序列构建进化树分析发现，A型有10个亚型（Ⅰ-Ⅹ）；O型也有10个亚型，即欧洲-南美洲型（Euro-SA）、中东-南非型（ME-SA）、东南亚型（SEA）、中国型（CHY）、西非型（WA）、东非1型（EA-1）、东非2型（EA-2）、东非3型（EA-3）、印尼1型（ISA-1）和印尼2型（ISA-2）；Asia1有6个亚型（Ⅰ-Ⅵ）。此外，VP1基因也常被用来进行A、O、Asia1的分型检测。因此，本发明选择口蹄疫病毒的A型VP1序列作为靶基因的区域，根据GeXP多重PCR检测体系引物的要求设计口蹄疫病毒A型的特异性引物。
发明内容
本发明提供一种可克服现有技术不足的、具有快速、高灵敏度、高通量的、可用于检测口蹄疫A型病毒的扩增口蹄疫A型病毒的引物，由这种引物构成的检测试剂盒，这种试剂盒的制备方法和非疾病检测的这种试剂盒使用方法。
本发明的扩增口蹄疫A型病毒的引物的基因序列为SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3和SEQIDNo.4；本发明的检测口蹄疫A型病毒的试剂盒内包括有前述基因序列为SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3和SEQIDNo.4的四条引物，其中引物SEQIDNo.3的5’端添加有Cy5荧光标签。
本发明的试剂盒非疾病诊断目的的使用方法是：首先以A型病毒的RNA为模板，用SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3和SEQIDNo.4引物进行扩增，再对PCR产物的进行毛细管电泳分析，根据毛细管电泳信号分析图上241bp处是否出现峰值，且信号大于2000判定被检样品的阴阳性。
相关的实验表明，本发明的序列SEQIDNo.1、SEQIDNo.2（即FMDV-A-F和FMDV-A-R）可特异性快速扩增口蹄疫A型病毒的核酸，通过核酸电泳检测到特异性条带，但同等条件下不能扩增口蹄疫O型病毒、口蹄疫病毒Asia1病毒、水疱性口炎病毒和猪水泡病病毒的核酸。
相关的实验提示本发明的序列可在制备快速鉴别口蹄疫A型病毒的GeXP诊断试剂盒中的应用，并在口蹄疫病毒流行病学研究中应用。
附图说明
图1为口蹄疫A型病毒引物特异性验证的核酸电泳检测结果。其中口蹄疫A型病毒引物可以特异性地扩增出FMDV-A型的基因组片段，而口蹄疫Asia1型病毒、口蹄疫O型病毒、水疱性口炎病毒和猪水泡病病毒均无特异性条带产生，说明口蹄疫A型病毒的GeXP引物的特异性非常高。
图2为口蹄疫A型病毒引物PCR灵敏性验证的核酸电泳检测结果。其中M为DL2000Marker；1为109个拷贝；2为108个拷贝；3为107个拷贝；4为106个拷贝；5为105个拷贝；6为104个拷贝；7为103个拷贝；8为102个拷贝；9为10个拷贝。由图可见109~104个拷贝的模板均由特异性产物产生，随着模板量的减少，产物条带变暗。从图可以看出本发明所设计的口蹄疫A型病毒GeXP引物在58℃条件下PCR反应最少可以检出104个拷贝的模板。
图3为口蹄疫A型病毒GeXP引物的GeXP-PCR特异性检测结果。从图可以看出口蹄疫病毒A型241bp处出现峰值，且信号大于2000时认为是阳性结果。同时用口蹄疫A型病毒的引物对口蹄疫O型病毒、口蹄疫Asia1型病毒、水疱性口炎病毒和猪水泡病病毒基因组进行GeXP反应时没有任何信号峰出现，这说明口蹄疫A型病毒的GeXP引物具有非常好的特异性。
图4至图7分别为不同拷贝的模板口蹄疫A型病毒用本发明的GeXP引物的扩增后用GeXP-PCR检测的灵敏性检测结果。其中图4为104copies，图5为103copies，图6为102copies，图7为10copies。结果显示104copies/μL~102copies/μL的模板均可以检测到特异性的峰值，随着模板量的检测，峰值的信号强度也不断的减弱，在10copies/μL时特异性的信号峰值不足2000。从图中可以看出本发明中所设计的口蹄疫A型病毒GeXP引物在本发明检测体系中可以检测出102copies/μL的模板。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明进行详细解说.
1.序列的制备
根据GeXP引物设计要求和NCBI公布的FMDV-A型的基因组，选择保守区域设计特异性引物，并通过添加通用引物形成特异性嵌合引物，而通用引物序列属于非生物源性的核苷酸序列，此外合成通用引物序列，并在上游通用引物的5’端添加Cy5荧光标签。本发明的可特异性扩增口蹄疫A型病毒核酸的引物：AGGTGACACTATAGAATAGGGTGATCTAGGGTCTCTCGC，在本发明中被命名为FMDV-A-F；GTACGACTCACTATAGGGACAGGAGCTGCTTTGCAGGTGCAAT，在本发明中被命名为FMDV-A-R。用于本发明的通用引物：Cy5AGGTGACACTATAGAATA，在本发明中被命名为UWD-F；GTACGACTCACTATAGGGA，本发明中被命名为UEV-R。
2．病毒基因组提取
单层细胞长至80%以上融合后，接种病毒，37℃孵育30min后弃去毒液。加入细胞维持液，37℃5%CO2培养，定期观察细胞病变（CPE），待90%以上细胞出现CPE后收毒。将病毒反复冻融3次，置-20℃冰箱保存备用。使用TaKaRa公司DNA提取试剂盒提取细胞毒株中的RNA。
3.FMDV-A引物特异性验证
以提取纯化的病毒RNA为模板进行扩增，实验体系如下：
反应条件如下：
各取5μL的PCR产物样品核酸电泳，电泳结果通过紫外凝胶成像系统进行检测并拍照。检测结果表明，口蹄疫A型病毒的GeXP引物在58℃的条件下能特异性地扩增出FMDV-A基因组片段，而口蹄疫O型病毒、口蹄疫Asia1型病毒、水疱性口炎病毒和猪水泡病病毒均无特异性条带产生，说明口蹄疫A型病毒的GeXP引物的特异性非常高。
4.口蹄疫A型病毒的GeXP引物单重PCR灵敏性验证
利用NanoDropND-1000紫外分光光度计测定FMDV-A型基因组的浓度，根据FMDV-A型基因组的分子量和浓度计算其相应的拷贝数。对FMDV-A型基因组进行梯度稀释，各取1μL作为模板，检测单重PCR的敏感性，PCR反应体系为：
反应条件如下：
各取5μL的PCR产物样品核酸电泳，电泳结果通过紫外凝胶成像系统进行检测并拍照。检测结果表明，109~104个拷贝的模板均有特异性产物产生，随着模板量的减少，产物条带变暗。从图可看出本发明所设计的口蹄疫A型病毒的GeXP引物在58℃下，可检出反应体系中104个拷贝的模板。
5.口蹄疫A型病毒GeXP-PCR的特异性检测
根据BeckmanCoulter公司的GenomeLab片段分析策略，建立25μL的PCR反应体系，反应体系为：
RT-PCR反应：
PCR产物的毛细管电泳分析：
用甲酰胺（SampleLoadingSolution,SLS）对PCR产物进行10倍的稀释；配置上样反应体系（40μl），包含38.5μl的甲酰胺（SampleLoadingSolution,SLS），0.5μl的DSS400（分子量内标-400），1μl的PCR产物稀释液；在漩涡器上震荡30s混匀，或用枪头混匀，并做简易离心以除去气泡，每孔加一滴石蜡油防止样品挥发；在缓冲液板与上样板对应孔内加入3/4体积的分离缓冲液；进入GeXP的SetUp程序，输入样品名称，对每个样品指定Frag-3分离方法，指定默认的GeXP分析方法，开始运行样本。
毛细管电泳结束，导出实验数据并对实验结果进行分析，从图可以看出在241bp处出现峰值，且信号大于2000时认为是阳性结果。同时用口蹄疫A型病毒的引物对口蹄疫O型病毒、口蹄疫AsiaI型病毒、水疱性口炎病毒和猪水泡病病毒基因组进行GeXP反应时没有任何信号峰出现，这说明口蹄疫A型病毒的GeXP引物具有非常好的特异性。
6.口蹄疫A型病毒GeXP-PCR灵敏性检测
利用NanoDropND-1000紫外分光光度计测定口蹄疫A型病毒RNA的浓度，根据病毒RNA的分子量和浓度计算其相应的拷贝数。对病毒RNA进行梯度稀释，稀释至106copies/μL~10copies/μL，各取1μL作为模板，检测口蹄疫A型病毒GeXP-PCR的灵敏性。
结果显示，口蹄疫A型病毒GeXP引物在58℃下对不同浓度基因组进行GeXP-PCR后的检测结果。结果显示104copies/μL~10copies/μL的模板均可以检测到特异性的峰值，随着模板量的检测，峰值的信号强度也不断的减弱，在10copies/μL时信号峰值强度不足2000。从图中可以看出本发明中所设计的口蹄疫A型病毒GeXP引物在本发明检测体系中可以检测出10copies/μL的模板。
从以上内容可见，这里设计合成的4个基因序列以及其形成的GeXP方法可以快速检测A型口蹄疫病毒。
<110>中国农业科学院兰州兽医研究所
<120>种检测口蹄疫A型病毒的试剂盒及制备方法
<160>4
<210>1
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列（FMDV-A-F）
<400>
aggtgacactatagaatagggtgatctagggtctctcgc39
<210>2
<211>43
<212>DNA
<213>人工序列（FMDV-A-R）
<400>
gtacgactcactatagggacaggagctgctttgcaggtgcaat43
<210>3
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列（UWD-F）
<400>
aggtgacactatagaata18
<210>4
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列（UEV-R）
<400>
gtacgactcactataggga19

Claims (2)

1.一种非疾病诊断目的的口蹄疫A型病毒的检测方法，其特征在于：首先以待测的RNA为模板，用SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3和SEQIDNo.4引物进行扩增，再对PCR产物的进行毛细管电泳分析，根据毛细管电泳信号分析图上241bp处是否出现峰值，且信号大于2000判定被检样品的阴阳性。
2.权利要求1所述的检测方法使用的试剂盒，其特征在于试剂盒内包括有基因序列为SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3和SEQIDNo.4的四条引物，其中引物SEQIDNo.3的5’端添加有Cy5荧光标签。
CN201410465735.1A 2014-09-15 2014-09-15 一种检测口蹄疫a型病毒的试剂盒及制备和使用方法 Active CN104212916B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410465735.1A CN104212916B (zh) 2014-09-15 2014-09-15 一种检测口蹄疫a型病毒的试剂盒及制备和使用方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410465735.1A CN104212916B (zh) 2014-09-15 2014-09-15 一种检测口蹄疫a型病毒的试剂盒及制备和使用方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104212916A CN104212916A (zh) 2014-12-17
CN104212916B true CN104212916B (zh) 2016-04-20

Family

ID=52094818

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410465735.1A Active CN104212916B (zh) 2014-09-15 2014-09-15 一种检测口蹄疫a型病毒的试剂盒及制备和使用方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104212916B (zh)

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101928780A (zh) * 2009-06-25 2010-12-29 北京索奥生物医药科技有限公司 一种a型口蹄疫病毒双色荧光pcr检测方法及其试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN104212916A (zh) 2014-12-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104195268B (zh) 检测口蹄疫A型、O型和Asia 1型病毒的试剂盒及制备方法
CN110358867A (zh) 非洲猪瘟病毒荧光型raa检测试剂盒
CN107630109A (zh) 一种检测新型猪急性腹泻综合征冠状病毒的荧光定量pcr引物及试剂盒
CN109781981A (zh) 检测非洲猪瘟病毒的分子探针、试剂盒及其应用
Yang et al. Reverse transcription–enzymatic recombinase amplification coupled with CRISPR-Cas12a for rapid detection and differentiation of PEDV wild-type strains and attenuated vaccine strains
CN103397105A (zh) 一种检测gii型诺如病毒的试剂盒及其用途
CN107435080A (zh) 一种检测猪瘟病毒的重组酶常温扩增核酸（rt‑rpa）试纸条试剂盒及应用
CN108588277A (zh) 一种犬瘟热病毒可视化核酸检测方法
CN113718063A (zh) 同时检测asfv、pcv2和prv病毒的多重芯片数字pcr引物、试剂盒及检测方法
CN106834549A (zh) 检测伪狂犬病病毒野毒株的交叉引物扩增‑免疫层析试纸联用法的引物和探针组以及试剂盒
CN110438260B (zh) 一种非洲猪瘟病毒核酸试纸条检测试剂盒
CN104263857B (zh) 一种快速检测水貂肠炎病毒的纳米pcr试剂盒及其应用
Li et al. Development of a recombinase-aided amplification combined with lateral flow dipstick assay for the rapid detection of the African swine fever virus
Gou et al. The colorimetric isothermal multiple-self-matching-initiated amplification using cresol red for rapid and sensitive detection of porcine circovirus 3
CN108624713A (zh) 一种猪伪狂犬病疫苗毒与野毒鉴别检测的方法及试剂盒
CN105002284A (zh) 一种副鸡嗜血杆菌荧光定量pcr检测方法
CN103898240A (zh) 检测登革病毒及其分型的引物、探针及方法
CN111471802A (zh) 一种猪德尔塔冠状病毒快速检测引物、试剂盒及其应用
CN104342500B (zh) 检测口蹄疫Asia 1型病毒的引物、检测试剂盒和制备方法
Qian et al. Clustered regularly interspaced short palindromic Repeat/Cas12a mediated multiplexable and portable detection platform for GII genotype Porcine Epidemic Diarrhoea Virus Rapid diagnosis
CN103224994A (zh) 口蹄疫病毒分型诊断环介导等温扩增试剂盒及其使用方法
CN110042175A (zh) 基于rpa技术检测菜豆普通花叶病毒的引物、探针、试剂盒及应用
CN104212916B (zh) 一种检测口蹄疫a型病毒的试剂盒及制备和使用方法
CN104975077B (zh) 猪源附红细胞体荧光定量pcr检测试剂盒及其应用
CN106521038B (zh) 一种高灵敏度的bhv‑2实时荧光定量pcr检测方法及试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant